Monoklonális antitestek gyártásaMonoklonális antitestek gyártása

MAB-üzem elrendezési

képe

MAB-üzem elrendezési

képe

BioreaktorokBioreaktorok

Emlős sejtek félfolytonos, vagy folytonos, sejtvisszatartásos fermentációja.

Hígítási sebesség: 0,5-1,0 /nap

Lassú, többhetes folyamat.

MAB-előállítás folytonos fermentációvalMAB-előállítás folytonos fermentációval

Sejtek elválasztásaSejtek elválasztása

Az állati sejteket 0,65 μm pó-rusméretű mikroszűrővel vá-lasztják el. A szűrőlepény le-rakódásának megakadályo-zására a levet diaszűrőben cirkuláltatják (keresztáramú szűrés). Az oldott fehérjéket a sejtek közül sóoldattal (PBS = phosphate buffered saline, foszfáttal pufferolt só-oldat) mossák ki.

Mikroszűrő membránokMikroszűrő membránok

Üregesszál (= „hollow fiber”) modulok.

AffinkromatográfiaAffinkromatográfia

Az antitesteket olyan affinkro-matográfiás tölteten kötik meg, amelynek liganduma a Sta-phylococcus Protein A fehérjé-je. Ez az antitestek közös, Fc régiójához kapcsolódik, azaz minden antitestet megköt, más fehérjéket viszont nem.

A MAB fehérjeszerkezeteA MAB fehérjeszerkezete

Protein A-affinkromatográfiaProtein A-affinkromatográfia

Előnyei:– Szelektíven köti az antitesteket– Nagy a kapacitása (15–30 g/liter töltet)

Hátrányai:– Drága: 8000–10 000 USD/liter

(300 l-es oszlop esetén 10 000 USD/l-rel számolva egy töltet ára 3 millió $, amivel csak 15-20 tisztítási művelet végezhető el.)

– Toxikus– Továbbjuthat, szennyezhet az elválasztás során– Az oszlop tisztítása nehézkes

Ipari méretű kromatográfiás oszlop, d » hIpari méretű kromatográfiás oszlop, d » h

Ioncsere kromatográfia 1Ioncsere kromatográfia 1

Erős kationcserélő gyantán. Cél: a főtermék megkötése, a szennyező anyagok kimosá-sa, azután a MAB elúciója.

Kiegyenlítő puffer: pH = 4,5

Mosás: pH = 5,0

pH-gradiens: pH 5,4→8,0

A kolonna regenerálása: cc sóoldattal

MAB kromatogramja kationcserélőnMAB kromatogramja kationcserélőn

Ioncsere kromatográfia 2.Ioncsere kromatográfia 2.

Tisztítás anioncserélő gyantán.

Cél: a szennyező anyagok meg-kötése, a főtermék kötődés nél-kül átmegy az oszlopon.

Kiegyenlítő puffer: pH = 7,0

Elúció: pH= 7,0 (75 mM foszfát)

A kolonna regenerálása: sóol-dattal (0,5 M foszfát)

Vírusok eltávolítása/inaktiválásaVírusok eltávolítása/inaktiválása

A MAB-oldat koncentrálása ultraszűrésselA MAB-oldat koncentrálása ultraszűréssel

A fermentlé MAB-koncentráci-ója 100–150 mg/l. A végter-mékben 10-20 g/l-re van szük-ség, a koncentrálás legkímé-letesebb módja az ultraszűrés. A MAB móltömege 180-190 kDa, ez alatti vágású memb-rán szükséges.

Formulázás, szűrésFormulázás, szűrés

Hozzáadják a végső formu-lázáshoz szükséges anya-gokat:

Puffer: nem illékony, pl. PO4

ionerősség beállítása: NaCl

Fagyvédő anyagok: pl. sza-haróz, mannit, glicerin

Töltőanyag: pl. glicin

Egy kiszerelt MAB-készítmény összetételeEgy kiszerelt MAB-készítmény összetétele

A monoklonális antitestek piacaA monoklonális antitestek piaca

Robbanásszerűen bővül.

Jelenleg ~100 MAB-készítmény van forgalomban, de ~500 van engedélyezés alatt az FDA-nál.

Előrejelzések szerint 2012-re az összes biológiai gyártású gyógyszer piacának felét a MAB-ok fogják kitenni (árbevé-telben kifejezve).