mÉtodos de estudo das cÉlulas
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MÉTODOS DE ESTUDO
DAS CÉLULAS
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TEORIA CELULAR: versão moderna
1) as células são as unidades morfológicas e fisiológicas de todos os organismos vivos;
2) as propriedades de um dado organismo dependem daquelas de cada uma de suas células;
3) as células originam-se somente de outras células, das quais herdam suas características;
4) a menor unidade da vida é a célula.
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DIVERSIDADE DAS CÉLULAS
VIRÚS
EUCARIONTES
PROCARIONTES
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���� PARASITAS INTRACELULARES OBRIGATÓRIOS
���� DNA ou RNA
���� Vírus animais, vírus vegetais e bacteriófagos
���� Parte central (informação genética), parte periférica (proteínas), invólucro lipoprotéico
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Bactérias
� caracterizam-se pela pobreza de membranas
� possuem: -membrana plasmática
-parede extracelular (proteção mecânica)
-citoplasma não compartimentalizado(polirribossomos)
-nucleóides
-não existe citoesqueleto
Ex.: Escherichia coli
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Células Animais e Vegetais
� caracterizam-se pela riqueza de membranas
� núcleo e citoplasma bem delimitados por membranas (trânsito constante de moléculas)
� formam compartimentos internos que separam os diversos processosmetabólicos
� possuem citoesqueleto
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Tipos de Microscópios
Microscopia de LuzConvencionalContraste de FaseContraste InterferencialCampo EscuroPolarizaçãoFluorescênciaConfocal a Laser
Microscopia eletrônicaTransmissãoAlta VoltagemVarredura
Outros tipos de microscópioTunelamento QuânticoForça AtômicaMicroespectrofotometria
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Com coloração fluorescente
Cores deinterferência
Diferenças deíndices de refração
Campoescuro
Sem coloração
Com coloração
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Componentes de um microscópio
Componentes ópticos:Fonte de luzSistema de lentes (condensador, objetiva, ocular)
Componentes Mecânicos:Base ou péCanhãoRevólverPlatinaParafusos macro e micrométricosCharriot
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Componentes de um microscópio
1. Base ou pé2. Fonte de luz3. Parafusos de foco4. Braço ou haste5. Condensador6. Platina7. Charriot8. Objetivas9. Revólver10. Canhão11. Ocular
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Os modelos microscópicos variam na forma e no desenho
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PREPARO DAS AMOSTRAS...
�Fixação = estabilização das estruturas celulares e intercelulares.
Fixação Química
1)-Fixadores químicos coagulantes: podem desnaturar as
proteínas em graus variáveis conforme sua estrutura molecular.
Ex: etanol.
2)-Fixadores químicos não coagulantes: são os aldeídos reativos,
como formaldeído e glutaraldeído, que formam ligações
covalentes com os grupos de aa livres de proteínas, produzindo
ligações cruzadas com as moléculas de proteínas adjacentes.
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INCLUSÃO EM PARAFINA
1) Fixação
2) Desidratação (álcool 70%, 80%,
95% e 100%)
3) Diafanização em álcool 100% +
xilol
4) Passagem em xilol puro
5) Dois banhos de parafina (estufa)
6) Inclusão em parafina em moldes
apropriados
Processamento convencional
INCLUSÃO EM HISTORRESINA
1) Fixação
2) Desidratação (álcool 70% e 95%)
3) Embebição em mistura de resina +
álcool 95%
4) Embebição em resina com
catalizador
5) Inclusão em resina
6) Polimerização em estufa
7) Colagem dos blocos em suporte
PREPARO DAS AMOSTRAS...
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SEQUÊNCIA GERAL DE COLETA E PREPARAÇÃO
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Existe pouco conteúdo dentro das
células que impedem a passagem da
luz, assim células fixadas e
seccionadas vistas ao microscópio
óptico são transparentes, com exceção
das células vegetais -cloroplastos!!!
Uma maneira de tornar as células
visíveis é a utilização de corantes!!!
Corantes = grupos cromofóricos
(responsáveis pela cor).
COLORAÇÃO DAS LÂMINAS PERMANENTES
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Hematoxilina e EosinaCORANTE BÁSICO (grupamento cromofórico é catiônico +) � afinidade por elementos ácidos
dentro das células – moléculas basófilas)
CORANTE ÁCIDO (grupamento cromofórico é aniônico -) � afinidade por elementos básicos
dentro das células – moléculas acidófilas)
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TECIDO EPITELIAL CORADO POR DIFERENTES CORANTES
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Microscopia de Fluorescência
TÈCNICAS ESPECIAIS
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Aplicações da Microscopia de Fluorescência
TÈCNICAS ESPECIAIS
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Aplicações da Microscopia de Contraste de Fase
1. Análise do material sem coloração prévia
2. Culturas de células3. Exames parasitológicos4. Esfregaços e Raspagens
de mucosas5. Sangue6. Protozoários de
ambientes aquáticos
TÈCNICAS ESPECIAIS
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EFEITO DO PLANO DE PLANO DE CORTE NA MORFOLOGIA CELULAR
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EFEITO DO PLANO DE PLANO DE CORTE NA MORFOLOGIA TECIDUAL
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MICROSCOPIA ELETRÔNICA
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Microscopia de Luz e Microscopia Eletrônica
Questões importantes: Ampliação e Resolução
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MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
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BACTÉRIA E VÍRUS EM MET
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MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA
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![Page 34: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012101/6169f2a211a7b741a34d23d3/html5/thumbnails/34.jpg)
![Page 35: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012101/6169f2a211a7b741a34d23d3/html5/thumbnails/35.jpg)
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![Page 36: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012101/6169f2a211a7b741a34d23d3/html5/thumbnails/36.jpg)
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![Page 37: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012101/6169f2a211a7b741a34d23d3/html5/thumbnails/37.jpg)
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![Page 38: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012101/6169f2a211a7b741a34d23d3/html5/thumbnails/38.jpg)
Centro de Microscopia Eletrônica
UNESP - Botucatu
MEV MET
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FIM