métodos de referencia y técnicas de laboratorio en uso para … · 2014-07-28 · métodos de...
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MMéétodos de Referencia todos de Referencia y Ty Téécnicas de Laboratorio encnicas de Laboratorio en
uso para Diagnuso para Diagnóóstico en stico en ParasitologParasitologííaa
MarMaríía Isabel Jercic L. a Isabel Jercic L. MsMs. EPT. [email protected]@ispch.cl
20072007
Red de LaboratoriosRed de Laboratorios
Red de Coproparasitología
350 Laboratorios Clínicos Red de Infección por T. cruzi
36 Laboratorios Clínicos
56 Bancos de Sangre
Red de Hidatidosis
20 Laboratorios Clínicos
Red de Toxoplasmosis
21 Laboratorios Clínicos
Red de Pneumocystis jiroveci
17 Laboratorios Clínicos
Laboratorio Nacional y de Referencia de Parasitología
LABORATORIO BIOLOGÍA MOLECULAR
VIGILANCIA REFERENCIA
PEEC SUPERVISIONES
CONTROL DE CALIDAD INVESTIGACIÓN
CURSOS ADIESTRAMIENTOS
CAPACITACIÓN
LAB. REF. PARASITOLOGÍA LABORATORIO ENTOMOLOGIA
FUNCIONESFUNCIONESSECCISECCIÓÓN PARASITOLOGN PARASITOLOGÍÍA A
DIAGNDIAGNÓÓSTICO EN STICO EN PARASITOLOGPARASITOLOGÍÍA A
DiagnDiagnóóstico Directostico Directo–– VisualizaciVisualizacióón del parn del paráásito en muestras de:sito en muestras de:
SangreSangreFluidosFluidos Deposiciones, orina, secreciones, etc.Deposiciones, orina, secreciones, etc.BiopsiasBiopsias
DiagnDiagnóóstico Indirectostico Indirecto–– BBúúsqueda de anticuerpos especsqueda de anticuerpos especííficos por ficos por
diferentes mdiferentes méétodos. todos.
DetecciDeteccióón del material genn del material genéético o tico o proteproteíínas constitucionales especnas constitucionales especííficasficas
PCRPCRCromatografCromatografííaa
VIGILANCIAVIGILANCIA
Reglamento sobre NotificaciReglamento sobre Notificacióón de Enfermedades n de Enfermedades Transmisibles de DeclaraciTransmisibles de Declaracióón Obligatoria N n Obligatoria N °°158158
–– NotificaciNotificacióón inmediatan inmediataMalariaMalariaTriquinosisTriquinosis
–– De NotificaciDe Notificacióón Diarian DiariaEnfermedad de ChagasEnfermedad de ChagasHidatidosisHidatidosis
–– Vigilancia de LaboratorioVigilancia de LaboratorioTrypanosoma cruziTrypanosoma cruzi Laboratorios ClLaboratorios Clíínicos y Bancos de nicos y Bancos de Sangre pSangre púúblicos y privados deben notificar semanalmente blicos y privados deben notificar semanalmente al ISP la identificacial ISP la identificacióón de n de T. cruzi, enviando muestras para T. cruzi, enviando muestras para su confirmacisu confirmacióón.n.
Se deben enviar a confirmar todas las Se deben enviar a confirmar todas las
muestras que resulten positivas en los muestras que resulten positivas en los
establecimiento pestablecimiento púúblicos o privadosblicos o privados
–– Existe un formulario especial para el envExiste un formulario especial para el envíío de o de
las muestras. las muestras. www.ispch.clwww.ispch.cl
–– No tiene costo la realizaciNo tiene costo la realizacióón de estos n de estos
exexáámenesmenes
–– Existe un algoritmo diagnExiste un algoritmo diagnóóstico que se aplica stico que se aplica
para cada parasitosis.para cada parasitosis.
REFERENCIAREFERENCIA
ExExáámenes dmenes disponibles para los isponibles para los laboratorios y pacientes plaboratorios y pacientes púúblicos blicos
de acuerdo a la previside acuerdo a la previsióón de n de paciente y privados con arancel.paciente y privados con arancel.
Listado en pagina Listado en pagina webwebwww.ispch.clwww.ispch.cl
Enfermedad de Enfermedad de ChagasChagas
Red de DiagnRed de Diagnóósticostico
Grupo Tamizaje 92Grupo Tamizaje 92–– ELISA y AglutinaciELISA y Aglutinacióón de Partn de Partíículasculas–– Deben enviar a confirmar las muestras POSITIVAS Deben enviar a confirmar las muestras POSITIVAS
e INDETERMINADASe INDETERMINADASGrupo ConfirmaciGrupo Confirmacióón 14n 14–– IFI Ig GIFI Ig G–– MicroscopMicroscopíía Directa a Directa
ISPISP–– ExExáámenes Directos menes Directos –– ExExáámenes Indirectosmenes Indirectos–– ExExáámenes Molecularesmenes Moleculares
Laboratorio Nacional y Laboratorio Nacional y de Referenciade Referenciade Parasitologde ParasitologííaaISPISP
Programa de Control VectorialPrograma de Control VectorialConfirmaciConfirmacióón de Muestrasn de MuestrasPrograma de control de la TransmisiPrograma de control de la Transmisióón n transplacentariatransplacentariaExExáámenes pacientesmenes pacientesNorma de AtenciNorma de Atencióón al paciente n al paciente chagchagáásicosico
ÚÚtil en la etapa agua de la enfermedad.til en la etapa agua de la enfermedad.En la etapa indeterminada o crEn la etapa indeterminada o cróónica snica sóólo el lo el 50 % de los pacientes es positivo.50 % de los pacientes es positivo.–– MicroscMicroscóópicos picos
FrotisFrotisExamen al frescoExamen al frescoGota gruesaGota gruesaMicroStroutMicroStrout
Concentración
ExExáámenes Directos menes Directos
DiagnDiagnóóstico Indirectostico Indirecto
Serología
Se han empleado:Se han empleado:
–– HemaglutinaciHemaglutinacióónn IndirectaIndirecta
–– EnzimoinmunoEnzimoinmuno ensayo Ig Gensayo Ig G
Inmunofluorescencia Indirecta Ig GInmunofluorescencia Indirecta Ig G
>o igual a 1: 20>o igual a 1: 20
–– Western Blot polivalente Western Blot polivalente IgGIgG Ig A e Ig MIg A e Ig M
Reacciones cruzadas con Reacciones cruzadas con LeishmaniaLeishmania, ,
mononucleosismononucleosis infecciosa, lepra.infecciosa, lepra.
Ig M para infecciones agudas y congIg M para infecciones agudas y congéénitasnitas
Enzimoinmuno ensayo ELISA Ig GEnzimoinmuno ensayo ELISA Ig G
Western blotWestern blotELECTROTRANSFERENCIA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS
CORRIENTE ELECTRICA
GEL SDS NITROCELULOSA INCUBACIÓN CON CONJUGADO
DESARROLLO
Western blot Infección por Trypanosoma cruzisueros positivos
Western blot Infección por Trypanosoma cruzisueros con otras parasitosis
Leishmaniosis Criptosporidiosis
BiologBiologíía Moleculara Molecular
Se puede emplear tSe puede emplear téécnicas para buscar cnicas para buscar DNA del parDNA del paráásito en pacientes sito en pacientes –– Agudos Agudos –– CrCróónicosnicos–– VectoresVectoresPuede ser cualitativo o CuantitativoPuede ser cualitativo o Cuantitativo–– PCR convencional PCR convencional ISPISP–– PCR tiempo real PCR tiempo real en proyectoen proyecto
Algoritmo de trabajoAlgoritmo de trabajo
Programa VectorialPrograma VectorialConfirmaciConfirmacióón de laboratorion de laboratorioTransmisiTransmisióón n TransfusionalTransfusionalTransmisiTransmisióón n TransplacentariaTransplacentaria
Hidatidosis HumanaHidatidosis Humana
Red de LaboratoriosRed de Laboratorios
20 instituciones20 instituciones–– Hospitales pHospitales púúblicos y privados. Clblicos y privados. Clíínicas y nicas y
Laboratorios privadosLaboratorios privadosExExáámenes Directosmenes Directos100 % ELISA Ig G 10% adem100 % ELISA Ig G 10% ademáás DD5s DD5Deben enviar a confirmar las muestras POSITIVAS e Deben enviar a confirmar las muestras POSITIVAS e INDETERMINADASINDETERMINADAS
ISPISP–– ExExáámenes Directos menes Directos –– ExExáámenes Indirectosmenes Indirectos–– ExExáámenes Molecularesmenes Moleculares
DiagnDiagnóóstico Directostico Directo
Se aplica a la observaciSe aplica a la observacióón n microscmicroscóópica del lpica del lííquido obtenido por quido obtenido por puncipuncióón de quiste hidatn de quiste hidatíídico.dico.
Quiste HidatQuiste Hidatíídicodico
PROTOESCOLEXPROTOESCOLEX
DiagnDiagnóóstico Indirectostico Indirecto
Serología
Se dispone de:Se dispone de:
Doble DifusiDoble Difusióón en n en gelgel con deteccicon deteccióón del Arco 5n del Arco 5ºº
EnzimoinmunoEnzimoinmuno ensayo Ig Gensayo Ig G
EnzimoinmunoEnzimoinmuno ensayo Ig Eensayo Ig E
Western blot polivalente Ig G, Ig A e Ig MWestern blot polivalente Ig G, Ig A e Ig M
AntAntíígeno Liquido Hidatgeno Liquido Hidatíídico extradico extraíído de quistes fdo de quistes féértilesrtiles
Reacciones cruzadas con cisticercosisReacciones cruzadas con cisticercosis
Western blot Hidatidosis sueros +
ToxoplasmosisToxoplasmosis
Toxoplasma gondiiToxoplasma gondii
Red de LaboratoriosRed de Laboratorios
21 instituciones21 instituciones–– Hospitales pHospitales púúblicos y privados. Clblicos y privados. Clíínicas y nicas y
Laboratorios privadosLaboratorios privadosELISA Ig G e ELISA Ig G e IgMIgMELFA Ig G e Ig M ELFA Ig G e Ig M
ISPISP–– ExExáámenes Indirectosmenes Indirectos
Laboratorio Nacional y Laboratorio Nacional y de Referenciade Referenciade Parasitologde ParasitologííaaISPISP
Importante en la transmisiImportante en la transmisióón n transplacentaria de la enfermedad, en transplacentaria de la enfermedad, en inmunocomprometidos y transplante de inmunocomprometidos y transplante de óórganos.rganos.
Inmunofluorescencia IndirectaInmunofluorescencia Indirecta Ig GIg G
ELFA Ig G, Ig M e Ig G ELFA Ig G, Ig M e Ig G avidityavidity
Inmunofluorescencia
MiniVidasMiniVidas bioMerieuxbioMerieux
ELFA para Toxoplasmosis detecciELFA para Toxoplasmosis deteccióón de n de IgGIgG e e IgMIgM
ToxocariasisToxocariasis
ToxocaraToxocara caniscanis
ToxocaraToxocara catiscatis
AntAntíígeno extracto somgeno extracto somáático de larvastico de larvasTTéécnica de eleccicnica de eleccióón:n:–– EnzimoinmunoEnzimoinmuno Ig G Mayor Ig G Mayor o igual a o igual a
1:641:64
El ISP dispone de:– 2 técnica de ELISA comercial y 1 propia– Técnica de Western blot comercial y
propia en desarrollo
ELISA Ig GELISA Ig G
De la LDe la Líínea LD nea LD BioBio DiagnosticDiagnosticLyonLyon, Francia., Francia.
SerSeríían positivos an positivos aquellas muestras aquellas muestras con las bandas de con las bandas de 24 y 35 24 y 35 KdKd. .
TriquinosisTriquinosis
Trichinella sppTrichinella spp
Se dispone de:Se dispone de:
–– 2 t2 téécnicas de ELISA Ig G una cnicas de ELISA Ig G una
comercial y otra propiacomercial y otra propia
–– 2 Western blot uno comercial Ig G y 2 Western blot uno comercial Ig G y
otro polivalenteotro polivalente Ig G, Ig A e Ig M.Ig G, Ig A e Ig M.
PatrPatróónn Debe estar presente 47 Debe estar presente 47 kDakDa junto con a lo menos una de las junto con a lo menos una de las bandas de 63, 52, 32 y 28 bandas de 63, 52, 32 y 28 kDakDa..
Western blot ISP sueros Positivos
De la LDe la Líínea LD nea LD BioBio DiagnosticDiagnosticLyonLyon, Francia., Francia.
SerSeríían positivos an positivos aquellas aquellas muestras con las muestras con las bandas de bandas de P 43P 43--44 y P 6444 y P 64
CoproparasitologCoproparasitologííaa
Red de LaboratoriosRed de Laboratorios
350 instituciones350 instituciones–– Hospitales pHospitales púúblicos y privados. Clblicos y privados. Clíínicas nicas
Consultorios y Laboratorios privadosConsultorios y Laboratorios privados–– Examen Seriado de deposiciones Examen Seriado de deposiciones
TelemannTelemann y y BurrowsBurrows ModificadosModificados
–– BBúúsqueda de squeda de Enterobius vermicularisEnterobius vermicularisTest de GrahamTest de GrahamBBúúsqueda desqueda de Cryptosporidium sppCryptosporidium spp
ISPISP
Laboratorio Nacional y Laboratorio Nacional y de Referenciade Referenciade Parasitologde ParasitologííaaISPISP
Generales Generales –– Se puedes derivan muestras de deposiciones para Se puedes derivan muestras de deposiciones para
confirmaciconfirmacióón de elementos microscn de elementos microscóópicos picos encontrados.encontrados.
Estudio en pacientes inmunocomprometidosEstudio en pacientes inmunocomprometidos–– BBúúsqueda de squeda de
Cryptosporidium Cryptosporidium parvumparvumIsosporaIsospora bellibelliCiclosporaCiclospora cayetanensiscayetanensisMicrosporidiumMicrosporidium spsp CromotropoCromotropo 2 R2 R
IdentificaciIdentificacióón de elementos macroscn de elementos macroscóópicos picos derivados derivados –– Se pueden enviar elementos o ejemplares Se pueden enviar elementos o ejemplares
eliminados por boca, nariz o ano.eliminados por boca, nariz o ano.–– Existe formulario especialExiste formulario especial
ZielhZielh NeelsenNeelsenBurrowsBurrowsAutofluorescenciaAutofluorescencia
Algunos Emergentes y Algunos Emergentes y rere--emergentesemergentes
Infecciones por especies Infecciones por especies del gdel géénero nero PlasmodiumPlasmodium
MalariaMalaria
FormaciFormacióón de Redn de Red
Se han realizado 3 talleresSe han realizado 3 talleres–– 45 Profesionales capacitados45 Profesionales capacitados
Protocolo de trabajo comProtocolo de trabajo comúúnnCapacidad de enfrentar diagnCapacidad de enfrentar diagnóóstico stico inicialinicialMMéétodos todos inmunocromatogrinmunocromatográáficosficos
El diagnEl diagnóóstico clstico cláásico es por sico es por microscopmicroscopíía y por lo tanto es operador a y por lo tanto es operador dependiente.dependiente.Existen Existen kitskits comerciales para realizar comerciales para realizar –– MMéétodos todos InmunocromatogrInmunocromatográáficosficos–– MMéétodos de biologtodos de biologíía molecular que a molecular que
permiten diferenciar las especies de permiten diferenciar las especies de Plasmodium.Plasmodium.
P falciparumP falciparumP vivaxP vivaxP malariaeP malariaeP ovaleP ovale
P ovale
P falciparum P vivax
P malariae
ComparaciComparacióón por mn por méétodotodo
MicroscopMicroscopííaa–– MMéétodo tradicionaltodo tradicional–– Requiere experienciaRequiere experiencia–– Bastante tiempo por muestrasBastante tiempo por muestras–– Falsos NegativosFalsos Negativos–– LLíímite sensibilidad 1mite sensibilidad 1--5 par5 paráásitos sitos ulul
P falciparum
P vivax
InmunocromatogrInmunocromatográáficosficos–– Detectan antDetectan antíígenos circulantegenos circulante–– Muy rMuy ráápidospidos–– No diferencian todas las especiesNo diferencian todas las especies–– LLíímite de sensibilidad 100 parmite de sensibilidad 100 paráásitos/sitos/ululPCRPCR–– Detecta las cuatro especiesDetecta las cuatro especies–– Detecta infecciones mixtasDetecta infecciones mixtas–– Posibilidad de automatizaciPosibilidad de automatizacióónn–– RRáápidospidos–– Limite de sensibilidad 0.01 a 0.05 parLimite de sensibilidad 0.01 a 0.05 paráásitos/sitos/ulul
ICT MalariaICT Malaria
AntAntíígeno geno
ProteProteíína 2 rica en histidina na 2 rica en histidina HRP2HRP2
OptimalOptimal
AntAntíígeno Lactato geno Lactato deshidrogenasadeshidrogenasa especespecííficafica
Las bandas esperadas para Las bandas esperadas para muestras positivas son muestras positivas son visibles tras la segunda visibles tras la segunda reaccireaccióón de amplificacin de amplificacióón: n:
P. falciparumP. falciparum: 395 : 395 bpbp •• •• •• ••
P. malariaeP. malariae: 269 : 269 bpbp
P. vivaxP. vivax: 499 : 499 bpbp
P. ovaleP. ovale: 436 : 436 bpbp
499499
436436
395395
269269
PCR ISP BIOMALARPCR ISP BIOMALAR
StrongyloidiasisStrongyloidiasis
Strongyloides stercoralis
Parasitosis cuyo diagnParasitosis cuyo diagnóóstico directo es stico directo es de baja sensibilidad, ya que se utilizan de baja sensibilidad, ya que se utilizan muestras fijadas.muestras fijadas.
Se sospecha en pacientes con Se sospecha en pacientes con eosinofiliaeosinofiliaalta.alta.
Se registran prevalencias mSe registran prevalencias máás altas en s altas en instituciones cerradas como hospitales instituciones cerradas como hospitales siquisiquiáátricostricos..
Larvas en deposiciones
Filariforme
Rabditiforme
ELISA ELISA IgGIgG ISPISPMERCADO P, Rubén, JERCIC L, María Isabel, TORRES H, Patricio et al. Inmunodiagnóstico de las infecciones por Strongyloides stercoralis en Chile utilizando la prueba de ELISA. Rev. méd. Chile, dic. 2002, vol.130, no.12, p.1358-1364. ISSN 0034-9887.
LeishmaniaLeishmaniaSchistosomiasisSchistosomiasisFilariasisFilariasis
De la LDe la Líínea LD nea LD BioBioDiagnosticDiagnostic LyonLyon, , Francia.Francia.
SerSeríían positivos aquellas an positivos aquellas muestras con las bandas muestras con las bandas de de P 14 y/o P 16.P 14 y/o P 16.
De la LDe la Líínea LD nea LD BioBioDiagnosticDiagnostic LyonLyon, , Francia.Francia.
SerSeríían positivos aquellas an positivos aquellas muestras con 3 de las muestras con 3 de las bandas de bandas de P 65, P 70, P P 65, P 70, P 80, P 95, P 110 y P 120.80, P 95, P 110 y P 120.
Amebas de vida Amebas de vida LibreLibre
GGéénero nero AcanthamoebaAcanthamoebaEn el ISPEn el ISP–– Cultivo AxCultivo Axééniconico
Demora 7 dDemora 7 dííasasRaspado cornealRaspado cornealBiopsiaBiopsiaLentesLentes
EpidemiologEpidemiologíía Moleculara Molecular
CultivoCultivo in vitro, a in vitro, a travtravééss del del mediomedio ANNE, ANNE, siguiendosiguiendo lo lo descritodescrito porporPage. (LCR; Page. (LCR; EpitelioEpitelio corneal; corneal; BiopsiasBiopsias; ; lenteslentes de de contactocontacto., etc.., etc.
• Sobre agar no nutriente, se depositauna pelicula de Sol. de Escherichia coli.
• Luego se procede a la siembra
• Estufa a 37° c., durante 7 días, revisandoperiodicamente.-
ImportadasImportadasLeishmaniasisLeishmaniasisSchistosomiasisSchistosomiasisFilariasisFilariasis
De la LDe la Líínea LD nea LD BioBioDiagnosticDiagnostic LyonLyon, , Francia.Francia.
SerSeríían positivos aquellas an positivos aquellas muestras con las bandas muestras con las bandas de de P 14 y/o P 16.P 14 y/o P 16.
De la LDe la Líínea LD nea LD BioBioDiagnosticDiagnostic LyonLyon, , Francia.Francia.
SerSeríían positivos aquellas an positivos aquellas muestras con 3 de las muestras con 3 de las bandas de bandas de P 65, P 70, P P 65, P 70, P 80, P 95, P 110 y P 120.80, P 95, P 110 y P 120.
FilariasisFilariasis
DetecciDeteccióón de n de –– BrugiaBrugia malayimalayi BrugiaBrugia timoritimori–– Loa Loa loaloa–– MansonellaMansonella ozzardiozzardi, , MansonellaMansonella
perstans,Mansonellaperstans,Mansonella streptocercastreptocerca–– OnchocercaOnchocerca volvulusvolvulus–– WuchereriaWuchereria bancroftibancroftiELISA Ig GELISA Ig G
Aseguramiento de la Aseguramiento de la calidadcalidad
Control de Calidad Interno Control de Calidad Interno Control de Calidad ExternoControl de Calidad Externo
Control de Calidad Control de Calidad InternoInterno
Debe estar presente en todos los Debe estar presente en todos los laboratorios y bancos de sangrelaboratorios y bancos de sangreExiste literatura de apoyoExiste literatura de apoyo–– Manual de control de calida Interno ISPManual de control de calida Interno ISP
Se capacita en todos los cursos Se capacita en todos los cursos
El ISP tiene un programa especial para El ISP tiene un programa especial para
todas las todas las ááreas del laboratorio clreas del laboratorio clíínico y nico y
bancos de sangre como tambibancos de sangre como tambiéén para n para
Laboratorios del Ambiente y de Salud Laboratorios del Ambiente y de Salud
OcupacionalOcupacional
Control de Calidad Control de Calidad Externo Externo
ÁÁrea Parasitologrea Parasitologííaa
SUBSUB--PROGRAMASPROGRAMAS–– DiagnDiagnóóstico stico CoproparasitolCoproparasitolóógicogico
Cryptosporidium Cryptosporidium parvumparvum..
–– DiagnDiagnóóstico de Serologstico de Serologíía para la a para la Enfermedad de Chagas:Enfermedad de Chagas:
Grupo Tamizaje Grupo Tamizaje
Grupo confirmaciGrupo confirmacióónn
–– SerologSerologíía para Hidatidosis Humana.a para Hidatidosis Humana.–– DiagnDiagnóóstico de stico de Pneumocystis jiroveciPneumocystis jiroveci–– SerologSerologíía para Toxoplasmosis humanaa para Toxoplasmosis humana
I