MTT原理MTT全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素 C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formazan），甲臜的多少可以用酶标仪在 570nm 处进行测定。在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT 不会有反应。MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为 5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于 100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用 0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放 4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在 0-0.7 范围内。以下版权声明必须遵守，转载时必须以链接的形式注明如下信息：

磷酸缓冲液的配制方法很容易，可以参考以前的文章。但 PBS 缓冲液则让很多人感到迷惑。下面是我常用的配方。0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取 8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的 pH值至 7.4，最后加蒸馏水定容至 1L即可。在 15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少 20分钟），保存存于室温或 4℃冰箱中。需要注意的是，通常所说的浓度 0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非 Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入 100 u/ml青霉素和链霉素之后再调 PH、定容、灭菌消毒。以下版权声明必须遵守，转载时必须以链接的形式注明如下信息：