n -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (hpma)
DESCRIPTION
Využití “Fluorescence Lifetime Microscopy” pro analýzu intracelulární lokalizace polymerních terapeutik nesoucích doxorubicin. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/1.jpg)
Využití “Fluorescence Lifetime Microscopy” pro analýzu intracelulární lokalizace polymerních terapeutik nesoucích doxorubicin
Hovorka Ondřeja, Šubr Vladimírb, Větvička David a, Kovář Lubomíra, Strohalm Jiříb, Strohalm Martina , Benda Aleš c,Hof Martinc, Ulbrich Karelb, Říhová Blankaa
a Mikrobiologický ústav, AVČR v.v.i, Vídeňská 1083, 142 20, Praha 4b Ústav Makromolekulární Chemie, AVČR v.v.i, Heyrovského nám. 2, 162 06, Praha6c Ústav Fyzikální Chemie J. Heyrovského, AVČR, v.v.i., Dolejškova 2155/3, 182 23 Praha 8
![Page 2: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/2.jpg)
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]CH3
CH2-CCO[ ]
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]
SPACER
N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA)
![Page 3: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/3.jpg)
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]CH3
CH2-CCO[ ]
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]
SPACER
N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA)
doxorubicinλex = 540nm, λem 612
![Page 4: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/4.jpg)
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]CH3
CH2-CCO[ ]
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]
SPACER
N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA)
doxorubicinλex = 510nm, λem 590
MW = 20kDa
![Page 5: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/5.jpg)
Intracelulární lokalizace doxorubicinu po inkubaci buněk s polymerním konjugátem
jaderná membrána
![Page 6: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/6.jpg)
Intracelulární lokalizace doxorubicinu po inkubaci buněk s polymerním konjugátem
jaderná membrána
membrána andozómů
![Page 7: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/7.jpg)
Intracelulární lokalizace doxorubicinu po inkubaci buněk s polymerním konjugátem
jaderná membrána
membrána andozómů
Golgiho aparát
![Page 8: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/8.jpg)
7,8-dehydro-9,10-desacetyldoxorubicinone
![Page 9: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/9.jpg)
7,8-dehydro-9,10-desacetyldoxorubicinone
![Page 10: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/10.jpg)
Emisní spektra doxorubicinu a D* při 488nm excitaci ve vodě
kvantový výtěžek D* je 10-20 vyšší v závislosti na prostředí……
![Page 11: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/11.jpg)
doxorubicin
D*
![Page 12: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/12.jpg)
spektrální unmixing směsi Dox + D* (5:1) založený na naměřených spektrech
![Page 13: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/13.jpg)
spektrální analýza polymerního konjugátu
spektrální unmixing založený na naměřených spektrech
![Page 14: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/14.jpg)
![Page 15: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/15.jpg)
![Page 16: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/16.jpg)
Doxorubicin
D*
![Page 17: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/17.jpg)
stanovené hodnoty „fluorescence lifetime“ pro Dox, D* a polymerní konjugát v roztoku bez buněk a v médiu zbaveném buněk
conjugate dox D* HPMA-Dox
average Lifetime
(ns)
cell-free system
1,1 3,9 1,2 / 4,1 *
average Lifetime
(ns)cellular system
1,5 4,1 2,3 / 4,4 *
![Page 18: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/18.jpg)
distribuce hodnot „fluorescence lifetime“ pro Dox, D* a polymerní konjugát v buněčné kultuře
![Page 19: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/19.jpg)
[ns]
doxorubicin D* Dox+D* (5:1) HPMA-Dox
![Page 20: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/20.jpg)
ZÁVĚR
FLIM je technika která umožní oddělit i fluorochromy, jejichž emisní spektrální charakteristika se výrazně překrývá a algorytmy pro spektrální unmixing v takových případech selhávají
Stanovili jsme lifetime pro Dox, D* a polymerní konjugát a podařilo se nám upřesnit a potvrdit jeho intracelulární distribuci.
![Page 21: N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062519/56814e79550346895dbc1608/html5/thumbnails/21.jpg)
Šubr V.Strohalm J.Ulbrich K.
Mikrobiologický ústav, AVČR v.v.i,
Ústav Makromolekulární
Chemie, AVČR v.v.i, Ústav Fyzikální Chemie J.
Heyrovského , AVČR, v.v.i.,
Hovorka O.Cimburek Z.Větvička D.
Kovář L.Strohalm M.Říhová B.
Benda A.
Hof M.