NanoNano e e MacropartículasMacropartículas paraparaaplicaçõesaplicações BiomédicasBiomédicas

NanopartículasNanopartículas

Partículas das dimensões do nanómetro

1 nm 0,000000001 m

MacropartículasMacropartículasPartículas das dimensões do micrómetroPartículas das dimensões do micrómetroPartículas das dimensões do micrómetroPartículas das dimensões do micrómetro

1 0,000001 m

Cultura de célulasCultura de células

LinhasLinhas celularescelulares -------- São São célulascélulas transformadastransformadasqueque se se dividemdividem rapidamenterapidamente..

MeioMeio de de CulturaCultura -------- MeioMeio queque contemcontem sorosoro, , antimicóticosantimicóticos e e antibióticosantibióticos, , soluçãosolução tampãotampão..

TripsinaTripsina -------- EnzimaEnzima queque possibilitapossibilita a a TripsinaTripsina -------- EnzimaEnzima queque possibilitapossibilita a a desagregaçãodesagregação das das célulascélulas umasumas das das outrasoutras e a e a

separaçãoseparação da base da da base da placaplaca..

DAPIDAPIA molécula de DAPI (A molécula de DAPI (A molécula de DAPI (A molécula de DAPI (A molécula de DAPI (A molécula de DAPI (A molécula de DAPI (A molécula de DAPI (44444444´́́́́́́́,,,,,,,,6 6 6 6 6 6 6 6 –––––––– diamidinodiamidinodiamidinodiamidinodiamidinodiamidinodiamidinodiamidino--------22222222--------

fenilfenilfenilfenilfenilfenilfenilfenil--------indol) é um marcador fluorescente indol) é um marcador fluorescente indol) é um marcador fluorescente indol) é um marcador fluorescente indol) é um marcador fluorescente indol) é um marcador fluorescente indol) é um marcador fluorescente indol) é um marcador fluorescente

que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.que se liga fortemente à molécula de DNA.

Esta molécula atravessa a membrana Esta molécula atravessa a membrana

celular sem a danificar, e é usada celular sem a danificar, e é usada

para visualizar os npara visualizar os núúcleos em células mortas ou vivas.cleos em células mortas ou vivas.

Em microscopia de fluorecência a molécula Em microscopia de fluorecência a molécula

de DAPI é excitada com radiaçde DAPI é excitada com radiaçãão ultravioleta e emiteo ultravioleta e emite

radiaçradiaçãão na zona do azul.o na zona do azul.

Marcação de núcleos de célulasMarcação de núcleos de células--linha e linha e visualizaçãovisualização

Observação de células marcadas com DAPI ao microscópio de fluerescência. Em cima uma montagem (merged) e em baixo apenas a imagem dos núcleu coloridos com DAPI.

Observação de células marcadas com DAPI ao microscópio de fluerescência. Em cima uma montagem (merged) e em baixo apenas a imagem das células em microscópio óptico.

TransfecçãoTransfecção

Processo em que se adicionam nanopartículas magnéticas (óxido de ferro) ao DNA, a introduzir na célula. Esta mistura é adicionada às células e a placa é colocada sobre ímans que permitem que as nanopartículas e o DNA penetrem nas que as nanopartículas e o DNA penetrem nas

células.

Resultados

O gene da GFP produz a proteína que é fluorescente (verde)

Extracção de Ficocianina

Spirulina --- Um tipo de cianobactériasunicelulares, coloniais ou filamentosas.unicelulares, coloniais ou filamentosas.

Ficocianina --- Proteína solúvel em água, estávelà temperatura ambiente, de cor azul e

fluorescente.

Radiação incidente----------- VerdeRadiação emitida---------Vermelha

Espectrofotometria

0.114

ESPECTRO DE ABSORÇÃO DA FICOCIANINA

ABSORVÂNCIA

-0.04

-0.02

0.00

0.02

0.04

0.06

0.08

0.10

A

400.0 450 500 550 600 650 700 750 800.0

-0.056

nm

COMPRIMENTO DE ONDA

Procedimento Qual a cor da solução?

A solução fica turva ou límpida?

A solução emite fluorescência vermelha?

A proteina está desnaturada?

Junte 5ml de fosfato de sódio 0.1M (pH=7)

Azul Claro Límpida Sim Não

Junte 5ml de água destilada Azul Claro Límpida Sim Não

Junte 5ml de acetona Esbranquiçada Turva Não Sim

Junte 5ml de uma solução com detergente

Transparente Límpida Não Sim

Junte 5ml de Junte 5ml de HCL 1M Azul Claro Límpida Não Sim

Junte 5ml de tampão fosfato de sódio e coloque o tubo num copo com água em ebulição

Transprente Límpida Não Sim

Esferas de Alginato