nefelometria i turbidimetria
TRANSCRIPT
![Page 1: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/1.jpg)
NEFELOMETRIA I TURBIDIMETRIA
![Page 2: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/2.jpg)
Principis bàsics• Espectroscòpies d’absorció molecular en la zona
d’espectre visible• Comportament de la matèria al incidir una radiació
electromagnètica (fenòmens de reflexió, dispersió, bloqueig i transmissió de la resta de radiació fins el detector)
• Característiques de la mostra: són partícules no transparents en un líquid (precipitats, suspensions col·loïdals,..)
• La nefelometria estudia la radiació dispersada per la mostra en angles diferents al d’incidència de la radiació
• La turbidimetria estudia la radiació no dispersada• Mètodes analítics qualitatius i quantitatius
![Page 3: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/3.jpg)
Nefelometria• La dispersió de la radiació és un fenomen
físic resultant de la interacció entre aquesta i les partícules en suspensió en un medi adequat.
• Els angles de mesura de la radiació dispersada oscil·len entre 15 i 90
• Aquesta dispersió està influïda per:– La concentració de l’analit– Volum, mida, pes i nombre de partícules– Longitud de l’ona de la radiació incident– Distància del detector a la cubeta
![Page 4: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/4.jpg)
Nefelometria (II)El grau d’influència d’aquests factors està
reflectit en la teoria de Rayleigh:
1. La intensitat de llum dispersada és:- Directament proporcional a la concentració
de les partícules en la mostra- Directament proporcional al pes molecular
de les …- Inversament proporcional al quadrat de la
distància entre el detector i la cubeta- Inversament proporcional a la quarta
potència de la λ
![Page 5: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/5.jpg)
Nefelometria (III)2. La distància entre el detector i la cubeta
és relacionen directament amb la sensibilitat dels mètodes aplicats
3. El model de dispersió depèn de la relació entre la mesura de la partícula i la longitud d’ona de la radiació incident. Quan són del mateix ordre, es produeix una dispersió de la radiació en diferents angles, fet que facilita la seva mesura.
![Page 6: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/6.jpg)
Nefelometria (IV)L’equip de mesura és específic per a
aquestes determinacions i està dissenyat de manera quel detector pot variar de posició respecte a la direcció de la radiació incident en uns angles preestablerts
![Page 7: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/7.jpg)
Nefelometria (V)Si en un principi la mostra és transparent i
al aplicar els reactius apareixen les partícules en suspensió, per a ajustar l’espectrofotòmetre utilitzarem un blanc-mostra, que elimina el bloqueig de la radiació incident per causes alienes a l’analit i degudes a la mostra.
![Page 8: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/8.jpg)
Tipus de dispersionsEs mostren per a tres mides de partícula, corresponents a les dispersions de Rayleigh, Rayleigh-Debye i Mie.L’angle de dispersió és el que existeix entre els rajos incident i dispersat. Així, és 0° per a la dispersió directa i 180° per a la dispersió que es dirigeix cap a enrere.
![Page 9: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/9.jpg)
D. Rayleigh D. R-Debye D. Mie
7000-40000 nm
![Page 10: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/10.jpg)
![Page 11: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/11.jpg)
Dispersió de la llum per diverses molècules i cèl·lules a 340 i 630nm
Al augmentar la mida de les partícules respecte a la λ del raig incident, la radiació dispersada es distribueix asimètricament
Partícules Mida (nm)
λ (nm) Dispersió
IgG 8 340 - 630 Rayleigh / R
IgM 35 340 - 630 R-Debye / R
Immunocomplexos
20-100 340 - 630 R-Debye / R
-Lipoproteïna 5-15 340 - 630 Rayleigh / R
-Lipoproteïna 15-30 340 - 630 R / R-Debye
Quilomicrons 200-450 340 - 630 R-D / R-D
E. Coli 500 340 - 630 Mie / R-Debye
Eritròcits 7500 340 - 630 Mie / Mie
![Page 12: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/12.jpg)
TurbidimetriaMesura la radiació bloquejada per part de
la mostra, relacionant la intensitat del feix incident i del resultant d’atravessar la cubeta
La detecció de la radiació transmesa es realitza en la mateixa direcció quel feix incident (θ = 0⁰) i el senyal pot expressarse com absorbància o com transmitància
![Page 13: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/13.jpg)
Turbidimetria(II)
![Page 14: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/14.jpg)
Turbidimetria (III)Aquest fenomen es regeix per la llei de
Lambert-Beer: la intensitat de radiació bloquejada per la mostra és directament proporcional a la concentració de l’analit
L’equip de mesura en general és el mateix que en espectroscopia d’absorció molecular en el rang del visible
![Page 15: Nefelometria i turbidimetria](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022042615/55b19185bb61eb73198b45a8/html5/thumbnails/15.jpg)
Nefelometria i TurbidimetriaEstudi comparatiu (diferències i similituds)
Turbidimetria NefelometriaMesura Radiació no dispersada Rad. Dispersada Equip Espectrofotòmetre Aparell específic Sensibilitat Depèn de l’equip Depèn del blanc Límit detecció Depèn de l’equip Depèn del blanc Interferències Existeixen de matriu λ 320-380 nm i des de 500 a 600nm Mètodes A punt final Quantitatius Cinètics Qualitatius Recta patró Aplicacions Determinació de proteïnes: Det. del calci (mètode del ATCA) (precipitació amb sals de P i S)Cost Menor Major (cal aparell) Angle feix incident 0⁰ 15-90⁰