nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · konflikt rhd przed...
TRANSCRIPT
![Page 1: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/1.jpg)
Katarzyna Guz
Instytut Hematologii i Transfuzjologii w Warszawie
![Page 2: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/2.jpg)
Nieinwazyjne badania molekularne
antygenów komórek krwi
Dlaczego są ważne?
Dzięki czemu są możliwe?
Jakimi metodami prowadzimy je w Polsce i na świecie?
Dlaczego nie są proste?
Jakie są nasze wyniki i wyniki innych laboratoriów?
Co wymaga ulepszenia?
![Page 3: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/3.jpg)
Dlaczego są ważne?
Antygeny komórek krwi mogą być immunogenne:
erytrocyty: najważniejsze RhD, ale też K, Rhc, RhE i inne
płytki: najważniejsze HPA-1a, ale też HPA-5b i inne HPA
Matczyne alloprzeciwciała
mogą powodować chorobę hemolityczną (ChHPN) lub
alloimmunologiczną małopłytkowość (AIMP/N) płodu/noworodka, gdy
dany antygen jest obecny na komórkach płodu
nie są groźne, gdy płód nie ma antygenu do którego są przeciwciała
nie trzeba monitorować ciąży metodami inwazyjnymi (kordocenteza,
amniopunkacja - ryzyko utraty płodu 1%, pogłębienia alloimmunizacji
Immunoprofilaktyka konfliktu RhD – nie potrzebna jak płód Rh-
![Page 4: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/4.jpg)
Konflikt RhD
przed immunoprofilaktyką
~20% immunizacja
immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu
1,6% immunizacja (Lenkiewicz 2000), 0,49% w latach 2006-2007
(Żupańska 2009) ~1000 rocznie w Polsce
90% skuteczność (zaniedbania podania immunoglobuliny anty-D, za mała dawka, przeciek i alloimmunizacja już w trakcie ciąży, u 1% ciężarnych w pierwszej ciąży, błędy w oznaczeniu RhD dziecka)
immunoprofilaktyka w 28 lub 34 tyg ciąży (rutynowo
stosowana w wielu krajach)
Obniżenie ryzyka immunizacji do 0,3% (van der Schoot 2009)
wysokie koszty, a nie jest potrzebna gdy płód RhD ujemny (40%)
w Wielkiej Brytanii 40 000 kobiet na 700 000 porodów rocznie
niepotrzebnie dostanie immunoglobulinę anty-D (Wright 2009)
![Page 5: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/5.jpg)
Konflikty inne niż RhD
brak immunoprofilaktyki
obowiązek skriningu przeciwciał czerwonokrwinkowych u
wszystkich ciężarnych w 12 i 28 tyg ciąży od roku 1996
zagwarantowany ustawowo:
ocena stosowania tego prawa w latach 2006-2007 (Żupańska
2009):
niespełna 48% ciężarnych objęto badaniami skriningowymi
(prawie 100% w Holandii)
jedynie 50% z nich to ciężarne RhD dodatnie (ich liczba powinna
być 5-krotnie wyższa)
przeciwciała nie anty-D u 0,37% ciężarnych RhD+ (anty-E, -K, -
c, -Jka,-Jkb, -Fya, -C, MNS, anty-Coa)
szacunkowo ~2000 przypadków rocznie w Polsce – aż 4/5
niedodiagnozowane
![Page 6: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/6.jpg)
Klinicznie istotne przeciwciała nie
anty-D Anty-K:
ciężka ChHP/N
Anty-c:
ciężka ChHPN nawet przy niskim mianie przeciwciał
przeciwciała mogą wytworzyć się w późniejszym etapie ciąży
Anty-E:
często wykrywane u ciężarnych
na ogół nie reagują one w pośrednim teście antyglobulinowym (PTA)
albo miano ich jest bardzo niskie
rzadko są przyczyną choroby hemolitycznej płodów/noworodków
(ChHP/N)
zdarzają się przypadki ChHP/N o bardzo ciężkim przebiegu
![Page 7: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/7.jpg)
Dzięki czemu są możliwe?
Inwazyjna
badania
antygenów
na komórkach pobranych w trakcie kordocentezy
DNA
z amniocytów
zbyt mało materiału u około 2% kobiet; ryzyko utraty płodu 1% (Mujezinovic, 2007)
z kosmków łożyska
zbyt mało materiału u około 8%;
ryzyko utraty płodu u około 1% (Mujezinovic, 2007)
W Wielkiej Brytanii rocznie ~20 000 amniocentez i 5 000 CVS - około przypadków 250 utraty płodu
Nieinwazyjna
badania
komórek płodu we krwi matki
zarzucona bo komórki te mogą przetrwać >20 lat
wolnokrążącego DNA płodu (cell free fetal - cff-DNA) w osoczu kobiety ciężarnej
Diagnostyka prenatalna
![Page 8: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/8.jpg)
Izolacja
DNA
cff-DNA w osoczu ciężarnych (Lo 1997)
cff-DNA
DNA matki
Z wykładu „ Non – invasive Prenatal Diagnosis
Technical Challenges and Advances, Helen White, PhD, 2009
![Page 9: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/9.jpg)
Charakterystyka cff-DNA możliwe do wykrycia już w 5/7 tygodniu ciąży
stężenie początkowo bardzo niskie, wzrasta z wiekiem
ciąży, ale zawsze konieczne czułe metody by je
wykryć
stanowi tylko 3-6% DNA w osoczu – reszta to DNA
matki
ulega degradacji w kilka godzin po porodzie (źródłem
cff-DNA komórki trofoblastu)
![Page 10: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/10.jpg)
Kierunki intensywnych badań
cff-DNA w osoczu
Choroby uwarunkowane genetycznie
sprzężone z płcią
jednogenowe
aneuploidia
Konflikty serologiczne (od 10 lat w IHiT):
RhD, Rhc, RhE
K w standaryzacji
![Page 11: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/11.jpg)
Jakimi metodami badamy cff-DNA?
Efektywna metoda izolowania DNA:
z dużych objętości (1 ml)
odczynnikami dedykowanymi do izolowania kwasów
nukleinowych wirusów
Bardzo czuła i specyficzna detekcja DNA:
real-time PCR
spektrometria mas MALDI-TOF
digital PCR
Ograniczenie ryzyka kontaminacji na etapie
przedanalitycznym i analitycznym
![Page 12: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/12.jpg)
Dlaczego nie jest to proste?
śladowa ilość cff-DNA w osoczu wobec wysokiej proporcji
DNA matki
tylko połowa genów w cff-DNA pochodzi od ojca
różna skala trudności badania w zależności jakie jest podłoże
genetyczne determinujące antygen, którego szukamy u płodu
ryzyko kontaminacji próbki DNA w fazie przedanalitycznej
genem powszechnym w populacji
konieczność udowodnienia, że badamy DNA płodu, a nie tylko
DNA matki - trudności w opracowaniu taniej, uniwersalnej
kontroli cff-DNA > niedopuszczalny wynik fałszywie ujemny!
![Page 13: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/13.jpg)
Skale trudności nieinwazyjnych
badań prenatalnych Najłatwiej szukać genu, którego nie ma u matki
SRY - nie ma go u kobiet
RHD – nie ma go u kobiet RhD-, a jest u osób
RhD+
ale skomplikowane i różnorodne podłoże fenotypów RhD+ i
RhD– stwarza dodatkowe trudności
![Page 14: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/14.jpg)
Podłoża genetyczne fenotypu RhD(-)
Delecja (brak) genu RHD (99% w rasie białej*)
pseudogen RHD ψ (67% w rasie negroidalnej)
RHD-CE(3-9)-D (4-6% w rasie żółtej)
RHDel (20-30% w rasie żółtej)
inne nieznane dotąd mutacje
* u 1% osób RhD- rasy kaukaskiej gen RHD jest obecny,
różne warianty RHD niemego
![Page 15: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/15.jpg)
Warianty białka RhD o zmienionej
ekspresji lub/i zmienionych epitopach Słabe D - mała ilość antygenu D na krwinkach
mutacje punktowe w regionach przezbłonowych lub
wewnątrzkomórkowych białka RhD i niektóre hybrydy
RHD-CE-D
Częściowy D - utrata jakiegoś epitopu D
hybrydy RHD-CE-D lub mutacje punktowe w
zewnątrzkomórkowych fragmentach białka RhD
DEL - szczególnie słaby D możliwe do wykrycia
serologicznie tylko techniką adsorpcji elucji
mutacje nonsensowne lub delecja eksonu 9 lub 8 RHD
![Page 16: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/16.jpg)
Konsekwencje skomplikowanego podłoża
genetycznego antygenu RhD dla
nieinwazyjnej diagnostyki
Niektóre osoby RhD-mają gen RHD lub jego
fragmenty
Jeśli kobieta Rh ujemna ma niemy gen RHD nie można u niej wykonać nieinwazyjnej diagnostyki RHD płodu
Analiza poziomu genu RHD względem genu kontrolnego na poziomie ilości DNA matczynego a nie cff-DNA
Niektóre osoby RhD+ mogą
nie mieć pewnych
fragmentów genu RHD
RhD dodatni płód może nie mieć
wszystkich eksonów/intronów genu
RHD
Konieczne badanie więcej niż jednego
fragmentu RHD
![Page 17: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/17.jpg)
Ilościowe wyniki wykrywania RHD pozwalają
odróżnić czy to gen płodu czy matki
flu
ore
scen
cja
Sygnał tła (fluorescencja z pierwszych 15 cykli)
RhD dodatnia
kobieta
Ct=28
Osoba
RhD
ujemna
Ct=40
RhD ujemna kobieta
z RhD dodatnim
płodem
Ct=35
![Page 18: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/18.jpg)
Przypadki w których niemożliwe było
nieinwazyjne ustalenie czy płód jest RhD+
4 matki z RHD słabe
1 matka z wariantem RHDel (IVS3 +1G>A)
6 RHD 1 RHDel (IVS3 + 1 G>A)
RHD częściowe (3 DVI typ 2, 1 DVI typ 1; 1 DV typ 4)
3 RHD słabe (typ 1, 11, 17)
IHiT,
Warszawa
5/353
Amsterdam
16/2380
![Page 19: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/19.jpg)
Jeśli w osoczu kobiety ciężarnej Rh-
nie wykryto genu RHDnajprawdopodobniej płód jest RHD ujemny
lecz
trzeba potwierdzić, że w próbce było:
wystarczająco dużo DNA płodu
„dobra” jakość DNA płodu
Badamy geny kontrolne odziedziczone po ojcu, a nie obecne u matki dla chłopców : gen SRY
dla dziewczynek: polimorfizmy typu delecja genu: GSTM1, GSTT1, S03, S06 , S 15 lub bialleliczne polimorfizmy typu insercja/delecja w obrębie genu: S01a/b, S04a/b, S05a/b, S07a/b, S08a/b, S09a/b, S10a/b, S11a/b, S14a/b, S 18a/b RHCE, ACEdel/ins
Transfusion, 2005, 45, 9
Gin.Pol, 2004, 75, 12
Gin.Pol, 2004, 75, 1
TRUDNE, ŻMUDNE, DROGIE…
![Page 20: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/20.jpg)
Wykrywanie genu kodującego RhD
w osoczu RhD ujemnej ciężarnej
Gen RHD-
Gen SRY+
RhD (-)chłopiec
GEN RHD+/-
POWTÓRZYĆ
BADANIE
Gen RHD-
Gen SRY-
prawdopodobnieRHD (-)
dziewczynka
ALE trzeba potwierdzić obecność DNA płodu
wykryciem polimorfizmu ins/del odziedziczonego
po ojcu
WYNIKI POWTARZALNE > dla 3 reakcji real-
time PCR (3 fragmentów genu RHD) WYNIKI ROZBIEŻNE
Gen RHD +
RhD (+) dziecko z drugiej
probówki
![Page 21: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/21.jpg)
Przykład wyniku
Zakład Immunologii Hematologicznej i Transfuzjologicznej
Instytut Hematologii i Transfuzjologii
00-957 Warszawa, ul. Chocimska 5 Warszawa dn. 17.02.2005
Wynik
Metodą real-time PCR w osoczu pani XY (RhD-) z 16 tygodnia
ciąży nie wykryto genu RHD pochodzącego od płodu. Osocze
zawierało DNA płodu, co potwierdzono wykrywając w nim
polimorfizmy S08a i ACEdel, nieobecne u matki, a obecne u ojca
(pana Z Y).
Komentarz: Wyniki badania wskazują, że płód jest Rh ujemny.
![Page 22: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/22.jpg)
Konsekwencje kliniczne fałszywych
wyników Fałszywie dodatni =
wykrywamy antygen,
którego płód nie ma
Płód jest traktowany jako mogący zimmunizować matkę i zagrożony ChHPN niepotrzebnie
zastosowana immunoprofilaktyka anty-D (dotyczy tylko konfliktu Rh)
monitorowanie hemolizy u płodu
co byłoby i tak stosowane gdyby badania cff-DNA nie wykonać
Fałszywie ujemny =nie wykrywamy antygenu,
który jest „groźny”
Płód jest traktowany jako
nie zagrożony, a:
matka powinna dostać immunoglobuliną anty-D (dotyczy
tylko konfliktu Rh)
płód powinien być monitorowany i ewentualnie leczony
![Page 23: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/23.jpg)
Potencjalne źródła wyniku fałszywie
dodatniego, sposoby przeciwdziałania
Kontaminacja próbki materiałem zawierającym DNA od osoby RhD dodatniej >> odpowiedni sposób pobierania, przesyłania
materiału, izolacji DNA, wykonania badania
Obecność „niemego genu RHD u płodu” w populacji kaukaskiej ryzyko około 0,2-1%
jeśli ojciec innej rasy niż kaukaska ryzyko większe konieczność analizy wykrywania różnych fragmentów RHD należy podać na skierowaniu pochodzenie etniczne (rasa
czarna, żółta)
![Page 24: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/24.jpg)
Potencjalne źródła wyniku fałszywie
ujemnego, sposoby przeciwdziałania
Brak lub zbyt mała koncentracja DNA płodowego w próbce
Konieczne udowodnienie obecności cff-DNA:
dla płodów płci męskiej – wykrycie genów z chromosomu Y
dla płodów płci żeńskiej – wykrycie genu/polimorfizmu ins/del odziedziczonego po ojcu, a nie obecnego u matki (wieloetapowe i skomplikowane badania)
Powtórzenie badania w późniejszym etapie ciąży
Dalsze badania nad sposobami udowodnienia „dobrej jakości” cff-DNA w próbce
badanej analiza metylacji DNA
![Page 25: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/25.jpg)
Skala trudności diagnostyki nieinwazyjnej
w konfliktach innych niż RhD
znacznie trudniejsza, bo podłożem różnicy
antygenów u matki i płodu są tzw. SNP
wysoki poziom niespecyficznej amplifikacji, powstający z
przeważającej ilości DNA matczynego
zadawalające wyniki jedynie dla badania:
alleli RHCE*c, RHCE*E genu RHCE ze względu na to że,
użyte startery zawierają dodatkowe polimorfizmy SNP,
prócz tych warunkujących antygeny Rhc czy RhE
allelu KEL*1 ze względu na modyfikację startera -
wstawienie tzw. LNA (z ang. locked nucleic acids) przed
specyficznym nukleotydem na końcu 3
![Page 26: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/26.jpg)
Czułość i swoistość kliniczna wykrywania genów płodu
w cff-DNA według publikowanych danychWykry
wany
gen
Publikacja/ Liczba
przypadków
Czułość %
(przedział
ufności dla 95%)
Swoistość
(przedział
ufności 95%)
SRY Metaanaliza 57 publikacji
/ 7 000
99.9
(99.7 – 100%)
94.9%
(93.5 – 96.4)
RHD Wielka Brytania/ 1997 99.8 99.2
Francja / 300+ 283 100 97.5 - 100
Belgia / 563 100 99.5
Polska / 230 100 99.6*
* u jednej ciężarnej z płodem RhD- nie wykryliśmy genu RHD, ale nie potwierdziliśmy
obecności cff-DNA, gdyż nie znaleźliśmy markera obecnego u ojca, a nieobecnego u matki
Jakie są wyniki nasze i innych laboratoriów?
![Page 27: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/27.jpg)
Rutynowo przeprowadzana diagnostyka
nieinwazyjna w konfliktach serologicznych w IHiTRhD
u 348/348 kobiet prawidłowo oznaczono RhD płodu:
– u 260 płód RHD(+)
– u 88 płód RHD(-): u 51 gen SRY (chłopcy), u 36 marker ins/del po
ojcu, w 1 przypadku brak markera od ojca (87/88 wydano wynik)
Rhc
u 22/22 kobiet prawidłowo oznaczono Rhc płodu:
– u 16 płód RHCE*c (+)
– u 6 płód RHCE*c (-)
RhE
u 21/21 kobiet prawidłowo oznaczono RhE płodu:
– u 14 płód RHCE*E (+)
– u 7 płód RHCE*E (-)
![Page 28: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/28.jpg)
Badania nieinwazyjne allelu KEL*1
minimalizacja ryzyka fałszywej amplifikacji przez stosowanie zmodyfikowanych starterów o podwyższonej swoistości, tzw. LNA (locked nucleic acids)
Finning i wsp. 2008: prawidłowe wyniki u 43 kobiet, które urodziły dzieci K-
1/27 wynik fałszywie ujemny u kobiet z przeciwciałami anty-K, które urodziły dziecko K+
IHiT pilotażowe badania DNA z osocza 11ciężarnych K-
u 5 potwierdzone prawidłowe wyniki: u 3 urodziły się K+ dzieci, u 2 K-
poziom wykrywanego allelu KEL*1 o 3-4- krotnie niższy od genu RHD
![Page 29: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/29.jpg)
Projekt masowych badań RHD płodu
do kwalifikacji do podania anty-D
Przy masowych badaniach
automatyzacja
zmniejszenie kosztów
![Page 30: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/30.jpg)
Koszty immunoprofilaktyki w czasie ciąży i ich
organiczenie po wprowadzeniu oznaczania RHD
płodu w Holandii
Obecnie stosowany schemat:
Ig dla kobiet Rh ujemnych,
które nie maja dzieci(14 000 )
koszt 3.1mln Euro
Wprowadzenie badań RHD w
ciąży i podawanie Ig
tylko gdy płód jest Rh+
koszt razem z badaniami
3 mln Euro
Objęcie wszystkich kobiet
podawaniem Ig w ciąży
(34 000)
koszt 6.6 mln Euro
Po włączeniu
nieinwazyjnych badań
RHD płodu
3.9 mln Euro
Van der Schoot, 2009
![Page 31: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/31.jpg)
Co wymaga ulepszenia?Potencjalne metody udoskonalenia nieinwazyjnych
badań prenatalnych
Rozdzielenie cff-DNA od DNA matki na podstawie:
wielkości
cff-DNA <300bp
DNA matczyne >500bp
różnic w budowie białek histonowych (cff-DNA z H3.1,
DNA matczyne z H3.3)
Opracowanie uniwersalnej kontroli cff-DNA
różnice w metyzacji cff-DNA
![Page 32: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/32.jpg)
PodziękowaniaWszystkim lekarzom i diagnostom laboratoryjnym, którzy
współpracują z IHiT dla udoskonalania nieinwazyjnej diagnostyki płodu
i
kobietom ciężarnym, które wyrażają zgodę na pobranie krwi i udostępniają dane o grupie krwi urodzonego noworodka
składa
zespół Pracowni Biologii Molekularnej Zakładu Immunologii Hematologicznej i Transfuzjologicznej w składzie:
dr Katarzyna Guz, dr Agnieszka Orzińska, mgr Justyna Smolarczyk-Wodzyńska, mgr Magdalena Łakomy,
prof. Ewa Brojer, prof. Barbara Żupańska
Tylko z Państwa pomocą możemy kontynuować badania!
![Page 33: Nieinwazyjne badania genówpłodu w osoczu kobiet ciężarnych ... · Konflikt RhD przed immunoprofilaktyką ~20% immunizacja immunoprofilaktyka po porodzie, poronieniu 1,6% immunizacja](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050408/5f8592dc471e3c422d53aa09/html5/thumbnails/33.jpg)
Zakład Immunologii Hematologicznej i Transfuzjologicznej IHiT
Kierownik: Prof. dr hab. Ewa [email protected] tel. (22)34 96 611
Pracownia Biologii Molekularnej:
dr Katarzyna Guz [email protected]
dr Agnieszka Orzińska orziń[email protected]
tel. 022 34 96 600 wew. 144, 154