O c

o U c

NOMBRE: MARTINEZ ENRIQUEZ MARIA ELENA

MATRICULA: 87343797

LICENCIATURA: BIOLOGIA EXPERIMENTAL

UNIDAD IZTAPALAPA

CIENCIAS BIOLOGICAS Y DE LA SALUD

TELEFONO: 7 44 66 24

TRIMESTRE LECTIVO: 96-0

HORAS A LA SEMANA: 20 Horas

I

TITULO DEL TRABAJO O PROYECTO:

SENSIBILIDAD AL GLUTAMATO MONOSODICO (GMS) DEL UTERO AISLADO DE

RATAS TRATADAS NEONAT-E CON EL GMS.

NOMBRE DEL ASESOR, PUESTO Y ADSCRIPCION:

ALFONSO EFRAIN CAMPOS SEPULVEDA

PROFESOR ASOCIADO "C" TIEMPO COMPLETO

PROFESOR TITULAR DE LA ASIGNATURA DE FAFWACOLOGIA HUMANA

JEFE DEL LABORATORIO DE TOXICOLOGIA

LUGAR DONDE SE REALIZO EL SERVICIO:

FACULTAD DE MEDICINA, DEPARTAMENTO DE FARMACOLOGIA

LABORATORIO DE TOXICOLOGIA, UNAM.

FECHA DE INICIO: 16 DE DICIEMBRE DE 1994

FECHA DE TERMINACION: 16 DE JUNIO DE 1995

CLAVE:

FIRMA DEL ALUMNO FIRMA DEL ASESOR

c

c

c c c

t

SENSIBILIDAD AL GLUTAMATO MONOSODICO (GMS) DEL UTERO AISLADO DE

RATAS TRATADAS NEONATALMENTE CON EL GMS.

c c c c c

G

0

INDICE

Pág.

I.- INTRODUCCION. .............................. 1

11.- ~STIFICACION...... ....................... 9

111.- OBJETIVO .................................. 9

1V.- BIPOTESIS. ................................ 9

V.- MATERIAL Y METODOS... ...................... 10

a) INDUCCION DE NEUROTOXICIDAD NEONATAL.. .. 10

b) PREPARACION DE FROTIS VAGINAL. .......... 10

c) AISLAMIENTO Y MONTAJE DE LA PREPARACION. 11

VI.- RESULTADOS.......... ...................... 14

VI1.- DISCUSION.. .............................. 20

VII1.- CONCLUSION.........., ................... 22

1X.- BIBLIOGRAFIA .............................. 23

SENSIBILIDAD AL GLUTAMATO MONOSODICO (GMS) DEL UTERO AISLADO DE RATAS TRATADAS NEONATALMENTE CON EL GMS.

I) INTRODUCCION

El ácido glutámico es un aminoácido no esencial que es

adquirido a través de la dieta y que se encuentra en altas

concentraciones en varias áreas del Sistema Nervioso Central

(SNC). En 1954 Hayashy propuso la función excitatoria del

glutamato a nivel del SNC:, 25 años después, evidencias

bioquímicas y fisiológicas demuestran que el glutamato es un

neurotransmisor que afecta el flujo iónico y modifica el

potencial de membrana, posteriormente se reporto su parficipación

en di-versos procesos fisiológicos, como el aprendizaje, la

memoria y el. desarrollo de la plasticidad neuronal, además de

que es .el precursor del ácido 6-aminobutírico (GABA) (Lodge and

Collingridge, 1990). Así mismo se ha descrito el uso del ácido

glutámico administrado por via oral en el tratamfento de la

esquizofrenia crónica y para a.umentar el coeficiente intelectual

en l o s niños ( Albert, 1946; Ewalt, 1948).

El efecto excitatorio del glutamato está mediada por

múltiples tipos de receptores específicos que se han

caracterizaao con el uso de fármacos agonistas. Estos receptores

se han clasificado en receptores ionotrópicos y metabotrópicos.

Dentro de l o s ionotropicos que participan en la transmisión

sináptica abriendo canales cationicos no selectivos se encuentran

los del tipo N-metil-D-aspartato (NMDA) y los no-NMDA a los que

pertenecen €1 receptor a kairiato (KA) , D,¿- amino-3-hidroxi-5-

1

,.."

c c C

[

C

8: n:

metil-4-isoxalon ácido propionic0 (AMPA) y .el L - A P 4 . Los canales

activados por el AMPA y e l Kainato son permeables a los iones

sodio y potasio, ' y el canal activado por NMDA es altamente

permeable a l o s iones sodio, potasio y principalmente calcio

(Wisden and Seeburg, 1993). Los receptores metabotrópicos, .se

encuentran acoplados al sistema de segundos mensajeros, a través

de mecanismos de señales, especificamente proteínas G. La

activación de la fosfoiipasa C da lugar a la formación de los

segundos mensajeros diacilglicerol y 1,4,5-trifosfato de inositol

Eenomeno qu.e se traduce a una movilización de calcio

intracelular. La activación del receptor metabotrópico por el

glutamato bloquea el retardo de la conductancia de ea2+

dependiente de K+ e incrementa la excitabilidad de neuronas.

Además, distintos neurotrancmisoresmetabotrópicos puedenmodular

la liberación. de calcio del reticulo endoplasmático y

sarcoplasmático via fosfato de inositol. Po r otro lado recientes

evidencias sugieren que los receptores ionotrópicos también

modulan la liberación de calcio intracelular por medio de

reticulo endoplasmico y sarcoplasmico (Schoepp and Corm, 1 3 9 3 ;

Simpson, 1995).

Se han propuesto diversos modelos en los cuales, participa

de manera importante el glutamato. En 1973 Bliss y Lomo

observaron que en una de las vias neuronales en el interior del

hipocampo se intensificaba la transmisión sináptica debido a un

incremento prolongad0 (horas a días) de la magnitud en la

respuesta posináptica a un estimulo presináptico. A esta

intensificación de la transmisión se le deIzomiiió "potenciación

L

a largo plazo" (PLP). En este modelo participan los receptores

NMDA que normalmente esta bloqueado por magnesio con un potencial

de membrana en reposo. Esta activación de el receptor NMDA

requiere no unicamente de la unión de glutamato liberado

sinápticamente si no tambign de una despolarización de la

membrana postsináptica. Esto es generado por la activación de

receptores AMPAlkainato en diferentes neuronas. Por lo que los

receptores de tipo NMDA comien2an a activarse unicamente cuando

se presenta una descarga de dos o más neuronas simultaneamente.

Cuando se ha presentado la despolarización inducida por el

glutamato a través del receptor no-NMDA (AMPA/kainato) este

neurotransmisor se une a l receptor NMDA, lo cual permite que se

elimine el bloqueo del magnesio sobre el canal iónico y así

permita la entrada de calcio hacia el interior de la célula. El

calcio inicia la PLP activando, al menos, tres tipos diferentes

de proteínas cinasas (Bliss and Collingridge, 1993). Otro de los

modelos propuestos donde participa el glutamato es la depresijn

a largo plazo'(DLP), en donde hay una disminución de la eficacia

de la transmisión que es modulada por los receptores

metabotrópicos (Ito, 1990). Aunque actualmente se piensa que

estos receptores metabotrópicos median la potenciacibn de los

receptores NMDA que pueden inducir una respuesta excitatoria de

alta intensidad al estimulo, por lo que esto facilita la

activación de la PLF (Schoepp and Conn, 1993). Estos estudi.os

pusieron de manifiesto en particular los mecanismos mediante los

cuales se podría codificar el aprendizaje, la memoria y el

desarrollo de la plasticidad. Una característica en. ambos

modelos es el aumento de iones calcio citoplasmatico para

3

desencadenar una serie de respuestas (activación de fosfolipasa

C, fosfolipasa Al, kinasa C, síntesis de NO, etc.) (Ito, 1994).

Diversas evidencias sugieren que la administración exógena

en la etapa neonatal del glutamato tomando como modelo el

glutamato monosódico (GMS) que actualmente es utilizado como

saborizante de alimentos destinados al consumo humano produce

lesiones neuronales en diversas estructuras, como la retina

(Lucas and Newhouse, 1957; Pickard, 1982), núcleo arqueado del.

hipotálamo, área postrema (Olney, 1971; Holzwarth, 1984;

Nemeroff, 1977; Krieger, 1979) y otras áreas circuventriculares

(Olney, 1978) . Dicha neurotoxicidad se ha observado en diferentes

especies que incluyen al ratón, la rata, el hamster, el cobayo

y el mono (Curtis, 1974; Lorden and Claude, 1986). Se acepta que

está neurotoxicidad es la consecuencia de la activación continua

de el receptor glutamatégico que se manifiesta como cambios

neuroquimfcas, endocrinos, metabólicos y conductuales. Está

neurotóxicidad es consecuencia de exceso de actividad excitatoria

que se traduce a una actividad excitotoxica provocada por la

activación masiva de receptores glutamatérgicos lo que ocasiona

un aumento de calcio intracelular y así el' daño neuronal

(Greenamyre, 1986; Mody and MacDonald, 1995). Además l a s

alteraciones en la neurotransmisión glutamatérgica se han

relacionado con diversas neuropatologías agudas y crónicas como

la enfermedad de Hunt ig t on, es tados epilépticos,

hipoxia/isquemia, hipoglucemia, enfermedad de Alzheimer,

Parkinson y esclerosis

Jennes, 1984; Frieder,

multiple (Nemeroff, 1977; Dawson, 1981;

1987; Olney, 1969, 1971).

4

I: c

c c o

o o

U

Recientemente, la función de los receptores NMDA ha recibido

una considerable atención, por lo que se han desarrollado

antagonistas al NMDA como un potencial de agentes terapéuticos

en el tratamiento de desordenes neurodegenerativos y de ansiedad

(Trullas and Slcolnick, 1990; Olney, 1991; Rogawski, 1993). Los

antagonistas conocidos que actuan a nivel de éste receptor son:

la ketamina, fenciclidina (PCP) , dizocilpina (MK801), TCP (1- [l-

(-2-tienil)-ciclohexil] piperidina), NANM, dextrometorfan,

dexoxadrol, CGS19755 (l-(cis-2-carboxipiperidina-4-yl)-metil-l

ácido fosfonico), CPP (3-([+]-2-carboxipiperazina-4-yl)-propil-l-

ácidofosfonico),NPC12626 (2-amino-4, 5-(1,2-ciclohexil)-7-ácido

fosfonoheptanoico), Ly233053 (Cis-(+)-4-(2H-tetrazol-5-y1) -

metilpiperidina-2-ácido carboxilico) y AP7 ( 2 -amino - 7 -

fosfonoheptanoato) (Willetts, 1990) .

Los receptores para aminoácidos excitatorios en tejidos

periféricos han sido muy poco estudiados. Se ha reportado la

presencia de receptores para el glutamato que pueden modular

distintas funciones en estructuras periféricas como la glándula

adrenal, glándula pineal, la pituitaria, los ganglios simpático

y parasimpático, así como en otros tejidos. En l a mayoría de los

casos los datos obtenidos no son concluyentes para l a

clasificaci6n de los subtipos de receptores para ylutamato, o de

la función que estén desempeñando en un Órgano en particular. Por

ejemplo hay evidencias de que posiblemente el receptor AMPA este

mediando en la glándula adrenal la secreción de catecolaminas es

(Schaffer, 1.973), en los ganglios parasimpático se ha reportado

la presencia. principalmente de receptores de tipo NMDA en fibras

5

y I .

c c

c

aferentes vagales ascendentes (Verdenhalven, 1 9 8 5 ) , las cuales

inervan el sistema nervioso autónomo ésto puede significar la

posible presencia de estos receptores en órganos inervados por

el sistema parasimpático (por ejemplo órganos viscerales, etc.)

(Sandor, 1991). Por otro lado, estudios in vitro con el empleo de íleon aislado de cobayo incubado en ausencia de magnesio han

permitido proponer que los receptores de ese músculo liso son de

tipo NMDA que son predominantes en el plexo mientérico (Fagg,

1985; Moroni, 1986; Wroblewski, 1989; Watkins, 1990). Lo anterior

se resume en la tabla I.

6

, . I , .

I

1

I

I i

I" r: c c GLANDULA PINEAL

c c:

GLANDULA ADRENAL F GLANDULA PITUITARIA

ESPERMATOZOIDES

GANGLIO SIMPATICO

GANGLIO PARASIMPATICOS

ASTROCITOS

/I PLEXO MIENTERICO I-.-

TABLA I - POSIBLE RECEPTOR

NMDA

AMPA/METABOTROPICO

METABOTROP I COS

AMPA

AMPA/METABOTROPICO

NMDA

KAINATO

AMPA

NMDA

AMPA

KAINATO

NMDA

KAINATO

AMPA

KAINATO

AMPA. - NMDA.

RATA

BOVINO

RATA

MAMIFEROS

MAMIFEROS

MAMIFEROS

RATA

COBAYO

7

,.",,

1:::

c c f

c

En el caso de músculo liso uterino, se encuentra inervado

por fibras simpáticas y parasimpáticas lo que le peimite un alto

grado de actividad espontánea tanto eléctrica como contráctil,

en respuesta a la acción COlinérgiCa que permite un aumento de

calcio intracelular, por lo cual la formación de el complejo

calcio-calmodulina y la generación de las subsiguientes etapas

del proceso da como resultado la contracción muscular. Está

actividad espontánea del músculo liso le permite reaccionar a

cambios locales del potencial de membrana, estimulación hormonal

o impulsos nerviosos por lo que hace que esté órgano tenga una

gran utilidad para la caracterización de nuevos fármacos así como

su utilidad en la terapéutica (Bolton, 1979; Kamm, 1989; Hai,

1989)

c c c

IC

11. JUCTIFICACION

Como se menciono el glutamato es un neurotransmisor

excitatorio que se encuentra, en varias áreas del SNC, y las

alteraciones en la neurotransmisión glutamatérgica se han

relacionado con diversas neuropatologias agudas y crónicas,

además de que existe información que señala que el tratamiento

iiconatal con este neurotransmisor, en roedores, provoca

neurotoxicidad, por lo que es importante estudiar las

alteraciones en la sensibilidad a agonistas y antagonistas del

giutamato en estructuras periféricas obtenidas de roedores

tratados neonatalmente con este aminoácido excitatorio.

111. OBJETIVO

Demostrar si el tratamiento neonatal con GMS da lugar a

cambios en la sensibilidad al propio GMC en el Útero aislado de

la rata adulta.

IV. HTPOTECIS

Si el tratamiento neonatal con GMS en roedores da lugar a

fenómenos de neurotoxicidad que se manifiestan como cambios

neuroquímicos, neu#bendocrinos y metabólicos, se infiere que las

estructuras periféricas que contienen receptores ai glutamato

pueden mostrar cambios en la sensibilidad a los agonistas y

antagonistas glutamatérgicos, como consecuencia de fenómenos de

plasticidad neuronal.

9

r

V. MATERIAL 'Y METODOS

a. INDUCCION DE NEUROTOXICIDAD

Se aparearon ratas albinas de la cepa Wistar de 250-300 g

(4 hembras por un macho). Las crias se separaron en 2 grupos: I

experimental y I1 control absoluto y fueron mantenidos a

temperatura constante (20-22'C:) en un cuarto con ciclo de luz-

obscuridad 12-12 hr, provistos de alimento y agua ad libitum.

A las crias del grupo experimental se les administró por via

subcutanea 2 mg/g de peso de GMS (Sigma) el 2" y 4" día posnatal

y 4 mg/g de peso el 6 " , 8' y 10" día posnatal (Dawson and Lorden,

1381; Olney, 1969). Las crias del grupo control absoluto no

recibieron tratamiento alguno. Aproximadamente entre las cuatro

y las cinco semanas los animales fueron destetados y sexados; y

entre 4 a 5 meses de edad las ratas hembras fueron utilizadas

para los estudios de sensibilidad al GMS en el Útero aislado.

I s . PREPARACION DE FROTIS VAGINAL

Previo al sacrificio y obtención del Útero de la rata, se

realizó un frotis vaginal para determinar en que estadío del

ciclo estral se encontraban l o s animales (proestro, estro,

metaestro Ó diestro). Con una pipeta Pasteur se introdujo en la

vagina 0.5 ml de solución salina fisiológica al 0.90 %

succionandola de inmediato, y colocando unas gotas en un porta

objetos y se añadió, a su vez, una gota de lugol colocando un

1 0

cubre objetos para posteriormente ser observadas al microscopio.

El estadio se determinó por las características morfológicas que

presentan las células epiteliales.

Por otro lado, debido a que los animales presentan daño a nivel

endócrino por el tratamiento neonatal, se realizo un seguimiento

de muestras vaginales durante 30 días a un grupo de ratas control

y a las tratadas con GMS.

C. AISLAMIENTO Y MONTAJE DE LA PREPARACION

Los animales fueron pesados y sacrificados por dislocación

cervical y el. Útero fué disecado e inmediatamente colocado en

cajas de Petri que contenían sol.uciÓn Krebs bicarbonatado con las

siguientes concentraciones mM: KH,PO, 1.3, KC1 3.4, NaCl 134,

CaC1, 2.8, NaIlCO, 16 y glucosa 7.7, en ausencia de magnesio. El

pH se ajusto a 7.4. El útero, se limpio del tejido adiposo y

conectivo y se obtuvierón segmentos de aproximadamente 1.5-2 cm

de longitud, los cuales fueron colocados en una cámara para

organo aislado de 30 ml que contenía solución Krebs burbujeadd

con carbógeno (5 % de CO, y 95 % de O,) y mantenidos a una

temperatura de 3.2’C (Fig.1) (Perry, 1970). Cada segmento fue

sometido a una tensión inicial de un gramo y perfundido con

solución nutriente durante tres horas (para eliminar todos los

iones magnesio); antes de la exposición al fármaco en estudio

(GMS) . La actividad basal y la respuesta contráctil inducida por

el. GMS se registraron a través de un transductor FT03 conectado

a un polígrafo Grass 79D. A continuación se realizó una curva

t i c i : j i ; I . ‘i~iripi.:t?nlin a l GMS a cinco concentraciones (10-6-10’ ’ M)

c c c c

n

Fig. 1 Montaje de la preparación de útero aislado de ratas hembras, perfundidos en solución krebs burbujeada con carbógeno y mantenidos a una temperatura de 32°C.

12

JI-rcpyrui

c e espaciadas logarítmicamente (Moroni, 1986; Tallarida, 1979)

c c c c: c o c

Los resultados se tomaron directamente de los registros

midiendo el área bajo l a curva de la actividad del músculo liso

uterino usando un método planimétrico a las diferentes

concentraciones de GMS tanto en los Úteros tomados de las ratas

controles como en l o s experimentales. Los resultados se

sometieron al análisis estadístico paramétrico de la prueba t de

Student para muestras indepenüientes y a su vez a un análisis de

varianza (ANOVA). Se considero estadísticamente significativos

los valores de p< 0.05 en ambas pruebas estadísticas.

En ei caso de los resultados de el frotis vaginal se calculo

la frecuencia de cada una de las fases del ciclo estral en l a s

ratas control y en las experimentales.

p. . . . ,

I f .

1 ..,

c c f

RESULTADOS

Los resultados obtenidos indican que la respuesta contráctil

inducida por el GMS fue mayor en el músculo liso uterino

obtenidos de l o s animales tratados neonatalmente con el propio

GMS, respecto al de l os animales control, como se observa en un

trazo representativo de la Fig.2, l o s Úteros obtenidos de los

animales glutamatizados mostraron una actividad espontanea

considerablemente mayor (actividad basal) en relación a los

Úteros obtenidos de los animales control, al igual cuando se

expuso la preparación uterina a las diferentes concentraciones

de GMS, siendo la diferencia estadisticamente significativa (pc

0.05). Lo anterior lo podemos observar gráficamente en la Fig.3

donde se tiene un aumento del area bajo la curva de las

preparaciones de Útero experimentales en contraste con las

controles, teniendo la maxima respuesta contráctil a una

concentración lX10-5 M . En contraste en el grupo control donde

la maxima respuesta se alcanza a una concentración de 1X10-4 M.

En relación a los resultados obtenidos del seguimiento

durante 30 días de la citologia vaginal, se pudo apreciar que las

ratas expuestas neonatalmente al GMS, presentaron con mayor

frecuencia las células características del metaestro, aspecto que

contrasta con la citoiogía vaginal que mostraron los frotis

obtenidos de las ratas control, cuya mayor frecuencia

correspondio a la etapa deX estro. Este fenómeno se puede

apreciax en la Fig. 4, como un desplazamiento de la curva de las

fases del ciclo estral hacia la derecha de las ratas del grupo

experimental con respecto a l grupo control.

14

, ...

, . En l a Fi'g. 5 podemos apreciar en terminos porcentuales l a

distribución de las frecuencias de l a s diferentes fases del ciclo

estral, tanto en los frotis vaginales obtenidos de l o s animales

! glutamatizados como l o s obtenidos del grupo control. En esta

figura se observa que la frecuencia más alta (47%) correspondio c- a 1.a fase de metaestro, en el caso de los animales experimentales

y solo un 10% correspondio a l a fase de estro. En contraste, en

el caso el grupo control la frecuencia más alta (48%)

correspondio a la fase de est.ro, y el menor porcentaje (15%)

correspondio a la fase de proestro y diestro.

r...

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b-

L__

ic:

15

m m I

I

w

2 m m

O co

O d.

O m

O hl

O

DISCUS ION

Se ha reportado que el ácido ylutamico produce una respuesta

contráctil en el íleon aislado de cobayo, a través de la

interacción con receptores específicos a nivel del plexo

mientérico. Este efecto es mediado por receptores del tipo NMDA

(Shannon, 1989), por lo que, para determinar la respuesta del

Útero al ylutamato monosódico y cuya interacción es modulada por

el My2+ fué necesario perfundir la preparación con solución

nutriente sinmaynesio durante tres horas para eliminar los iones

maynesio, ya que éste participa bloqueando selectivamente el

sitio modulador de l o s receptores tipo NMDA (Moroni, 1986).

Los resultados obtenidos en este trabajo señalan que el

tratamiento neonatal con GMS incrementa la sensibilidad al propio

GMS en los úteros obtenidos ien la edad adulta de los animales,

este fenomeno se refleja en un aumento tanto en la frecuencia

como en l a intensidad de las contracturas (Fig.2). La respuesta

máxima fué obtenida a 'una concentración de 1X10-5 M en las

preparaciones experimentales y en las preparaciones obtenidas de

'I (1:; iiiliiiiLilC>:J control la máxima respuesta ::e alcanzó cuando se

aplicó la concentración de lXlO-' M, es decir que la respuesta

maxima se a:lcanzo a menor concentración en los Úteros obtenidos

de los animales glutamatizados con respecto al grupo control.

Este aumento en la sensibilidad en los Úteros experimentales

posiblemente sea la consecue:ncia de un incremento en el número

de receptores como una respuesta anaregulatoria provocada por la

neurotoxicidad a l glutamato y que se refleja a nivel periférico

20

como un fenomeno de plasticidad neuronal ligado a un incremento

en el número de receptores al neurotransmisor excitatorio en

aquellas estructuras que poseen inervación glutamatergica, como

es el caso del plexo mientérico intestinal y otros musculos lisos

como el útero. Lo anterior permite explicar el incremento en la

respuesta que se observa al administrar el GMS exogeno

directamente sobre la preparación de Útero aislado de las ratas

experimentales que da lugar a una mayor interacción del GMS con

el receptor del tipo NMDA y posiblemente con l o s de tipo no NMDA

y metabotrópicos, lo que probablemente ocasione un aumento de

calcio intracelular y así una mayor contracción múscuiar. Por

otro lado se ha pensado que posiblemente el receptor NMDA este

modulando la actividad de neuronas colinérgicas que a su vez

están involucradas con la contracción del músculo liso uterino

(Moroni, 1986; Schoepp and Conn, 1993).

Con respecto al desplazamiento hacia la derecha del ciclo

estral de las ratas experimentales (como se observa en la gráfica

4) posiblemente se deba'a que el GMS lesiona importantes areas

de el sisatema nervioso central en la etapa neonatal, como es el

núcleo arqueado de el hipotálamo, area postrema, eminencia media

del hipotálamo, etc. provocando cambios, endócrinos en la etapa

adulta, lo cual se refleja en una disminución de la producción

de hormonas leutinizante (LH) y la foliculo estimulante (FSH) que

m i i iii?ceuarias para que se presente la ovulación aspecto que sc:

I U . I I I i I ¡.t::ii.a ( N I ~1n;i tiiriiiiiiiuci6n en I n f ixcxiei ic ia o ausencia LoL-al.

(?,+ Is. etapa de estro.

G

CONCLUSION

Podemos concluir que el tratamiento neonatal con GMS da

lugar a fenómenos de neurotoxicidad que se traduce a cambios en

la sensibilidad a l propio GMS y cambios neuroendocrinos en donde

se obsrva una alteración de el ciclo estral. Esto posiblemente

sea debido a un aumento en el número de receptores como un

proceso de anaregulación que presenta el organismo en respuesta

a la neurotoxicidad.

I

r L 6: lT- L

i u r

22

It IC

n U

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