PowerPoint Presentation

Northern BlottingKelompok 3 : Ari Nugraha Saputra Febby AprillianiJen RetnoMaria OktavianaMisriani Mia PangestikaRina DamayantiRisma AnggrianiShella Nur Alfianti Northern Blotting...Nourtern Blotting adalah metode laboratorium yang digunakan untuk mendeteksi molekul RNA spesifik antara campuran RNA.Northern Blotting dapat digunakan untuk menganalisa sampel RNA dari jaringan tertentu atau jenis sel dalam rangka untuk mengukur ekspresi RNA dari gen tertentu. Teknik ini mirip dengan teknik Southern BlottingSejarah ...Teknik Northern Blotting dikembangkan pada tahun 1977 oleh James Alwine, David Kemp, dan George Stark di Stanford University.Northern blotting mengambil nama pertama dari teknik yang sama yaitu Southern Blooting, nama untuk biologiEdwin Southern.Prinsip kerja..Prinsip Northern Blotting adalah memisahkan RNA berdasarkan ukuran dan terdeteksi pada membran menggunakan probe hibridisasi dengan urutan basa komplementer untuk semua atau sebagian dari urutan mRNA target.Cara kerja...RNA diisolasi dari beberapa sampel biologis (misalnya berbagai jaringan, berbagai tahap perkembangan jaringan yang sama dll)Sampel RNA dipisahkan menurut ukuran mereka pada gel agarosa

Sampleas yang dimuat pada gel

Gel yang dihasilkan setelah menjalankan3. Gel ini kemudian dihapuskan pada membran nilon atau filter nitroselulosa

4. Membran ditempatkan dalam cawan berisi hibridisasi buffer dengan probe berlabel(radioaktif atau kimia berlabel).Probe dirancang khusus untuk urutan kepentingan. Dengan demikian, akan berhibridisasi ke RNA pada blot yang sesuai dengan urutan kepentingan.

Probe dapat berupa ss-DNA atau RNA.5. Membran dicuci untuk menghilangkan probe terikat.

Akses probe dihapus6. Probe berlabel terdeteksi melalui autoradiografi(jika probe radioaktif yang digunakan)atau melalui reaksi chemiluminescence(jika probe berlabel kimia yang digunakan).Dalam kedua kasusini menyebabkan pembentukan dari sebuah band gelap pada film X-ray.Kita sekarang dapat membandingkan pola ekspresi dari urutan kepentingan dalam sampel yang berbeda

Interprtasi hasil

Aplikasi Northern Blotting ..Mendeteksi mRNA tertentu dalam sampelDigunakan dalam screening rekombinan dengan mendeteksi mRNA yang dihasilkan oleh transgenDalam diagnosa penyakitDalam studi ekspresi genKeunggulanSering digunakan sebagai suatu analisis yang hasilnya validLebih sensitif dibandingkan dengan penggunaan teknik RT-PCRDigunakan untuk mengkonfirmasikan dan memeriksa transgenik binatangDapat digunakan untuk penelitian sampai kemajuan masa yang akan datang

Kekurangan Memakan waktu banyakMemerlukan sejumlah besar RNA untuk deteksiSecara kuantitatif tidak akurat untuk RNA dengan konsentrasi rendahThank you