nové smery v analytickej chémii 2016/2017 juraj piešťanský · nové smery v analytickej...
TRANSCRIPT
![Page 1: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/1.jpg)
Nové smery v analytickej chémii 2016/2017
Juraj Piešťanský
![Page 2: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/2.jpg)
Získavanie analytickej informácie
o skúmanom objekte
Postup – opis všetkých krokov, operácií
a zariadení, ktorými sa realizuje experiment
Metóda - koncepcia získavania optimálnych
informácií o skúmaných objektoch pri použití
určitého princípu analýzy
Princíp - použitie určitého javu na získanie
informácie
![Page 3: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/3.jpg)
![Page 4: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/4.jpg)
27%
6% 61%
6% Štúdium a získavanie informácií
Odber vzoriek
Príprava vzoriek
Analýza vzoriek
![Page 5: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/5.jpg)
0%
5%
10%
15%
20%
25%
30%
4% 6%
11%
19%
7% 6% 9%
30%
![Page 6: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/6.jpg)
Rozdelenie podľa:
1. Skupenstva – tuhé, kvapalné, plynné
2. Pôvodu – biologické, environmentálne,
priemyselné, potravinárske
3. Zložitosti matrice – jednoduché, komplexné
Vzorky farmaceutického charakteru:
Liečivo, liek, pomocné látky, liekové formy
![Page 7: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/7.jpg)
Vzorka biologického charakteru nie je živý
organizmus, ale musí pochádzať zo živého
organizmu, pričom nie je podstatné, či tento
organizmus je živý alebo mŕtvy v čase odberu
a analýzy vzorky
Biologické tekutiny – krv, moč, plazma, ...
Živočíšne tkanivá, rastlinné pletivá, bunkové
kultúry, ...
Úmyselne/neúmyselne
pozmenené tkanivá/tekutiny
![Page 8: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/8.jpg)
Rastlinný materiál – obsahové látky – jedy, iritácia pokožky,
slizníc
živočíšny materiál – jedy, vírusy, parazity, alergény
humánny – vysokoinfekčný materiál, liečivá, vírusy,
mikroorganizmy
- bezpečnostné predpisy
- ochranné pomôcky
- pravidelné lekárske
prehliadky exponovaného
personálu
Odber vykonávaný v zdravotníckych zariadeniach vyškoleným
personálom v odberových miestnostiach – správny odber,
označenie, uloženie a transport vzorky
Jednoznačné označenie každej odobratej vzorky bez možnosti
akejkoľvek zámeny
![Page 9: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/10.jpg)
1964 – Helsinská deklarácia – protokol
navrhovaného výskumného projektu má byť
postúpený nezávislej inštitúcii na posúdenie,
pripomienkovanie a usmernenie
![Page 11: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/11.jpg)
typ a stabilita analyzovanej látky
typ matrice
podmienky, za ktorých sa analýza vykonáva
často definovaný normami
Úprava:
mechanická (nedeštruktívna)– drvenie,
zmenšovanie „zrna“, preosievanie, ...
chemická (deštruktívna)– zvyčajne prevod
vzorky do kvapalnej fázy, mineralizácia
vzorky
![Page 12: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/12.jpg)
klinické vzorky:
1. krv a krvi príbuzné tekutiny
2. telové tekutiny iné ako krv
3. exkréty, reziduá
4. iný biologický materiál
Oblasti – farmácia, medicína, toxikológia,
biochémia, kriminalistika, šport, ...
![Page 13: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/13.jpg)
Krv – arteriálna, venózna, kapilárna
Krvné bunky – červené krvinky, biele krvinky
Mozgovomiešny mok (cerebrospinálny mok) –
CSF
Pupočníková krv
Plazma
Sérum
![Page 14: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/14.jpg)
tzv. tekuté tkanivo s vysokým
stupňom vývoja a špecializácie
Rozloženie:
- celý obeh – 84 % systémový
obeh, 9 % pľúcny obeh, 7 % srdce
- systémový obeh – 75 % vény a
venuly, 14 % veľké tepny,
8 % kapiláry, 3 % arterioly
7 – 10 % hmotnosti tela
4,5 – 6 l
Zloženie:
- nebunková časť (tekutá) =
krvná plazma (55 % objemu krvi)
- bunková časť – krvné elementy
(45 % objemu krvi)
![Page 15: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/15.jpg)
Špecializovaný personál
Odber do skúmavky s vhodným antikoagulantom:
Uchovávanie pri 4°C
„dried blood spot“ – kvapka krvi sa nanesie na povrch
filtračného papiera a nechá sa vysušiť – uľahčenie
skladovania a transportu vzoriek
Antikoagulant Koncentrácia (ml-1 krvi)
Lítna soľ heparínu 10 – 20 jednotiek
Sofná soľ heparínu 10 – 20 jednotiek
Fluorid sodný s EDTA (alebo oxalátom) 1 – 2 mg (6 – 10 mg)
Citrát sodný 3 mg
EDTA 2 mg
![Page 16: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/17.jpg)
5 % telesnej hmotnosti
55 % objemu krvi
25 % extracelulárnej tekutiny
pH = 7.4 (veľmi dobrá pufrovacia
kapacita (rozmedzie pH 7.35 – 7.43)
Zloženie:
1.) voda – 93 %
2.) organické látky – 6 %
- bielkoviny – albumíny, globulíny, fibrinogén
- fosfolipidy, cholesterol, TAG, Glc, močovina, laktát, kys.
močová, kreatinín, bilirubín, a i.
- enzýmy – napr. esterázy
3.) anorganické látky – 1 %
- ióny – katióny: Na+, K+, Ca+
– anióny: Cl-, HCO3-
![Page 18: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/18.jpg)
Uchovávanie – pri -20 až -80°C
![Page 19: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/19.jpg)
Zloženie podobné plazme, neobsahuje však
fibrinogén
Získava sa voľným vyzrážaním odobratej krvi v
odberovej nádobke (15 min., pri izbovej teplote)
Preferovanejšia matrica než
plazma
pri procesoch zmrazovania
a rozmrazovania poskytuje
menej precipitátu
Uchovávanie pri -20 až -80 °C
![Page 20: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/20.jpg)
Plodová voda (amniotická tekutina)
Komorová voda
Materské mlieko, kolostrum
Žalúdočná šťava
Lymfa
Peritoneálna tekutina
Sliny
Spermie
Synoviálna tekutina
Slzy
Vaginálna tekutina
Sklovec
![Page 21: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/21.jpg)
- význam v toxikológii,
patológii, forenznom
lekárstve
- poškodené telo – spálené,
hnijúce
![Page 22: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/22.jpg)
Pôvodné liečivá
Metabolity zvyčajne absentujú
Charakteristický zápach indikuje viaceré
intoxikácie:
- mandľový – kyanid
- ovocný – alkoholy, estery
- cesnakový – arzén, fosfan
- naftalínový – gáfor, naftalén
- hruškový – trichloracetaldehyd
- fenolický – dezinficienciá
- tabakový – nikotín
- sladkastý – chloroform
![Page 23: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/23.jpg)
99,5% voda,
anorganické ióny,
malé organické
molekuly, malé
množstvo proteínov a
polysacharidov
Rozdiely vo viskozite
a pH (medzi 6 a 8)
1 l za deň – cez noc je
produkcia slín
zanedbateľná
![Page 24: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/24.jpg)
Rýchly, neinvazívny, netraumatizujúci odber
Kvalitatívna analýza – netreba upravovať vzorku
Kvantitatívna analýza – úprava vzorky riedením s
vodou alebo pufrom (zohľadniť riedenie)
Pred odberom sa vyhnúť hygiene ústnej dutiny
Stimulácia slinotvorby – žuvanie žuvačky,
parafilmu, nanesenie kyseliny citrónovej
pH slín – ovplyvňuje povaha prijímanej potravy a
iné agensy
– pri cielenej stimulácii je pH cca 7,4
![Page 25: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/25.jpg)
![Page 26: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/26.jpg)
Žlč
Vydychovaný vzduch
Stolica
Pot
Moč
![Page 27: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/27.jpg)
Vydychovaný vzduch
Etanol
Markery rakovinových
alebo zápalových ochorení
Častá GC alebo GC-MS
analýza
![Page 28: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/28.jpg)
čerstvý – žltý, žlto-zelený
uchovávaním nadobúda
žlto-hnedé sfarbenie a neskôr
prechádza na hnedé sfarbenie v dôsledku
oxidácie urobilinogénu na urobilín
Zloženie:
1. voda – 95 %
2. organické látky – močovina, kreatinín,
hormóny, enzýmy, bielkoviny,
3. anorganické látky – Na, K, Cl, ...
![Page 29: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/29.jpg)
Typy odberov:
- náhodný (priebežný) – jednorazový odber
- ranný
- tzv. „end-of-shift“
- 24-hodinový
Metabolické štúdie – sledovanie presných
časových intervalov a objemov odberov moču
Štandardizácia moču – zvyčajne na
vylučovaný kreatinín – v niektorých prípadoch
nevhodné (posilňovanie, lieky, ...)
![Page 30: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/30.jpg)
Uchovávanie – prídavok 2
mol/l HCl
Stabilita:
- pri izbovej teplote – 1
týždeň
- pri 2 – 8 °C – 1 mesiac
- zmrazený – dlhodobé
uchovávanie – po
rozmrazení potreba
centrifugácie –
odstránenie precipitátu
- neokyslený moč –
mikrobiologická
kontaminácia, strata AMK
![Page 31: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/31.jpg)
Čas, časový harmonogram odberu – často kľúčový faktor ??????
- TCA (amytriptilín, imipramín, ...) retencia moču – výsledky
analýzy nezodpovedajú reálnemu stavu
- metabolity
- intoxikácia niektorými liečivami často vedie k charakteristickým
zmenám sfarbenia moču
a) žltý/hnedý – chlorochin, karotenoidy, metyldopa (státím),
chinín, ...
b) červený/hnedý – metyldopa, rifampicín, warfarín, ...
c) modrý/zelený – amitriptylín, indometacín, rezorcinol, ...
d) čierny – levodopa (státím), tymol, rezorcinol, ...
- uľahčenie ďalšej analýzy a úvodný predpoklad k podaniu antidóta
![Page 32: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/32.jpg)
Bezoár – konkrement, patologicky vytvorený
pevný útvar v dutých orgánoch – tvorí sa z
nestrávených zvyškov potravy
Bronchoalveolárna laváž
Kamene – obličkové, žlčové, močové
Dialyzačná tekutina
Gastrická laváž
Vlasy
Nechty
Hlien, nosový výter
Zvratky
Tkanivá
![Page 33: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/33.jpg)
- Vlasy – 65 – 95% proteíny (keratín), voda (15 – 35%), lipidy
(1 – 9%)
- kovy, liečivá a ich metabolity
- chronická expozícia
![Page 34: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/34.jpg)
Dekontaminácia:
- použitie detergentov
– šampóny,
operačné
dezinficienciá,
surfaktanty
(0,1% SDS), fosfátové
pufre, organické
rozpúšťadlá – acetón,
dietyléter, metanol,
etanol, dichlórmetán,
hexán, pentán
![Page 35: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/35.jpg)
Pečeň
- 10 – 20 g odber
- vždy z pravého laloku
- ľavý lalok –
kontaminácia žlčou,
gastrickými šťavami
Pľúca
Mozog
Obličky
Slezina
- 10 – 20 g odber
![Page 36: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/36.jpg)
Biopsia v odôvodnených prípadoch – najmä
vzorky pooperačné a forenzné
Príprava vzoriek – homogenizácia v prostredí
kyselín – nevýhodou sú nízke výťažnosti
- vhodnejší je postup použitia enzýmov –
proteáz – napr. subtilisin Carlsberg (z Bacillus
licheniformis) – serínová endoproteináza
![Page 37: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/37.jpg)
![Page 38: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/38.jpg)
Kompatibilita vzorky
s analytickým
systémom
Interakcia matrica-
analyt -
minimalizovať
Spôsoby:
1. solubilizácia/homogenizácia
2. rozrušenie väzby na proteíny
3. prídavok štandardov látok
4. odstránenie nerozpustných
zložiek matrice
5. zakoncentrovanie/zriedenie
6. stabilizácia, rozklad a/alebo
derivatizácia analytu
7. hydrolýza konjugátov
![Page 39: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/39.jpg)
![Page 40: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/40.jpg)
www.waters.com
![Page 41: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/41.jpg)
www.waters.com
![Page 42: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/42.jpg)
www.waters.com
![Page 43: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/43.jpg)
www.waters.com
![Page 44: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/44.jpg)
Off-line
On-line
At-line
In-line
![Page 45: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/45.jpg)
Základné techniky prípravy vzoriek:
- extrakcia, dialýza, precipitácia, filtrácia,
ultrafiltrácia
Práca s kvapalnou vzorkou
- centrifugácia, riedenie, odparenie, filtrácia,
zmrazenie, lyofilizácia
Selektívne spôsoby úpravy vzorky:
- extrakcia kvapalina – kvapalina (LLE), extrakcia
tuhou fázou (SPE), elektromigračné procesy,
superkritická fluidná extrakcia (SFE)
Spôsoby zvýšenia selektivity a citlivosti:
- derivatizácia vzoriek
![Page 46: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/46.jpg)
Mechanická homogenizácia
v homogenizátoroch
Inkubácia a digescia s
kyselinami, enzýmami
(kolagenáza, proteáza,
lipáza, ...)
náväznosť s ďalšími
extrakčnými a
koncentračnými technikami
Vlasy – inkubácia s NaOH –
hydrolýza niektorých
analytov (kokaín,
amfetamíny)
- inkubácia s HCl (0,1 mol/l,
16 hod., 45 – 56 °C) –
minimalizácia straty týchto
analytov
![Page 47: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/47.jpg)
Filtračné membrány
schopné zachytávať
častice s Mr
v rozsahu 10 000 – 30 000,
veľkosť častíc 2 – 1000 nm
Molekuly rozpúšťadla sú
zvýšeným tlakom
pretláčané cez membránu
Makromolekuly a koloidy
väčšie ako otvory v
membráne zostávajú
zachytávané
![Page 48: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/48.jpg)
Oddeľovanie väčších organických molekúl od rozpustených nízkomolekulárnych
anorganických solí
Rozdiel koncentrácií medzi vzorkou a rozpúšťadlom vedie k prechodu
nízkomolekulárnych látok do rozpúšťadla
Látky s menšou Mr prechádzajú rýchlejšie
Pomalý proces
Odvod roztoku – kontinuálny
– periodický
![Page 49: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/49.jpg)
Plazma, sérum:
- 10% (w/v) kys. trichlóroctová
- 6% (w/v) kys. chloristá
- acetonitril
- acetón
- etanol
- metanol
- nasýtený roztok síranu amónneho
- ultrafiltrácia
- zvýšená teplota (80 °C)
- dialýza
Samostatne alebo v spojení s
inými predúpravnými metódami
(napr. SPE)
![Page 50: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/50.jpg)
![Page 51: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/51.jpg)
tzv. precipitačné protokoly
- často kombinácie viacerých precipitačných agensov
- čo chceme analyzovať ? – proteíny alebo látky v plazme
Príklad precipitačného protokolu:
1. 100 μl plazmy alebo séra + 200 μl metanolu s obsahom 0,2%
(v/v) HCl
2. vortexovanie
3. centrifugácia – 10 000g, 30 s
4. odber supernatantu – opätovné pridanie precipitantu, bod 2 a
3, odber supernatantu a jeho filtrácia, odparenie a
rekonštitúcia, resp. priama injektáž
5. premývanie precipitantu
6. spracovanie precipitantu
![Page 52: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/52.jpg)
Výlučne len pre spojenie s GC
Headspace = „hlavový priestor“
Vytvorenie rovnovážneho stavu medzi kvapalnou a plynnou fázou
v tlakovej nádobe s uzáverom a pružným septom
Prchavé analyty v biologickom materiáli – napr. etanol,
anestetické plyny
Farmácia – reziduá rozpúšťadiel v tabletách
![Page 53: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/53.jpg)
Ekvilibrácia – 15 min., konštantná teplota
Výhoda – zamedzenie kontaminácie GC kolóny neprchavými zložkami
matrice
Nádobky – 6, 10, 20 ml
Typy nádobiek:
1. S okrúhlym dnom – práca s autosamplerom
2. S plochým dnom – odolnejšie voči vyššiemu tlaku, práca pri vyšších
teplotách, derivatizácia
Pomer fáz – najčastejšie 1:1
Rozdeľovací koeficient: K = c (L,S) / c (G)
Experimentálne ovplyvniteľné parametre:
1. Teplota – pri vyššej t vyššia koncentrácia analytu v plynnej fáze
2. Miešanie vzorky – rovnomerná distribúcia analytu medzi obe fázy
3. Rýchlosť ustálenia rovnovážneho stavu, fyzikálno-chemické vlastnosti –
modifikácie kvapalinou, sorbentom, úprava pH
![Page 54: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/54.jpg)
Rovnovážna technika založená na delení látok podľa rozdeľovacích
konštánt medzi vodnú a organickú fázu (s vodou nemiešateľná)
Podmienky: - vhodné organické s vodou nemiešateľné rozpúšťadlo,
zodpovedajúca hodnota pH
Vhodnejšie sú menej polárne rozpúšťadlá – zvýšenie selektivity extrakcie
iba na analyt, v opačnom prípade i čiastočná extrakcia niektorých zložiek
matrice
Najmä purifikácia lipofilných analytov – liečivá s účinkom na CNS
![Page 55: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/55.jpg)
Dobrá „extrakčná sila“
Malá rozpustnosť vo vode (s vodou nemiešateľné)
Menšia hustota než voda
Mierne prchavé (nesmie však dochádzať k jeho odparovaniu v
procese extrakcie)– uľahčenie ďalšieho spracovania vzorky
Stabilita, inertnosť
Nízka horľavosť
Nízka toxicita
Cenovo dostupné
Požadovaná čistota
Neabsorbuje v UV oblasti, nevykazuje elektrochemické vlastnosti
Neposkytuje odozvu na detektoroch typu – NPD, ECD, MS
![Page 56: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/56.jpg)
Liečivá v biologických tekutinách
Extrakcia závisí od:
1. pH prostredia
2. pKa analytu
3. rozdeľovacieho koeficientu
Bázy – pH o 2 jednotky viac ako pKa analytu
Kyseliny – pH o 2 jednotky menej ako pKa
analytu
![Page 57: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/57.jpg)
Polypropylénové
kolóny
Nezamieňať si ich s
SPE kolónkami
Kolóny Tox-Elut –
príprava moču pre
skríning, extrakcia
viacerých typov látok
v jednom kroku –
kyslé (barbituráty) i
zásadité (morfín)
![Page 58: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/58.jpg)
Rýchla, jednoduchá, nenáročná
Jednoduchá zmena extrakčných
podmienok
Nevyžaduje osobitné vybavenie
laboratória
univerzálna
Vysoká spotreba organických
rozpúšťadiel – likvidácia
toxického odpadu, vysoká záťaž
životného prostredia
Riziko tvorby emulzií na
medzifázovom rozhraní
Nevhodné pre automatizáciu
![Page 59: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/59.jpg)
Krv, plazma (0,1 – 4 ml)
Spojenie s GC, HPLC, CE
GC – premytie acetónom,
extrakcia do dodecylacetátu,
dihexyléteru, oktanolu
15 – 45 min., 10 – 200-
násobné zakoncentrovanie
HPLC, CE – prvotná
impregnácia s vodou
nemiešateľným
rozpúšťadlom, potom
naplnenie vhodným vodným
roztokom – princíp
biologických membrán
![Page 60: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/60.jpg)
Látky stredne prchavé a neprchavé
Postup:
1. výber vhodnej SPE trubičky alebo disku
- typ fázy
- množstvo sorbentu
- veľkosť kolónky alebo disku
2. kondicionovanie
3. nadávkovanie vzorky
4. premytie
5. vymytie analytu
![Page 61: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/61.jpg)
Automatizovaný postup
Neautomatizovaný postup
![Page 62: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/62.jpg)
Princíp: - interakcia analytu prítomného v kvapalnej fáze s tuhou
fázou sorbentu umiestnenou v kolónke z polypropylénu alebo skla
Sorbenty: - na báze silikagélu, syntetických živíc, oxidu hlinitého
Fázy:
1. Normálne – polárne skupiny viazané na silikát
2. Obrátené – nepolárne skupiny viazané na silikát (oktylová,
oktadecylová skupina)
3. Iónovýmenné – viazaný iónomenič (katex, anex)
On-line spojenie SPE-LC
![Page 63: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/63.jpg)
Sorbenty pre SPE:
1. modifikované
silikagély
2. uhlíkové sorbenty
3. imunoafinitné
sorbenty
4. sorbenty s
vnútorným povrchom
pokrytým reverznou
fázou
5. polyméry s
odtlačkom molekuly
![Page 64: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/64.jpg)
Vysoká výťažnosť izolácie
analytov
Jednoduchá predkoncentrácia
analytov
Účinná purifikácia
Úspora – času, organických
rozpúšťadiel
automatizácia
Obmedzené adsorpčné
schopnosti kolón
Ťažkosti pri spracovaní veľkých
objemov vzorky
Nevhodné pre vzorky s vysokým
obsahom lipidov
![Page 65: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/65.jpg)
Nový typ materiálu pre uskutočnenie SPE
Častice sorbenta (najčastejšie modifikovaný
silikagél) sú zachytené na inertnom materiáli
(teflon)
Pomer sorbent:teflon je 9:1 (w/w)
Rýchlosť prietoku kvapaliny na disku je nižšia
než pri klasickej SPE - pozitívum v zmysle
zvýšenej výťažnosti extrakcie
Ide o tzv. SPE kolónku s veľkým priemerom
a malou dĺžkou
Možnosť izolácie a zakoncentrovania analytu
z veľkého objemu (1 – 2 l) vo veľmi krátkom čase
![Page 66: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/66.jpg)
1992 – Janusz Pawliszyn
Adsorpčná a desorpčná technika zakoncentrovania
Vlákno z kremenného skla (1 cm) pokryté vhodným sorbentom
Vlákno spojené s piestom umiestnené v ihle (ochrana pred poškodením)
Analyt je extrahovaný iba do dosiahnutia rovnovážneho stavu
Rovnovážny stav ovplyvňuje:
1. Koncentrácia analytu vo vzorke
2. Typ a hrúbka sobentu na vlákne – prchavé látky = hrubšia vrstva, menej
prchavé látky = tenká vrstva
![Page 67: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/67.jpg)
Sorpcia:
- technika priameho ponorenia (priama sorpcia)
- headspace technika
- technika priameho ponorenia s ochrannou membránou – pomalší proces
Desorpcia:
- GC – tepelná desorpcia
- LC – desorpcia mobilnou fázou
Podľa sily sorpcie analytu:
- desorpcia dynamická – slabšie viazané
analyty, priamo unášané mobilnou fázou
k analytickej kolóne
- desorpcia statická – vlákno v kontakte
s mobilnou fázou počas 1 – 10 min., až potom prenos ku kolóne
![Page 68: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/68.jpg)
Quick Easy, Cheap, Effective,
Rugged (Robust), Safe
1993 – Anastassiades a Lehotay
Potravinárske matrice
dvojkroková extrakčná metóda
zahŕňajúca: i) extrakciu
a zhomogenizovanie vzorky a jej
frakcionáciu pomocou
organického rozpúšťadla
a roztokov solí, ii) extrakciu
a prečistenie organickej vrstvy
získanej v prvom kroku pomocou
tzv. disperznej SPE
![Page 69: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/69.jpg)
Extrakcia nadkritickými
tekutinami
Eliminácia spotreby organických
rozpúšťadiel
Extrakčné médium – často CO2,
extrakt sa po procese extrakcie
zavádza pod hladinu vhodného
rozpúšťadla alebo na tuhý
sorbent
Uplatnenie iba pri analýze
nepolárnych látok
Nadkritická tekutina – fyzikálne
vlastnosti plynu, chemické
vlastnosti kvapaliny
- rozpustnosť látok porovnateľná
s kvapalinami, nižšia viskozita a
vyššia difuzivita, takmer nulové
povrchové napätie
![Page 70: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/70.jpg)
Proces:
1. Povrchová desorpcia analytu do tekutiny
2. Difúzia analytu z vnútorného objemu matrice
3. Difúzia analytu cez povrchovú hraničnú vrstvu
4. Difúzia a transport v objeme nadkritickej fázy
![Page 71: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/71.jpg)
Práškované vzorky – pôda, rastlinný materiál,
vlasy
Nevhodné pre tekuté vzorky – riešenie =
nanesenie na tuhý sorbent – napr. silikagél
Prídavkom tzv. kosolventu možno zvýšiť
rozpustnosť hydrofilných látok (metanol ako
kosolvent) alebo urobiť prostredie kyslým
(HCl) alebo bázickým (amoniak)
Bežne v spojení s GC – analýza opiátov vo
vlasoch, analýza barbiturátov v plazme
![Page 72: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/72.jpg)
Výborné permeačné vlastnosti
nadkritickej kvapliny
Dobrá selektivita izolácie a
vysoká čistota extraktu
Termolabilné analyty
Možnosť úplnej automatizácie
Minimálna záťaž životného
prostredia
Izolácia analytu z tuhej a suchej
matrice
Požiadavka na vysokočistý CO2,
N2O alebo iné extrakčné médium
Vysoké vstupné náklady na
zariadenie
![Page 73: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/73.jpg)
ITP v 2D systémoch (ITP-ITP, ITP-CZE)
využívajúcich hydrodynamicky uzatvorený systém
![Page 74: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/74.jpg)
Najmä v GC, ale i v HPLC
Chemická modifikácia pôvodnej molekuly analytu
Cieľ: - dosiahnutie chromatografickej analýzy, zlepšenie detekčných
charakteristík, potvrdenie identity analytu, zvýšenie stability analytu,
analýza relatívne neprchavých látok (v prípade GC)
On-line i off-line prevedenie
Zvyčajne: silylácia (zvýšenie prchavosti), acylácia (zníženie polarity
amino-, hydroxy-, alebo tio-skupín), alkylácia (vnášanie alkylových
skupín)
![Page 75: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/75.jpg)
![Page 76: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/76.jpg)
Protokol potvrdzujúci, že istý postup
poskytuje vopred určené špecifikácie
Niektoré validačné parametre:
- čas analýzy
- linearita
- presnosť
- správnosť
- robustnosť
- medza dôkazu
- medza stanovenia
![Page 77: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/77.jpg)
Validácia závislá od účelu - bioanalytické
metódy, priemysel a potravinárstvo, farmácia
FDA smernica pre validáciu bioanalytických
metód – 2013 (návrh smernice na
pripomienkovanie)
EMA smernica – validácia bioanalytických
metód a metód pre vzorky farmaceutického
charakteru
ICH guideline
IUPAC smernica
![Page 78: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/78.jpg)
Potreba purifikácie
vzorky
Optimalizácia
„surová“ matrica
predlžuje časy
analýzy – interakcia
analyt-biologická
zložka
Nehomogénna vzorka
– posuny v časoch
analýzy
![Page 79: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/79.jpg)
Zhodnosť - vyjadruje
tesnosť zhody medzi
nezávislými výsledkami
skúšok získanými pri
vopred špecifikovaných
podmienkach
Reprodukovateľnosť
Opakovateľnosť
Vyjadrená
prostredníctvom
smerodajných odchýliek,
resp. relatívnych
smerodajných odchýliek
Správnosť:
resp. presnosť
Vyjadrená ako výťažnosť
- porovnanie koncentrácie
získanej z biologickej
matrice a koncentrácie
získanej z modelovej
vzorky vo vode
Selektivita – schopnosť
rozlíšiť požadovaný analyt
od ostatných súčastí
prítomných vo vzorke
![Page 80: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/80.jpg)
Rozpätie = rozdiel medzi najväčšou
a najmenšou pozorovanou hodnotou
kvantitatívneho znaku, ktorý súvisí so
zhodnosťou a správnosťou metódy
Linearita = schopnosť metódy získať
výsledok, ktorý je proporcionálny
koncentrácii analytu
- metóda kalibračnej krivky – y = ax + b
- korelačný koeficient
![Page 81: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/81.jpg)
Medza dôkazu – LOD = najnižšia koncentrácia
analytu, ktorá je pri danej hladine
spoľahlivosti ešte detegovateľná
Medza stanovenia – LOQ = najnižšia
koncentrácia analytu, ktorá môže byť
stanovená s prijateľnou hodnotou presnosti
- biologické interferenty – vysoké hodnoty LOD
- purifikácia a predkoncentrácia – posun do
oblastí ultrastopových analýz
![Page 82: Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský · Nové smery v analytickej chémii 2016/2017 Juraj Piešťanský Získavanie analytickej informácie o skúmanom](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022050209/5f5bd26477ddfc18b176c179/html5/thumbnails/82.jpg)