PADECIMIENTOS INFECCIOSOS

CONCEPTOS BASICOS

• Indicación de una prueba de laboratorio = SOSPECHA CLINICA (excepto en las pruebas con implicación en la medicina preventiva)

• Trabajo en equipo MEDICO + LABORATORIO

• Fase pre-analítica: selección, recolección, transporte y procesamiento de los especímenes.

TOMA DE MUESTRA DE CALIDAD ANALÍTICA

• Seleccionar el sitio anatómico en base a la sospecha dx.

• Técnica adecuada de toma de muestra

• Asegurar la sobrevida del germen mediante un medio de transporte adecuado

• Proceso inmediato (< 2 horas)

CALIDAD

TOMA DE MUESTRASELECCIÓN DE MEDIOS

CONSERVACION

TRANSPORTE

TOMA DE MUESTRA DE CALIDAD ANALITICA

• Antes del la recolección la flora comensal debe ser eliminada• Enviar historia clínica (Fecha y hora de toma de muestra, dx.

Clínico, tx. con antibióticos)• No almacenar muestras por lapsos mayores a 24 horas (excepto

cultivos virales por 2 a 3 días a 4° C)• Procesar de inmediato cultivos para anaerobios (15 a 30 min). El

material de biopsias se puede mantener por 24 horas a 25 °C en ambiente anaerobio.

• Conocer la sensibilidad de MO a los cambios bruscos de temperatura.

• Si los síntomas persisten a pesar de un Tx basado en un cultivo inicial, tomar nueva muestra en 72 horas.

• Rechazar muestras mal obtenidas, conservadas o transportadas.

PROCEDIMIENTOS ANALITICOS

• EXAMEN MICROSCOPICO DIRECTO– Celularidad– Calidad de la muestra– Presencia de bacterias, micelios, levaduras,

parásitos o inclusiones virales.– Tinciones

• CULTIVO

TINCIONES

TINCION DE GRAM

• Tinción bacteriana diferencial; las bact. Gram(+) retienen el complejo violeta cristal-yodo, que es eliminado de las células Gram (-) durante la decoloración; estas últimas se tiñen de contracolorante rojo, la safranina

Cocos grampositivos

Bacilos Gramnegativos

TINCION DE ZIEHL-NEELSEN

• Tinción acidorresistente en el que la carbolfucsina tiñe los ácidos micólicos en la pared celular de los MO acidorresistente, que aparecen de color rosa-rojo

• Permite la detección de micobacterias, nocardias y Actinomyces

TINCIONES

Cryptococcus: diferentes tinciones

Tinción con fluorocromos(Naranja de acridina,Rodamina auramina, blancoCalcofluor)

Tinción con tinta china Tinta China c/microscopiaDe contraste

Treponema pallidum: tinciones

Campo Oscuro/Contraste de fases Tinción mediante anticuerpos Específicos antitreponémicos marcadoscon colorantes fluorescentes.

RESPIRATORIO

DIGESTIVO

GENITOURINARIO

SNC….

COPROCULTIVO

UROCULTIVO

HEMOCULTIVO

ESPECTORACION

EXUDADO VAGINAL/URETRAL

EXUDADO OTICO

EXUDADO FARINGEO

EXUDADO CONJUNTIVAL

LIQUIDOS CORPORALES

PARASITOS

BACTERIAS

VIRUS

HONGOS

¿Qué prueba delaboratorio solicito?

METODOS DIRECTOS METODOS INDIRECTOS

ELISAAGLUTINACIONPCR

AnticuerposEnzimas

ProteínasDNA/RNA

HIS

TO

RIA

CL

INIC

AD

IAG

NO

ST

ICO

CL

INIC

O

ESTUDIOS EN HECES

• Afecciones gastrointestinales:– Directa: Por un microorganismo (infección

intestinal)– Indirecta: secreción de diversos fermentos y

toxinas que alteran la motilidad y permeabilidad de la membrana intestinal (intoxicación alimentaria o toxiinfección)

PERFIL COPROLOGICO

• NIÑOS– Amiba en fresco– Azucares reductores– Citología de moco

intestinal– Coproparasitoscopico

(1 muestra)– Sangre oculta en

heces– Coprocultivo– Rotavirus en heces

• ADULTOS– Amiba en fresco– Coproparasitoscopico

(1 muestra)– Grasa en heces

(cualitativa)– Sangre oculta en

heces– Coprocultivo

RELACION ENTRE ALGUNOS TIPOS DE GASTROENTERITIS Y LA FIEBRE

MicroorganismoPatología causada

porPeríodo de incubación

Síntomas comunes

Staphylococcus aureus Toxina (termoestable)

2-6 h Nauseas, vómitos, calambres abdominales, diarrea (30%), s/fiebre o muy poca.

Salmonella Infección (enteroinvasividad)

12-36 h Diarrea, dolor abdominal, por lo común fiebre.

Shigella Infección (enteroinvasividad)

24-72 h Diarrea líquida con mucus; la fiebre es habitual.

Clostridium perfringens Toxina (moderadamente termoestable)

6-12 h Diarrea, calambres, sin fiebre o muy poca

Clostridium botulinum Toxina (termoestable)

Variable (de horas o días)

Gastroenteritis inicial

ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES ASOCIADAS CON LEUCOCITOS FECALES

EnfermedadPorcentaje de pacientes con

leucocitosis fecalTipo de leucocito

predominante

Shigelosis 100 Leucocito PMN (84 %)

Salmonelosis (no por S. thypi) 82 Leucocito PMN (75 %)

Fiebre Tifoidea 100 Leucocitos mononuclares (95%)

E. Coli (enteroinvasor) 100 Leucocito PMN (85 %)

Colitis ulcerosa (activa) 100Leucocito PMN (88 %) (eosinófilos 8%)

Disentería amebiana VariableGeneralmente monocitos, salvo infección bacteriana secundaria

Diarrea virásica, cólera, toxina por S. aureus, Clostridium, E. coli enterotóxico

0-10 **

Salmonella

Fiebre TifoideaSalmonelosis

gastrointestinal

Salmonella typhiSalmonella paratyphi A/B

Salmonella typhimuriumSalmonella enteritidis

Salmonella Choleraesuis

Niños??

HemocultivoCoprocultivo

METODOSDIRECTOS

METODOSINDIRECTOS

Aglutinación(Reacciones febriles)

Coprocultivo

METODOSDIRECTOS

¿Qué métodos son mejores?¿Cuáles ayudan a hacer el diagnóstico?

HISTORIA NATURAL DE LA ENFERMEDAD

Tiempo transcurrido desde el momento de la infección

HEMOCULTIVO COPROCULTIVO SEROLOGIA

Máximo de positividad durante la 1a. semana

Permite aislar con un 30-50 % de posibilidad Salmonella durante todo el transcurso de la enfermedad, siempre y cuando el paciente no este bajo tratamiento, aunque el máximo de positividad se obtiene durante la 2a. Semana de evolución

Máximo de efectividad a partir de las 2a ó 3er. Semanas de evolución.

Son indicativos de reacción reciente:Salmonella Título ≥1/80 (anticuerpos somáticos)

Título ≥ 1/160 (anticuerpos flagelares)Brucella Título ≥ 1/80Proteus Título de OX19 (somático) ≥ 1/80

OX2 (somático) ≥ 1/20OXK (somático) ≥ 1/80

METODO DIRECTO

Demostración de H. pylori (PCR)Actividad de ureasa (Pba. del aliento)

Biopsia

AcAnti-H.pylori (IgG)

Suero

Heces

ELISA

ENFERMEDAD ULCERO-PEPTICA

DIAGNOSTICO POR LABORATORIO

Ag-H.pylori

UROCULTIVO

• Orina contaminada o Infección urinaria?– Contaminación: Cuenta de MO < 10.000/ml– Infección: cuenta de MO >100.000/ml o UFC

• Cuenta leucocitaria (>10 x campo)

• Hematuria/Leucocituria persistente con cultivo negativo: tuberculosis de vías urinarias (2 muestras seriadas)

• PCR: N. gonorrhoeae, C. trachomatis

MÉTODO DE RECOLECCIÓN CUENTA DE COLONIAS

PROBABILIDAD DE INFECCIÓN (%)

Aspirado suprapúbico

Bacilos gram (-): Cualquier númeroCocos gram (+): > pocos cientos

> 99%

Cateterización transvesical

> 105104 – 105103 - 104< 103

95%Infección probableSospechoso (repetir)

Infecc. Poco probable

Chorro medio Hombre: >104 Infección probable

Mujer: 3 muestras > 105 2 muestras > 105 1 muestra > 105104 - 105 < 104

95%90%80%Sospechoso (repetir)Sintomáticas: sospechosoAsintomáticas: infección poco probable

Criterios microbiológicos diagnósticos de IVU

Uretritis/Prostatitis• Diplococos G(-)= enfermedad

gonocócica• Siembra en medios selectivos

para N. gonorrhoeae (Trayer-Martin; Agar Chocolate; pbas. Bioquímicas)

• PCR• Infección por C. trachomatis

(Tinción Fluorescente; EIA)• En mujeres: muestras de

colposcopía para cultivo e identificación de N. gonorrhoeae y C. trachomatis

• Cervicitis: cultivo e identificación de Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum (+ 104 UFC)

• Urocultivo y hemocultivo (período febril)

• Agente causal más frecuente: E. coli

• En infección crónica: cultivo de exudado prostático.

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO EN ENFERMEDADES VIRALES

PATOGENOS PROCEDIMIENTOS

Tracto respiratorio. Adenovirus, Influenza, Enterovirus, Rubeola, Paramixovirus

Hisopado de rinofaringe para cultivo celular o detección de Ag por FIA

Tracto digestivo. Rotavirus, reovirus, adenovirus, virus Norwalk

Microscopia electrónica, ELISA para Ag virales en heces o hisopado rectal

Exantémicas. Rubeola, sarampión, picornavirus Detección de Ag virales en orina (rubeola); efectos citopáticos en exudado faríngeo (sarampión), serología

Piel-mucosas. Herpes simple, varicela zoster, echovirus

Impronta de las vesículas y frotis de Tzanck; serología; PCR

SNC. Enterovirus, arbovirus, rabia, CMV, sarampión, parotiditis

FIA del Ag en saliva y tejidos; cultivo celular de LCR, antigenemia en suero para CMV; PCR para VHS

Sangre. VIH, Hepatitis viral A, B, C Detección de Ag o Ac en suero (ELISA); PCR; carga viral. Western Blot

PRUEBA RAPIDA PARA N1H1

INFORME

Infecciones Virales

• Lesiones más frecuentes en humanos por VPH– Papilomatosis laringea– Condiloma acuminado y plano cervicouterino– Verrugas cutaneas vulgares y plantares– Lesiones en la conjuntiva ocular– Displasias y carcinomas anogenitales– Adenocarcinoma de próstata

• Tres niveles de riesgo por tipos• Tipo 6, 11, 16, 18 y 31 asociados a neoplasias

anogenitales

Diagnóstico de laboratorio de las enfermedades parasitarias

PATOGENOS PROCEDIMIENTOS

Sangre: Plasmodium, Babesia, tripanosomiasis

Gota gruesa con sangre anticoagulada y tinción de Giemsa

Médula ósea y úlceras cutáneas Aspirado y frotis con Giemsa

Sistema nervioso central: Acanthamoeba, Naegleria, Treponema, Cisticercosis

Examen microscópico del LCR

Pulmón: Paragonimus, strongyloides Frotis del esputo, lavado bronquial y frotis con Giemsa-Gram

Músculo: Trichinella spiralis; leishmania Biopsia y serología

Piel: Onchocerca, Larva migrans Microscopía directa y serología

Urogenital: Tricomonas, Schistosoma Examen en fresco, serología, FIA, sedimento urinario

La elección de la prueba adecuada y la interpretación de los resultados se basanEn la comprensión del ciclo vital del parásito y de la patogénesis en los humanos

Trypanosoma cruzi

MOSCA TSE TSÉ (GLOSSINA)

Tripomastigotesen sangre periférica

Amastigotesen tejido

T. Cruzi (positivo, FIA)

Leishmaniasis

T. saginata T. solium

DIAGNOSTICO POR LABORATORIO• COPROPARASITOSCOPICO• CITOLOGICO DE LCR• SEROLOGÍA

HU

EV

OS

PR

OG

LO

TID

EE

SC

OL

EX

DIAGNOSTICO CLINICO• TAC• EPIDEMIOLOGIA

Ascaris lumbricoides

Enterobius vermicularis

Recolección de la muestra

Элементы

¿RECONOCES ESTOS PARASITOS?

¿RECONOCES ESTOS PARASITOS?