pemanfaatan metode klt- … · 3.4 prosedur penelitian ... gambar 2.3 profil klt ekstrak etil...
TRANSCRIPT
i
PEMANFAATAN METODE KLT-
SPEKTROFOTODENSITOMETRI UNTUK
MENENTUKAN SIDIK JARI KROMATOGRAFI
EKSTRAK ETANOL HERBA SELEDRI
(Apium graveolens Linn.)
Skripsi
I NYOMAN GDE WAISNAWA
1108505016
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2015
iii
iv
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena atas
berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“Pemanfaatan Metode KLT-Spektrofotodensitometri untuk Menentukan
Sidik Jari Kromatografi Ekstrak Etanol Herba Seledri (Apium graveolens
Linn.)” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan dari
berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan
terima kasih kepada:
1. Drs. I Nyoman Kadjeng Widjaja, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing I
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan Skripsi ini.
2. Luh Putu Mirah Kusuma Dewi S.F., M.Sc., Apt. selaku dosen
pembimbing II yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi,
semangat, bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan Skripsi ini.
3. Ir. Anak Agung Gde Raka Dalem, M.Sc. (Hons), selaku Dekan Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
v
4. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana.
5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis
selama penyusunan Skripsi ini.
6. I Made Gara, selaku ayah tercinta yang telah mengasuh dan membesarkan
penulis, membimbing, memberikan doa, cinta, dan motivasi kepada
penulis, kakak kandung penulis yaitu Ni Putu Raka Hermayanti dan Ni
Made Rai Juniariani, serta keluarga besar di Desa Peliatan, Kecamatan
Ubud, Kabupaten Gianyar yang selalu memberikan motivasi dan
dukungan dalam penyusunan Skripsi ini.
7. Putera Sampoerna Foundation dan Astro Kasih yang telah memberikan
kepercayaan dan kesempatan untuk menerima beasiswa, serta memberikan
motivasi dan dukungan kepada penulis selama mengikuti pendidikan di
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana.
8. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2011 (Lumiere Onze
Vauquelin) yang selalu menemani di saat suka maupun duka, Tim Riset
Wirasuta 2014/2015, serta teman seperjuangan dan staf Laboratorium
Forensik Sains dan Kriminologi Universitas Udayana yang saya
banggakan atas semangat dan motivasinya kepada penulis dalam
penyusunan Skripsi ini.
vi
9. Seluruh rekan seperjuangan organisasi dan komunitas: Himafarma Unud,
BEM FMIPA Unud, Sampoerna Foundation Scholars Club Bali, Earth
Hour Denpasar, dan IGers Bali, serta teman-teman KKN-PPM Unud
Periode IX Desa Bunutin yang telah memberikan dukungan mental dan
semangat kepada penulis dalam berbagai hal.
10. Seluruh mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2010, 2012, dan 2013 yang
memberikan semangat dan dukungan dalam pembuatan skripsi ini.
11. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan
Skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.
Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat
membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis
berharap semoga Skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang
memerlukan.
Bukit Jimbaran, Juli 2015
Penulis
vii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL .................................................................................... i
LEMBAR PENGESAHAN ......................................................................... ii
KATA PENGANTAR ................................................................................. iii
DAFTAR ISI ................................................................................................ vi
DAFTAR TABEL ........................................................................................ ix
DAFTAR GAMBAR ................................................................................... x
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................ xii
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ................................................... xiii
ABSTRAK. .................................................................................................. xiv
ABSTRACT ................................................................................................. xv
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................. 1
1.1 Latar Belakang .......................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ..................................................................... 4
1.3 Tujuan Penelitian ...................................................................... 4
1.4 Manfaat Penelitian .................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................ 5
2.1 Herba Seledri.................................................................. ........... 5
2.1.1. Klasifikasi Herba Seledri ..................................... ........... 5
2.1.2. Deskripsi Herba Seledri ................................................... 5
2.1.3. Kandungan Kimia Herba Seledri ..................................... 6
2.1.4. Manfaat Herba Seledri ..................................................... 6
viii
2.2 Apiin (Apigenin 7-O-apioglukosida) ......................................... 7
2.3 Metode Ekstraksi ...................................................................... 8
2.4 Kromatografi Sidik Jari (Fingerprint) ....................................... 8
2.5 KLT-Spektrofotodensitometri ................................................... 11
2.6 Analisis Fungsi Korelasi Silang ................................................ 16
2.7 Analisis Data dengan Fungsi Kosinus ...................................... 16
BAB III METODE PENELITIAN .............................................................. 18
3.1 Rancangan Penelitian ............................................................... 18
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ................................................... 18
3.3 Bahan dan Peralatan Penelitian ................................................ 19
3.3.1 Bahan Penelitian ...... ...................................................... 19
3.3.2 Alat Penelitian ................................................................ 19
3.4 Prosedur Penelitian ................................................................... 19
3.4.1 Pengumpulan, Determinasi, dan Preparasi Sampel......... 19
3.4.2 Penetapan Susut Pengeringan ........................................ 20
3.4.3 Metode Ekstraksi ............................................................ 21
3.4.4 Identifikasi Senyawa Apiin dan Pemilihan Fase Gerak . 21
3.4.5 Pemilihan Volume Penotolan ......................................... 22
3.4.6 Pemanfaatan KLT-Spektrofotodensitometri dalam
Penentuan Sidik Jari Kromatografi Ekstrak Etanol
Herba Seledri ................................................................... 24
3.4.7 Analisis Fungsi Korelasi Silang ..................................... 25
3.4.8 Analisis Data dengan Fungsi Kosinus ........................... 25
ix
3.5 Skema Kerja Penelitian ............................................................ 26
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 27
4.1 Pengambilan Sampel Herba Seledri ......................................... 27
4.2 Determinasi Jenis Tanaman ...................................................... 27
4.3 Penetapan Susut Pengeringan ................................................... 28
4.4 Ekstraksi Sampel Herba Seledri ............................................... 29
4.5 Identifikasi Senyawa Apiin dan Pemilihan Fase Gerak ............ 30
4.6 Pemilihan Volume Penotolan ................................................... 36
4.7 Pemanfaatan KLT-Spektrofotodensitometri dalam Penentuan
Sidik Jari Kromatografi Ekstrak Etanol Herba Seledri ............. 38
4.8 Analisis Data ............................................................................. 44
4.8.1 Analisis Fungsi Korelasi Silang ...................................... 44
4.8.2 Analisis Fungsi Kosinus .................................................. 45
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ....................................................... 48
5.1 Kesimpulan ............................................................................... 48
5.2 Saran ......................................................................................... 49
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 50
LAMPIRAN ................................................................................................. 54
x
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 4.1 Hasil Susut Pengeringan Serbuk Herba Seledri .......................... 28
Tabel 4.2 Perbandingan Warna Ekstrak Etanol Herba Seledri dari Tiga
Daerah .......................................................................................... 30
Tabel 4.3 Nilai Rs dan Tf yang Dihasilkan oleh Senyawa Penanda Apiin
pada Kedua Sistem Fase Gerak ................................................... 35
Tabel 4.4 Nilai Rs dan Tf yang Dihasilkan oleh Senyawa Penanda Apiin
pada Kromatogram Sistem Fase Gerak II .................................... 38
Tabel 4.5 Nilai Fungsi Korelasi Silang (r) Spektrum Apiin ........................ 44
Tabel 4.6 Nilai AUC Ekstrak Etanol Herba Seledri dari Tiga Daerah pada
Tiap Nilai Rf ................................................................................ 46
Tabel 4.7 Nilai Kosinus Sampel Ekstrak Etanol Herba Seledri ................... 46
xi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1 Herba Seledri dari Daerah Pancasari Buleleng Bali ............. 6
Gambar 2.2 Struktur Kimia Apiin ............................................................ 7
Gambar 2.3 Profil KLT Ekstrak Etil Asetat dari Tiga Buah-buahan
Umbelifera............................................................................. 9
Gambar 2.4 Profil Sidik Jari HPTLC Ekstrak Etil Asetat dari Tiga
Buah-buahan Umbelifera ...................................................... 10
Gambar 2.5 Perhitungan Resolusi (Rs) ..................................................... 14
Gambar 2.5 Perhitungan Tailing Factor (Tf) ........................................... 14
Gambar 2.6 Sketsa Sudut di Antara Dua Vektor ..................................... 16
Gambar 3.1 Skema Kerja Penelitian Secara Umum ................................. 26
Gambar 4.1 Ekstrak Etanol Herba Seledri ............................................... 29
Gambar 4.2 Identitas KLT-Spektrofotodensitometri Ekstrak Etanol
Herba Seledri Daerah Pancasari dengan Fase Gerak
Toluene P : Butanol P : Asam Asetat P : Air (2 : 2 : 1 : 5
v/v) ....................................................................................... 31
Gambar 4.3 Spektrum Puncak Kromatogram dari Flavonoid................... 32
Gambar 4.4 Identitas KLT-Spektrofotodensitometri Ekstrak Etanol
Herba Seledri Daerah Pancasari dengan Fase Gerak
Kloroform : Metanol : Air (70 : 30 : 6,52 v/v) ..................... 33
Gambar 4.5 Spektrum Puncak Kromatogram dari Flavonoid................... 34
xii
Gambar 4.6 Puncak Kromatogram Sampel Ekstrak Etanol Herba Seledri
dengan Fase Gerak Kloroform : Metanol : Air (70 : 30 : 6,5
V/V) pada Panjang Gelombang 210 nm .............................. 37
Gambar 4.7 Pengamatan Bercak Kromatogram Sampel Ekstrak Etanol
Herba Seledri dari 3 Daerah .................................................. 39
Gambar 4.8 Pola Puncak Kromatogram Sampel Ekstrak Etanol Herba
Seledri pada Panjang Gelombang 210 nm ........................... 40
Gambar 4.9 Spektrum pada Tiap Puncak Kromatogram Ekstrak Etanol
Herba Seledri ........................................................................ 41
Gambar 4.10 Pola Puncak Kromatogram Sampel Ekstrak Etanol Herba
Seledri pada Panjang Gelombang Maksimum 338 nm ........ 42
Gambar 4.11 Spektrum Puncak Mayor Kromatogram Ekstrak Etanol
Herba Seledri ........................................................................ 43
Gambar 4.12 Perbandingan Bentuk Spektrum Apiin dari Tiga Daerah .... 44
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman Seledri ........................................ 54
Lampiran 2. Perbandingan Spektrum Apiin pada Pustaka dengan Hasil
Penelitian ................................................................................. 56
Lampiran 3. Skema Pembuatan Pereaksi Sitroborat .................................... 57
xiv
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH
AUC : Area Under Curve
C : Korelasi Kosinus
DAD : Diode Array Detector
GC : Gas Chromatography
FHI : Farmakope Herbal Indonesia
HPLC : High Performance Liquid Chromatography
mdpl : meter di atas permukaan laut
MS : Mass Spectrophotometry
r : Korelasi Spektrum
Rf : Retardation Factor
Rs : Resolusi
Tf : Tailing Factor
TLC : Thin Layer Chromatography
UV : Ultraviolet
WHO : World Health Organization
xv
ABSTRAK
Herba seledri (Apium graveolens Linn.) memiliki aktivitas sebagai
antimikroba, antihipertensi, antioksidan, antiketombe, antidepresan, dan anti-
inflamasi. Tanaman sebagai bahan baku obat herbal dapat mengandung banyak
senyawa kimia. Kandungan senyawa kimia penanda dapat digunakan sebagai
salah satu parameter dalam standardisasi bahan baku obat herbal. WHO telah
menetapkan sidik jari kromatografi sebagai metode standardisasi obat herbal.
Penelitian ini bertujuan memanfaatkan metode KLT-spektrofotodensitometri
untuk menentukan sidik jari kromatografi ekstrak etanol herba seledri serta
melihat variasi sidik jari kromatografi ekstrak etanol herba seledri dari 3 daerah di
Indonesia.
Sampel herba seledri diperoleh dari Pangalengan (Jawa Barat),
Pandanrejo (Jawa Timur), dan Pancasari (Bali). Serbuk herba seledri diekstraksi
dengan etanol 96% menggunakan bantuan ultrasonik. Ekstrak etanol ditotolkan
sebanyak 4 µL pada fase diam silika gel 60 GF254 menggunakan Linomat 5
(CAMAG), dan dielusi dengan fase gerak kloroform : metanol : air (70 : 30 : 6,5
v/v). Bercak diamati dengan TLC Visualizer (CAMAG) di bawah sinar putih, UV
254, UV 366. Kromatogram dipindai dengan TLC Scanner 4 (CAMAG) pada
panjang gelombang 210 nm dan 338 nm. Spektrum tiap puncak dipindai pada
panjang gelombang 200-400 nm.
Senyawa penanda apiin memiliki Rf 0,47, berfluoresensi hijau
kekuningan pada UV 366 nm setelah disemprot dengan pereaksi sitroborat. Apiin
memberikan panjang gelombang maksimum spektrum UV pada 270 nm dan 338
nm. Kromatogram pada panjang gelombang maksimum 338 nm mempunyai 4
puncak mayor yaitu pada Rf 0,47; 0,70; 0,78; dan 0,88. Hasil analisis korelasi
silang yaitu r = 0,99 menunjukkan spektrum senyawa penanda apiin pada ketiga
sampel identik. Hasil analisis fungsi kosinus yaitu C = 92,29 menunjukkan ketiga
sampel memiliki pola puncak kromatogram yang bervariasi.
Kata kunci: Seledri, Apium graveolens, standardisasi, kromatografi sidik jari
fitokimia, KLT-spektrofotodensitometri, fungsi kosinus
xvi
ABSTRACT
Celery herbs (Apium graveolens Linn.) has activity as an antimicrobial,
antihypertensive, antioxidant, anti-dandruff, antidepressants, and anti-
inflammatory. Plants as raw material contain many chemical compounds. The
marker compounds are one of the parameters for herbal medicines
standardization. WHO has defined a chromatography fingerprint as
standardization method for herbal medicines. This study using TLC-
spectrophotodensitometry for determining chromatography fingerprint of ethanol
extract of celery herbs and for determining its chromatography fingerprint
variation in 3 different areas.
Celery herbs obtained from Pangalengan (West Java), Pandanrejo (East
Java), and Pancasari (Bali). Celery herbs powders extracted using an ultrasonic.
Ethanol extract spotted 4 µL on silica gel 60 GF254 as a stationary phase using
Linomat 5 (CAMAG). Then eluted with chloroform : methanol : water (70 : 30 :
6,5 v/v) as a mobile phase. Spots scanned with TLC Visualizer (CAMAG) at
white light, UV 254, UV 366. Chromatogram scanned using TLC Scanner 4
(CAMAG) at 210 nm and 338 nm. Spectrum then scanned at 200 - 400 nm.
Apiin as a marker has Rf 0,47 and give fluorescent yellowish green at UV
366 nm after sprayed with boric-citric acid. Apiin has maximum wavelength each
at 270 nm and 338 nm. Chromatogram at 338 nm has 4 major peaks, in Rf 0,47;
0,70; 0,78; and 0,88. Results of the cross-correlation analysis r = 0,99 indicates
that apiin spectrum in 3 samples are identic. Results of the cosine function
analysis C = 92,29 indicates that 3 samples of celery herbs have varying
chromatographic fingerprints.
Keywords: Celery, Apium graveolens, standardization, phytochemical chromatographic
fingerprints, TLC-spectrophotodensitometry, cosine function