pembuatan preparat hewan
DESCRIPTION
mikroteknikTRANSCRIPT
PEMBUATAN PREPARAT JARINGAN HEWAN
Pada dasarnya pembuatan preparat jaringan hewan terdiri atas proses
pengambilan organ yang akan dibuat preparat section-nya, proses pengawetan
(fiksasi), proses dehidrasi, clearing, embedding, pemotongan blok, deparafinisasi,
rehidrasi, pewarnaan, clearing, dan mounting. Metode pewarnaan yang digunakan
disesuaikan dengan jaringan atau organ yang akan dibuat preparatnya. Metode
pewarnaan yang umum digunakan diantaranya adalah pewarnaan Hematoxilin-Eosin
(H-E), pewarnaan Mallory Azan (M-A), pewarnaan Verhoef Van Gieson (VVG),
pewarnaan Impregnasi Perak, dan pewarnaan Periodic Acid Schiff. Adapun pada
praktikum pembuatan preparat jaringan hewan ini digunakan metode pewarnaan
hematoxylin-eosin (H-E).
ALAT DAN BAHAN
Alat:
Botol anestesi
Papan bedah
Alat bedah
Spuit
Inkubator
Gelas obyek dan gelas penutup
Mikrotom
Mikroskop
Bahan:
Tikus putih
Eter
1
NaCl fisiologis 0,09%
Larutan Bouin
Alkohol
Xylol
Parafin
Air kran
Pewarna Hematoxylin
Pewarna Eosin
Entellan
CARA KERJA
1. Pengambilan Sampel
Tikus putih dibius menggunakan eter dalam botol anestesi sampai pingsan.
Letakkan tikus putih pada punggungnya di atas papan bedah. Keempat
kakinya difiksasi menggunakan jarum pentul. Rambut tubuh di linea mediana
dibasahi sedikit air. Kulit di anterior genitalia eksterna diangkat menggunakan
pinset dan dipotong lateral. Arah gunting kemudian dilanjutkan ke arah
anterior tubuh sampai memotong diafragma dada dan berlanjut sampai ke
bawah mandibula. Kulit kemudian diangkat dari jaringan di bawahnya
menggunakan pinset dan difiksasi pada papan bedah menggunakan jarum
pentul. Dinding perut dibuka dan ambillah organ-organ yang akan digunakan
dibuat preparat histologi. Organ yang dikehendaki segera diambil dan
dimasukkan ke dalam larutan pencuci, kemudian dimasukkan ke larutan
pengawet (larutan Bouin). Untuk organ pencernaan, sebelum diambil segera
disuntik dengan larutan pengawet.
2. Proses Pengawetan (Fiksasi)
Organ yang akan dibuat preparat dimasukkan ke dalam larutan Bouin dan
disimpan selama 24 jam.
3. Proses Dehidrasi
2
Jaringan dihilangkan kandungan airnya dengan cara dimasukkan ke dalam
alkohol bertingkat, mulai dari 70%, 80%, 90%, 95%, dan 100%, masing-
masing selama 30 menit.
4. Clearing
Jaringan yang sudah didehidrasi kemudian dimasukkan dalam larutan xylol
selama 1,5 jam.
5. Embedding
Sebelum di-embedding jaringan dimasukkan ke dalam xylol:parafin 1 (3:1),
xylol:parafin 2 (1:1), xylol:parafin 3 (1:3), dan parafin murni dua kali,
masing-masing selama 30 menit (diletakkan dalam oven suhu 56-58⁰C.
Setelah dari parafin murni, jaringan di-embedding (diblok) dengan parafin
sampai mengeras.
6. Pengirisan Blok
a. Masukkan preparat dalam blok parafin ke dalam lemari es agar keras.
b. Letakkan blok pada mikrotom, kemudian iris dengan ketebalan 5 mikron.
c. Ambil potongan jaringan menggunakan kuas kecil dan ditempel pada
gelas obyek serta diberi lem dari putih telur dan gliserin.
d. Tetesilah dengan satu tetes formalin 4%.
e. Pindahkan ke inkubator selama 12 jam.
7. Deparafinisasi
Jaringan yang sudah menempel pada gelas obyek dimasukkan ke dalam xylol
1, xylol 2, dan xylol 3, masing-masing selama 1 menit.
8. Rehidrasi
Setelah dari xylol 3, gelas obyek direhidrasi dengan jalan dimasukkan ke
dalam alkohol absolut 1, absolut 2, absolut 3, alkohol 95%, alkohol 90%,
alkohol 80%, dan alkohol 70%, masing-masing 1 menit. Kemudian obyek
tersebut dimasukkan ke dalam wadah yang dialiri air kran yang mengalir
selama 10 menit.
9. Pewarnaan
3
a. Jaringan diwarna dengan pewarna hematoxylin selama 5 menit, lalu cuci
dengan air kran.
b. Pucatkan dengan larutan pemucat yang berupa 1% HCl dalam 70%
alkohol. Masukkan dalam larutan eosin selama 5 menit. Kontrollah di
bawah mikroskop, jika warna ungu dan merah sudah cukup kontras maka
jaringan langsung didehidrasi dengan alkohol bertingkat 70%, 80%,
90%, 95%, masing-masing dengan 2 kali celup. Kemudian masukkan ke
dalam alkohol absolut 1, 2, dan 3, masing-masing selama 5 menit.
10. Clearing
Setelah dari alkohol 3, jaringan dimasukkan ke dalam xylol 1, xylol 2, xylol 3,
masing-masing selama 5 menit.
11. Mounting
Dari xylol 3 jaringan segera ditutup dengan gelas penutup menggunakan
perekat entellan, biarkan sampai mengering.
4