PENETAPAN HCG DENGAN TEKNIK IMUNOKROMATOGRAFI

Oleh:Nama: Siti Nur HidayahNIM: B1J011026Rombongan: IKelompok: 1Asisten: Maulana Yusuf

LAPORAN PRAKTIKUM IMMUNOLOGI

KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN KEBUDAYAANUNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMANFAKULTAS BIOLOGIPURWOKERTO2014I. II. PENDAHULUANA. Latar BelakangSatu hal yang tidak bias lepas dari proses kehamilan adalah perubahan hormon yang menyebabkan berbagai perubahan organ dan system tubuh seorang ibu hamil. Hormon itu sendiri merupakan aneka substansi kimia yang dilepaskan kealiran darah untuk merespons suatu rangsangan dan mengaktifkan sel, sesuai dengan hormon yang dibutuhkan dan membutuhkannya. Fertilisasi terjadi pada hari-hari setelah ovulasi yang merupakan titik tengah daur haid. Telur yang telah mengalami proses pembuahan mengapung kearah tuba fallopi dan masuk kedalam uterus dimana ovum menanam diri pada endometrium sekretorik yang telah siap. Segera setelah implantasi pada hari ke-21 hingga hari ke-23 dari siklus, dimulai produksi gonadotropin korionik (chorionic gonadotrpin,CG) (Adnyana, 2006).Hormon Chorionic Gonadotropin(HCG) adalah hormon khas kehamilan yang ditemukan dalam darah dan urine perempuan hamil. Hormon yang dibentuk oleh trofoblast atau lapisan bagian luar janin yang terbentuk pada awal pembentukan janin dan plasenta ini berfungsi mempertahankan korpus luteum yaitu jaringan berwarna kuning dalam indung telur yang terbentuk ketika indung telur baru saja melepaskan sel telur. korpus luteum ini yang berfungsi membuat eksogen dan progesterone sampai plasenta terbentuk seutuhnya. Keberadaan hormon ini dalam urin pada awal kehamilan merupakan dasar berbagai tes kehamilan di laboratorium dan kadang-kadang dapat dideteksi di dalam urin 14 hari setelah konsepsi. Gonadotropin korionik penting bagi pengenalan kehamilan oleh ibu karena hormon ini bekerja menyelamatkan korpus luteum, tempat pembentukan utama progesteron selama 6 minggu pertama (Adnyana, 2006).

B. Tinjauan PustakaGonadotropin (hCG) tidak hanya diekspresikan dalam trofoblas plasenta, tetapi juga di sejumlah besar tumor. HCG dan hormon gonadotropin luteal (LH) mengikat reseptor yang sama (LH-R) dan memiliki fungsi biologi sejenis, meskipun hCG lebih kuat karena memiliki reseptor yang tinggi dalam mengikat afinitas peredaran darah yang lebih lama sekitar separuh hidupnya. Human chorionic gonadotropin adalah glikoprotein yang dihasilkan oleh trofoblas janin selama kehamilan dan disekresikan ke dalam sirkulasi ibu. Komitmen sitotrofoblas untuk syncytiotrofoblas dikaitkan dengan aktivasi-dan bhCG gen subunit. Intermediet ini bersifat sementara, mereka membedakan untuk syncytiotrofoblas dan ekspresi-b hCG penurunan RNA. Juga dalam chorion sel karsinoma yang terdiri dari kelompok-kelompok cytotrophoblastlike dan sel-sel berinti besar, a-dan-b hCG RNA dinyatakan. Dalam sel-sel ini, hCG telah digunakan sebagai penanda tumor untuk waktu yang lama(Lenhard, 2012)Macam-macam test kehamilan seperti, USG, Pemeriksaan Aft Alfa- Fetoprotein (AFP), Amniosentesis, Fetoskopi dan Pengambilan Contoh Vili Korion (Chorionic Villus Sampling). Ultrasound atau ultrasonografi adalah penggunaan gelombang suara frekuensi tinggi untuk melihat ke dalam rongga perut dan menampilkan citra janin di layar monitor. Tes ini biasanya dilakukan di ruang praktek dokter atau di rumah sakit bersalin. Tes AFP/ tes darah sebaiknya dijalani setidaknya satu kali antara minggu ke 14 - 20. Produksi AFP berlangsung di hati janin. Kadar yang terlampau tinggi atau rendah merupakan indikator adanya cacat lahir. Kadar yang terlalu tinggi mengindikasikan adanya cacat saluran syaraf (NTD) seperti misalnya: spina bifida (sambungan beberapa lengkung ruas tulang-belakang tidak me-rapat), atau anensefali (pembentukan otak tidak sempurna). Sedangkan kadar yang terlalu rendah mengindikasikan sindroma Down atau kelainan kromosom (Kreier, 1990)..Tes amniosentesis hanya dilakukan kecuali pada kehamilan beresiko tinggi. Fetoskopi dilakukan dengan cara memasukkan sebatang pipa halus dengan ujung yang berlampu kedalam air ketuban lewat sebuah insisi kecil disebelah atas tulang pubis. Sebuah lensa di dalam pipa memungkinkan pengamatan langsung pada janin. CVS adalah tes prenatal terbaru yang merupakan alternatif lain dari tes amniosentesis. Tes ini dilakukan dengan memasukkan sebuah kateter ke dalam rahim melalui liang vagina untuk mengambil sedikit jaringan plasenta. Jaringan ini kemudian diteliti untuk mendeteksi kelainan kromosom, metabolisme, dan DNA (Kreier, 1990).Salah satu cara untuk mendeteksi HCG dalam urine adalah dengan metode imunokromatografi. Uji ini dengan menggunakan urin yang diperiksa beta HCG nya yaitu suatu metoda imunokromatografi dengan menggunakan teststrip yang berisi antibodi monoklonal anti HCG (sebagai zona test) yang dilekatkan pada lateks berwarna merah sebagai zona kontrol adalah anti HCG dari IgG mouse. Test ini merupakan yang paling lazim dan banyak digunakan oleh para ibu. Karena selain mudah dan sederhana, test urine ini juga dapat dilakukan oleh sendiri tanpa perlu bantuan ahli. Inti test kehamilan adalah untuk mengetahui kadar HCG (Human Chorionic Gonadotropin) yaitu suatu hormon yang dihasilkan embrio saat terjadinya kehamilan yang akan meningkat dalam urin dan darah seminggu setelah konsepsi (Mansjoer, 1999). Hormon tersebut dilepaskan ke dalam darah ibu yang mengalir mengelilingi ovum, lalu terbawa menuju indung telur. Hal tersebut mengakibatkan peningkatan progesterone yang berfungsi menahan haid berikutnya. HCG mencapai tingkat produksi maksimum saat usia kehamilan 12 minggu, sementara plasenta berkembang dan mejadi lebih aktif. HCG dikeluarkan oleh ginjal ibu dan dapat dideteksi dalam daran dan urine, pada minggu-minggu awal kehamilan. Keberadaan hormon inilah yang menjadi dasar test kehamilan. Jenis-jenis test urine ada yang disebut Test Pack (Pengetesan sendiri), Test Slide dan Test Laboratorium (Katzung, 1994).

C. TujuanTujuan dari praktikum kali ini adalah untuk mengetahui cara penetapan HCG dengan menggunakan teknik kromatografi melalui test kehamilan.

III. MATERI DAN METODEA. MateriAlat dan bahan yang digunakan dalam praktikum penetapan HCG dengan teknik Imunokromatografi adalah tempat urine (botol film), sampel urine wanita hamil muda, sampel urine wanita normal (tidak hamil), test strip Acon (antigen HCG).B. MetodeCara Kerja praktikum kali ini yaitu:

Sampel urin + dan - Testrip dicelupkan tanpa Hasil setelah 5melebihi garis celup maksimal

Interpretasi.

Gambar 1. Interpretasi Hasil pada Test Pack

IV. V. HASIL DAN PEMBAHASANA. Hasil

Positif (+)Negative (-)Gambar 3.1 Tes strip positif dan negatif

Tabel 3.1. Tabel Pengamatan Tes strip

NoKelompokHasil

11+

22-

33+

44-

Keterangan : = Hasil Negatif+= Hasil Positif

B. PembahasanPenetapan HCG dengan teknik imunokromatografi merupakan uji laboratorium bagi wanita untuk mengetahui kehamilan (Mansjoer, 1999). Brown (1961), menyatakan bahwa HCG beredar dalam darah dan urine satu minggu setelah fertilisasi. Kadar HCG tertinggi adalah 120 IU/ml serum yang didapatkan pada hari ke 62 setelah menstruasi terakhir dan kadar terendah adalah 10 IU/ml pada hari ke 154 setelah menstruasi terakhir, kemudian kadarnya akan naik kembali 20 IU/ml pada hari ke 200 setelah fertilisasi dan kadarnya tidak berubah sampai kehamilan berakhir, tetapi karakteristik HCG adalah bersifat lutoetropik yaitu HCG akan diproduksi tertinggi pada pagi hari, sehingga urine wanita hamil bisa saja hasilnya dianggap negatif apabila pengambilan sampel urine dilakukan selain pada pagi hari sehingga kadarnya tidak mencapai maksimal atau bisa kurang dari 50 IU/ml. Sedangkan menurut Speicher dan Smith (1996), konsentrasi HCG pada darah dan urin memperlihatkan puncak-puncak yang sejajar sekitar 60 hari setelah konsepsi, kemudian menurun ke kadar yang rendah tepat sebelum akhir kehamilan (persalinan). Kadarnya dalam urin memuncak sampai 20.000 hingga 100.000 IU per hari dan menurun pada kehamilan lanjut hingga nilainya 4.000 sampai 11.000 IU per hari.Berdasarkan data hasil praktikum didapatkan bahwa sampel urin yang diuji oleh kelompok 1 dan 3 hasilnya positif, ini berarti terdapat HCG yang berlebihan pada sampel. Sedangkan pada kelompok 2 dan 4 memiliki nilai negatif, berarti pada urin tidak ditemukan kadar HCG yang berlebihan. Hasil negatif diperlihakan dengan pembentukan satu garis merah, sedangkan hasil positif menunjukkan dua garis merah pada test pack. Hal ini sesuai dengan pustaka yang menyatakan bahwa adanya hormon Gonadotropin korionik (HCG) di dalam plasma ibu dan ekskresinya di urin merupakan dasar bagi uji endokrin untuk kehamilan. Hormon yang berlebihan pada Ibu hamil akan memberikan hasil berupa 2 garis merah, yang merupakan akibat dari kelebihan kompleks antigen-antibodi. Antigen berasal dari hormon HCG pada Ibu hamil, sedangkan antbodi berasal dari antibodi anti HCG pada partikel lateks. Hormon ini dapat ditemukan di dalam cairan tubuh dengan salah satu dari berbagai teknik bioassay atau immunoassay (Bobak, 2003).

Garis merah yang terbentuk pada Teststrip yang dicelupkan pada tempat urine yang telah berisi sampel tersebut terjadi karena adanya pergerakan (migrasi) urine ke atas membawa partikel lateks ke area reaksi yaitu zona test dan kontrol. Bila urine mengandung HCG (sebagai antigen) maka akan bereaksi dengan anti HCG pada partikel lateks membentuk kompleks antigen-antibodi yang terikat pada zona test dan menimbulkan garis pertama yang berwarna merah. Kelebihan kompleks antigen-antibodi (HCG dan anti HCG) akan melanjutkan migrasinya ke zona kontrol dan berikatan dengan anti HCG dari IgG mouse serta membentuk garis kedua yang berwarna merah. Formasi satu dan dua garis visual akan memudahkan pembacaan hasil (Siswosuharjo dan Chakrawati, 2001).

Gambar 2. Cara Kerja test packPenetapan ada tidaknya HCG menggunakan tes peck memiliki kelebihan yaitu dapat digunakan untuk urine yang kadar HCGnya rendah sekitar 25 IU/L, akurasinya cukup tinggi, kekurangan alat ini adalah harganya cukup mahal, sedangkan pada reaksi aglutinasi (reaksi sekunder) mempunyai kelebihan harganya murah, sedangkan kekurangannya hasilnya tidak terlihat jelas kalau kadar HCG terlalu rendah dan harus dilihat dibawah mikroskop (Brown, 1961)Macam-MacamTestKehamilan (Yanti, 2005) :a. Test Latex Aglutination Inhibition (LAI)HCG merupakan suatu hormon dan hormon adalah protein. ApabilaHCG disuntikkan pada kelinci, maka tubuh kelinci akan terangsang untukantibodi yang ditunjukkan terhadap HCG (antiHCG). Antibodi inilah yang dipakai untuk menentukan kehadiran HCG didalam urin, reaksi yang terjadi adalah kompleks HCG-anti HCG. Test LatexAglutination Inhibition mudah dilakukan dan hasil diperoleh dalam 2 menit. Test ini akurat pada 4-10 hari setelah terlambat haid. b. Test Hemaglutination Inhibition (HAI)Test ini lebih sensitif daripada test LAI, tetapi memerlukan waktu 1 sampai 2 jam hasil diperoleh. Akan tetapi, Neocept yang memberi hasil akurat sebelum ataupada haid terlambat. Semua test HAIakurat sekitar4 hari setelah terlambat haid, dipasaran juga dijual e.p.t (early pregnano test= test kehamilan dini). Suatu test HAI yang dapat dilakukan di rumah dan dijual di umum.c. RadioreceptorAssaySalah satu kategori terbaru test kehamilan. Test serum 1 jam ini memerlukan peralatan yang cukup canggih. Radioreceptor Assay biasanya terjadi pada saat terlambat haid (14 hari setelah konsepsi). d. RadioImmunoassayTest ini untuk sub unit beta HCG memakai tanda berlabel radioaktif sehingga test harus dilakukan di Laboratorium. Bergantung pada derajat sensitivitas yang diinginkan, waktu test bervariasi dari 1 sampai 48 jam. Radio Immunoassay merupakantest kehamilan yangpalingsensitif.Saat ini kehamilan dapat didiagnosis 8 hari setelah ovulasi atau 6 hari sebelum haid berikutnya.e. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)merupakantestkehamilanyangpalingpopuler.Testini menggunakanantibodi monoklonal spesifik yang dihasilkan oleh cell linehibrida. Suatuenzimyangbukanmerupakansenyawaradioaktif, mengidentifikasi antigen substansi yang akan diukur. Enzim menginduksi reaksi perubahan warna sederhana. Hasil akhir test dapat dibaca dengan mata telanjang atau spektrofotometer. Tes ini memiliki banyak kelebihan. Antigen enzim berkonjugasi dengan reagen test stabil. Peralatanyang diperlukan sederhana dan tidak adaproduk sampah nuklir.Penetapan HCG dengan teknik imunokromatografi merupakan uji untuk mengetahui kehamilan. Uji ini merupakan suatu metode imunokromatografi dengan menggunakan teststrip yang berisi antibodi monoclonal anti HCG sebagai zona test dan sebagai zona kontrol adalah anti HCG dari IgG mouse. Dasar yang digunakan dalam teknik ini adalah reaksi antigen-antibodi dengan HCG sebagai antigen dengan prinsip kerja kapilaritas (Kreier, 1990).

VI. KESIMPULAN DAN SARANA. KesimpulanKesimpulan yang didapat dari praktikum kali ini adalah :1. Human Chorionic Gonadotropin merupakan hormon yang dapat diindikasikan untuk mengetahui kehamilan pada wanita muda pada umur di bawah tiga bulan.2. Hasil uji HCG positif pada urin wanita hamil ditunjukan dengan terbentuknya dua buah garis berwarna merah pada zona test dan zona kontrol (hasil positif).3. Hasil uji negatif pada wanita yang tidak hamil ditunjukkan oleh terbentuknya satu garis merah pada zona kontrol.

B. SaranSebaiknya untuk penetapan HCG perlu mencoba teknik lain selain teknik imunokromatografi.

DAFTAR REFERENSIAdnyana, IB. P. 2006. Hubungan Jumlah Folikel Antral dengan Respon Ovarium Terhadap Stimulasi Ovulasi. Journal Peny Dalam, Vol.7, No. 3Brown. 1961. Progesteron and Defence Mechanism of Pregnancy. Boston:Little Brown Company.

Bobak, Irene. 2003. Keperawatan Maternitas. EGC, Jakarta.

Katzung, B.G. 1994. Basic and Clinical Pharmacology. Prentice Hall, New York.Kreier, J. and R. J. Mortensen. 1990. Infection, Resistence and Immunity. Harper and Row Publisher, New York.Kresno, S. B. 2000. Imunologi : Diagnosis dan Prosedur Laboratorium Jakarta: Penerbit Fakultas Kedokteran UILenhard, Miriam. 2012. Human Chorionic Gonadotropin And Its Relation To Grade, Stage And Patient Survival In Ovarian Cancer. BMC Cancer 12:2Mansjoer, A. 1999. Kapita Selekta Kedokteran. Jakarta: Media Aesculapius FKUI,Nalbandov, A. V. 1990. Fisiologi Reproduksi pada Mamalia dan Unggas., Jakarta: UI-PressSpeicher, C. E. & J. W. Smith. 1996. Pemilihan Uji Laboratorium Yang Efektif. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.Siswosuharjo., S dan Chakrawati., F. 2010. Panduan Super Lengkap Hamil Sehat. Semarang: PT Niaga Swadaya.Yanti (2005). Hormon HCG dan Uji Kehamilan. http//www.celoteh.com/hormone hcgdanujikehamilan.htm. diakses pada tanggal 8 april 2014