PENGANTAR PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI – STERILISASI

PENGANTAR PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI – STERILISASI

BLOK ENDEMIC DISEASE TA.2013/2014JURUSAN KEDOKTERAN GIGI UNSOED

STERILISASI ALAT DIAGNOSTIK Tujuan : Sterilisasi alat diagnostik menggunakan beberapa metode sterilisasi

Bahan : 1.Larutan Fisiologis (NaCl) dalam tabung reaksi2.Media Nutrient Agar dalam cawan petri

Alat : •Diagnostic set•Cotton buds steril•Micropipette (100-1000 μl) dan blue tip•Drugalsky•vortex mixer•Inkubator•Spidol•Lampu spritus

Prosedur kerja :•Diagnostik set diperlakukan sesuai metode sterilisasi •Cuci air kran•Menggunakan autoclave•Merendam dalam air mendidih•Usap alkohol•Rendam Dettol Solution•Selanjutnya dilakukan swab dengan cotton buds steril pada diagnostic set yang telah disterilisasi, kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi berisi akuadest steril untuk dilakukan pengenceran 10-1. Kemudian dilakukan penanaman secara spread plate sebanyak 0,1 ml suspensi.•Setelah inkubasi selama 3x24 jam suhu 37 OC, jumlah koloni kemudian dihitung dan dibandingkan antar metode sterilisasi.

STERILISASI DENGAN ZAT KIMIA (ANTISEPTIK)

Tujuan : a.Sterilisasi tangan praktikan (probandus) menggunakan zat kimiab.Penghitungan Jumlah koloni bakteri

•Bahan : 1.Air kran & Bahan antiseptik (alkohol, sabun antiseptik, betadine®, hand sanitizer)2.Larutan fisiologis (NaCl)3.Nutrient Agar (NA) dalam cawan petri

• Alat : 1.Cotton buds steril2.Micropipette (100-1000 μl) dan blue tip3.Tabung reaksi4.Drugalsky5.Cawan petri6.vortex mixer7.Inkubator8.Spidol

• PROSEDUR KERJAa. Tiap Grup Praktikum dibagi menjadi 5 kelompok kecil. Tiap kelompok

menyiapkan probandus.b. Kontrol : telapak tangan probandus diswab dengan cotton buds steril,

kemudian cotton buds dimasukkan ke dalam tabung reaksi berisi larutan NaCl untuk dilakukan seri pengenceran (mengurangi kepadatan jumlah mikroorganisme pada suatu sampel) : 10-1, 10-2, 10-

3

Pada seri pengenceran terakhir diambil 0,1 ml suspensi dan dilakukan penanaman secara spread plate pada NA.c. Perlakuan : tangan probandus yang sama disterilkan dengan bahan2

sterilisasi yg telah disiapkan, kemudian diswab dengan cotton buds steril dan cotton buds dimasukkan ke dalam tabung reaksi berisi akuadest steril untuk dilakukan seri pengenceran 10-1 .

Diambil 0,1 ml suspensi dan dilakukan penanaman secara spread plate pada NA.d. Setelah inkubasi selama 3x24 jam suhu 37 OC, kontrol dan perlakuan dihitung jumlah koloninya kemudian dibandingkan.

Penghitungan Jumlah Bakteri• Akan dilakukan penghitungan bakteri secara tidak

langsung (Indirect Count) pengenceran berseri dan sampel yg mengandung m.o ditanam pada media pertumbuhan yg sesuai.

• Teknik Pengambilan Sampel : Swab & Rinse

• Teknik Pengenceran

Cotton bud

suspensi

• Teknik Penanaman pada media pertumbuhana. Pour Plate Method 1 ml suspensi dimasukkan ke dalam cawan petri kosong kemudian NA cair (suhu 45-50 ⁰C) dituangkan dalam cawan petri tsb.

b. Spread Plate Method 0,1 ml suspensi dituangkan ke dalam cawan petri yang berisi NA padat, diratakan dengan drugalsky

Inkubasi dalam suhu 37 ⁰C selama 1-2 x 24 jam

• Teknik Penghitungan jumlah bakteri

- Plate count / viable count : didasarkan pada asumsi bahwa setiap sel m.o hidup dalam suspensi tumbuh mjd satu koloni setelah ditumbuhkan dalam media pertumbuhan & lingkungan yang sesuai.

- Setelah diinkubasi, jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan dari jumlah m.o dalam suspensi tersebut.

- Koloni yang tumbuh tidak selalu berasal dari satu sel m.o karena beberapa m.o tertentu cenderung membentuk kelompok atau berantai shg satuannya Coloni Forming Units (CFU’s) per ml (koloni yang tumbuh berasal dari suspensi yang diperoleh menggunakan pengenceran bertingkat dari sebuah sampel yang ingin diketahui jumlah bakterinya).

• Syarat koloni yang ditentukan untuk dihitung adalah sebagai berikut :- Satu koloni dihitung 1 koloni.- Dua koloni yang bertumpuk dihitung 1 koloni.- Beberapa koloni yang berhubungan dihitung 1 koloni.- Dua koloni yang berhimpitan dan masih dapat dibedakan dihitung 2 koloni.- Koloni yang terlalu besar (lebih besar dari setengah luas cawan) tidah dihitung.- Koloni yang besarnya kurang dari setengah luas cawan dihitung 1 koloni.

Rumus Jumlah Bakteri (CFU/ml)= jumlah perhitungan x 1 x 10 pengenceran

• Contoh :Kontrol (pengenceran 10-3) Perlakuan (pengenceran 10-1)

• misalKeberhasilan Bahan Sterilisasi (%) =

(Juml bakteri kontrol – Juml bakteri perlakuan) x 100% Juml. Bakteri kontrol

TUGAS KELOMPOK PRAKTIKUM

• Membuat Laporan Praktikum (Kelompok) untuk membandingkan efektivitas cara sterilisasi dan bahan sterilisasi yang digunakan dalam praktikum.