pengaruh ekstrak metanol daun sirsak annona …
TRANSCRIPT
1
LAPORAN PENELITIAN
PENGARUH EKSTRAK METANOL DAUN SIRSAK
(ANNONA MURICATA) DALAM MENGHAMBAT
PERTUMBUHAN BAKTERI SALMONELLA TYPHI
SECARA IN VITRO
Oleh :
PUTU NANDA PRAMADYA P.
MADE AGUS HENDRAYANA
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER
UNIVERSITAS UDAYANA FAKULTAS KEDOKTERAN
DENPASAR
2016
2
PENGARUH EKSTRAK METANOL DAUN SIRSAK (ANNONA
MURICATA) DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI
SALMONELLA TYPHI SECARA IN VITRO
Putu Nanda Pramadya P, Made Agus Hendrayana
Fakultas Kedokteran Universitas Udayana
ABSTRAK
Salmonella typhi merupakan penyebab utama penyakit demam typhoid.
Masalah yang kini dihadapi dari berbagai penyakit infeksi adalah resistensi
bakteri terhadap antibiotik. Pengembangan suatu alternatif pengobatan yang tidak
menyebabkan efek samping perlu dilakukan. Salah satu tanaman yang telah lama
dimanfaatkan sebagai obat tradisional diantaranya adalah daun sirsak. Kandungan
flavonoid, steroid, alkaloid, saponin, dan tanninyang dilaporkan pada daun
tanaman sirsak (Annona muricata) berkontribusi sebagai antibakteri. Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui efek antibakteri dengan mengukur zona hambat yang
diinduksi oleh ekstrak metanol daun sirsak pada bakteri Salmonella typhi secara in
vitro. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium dengan
rancangan penelitian posttest only control design dengan metode difusi agar
(Kirby-Bauer). Studi ini menggunakan daun sirsak yang diekstraksi dengan
metode maserasi dengan menggunakan pelarut metanol. Ekstrak metanol daun
sirsak dengan konsentrasi larutan 50mg/mL, 100mg/mL, 200mg/mL dan
400mg/mL yang diuji pada bakteri Salmonella typhi secara in vitro. Uji ekstrak
secara in vitro pada bakteri Salmonella typhi melaporkan hasil bahwa ekstrak
metanol daun sirsak (Annona muricata) tidak dapat menghambat pertumbuhan
bakteri Salmonella typhisecara in vitro. Terdapat beberapa faktor yang tidak dapat
dikontrol yang mempengaruhi hasil dari penelitian ini seperti jenis bakteri,
lingkungan tempat tanaman berasal, dan efektifitas ekstrak. Diperlukan penelitian
lebih lanjut untuk uji antibakteri ekstrak metanol daun sirsak dengan konsentrasi
larutan yang berbeda, untuk mengetahui konsentrasi yang dapat memberikan efek
secara in vitro pada bakteri Salmonella typhi.
Kata Kunci: Salmonella typhi, ekstrak daun sirsak, antibakteri
3
DAFTAR ISI
SAMPUL..................................................................................................... 1
ABSTRAK .................................................................................................. 2
DAFTAR ISI ............................................................................................... 3
DAFTAR TABEL ....................................................................................... 6
DAFTAR GAMBAR .................................................................................. 7
BAB I. PENDAHULUAN
1.1 ..................................................................................................... Latar
Belakang ............................................................................................... 8
1.2 ..................................................................................................... Rumus
anMasalah .......................................................................................... 10
1.3 ..................................................................................................... Tujua
n .......................................................................................................... 11
1.4 ..................................................................................................... Luara
n yang Diharapkan ............................................................................ 11
1.5 ..................................................................................................... Manfa
at ......................................................................................................... 11
BAB II Landasan Teori
2.1 KarakteristikBakteriSalmonella typhi ............................................. 13
2.1.1 Salmonella ........................................................................................ 13
2.1.2 Salmonella typhi ............................................................................... 14
2.1.3 Morfologi ......................................................................................... 14
2.1.4 Patogenesis ....................................................................................... 15
2.1.5GejalaKlinis Demam Tifoid .............................................................. 17
4
2.2 Potensi Daun Sirsak (Annona muricata) ......................................... 19
2.2.1 Tanaman Annona muricata .............................................................. 19
2.2.2 Manfaat Annona muricata ............................................................... 20
2.2.3 Aktifitas Antibakteri Daun Annona muricata .................................. 21
BAB III KERANGKA BERPIKIR DAN KONSEP PENELITIAN
3.1Kerangka Berpikir ............................................................................. 23
3.2Konsep Penelitian ............................................................................... 24
3.3Hipotesis Penelitian ............................................................................ 24
BAB IV METODE PENELITIAN
4.1 Rancangan Penelitian ....................................................................... 25
4.2 Ruang Lingkup Penelitian ................................................................ 27
4.2.1 Lokasi Penelitian .............................................................................. 27
4.2.2 Waktu Penelitian .............................................................................. 27
4.2.3 Disiplin Ilmu Terkait ........................................................................ 27
4.3 Rancangan Penelitian ....................................................................... 27
4.4 Sampel Penelitian .............................................................................. 28
4.5 Pengulangan Sampel ........................................................................ 28
4.6 Kriteria Sampel ................................................................................ 28
4.6.1 Kriteria Inklusi ................................................................................ 28
4.6.2 Kriteria Ekslusi ................................................................................ 28
4.7 Identifikasi Variabel ......................................................................... 29
4.8 Definisi Operasional Variabel .......................................................... 29
4.9 Alat dan Bahan ................................................................................. 31
5
4.10 Protokol Penelitian .......................................................................... 31
4.10.1 Pembuatan Simplisia Daun Annona Muricata ............................... 31
4.10.2 Pembuatan Ekstrak ......................................................................... 32
4.10.3 Pembuatan Media ........................................................................... 33
4.10.4 Pembuatan Larutan Mc. Farland .................................................. 33
4.10.5 Pembuatan Suspensi Bakteri ......................................................... 33
4.10.6 Inokulasi Bakteri pada Media Agar ............................................... 34
4.10.7 Pembuatan larutan Kontrol Negatif dan Positif ............................. 34
4.10.8 Penyiapan Larutan Uji ................................................................... 34
4.10.9 Pengujian Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Agar ....... 34
4.7.10 Pengamatan Data Pengukuran ....................................................... 35
4.11 Analisi Data .................................................................................... 35
4.12 Jadwal Penelitian ........................................................................... 35
BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN
5.1 Hasil Ekstraksi Daun Sirsak ........................................................... 36
5.2 Hasil Uji Fitokimia ........................................................................... 36
5.3 Hasil Uji Antibakteri ........................................................................ 43
5.4 Pembahasan ...................................................................................... 45
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN
6.1 Simpulan ........................................................................................... 49
6.2 Saran ................................................................................................. 50
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
6
DAFTAR TABEL
Tabel 5.1 Hasil Uji Fitokimia Alkaloid ........................................................ 39
Tabel 5.2 Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Metanol Daun Sirsak ...................... 42
Tabel 5.3 Data Hasil Pengukuran ................................................................ 45
7
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1Salmonella typhi pada pengecatan Gram stain .......................... 15
Gambar 2.2 Struktur Bakteri Salmonella typhi ............................................ 15
Gambar 2.3 Skema PatogenesisSalmonella typhi ......................................... 18
Gambar 2.4 Tanaman Annona muricata ....................................................... 20
Gambar 3.1 Skema Konsep Penelitian ......................................................... 24
Gambar 4.1 Skema Rancangan Penelitian ................................................... 25
Gambar 5.1 Larutan Uji ............................................................................... 37
Gambar 5.2 Hasil Uji Flavonoid .................................................................. 37
Gambar 5.3 Hasil Uji Saponin ..................................................................... 38
Gambar 5.4 Hasil Uji Fenol ......................................................................... 39
Gambar 5.5 Hasil Uji Bouchardat ................................................................ 40
Gambar 5.6 Hasil Uji Wagner ...................................................................... 40
Gambar 5.7 Hasil Uji Mayer ........................................................................ 40
Gambar 5.8 Larutan Blanko ......................................................................... 40
Gambar 5.9 Hasil Uji Steroid ....................................................................... 41
Gambar 5.10 Hasil Uji Triterpenoid ............................................................ 41
Gambar 5.11 Hasil Uji Tannin ..................................................................... 41
Gambar 5.12 Hasil Uji Glikosida ................................................................. 42
Gambar 5.13 Hasil Uji Ekstrak Metanol Daun Sirsak ................................. 44
8
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Demam typhoid merupakan salah satu penyakit infeksi pada saluran
pencernaan yang menjadi sorotan seluruh masyarakat dunia. Demam
typhoidsendiri diakibatkan oleh bakteri Salmonella khususnya serotipe Salmonella
typhi atau Salmonella paratyphi. Seperti penyakit menular lainnya, demam
typhoid banyak ditemukan di negara berkembang, dimana kebersihan pribadi dan
sanitasi lingkungannya masih tergolong kurang baik. Menurut catatan CDC,
estimasi demam typhoiddi Amerika serikat adalah 5.700 kasus tiap tahunnya,
dimana lebih banyak ditemukan pada wisatawan. Selain itu, estimasi sekitar 21
juta orang di seluruh dunia terinfeksi demam typhoid dan 200.000 dari yang
terinfeksi meninggal akibat infeksi ini(CDC,2014). Prevalensi untuk negara-
negara kawasan ASIA diketahui sekitar 900/10.000 penduduk per tahun.
Indonesia diketahui sebagai negara endemik demam typhoid. Diperkirakan sekitar
800/100.000 penduduk menderita demam typhoidsetiap tahunnya
(Widoyono,2011).
Permasalahan dalam penanggulangan penyakit infeksi bakteri seperti
demam typhoid yang terjadi hampir diseluruh belahan dunia saat ini adalah
resistensi atau ketidakpekaan bakteri terhadap antibiotik lapis pertama (first-line
9
drug) yang digunakan sebagai terapi.Penggunaan antibiotik yang tidak rasional di
kalangan masyarakat semakin menambah kasus resistensi antibiotik pada bakteri-
bakteri enterik salah satunya pada bakteri Salmonella typhi(Kavita N, 2010).
Tingginya angka morbiditas dan mortalitas karena demam
typhoidterutama pada negara berkembang, menggerakkan berbagai pihak
berupaya untuk menyelesaikan masalah ini. Berkembangnya paradigma dalam
bidang kesehatan, untuk menggunakan ramuan alami dan obat-obat tradisional
sebagai terapi penyakit, sangat membuka peluang untuk meneliti dan
mengembangkan tanaman obat sebagai cadangan antibiotik di masa depan. Salah
satu tanaman yang sering digunakan untuk obat tradisional adalah sirsak (Annona
muricata L). Bagian tanaman sirsak yang dilaporkan mengandung efek antibakteri
adalah bagian daunnya (Widoyono,2011)(Kavita N, 2010).
Penelitian terdahulu telah melakukan uji daya hambat ekstrak metanol
daun sirsak pada berbagai jenis bakteri gram negatif dan gram positif.Hasil
penelitian dari Ginda Haro, et al, menyatakan bahwa ekstrak metanol dari daun
sirsak pada konsentrasi 150 mg/ml dapat menghambat pertumbuhan dari
Staphylococcus aureus dengan diameter zona inhibisi sebesar 14.1 mm dan pada
konsentrasi 250 mg/ml mampu menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia
coli dengan zona inhibisi sebesar 14.5 mm. Minimum Inhibition Concentration
(MIC) dari ekstrak metanol daun sirsak yakni 5 mg/ml dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan zona inhibisi sebesar 8.6 mm
dan 8.0 mm pada bakteri Escherichia coli. Pada penelitian ini juga memperoleh
hasil bahwa ekstrak metanol memiliki kekuatan inhibisi lebih kuat apabila
dibandingkan dengan ekstrak kloroform (Ginda Haro et al, 2011)
10
Escherichia coli mempunyai beberapa kesamaan karakteristik dengan
Salmonella typhi. Beberapa kesamaan karakteristik dari kedua bakteri ini
diantaranya adalah berasal dari golongan yang sama yakni gram negatif,
sama-sama berbentuk batang, tidak berspora, dinding sel berupa
peptidoglikan dengan komponen membran luar bakteri yang tersusun atas
lipopolisakarida, serta merupakan jenis bakteri enterikyang menginfeksi
usus manusia.
Melihat adanya kesamaan karakteristik antara bakteri Escherichia
coli dengan Salmonella typhi,tidak tersedianya data ilmiah terkait penelitian
ekstrak daun sirsak pada bakteri gram negatif Salmonella typhiserta adanya
paradigma masyarakat yang mengembangkan sumber alam sebagai terapi
cadangan di masa depan, membuat peneliti tertarik untuk melakukan
penelitian pendahuluanuji daya hambat ekstrak daun sirsak (Annona muricata)
dalam menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella typhi secara in vitro.
Diharapkan nantinya hasil penelitian pendahuluan yang dilakukan dapat
menjadi dasar teori dari penelitian selanjutnya mengenai potensi antibakteri
untuk terapi pada infeksi bakteri Salmonella typhi.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang diatas, maka dapat dirumuskan masalah yaitu :
1. Apakah ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata) dapat menghambat
aktivitas dari bakteri Salmonella typhi secara in vitro ?
11
2. Berapakah diameter zona hambat yang dihasilkan dari ekstrak metanol daun
sirsak (Annona muricata) terhadap pertumbuhan bakteri Salmonella typhisecara in
vitro?
3. Berapakah konsentrasi optimal yang menunjukkan aktivitas antibakteri ekstrak
metanol daun sirsak (Annona muricata) terhadap bakteri Salmonella typhi secara
in vitro?
1.3 Tujuan
1.3.1 Tujuan umum
Untuk mengetahui efek antibakteri ekstrak metanol daun sirsak (Annona
muricata) terhadap pertumbuhan bakteri Salmonella typhi secara in vitro.
1.3.2 Tujuan khusus
1. Untuk mengetahui diameter zona hambat yang dihasilkan dari ekstrak metanol
daun sirsak (Annona muricata) terhadap pertumbuhan bakteri Salmonella
typhisecara in vitro.
2.Untuk mengetahui konsentrasi optimal yang menunjukkan aktivitas antibakteri
ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata)terhadap bakteri Salmonella
typhisecara in vitro.
1.4 Luaran yang Diharapkan
Luaran yang diharapkan adalah terkumpulnya data ilmiah aktivitas antibakteri
ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata) terhadap pertumbuhan bakteri
Salmonella typhisecara in vitro.
1.5 Manfaat
12
1.5.1 Manfaat bagi penulis
Menambah wawasan penulis tentang efek aktivitas antibakteri ekstrak
metanoldaun sirsak (Annona muricata) terhadap bakteri Salmonella typhi.
1.5.2 Manfaat bagi dunia pendidikan
Hasil penelitian dapat menambah ilmu pengetahuan khususnya dalam bidang
mikrobiologi alternatif dan dapat dijadikan acuan dalam penelitian selanjutnya.
1.5.3 Manfaat bagi masyarakat
Hasil penelitian diharapkan dapat digunakan sebagai alternatif alami antibakteri
Salmonella typhi.
13
BAB II
LANDASAN TEORI
2.1 Karakteristik Bakteri Salmonella typhi
2.1.1 Salmonella
Salmonella merupakan bakteri batang gram-negatif, tidak mempunyai
kapsul, berflagela dan tidak membentuk spora. Karena habitat aslinya yang berada
di dalam usus manusia maupun binatang, bakteri ini dikelompokkan ke dalam
enterobacteriaceae. Walaupun begitu banyak serotip dari Salmonella, namun telah
disepakati bahwa hanya terdapat dua spesies, yakni S. bongori dan S. enterica
dengan enam subspesies. Klasifikasi Salmonella terbentuk berdasarkan dasar
epidemiologi, jenis inang, reaksi biokimia, dan struktur antigen O, H, V ataupun
K. Antigen yang paling umum digunakan untuk Salmonella adalah antigen O dan
H(Widoyono,2011).
Antigen O, berasal dari bahasa Jerman (Ohne), merupakan susunan
senyawa lipopolisakarida (LPS). LPS mempunyai tiga region. Region I
merupakan antigen O-spesifik atau antigen dinding sel. Region II merupakan
bagian yang melekat pada antigen O, merupakan core polysaccharide yang
konstan pada genus tertentu. Region III adalah lipid A yang melekat pada region
II dengan ikatan dari 2-keto-3-deoksioktonat (KDO). Antigen H merupakan
antigen yang terdapat pada flagela dari bakteri ini, yang disebut juga flagelin.
Antigen H adalah protein yang dapat dihilangkan dengan pemanasan atau dengan
menggunakan alkohol. Antigen K berasal dari bahasa Jerman, kapsel. Antigen K
merupakan antigen kapsul polisakarida dari bakteri enteric (Widoyono,2011)
(Mandal, B.K et al, 2008).
14
2.1.2 Salmonella typhi
Penamaan yang umum digunakan, seperti Salmonella typhi sebenarnya
tidak benar. Taksonomi S. typhi adalah sebagai berikut.
Phylum : Eubacteria
Class : Prateobacteria
Ordo : Eubacteriales
Family : Enterobacteriaceae
Genus : Salmonella
Species : Salmonella enterica
Subspesies :enteric (I)
Serotipe : typhi
Karena itu, penamaan yang benar adalah S. enterica subgrup enteric serotip typhi,
ataupun sering dipersingkat dengan S. enteric I ser. typhi. Namun penamaan
Salmonella typhi telah umum digunakan karena lebih sederhana (Microbes.edu,
2014).
2.1.3 Morfologi
Salmonella typhi merupakan bakteri batang, gram negatif yang tidak
membentuk spora. Bakteri ini juga bersifat fakultatif, dan sering disebut sebagai
facultative intra-cellular parasites karena mampu hidup baik di dalam maupun
diluar sel inangnya. Dinding selnya terdiri atas murein, lipoprotein, fosfolipid,
protein, dan lipopolisakarida (LPS) dan tersusun sebagai lapisan-lapisan. Ukuran
panjangnya bervariasi, dan sebagian besar memiliki peritrichous flagella sehingga
bersifat motil (bisa bergerak)(Widoyono,2011)(Mandal, B.K et al, 2008).
15
2.1.4 Patogenesis
Bakteri Salmonella typhi masuk ke system pencernaan manusia melalui
makanan atau minuman yang sudah tercemar. Salmonella typhi masuk melewati
Gambar 2.1: Salmonella typhi pada pewarnaan
Gram Stain. Memiliki bentuk menyerupai
batang, memiliki peritrichous flagella sehingga
bersifat motil.
Gambar 2.2Struktur bakteri Salmonella typhi yang merupakan kelompok bakteri gram
negatif berflagel.
16
mucosa usus halus dan usus besar, kemudian menetap pada bagian intraseluler
tempat mereka berproliferasi (memperbanyak diri). Setelah melewati epitel,
bakteri akan memasuki lamina propria. Bakteri dapat juga melakukan penetrasi
melalui intercellular junction. Serta menyebabkan munculnya
ulserasi(pembengkakan) pada folikel limfoid. Pada awalnya S. typhi berproliferasi
di Payer’s patch dari usus halus, kemudian sel mengalami destruksi sehingga
bakteri akan dapat menyebar ke hati, limpa, dan system retikuloendotelial. Dalam
satu sampai tiga minggu bakteri akan menyebar ke organ tersebut. Bakteri ini
akan menginfeksi empedu, kemudian jaringan limfoid dari usus halus,
terutamanya ileum. Invasi bakteri ke mukosa akan memicu sel epitel untuk
menghasilkan berbagai sitokin proinflamasi seperti IL-1, IL-6, IL-8, TNF-β, INF,
GM-CSF.
Infeksi dari Salmonella typhi baik pada saluran cerna maupun organ lain,
akan menyebabkan reaksi inflamasi. Reaksi inflamasi ini akan menghasilkan
pirogen endogen sehingga set point tubuh (suhu tubuh) meningkat, dan suhu
tubuh pun meningkat. Rasa tidak nyaman pada bagian perut juga merupakan hasil
reaksi inflamasi pada saluran cerna yang menghasilkan bradikinin. Adanya
bradikinin akan menimbulkan sensasi nyeri. Sedangkan endotoksin yang
dihasilkan S. typhi dapat menyebabkan gangguan kardiovaskular, gangguan
neuropsikiatrik, dan gangguan pernafasan (Sarman,2001)(WHO,2003).
17
2.1.5 Gejala klinis demam typhoid
Gejala klinis demam typhoid bervariasi dari asimtomatik, ringan, berat,
bahkan sampai menyebabkan kematian. Gejala klinis demam typhoid yang
simptomatik biasanya ditandai dengan demam, nyeri abdomen, mual, muntah,
malaise, dan diare yang muncul akibat infeksi bakteri S.typhi. Hal yang
membedakan demam typhoid dengan diagnosis penyakit lainnya adalah pola
demam yang bersifat stepwise atau anak tangga. Demam diawali dengan suhu
yang lebih rendah, kemudian meningkat dihari berikutnya. Pola demam yang
sedemikian rupa inilah yang dapat menyebabkan hilangnya kesadaran pada
penderita. Masa inkubasi S. typhi berkisar 3-21 hari dimana durasinya sesuai
dengan virulensi, serta status imunitas dari penderita. Gejala klinis yang umum
adalah demam yang panjang (38,8˚C-40,5˚C). Demam ini dapat berkelanjutan
selama empat minggu jika tidak segera ditangani. Keluhan nyeri abdomen hanya
berkisar 30-40% dari penderita yang menderita demam typhoid. Jika dilakukan
pemeriksaan fisik, hanya dapat ditemukan suhu tubuh yang meningkat
(Widoyono,2011)(Mandal,B.K et al,2008)(WHO,2003).
18
Gambar 2.3 : Skema patogenesis untuk Salmonella typhi.
Setelah bakteri menginfeksi tubuh manusia, S.typhiakan menghasilkan
endotoksin yang dapat mengganggu system kardiovaskuler, neuropsikiatrik dan
pernafasan. Selain itu S.typhi akan menimbulkan reaksi inflamasi terutama pada
saluran pencernaan, hepar dan limpa. S.typhi juga akan menghasilkan pirogen
endogen, sehingga menimbulkan peningkatan suhu tubuh sebagai manifestasi
klinisnya.
Gangguan
kardiovaskuler,
neuropsikiatrik,
pernafasan
Demam
Hepatomegali
Spleenomegali
Perasaan
tidak enak
diperut
Pirogen
endogen
Hepar dan limpa Saluran cerna
Endoktoksin Reaksi inflamasi
Infeksi S.typhi
19
2.2 Potensi Daun Sirsak (Annona Muricata L)
2.2.1 Tanaman Annona muricata
Annona muricata atau di Indonesia yang lebih dikenal dengan buah sirsak
merupakan tanaman dataran rendah tropis yang berasal dari keluarga Annonaceae.
Nama lain dari buah ini adalah graviola and guanábana. Buah sirsak berasal dari
Amerika Tengah dan Amerika Selatan, serta kepulauan Caribia. Kini buah sirsak
tersebar di daerah-daerah tropis di seluruh dunia termasuk Florida Selatan dan
ASIA Tenggara pada daratan 1150 meter dari permukaan laut. Berikut adalah
taksonomi dari tanaman sirsak.
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Sub Divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Bangsa : Ranunculales
Suku : Annonaceae
Marga : Annona
Jenis : Annona muricata (Sri Sugati, 1991)
Tanaman Annona muricata rata-rata tumbuh sampai mencapai tinggi 8
meter. Daunnya licin, berbentuk oval. Bunga dan buahnya cenderung berbentuk
bulat dan biasanya muncul ada musim-musim tertentu saja. Buahnya berbentuk
oval ireguler, berukuran 15-30 cm. Daging buah berwarna putih, berserabut dan
berisi biji berwarna hitam. Jus sirsak diketahui mengandung 19-23% gula dan
20
1.10-1.71% protein total. (Onyechi,2012) Varietas pada Annona muricata sendiri
terdiri dari banyak jenis.
2.2.2 Manfaat Annona muricata
Sejak jaman dahulu, tanaman Annona muricata digunakan dalam
kehidupan sehari-hari. Biasanya Annona muricata digunakan sebagai bahan untuk
dikonsumsi, baik secara langsung, ataupun diolah terlebih dahulu. Buah, biji,
daun, kulit dan akar digunakan sebagai terapi untuk parasit pada sistem
pencernaan, batuk (termasuk asma dan bronkitis), penyakit pada hati, inflamasi,
diabetes dan hipertensi. Biji Annona muricata digunakan sebagai insektisida,
sedangkan daunnya biasa digunakan untuk membasmi kutu rambut dan kutubusuk
(bedbugs) (Susi et al, 2014).
Buah sirsak dalam pengobatan alami digunakan untuk mengobati penyakit
atritis, neuralgia, diare, disentri, demam, malaria, penyakit akibat parasite,
rematik, kemerahan pada kulit dan dikonsumsi juga pada ibu menyusui untuk
meningkatkan produksi ASI. Daunnya digunakan untuk terapi pada kista,
Gambar2.4 :TanamanAnnona muricata tumbuh sampai mencapai tinggi 8 meter.
Daunnya licin, berbentuk oval. Bunga dan buahnya cenderung berbentuk bulat dan
biasanya muncul ada musim-musim tertentu saja.
21
diabetes, sakit kepala dan insomnia. Biji sirsak yang dihancurkan dipercaya
memiliki efek antihelmintik yang dapat melawan cacing eksternal dan internal
manusia, serta parasite lainnya. Di negara-negara tropis Afrika, tanaman sirsak
digunakan sebagai astringent (untuk menghentikan perdarahan), insektisida dan
agen piscicide, serta untuk mengatasi batuk, nyeri, penyakit kulit. Di India, buah
dan bunga digunakan untuk mengatasi radang selaput lender hidung (catarrh),
sedangkan akar batang dan daunnya dipercaya memiliki aktifitas anti radang dan
antilemitik. Di Amerika Selatan dan Negara tropis Afrika, termasuk Nigeria, A.
muricata digunakan sebagai echtomedicine untuk melawan tumor dan kanker.
Selain digunakan sebagai anti inflamasi, hipoglikemi agen, sedative, relaksasi otot
polos, efek hipotensif dan antipasmodik (Soheil,2015).
2.2.3 Aktifitas antibakteri daun Annona muricata
Analisis fitokimia mengungkapkan adanya metabolit skunder seperti
tannin, steroid, cardiac glycoside; alkaloid, saponin dan flavonoidyang membuat
ekstrak daun sirsak memiliki aktivitas antibakteri. Komparasi aktivitas antibakteri
antara ekstrak metanol daun sirsak dengan antibiotik standar yakni streptomicyn,
memperlihatkan hasil bahwa ekstrak metanol memiliki signifikansi (P<0.05)
efikasi sebagai anti bakteri dan dapat disandingkan dengan antibiotik standar
seperti streptomicyn(Solomon et al,2014)
Hasil penelitian yang dilakukan Ginda Haro dkk, di Medan Sumatera
Utara juga menyatakan bahwa ekstrak metanoldaun A.muricata memiliki efek
antibakteri yang cukup baik pada percobaan yang menggunakan bakteri
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli apabila dibandingkan dengan
22
penggunaan ekstrak dengan chloroform. Hasil dari uji aktivitas anti bakteri yang
dilakukan oleh Ginda Haro dkk, memperlihatkan konsentrasi 150 mg/ml ekstrak
metanol daun sirsak mampu menginhibisi pertumbuhan dari Staphylococcus
aureus dengan diameter zona inhibisi 14.1 mm dan pada konsentrasi 250 mg/ml
mampu menginhibisi pertumbuhan Escherichia coli dengan diameter zona inhibisi
14.5 mm. Pada konsentrasi minimum inhibisi, ekstrak metanol 5mg/ml mampu
menginhibisi pertumbuhan dari Staphylococcus aureus dengan diameter zona
inhibisi 8.6 mm dan 8.0 mm untuk E.coli.
Diameter zona inhibisi pada ekstrak metanol terbukti jauh lebih besar
karena kemampuan metanol yang lebih mudah melarutkan bahan bioaktif yang
ada pada daun. Senyawa dengan diameter zona inhibisi 14 sampai dengan 16 mm
dinyatakan sebagai hasil yang memuaskan.
Diameter zona inhibisi ekstrak metanol daun sirsak sangat dianjurkan,
mengingat ekstrak metanol daun sirsak mengandung tannin dan flavonoids.
Mekanisme tannin pada aktifitas anti bakteri pada konsentrasi rendah dapat
merusak membran sitoplasma dan menyebabkan pecahnya sel, Pada konsentrasi
yang tinggi tannin akan berkoagulasi dengan protein seluler. Sedangkan flavanoid
dapat merusak permeabilitas dari dinding sel antibakteri(Ginda Haro et al, 2011).
23
BAB III
KERANGKA BERPIKIR, KONSEP PENELITIAN DAN
HIPOTESIS PENELITIAN
3.1 Kerangka Berpikir
Demam Typhoid merupakan salah satu penyakit infeksi endemik yang
berada di negara-negara berkembang sepeti Indonesia. Demam Typhoid
disebabkan oleh bakteri Salmonella Typhi yang menular secara fecal-oral akibat
tingkat kebersihan dan sanitasi yang buruk. Berkembangnya paradigma dalam
bidang kesehatan terkait dengan terapi pengobatan, yaitu penggunaan ramuan
alami dan obat-obat tradisional, sangat membuka peluang untuk meneliti dan
mengembangkan tanaman obat untuk terapi komplementer.Salah satu tanaman
yang sering digunakan untuk obat tradisional adalah sirsak (Annona muricata L).
Bagian tanaman sirsak yang dilaporkan mengandung efek anti bakteri adalah
bagian daunnya. Penelitian ini berfokus pada penggunaan ekstrak metanol
daunAnnona Muricatadengan berbagai konsentrasiuntuk melihat efektifitasnya
terhadap pertumbuhan koloni bakteriSalmonella typhi. Annona Muricata dipilih
karena beberapa studi sebelumnya menyebutkan terdapat efek antibakteri pada
tumbuhan tersebut. Penelitian ini menggunakan uji cakram difusi (diffusion disc
method) dengan mengukur rerata diameter zona hambat yang dihasilkan pada
berbagai konsentrasi ekstrak serta membandingkannya untuk menilai efek optimal
terkait perananannya sebagai antibakteri.
24
3.2 Konsep Penelitian
Gambar 3.1 Skema Konsep Penelitian
3.3 Hipotesis Penelitian
Berdasarkan landasan teori yang ada dan sehubungan dengan
permasalahan, maka dapat dirumuskan hipotesis sebagai berikut:
a) Ho= Ekstrak metanol Annona Muricatatidak dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Salmonella typhi secara in vitro (P > 0,01)
b) Ha = Ekstrak metanol Annona Muricatadapat menghambat pertumbuhan
bakteri Salmonella typhi secara in vitro (P < 0,01)
25
BAB IV
METODE PENELITIAN
4.1 Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode True Experimental Post Test Only
Group Design untuk mengetahui pengaruh ekstrak metanol daun Annona muricata
dalam menghambat pertumbuhan Salmonella typhi secara in vitro. Sampel dibagi
dalam 2 kelompok yakni kelompok kontrol (K) dan kelompok perlakuan (P).
Kelompok kontrol merupakan kontrol negatif dengan (K1) dan kontrol positif
dengan (K2) sedangkan kelompok perlakuan dibagi atas 4 kelompok berdasarkan
dosis penggunaan ekstrak metanol daun Annona muricata pada masing-masing
isolat pada biakan Salmonella typhi dengan konsentrasi 50 mg/mL(P1), 100
mg/mL (P2), 200 mg/mL (P3), dan 400mg/mL(P4).
26
Gambar 4.1 Skema Rancangan Penelitian
Keterangan :
K1 = Kelompok kontrol Salmonella typhi negatif (metanol)
K2 = Kelompok kontrol Salmonella typhipositif (ciprofloxacin)
P1 = Kelompok intervensi 1 Salmonella typhi, ekstrak metanol daun Annona
muricata 50 mg/mL
P2 = Kelompok intervensi 2 Salmonella typhi, ekstrak metanol daun Annona
muricata 100 mg/mL
P3 = Kelompok intervensi 3 Salmonella typhi, ekstrak metanol daun Annona
muricata 200 mg/mL
P4 = Kelompok intervensi 4 Salmonella typhi, ekstrak metanol daun Annona
muricata 400 mg/mL
Q1 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompok kontrol negatif setelah
perlakuan
Q2 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompokP1 setelah perlakuan
Q3 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompok P2 setelah perlakuan
Q4 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompok P3 setelah perlakuan
Q5 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompok P4 setelah perlakuan
Populasi = Isolat bakteri Salmonella typhi
Sampel = Isolat bakteri Salmonella typhi yang berasal dari Instalasi
Laboratorium Mikrobiologi Rumah Sakit Umum Pusat Sanglah
27
4.2 Ruang Lingkup Penelitian
4.2.1 Lokasi penelitian
a) Pengeringan dan pembuatan ekstrak metanol daun Annona muricata dilakukan
di Lab. Pasca Sarjana Universitas Udayana.
b) Pengambilansampel isolat bakteri Salmonella typhi dilakukan di Instalasi
Laboratorium Mikrobiologi Rumah Sakit Umum Pusat Sanglah.
c) Persiapan, perlakuan, dan uji zona hambat pada sampel di Laboratorium
Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Udayana, Jalan PB. Sudirman,
Denpasar.
4.2.2 Waktu penelitian
Penelitian ini dimulai dari perancangan tema, penyusunan kerangka,
pengumpulan, pengolahan dan analisis data, pelaksanaan eksperimen, serta
pembuatan laporan hasil penelitian. Penelitian ditargetkan dilaksanakan pada
Maret 2016 – Januari 2017.
4.2.3 Disiplin ilmu terkait
Penelitian ini merupakan penelitian multidisiplin yang menggabungkan
aspek farmakologi dan mikrobiologi.
4.3 Rancangan Penelitian
Jenis penelitian ini adalah penelitian True Experimental Posttest only
Control Group, sehingga dapat mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak
metanol daun Annona muricata dalam menghambat pertumbuhan Salmonella
typhi yang dinilai berdasarkan parameter diameter zona hambat.
28
4.4 Sampel Penelitian
1. Sampel bakteri yang digunakan dalam penelitian adalah isolat bakteri
Salmonella typhi yang diperoleh dari Instalasi Laboratorium Mikrobiologi Rumah
Sakit Umum Pusat Sanglah.
2. Sampel ekstrak daun Annona muricata yang digunakan, diperoleh dari tanaman
Annona muricatayang banyak terdapat di Kabupaten Klungkung, provinsi Bali.
4.5 Pengulangan Sampel
Sesuai dengan rancangan penelitian, maka sampel dialokasikan ke dalam 4
kelompok perlakuan (P1, P2, P3, P4), dan 2 kelompok kontrol (K1, K2). Untuk
mengetahui jumlah ulangan (replikasi) pada tiap kelompok, dipergunakan rumus
Federer: . Karena jumlah perlakuan (p) adalah 6, maka
jumlah pengulangan minimal yang dilakukan pada masing-masing jenis perlakuan
dan kontrol adalah sebanyak 4 kali yang kemudian akan dirata-ratakan.
4.6Kriteria Sampel
4.6.1 Kriteria inklusi
Koloni bakteri yang digunakan tumbuh secara merata pada lempeng agar.
4.6.2 Kriteria eksklusi
Koloni bakteri tidak tumbuh merata atau terkontaminasi pada lempeng agar.
29
4.7 Identifikasi Variabel
Adapun variabel yang akan dianalisis pada penelitian ini adalah:
a. Variabel Bebas : - Ekstrak daun sirsak (Annona muricata)
b. Variabel Tergantung : - Diameter zona hambat
c. Variabel Kendali : - Waktu inkubasi
- Suhu inkubasi
- Media kultur bakteri
- Konsentrasi ekstrak
4.8 Definisi Operasional Variabel
No Variabel Definisi Skala
1 Ekstrak daun
Annona
muricata
Ekstrak daun Annona muricata adalah
ekstrak zat aktif yang diperoleh dengan
melakukan ekstraksi dari daun tanaman
Annona muricata dengan menggunakan
pelarut metanol. Konsentrasi ekstrak
yang digunakan pada penelitian ini
adalah 50mg/mL, 100mg/mL,
200mg/mL, dan 400mg/mL.
Numerik
2 Diameter zona
hambat
Diameter zona hambat adalah diameter
area bening pada kultur bakteri yang
tidak menunjukkan adanya aktivitas
pertumbuhan bakteri akibat dari
pemberian zat antibakteri.
Pengukuranakandilakukandengan
Numerik
30
menggunakan jangka sorong dengan
satuan milimeter.
3 Waktu
inkubasi
Waktu yang digunakan dalam
menumbuhkan kultur bakteri dan
menguji aktivitas zat antibakteri yang
diberikan pada kultur bakteri Salmonella
typhi dalam inkubator. Waktu inkubasi
yang digunakan adalah 18-24 jam.
Numerik
4 Suhu inkubasi Suhu yang digunakan dan diatur pada
inkubator dalam menumbuhkan dan
menguji aktivitas zat antibakteri yang
diberikan pada kultur bakteri Salmonella
typhi. Suhu inkubasi yang digunakan
adalah 37o C.
Numerik
5
Media Kultur
Bakteri
Media kultur bakteri yang digunakan
dalam penelitian ini adalah media agar
Mueller-Hinton. AgarMueller-Hinton
(MH)ditimbang seberat 3,4 gram,
kemudian dilarutkan dengan 100 ml
akuades serta dimasukkan kedalam
autoclave dengan suhu 1210 C selama
15 menit. Selanjutnya, MH tersebut
ditaruh di water bath hingga suhu turun
menjadi ± 500 C. MH dituangkan
31
kedalam cawan petri serta diinkubasi
dengan suhu 370
C selama 24 jam untuk
mengetahui sterilitas media. Bila media
tampak jernih (steril)/ tidak ada koloni
bakteri maka media bisa digunakan
sebagai penanaman bakteri Salmonella
typhi.
4.9 Alat dan Bahan Penelitian
a. Alat-alat yang dibutuhkan: 1) Tabung reaksi dan rak;2) Ose; 3) Lampu
spiritus; 4) Inkubator; 5) Kapas lidi steril; 6) Pinset/penjepit; 6)Jangka
sorong; 7) Cawan petri; 8) Erlemeyer; 9) Kaca preparat; 10) Pipet; 11)
Autoclave ;12) Disk kosong
b. Bahan-bahan yang dibutuhkan: 1) Agar Mueller Hinton (MH); 2) Ekstrak
metanol daun sirsak 3) Larutan NaCl (0,9%); 4) Larutan 0,5 Mc Farland;
5) Linezolid 30g; 6)Bakteri Salmonella typhi 7) Metanol 8) Akuades 9)
Ciprofloxacin
4.10 Protokol Penelitian
4.10.1 Pembuatan simplisia daun Annona muricata
Buat bubuk sampel dengan cara: (1) Cuci bersih daun Annona muricata
yang berusia matang (tidak muda, tidak tua) (2) Potong kecil-kecil, (3) Keringkan
potongan daun dengan diangin-anginkan dalam ruangan (tidak terpapar sinar
32
matahari, (4) Hancurkan menggunakan blender hingga menjadi bubuk, lalu ayak,
(5) Simpan serbuk dalam toples yang tertutup rapat dan kering.
4.10.2 Pembuatan ekstrak
1. Daun sirsak yang sudah dibersihkan dengan air kemudian dipotong-
potong kecil menggunakan pisau, kemudian dikering-anginkan tanpa
sinar matahari atau dengan menggunakan oven dengan suhu 400C.
Setelah kering, daun sirsak dihaluskan dengan blender dan diayak
untuk memisahkan bagian yang masih kasar dengan yang sudah
halus.
2. Setelah itu, 500 gram serbuk simplisia daun sirsak direndam dengan
larutan metanol sebanyak 2 liter di dalam sebuah toples kaca, lalu
ditutup.Biarkan selama 2 hari sambil sesekali diaduk.
3. Setelah 2 hari, sampel yang direndam tersebut disaring dengan kertas
saring sehingga menghasilkan filtrat 1 dan ampas 1. Setelah itu filtrat
(lapisan atas yang berupa campuran metanol dengan zat aktif)
diambil dan residu dimaserasi kembali selama semalam. Selanjutnya
filtrat diambil lagi dan residu dimaserasi kembali sampai empat kali
pengulangan.
4. Setelah semua filtrat ekstrak daun sirsak diperoleh, lalu difiltrasi
menggunakan kertas Whatmann 0,1 dan evaporasi menggunakan
rotary evaporator pada suhu 400 C sehinga diperoleh ekstrak kental.
5. Ekstrak ditimbang dan disimpan dalam wadah gelas atau botol yang
tertutup sebelum digunakan untuk pengujian dengan berat 0.05 gr,
33
0.1 gr, 0.2 gr, dan 0.4 gr. Tidak lupa untuk memberikan label pada
botol.
6.Lalu bila akan digunakan, ekstrak metanol daun sirsak yang sudah
ditimbang diencerkan dengan menambahkan larutan metanol lalu
aduk hingga ekstrak larut dalam botol.
4.10.3 Pembuatan media Mueller-Hinton
Persiapan diawali dengan menimbang Mueller-Hinton(MH) seberat 3,4
gram yang kemudian dilarutkan dengan 100 ml akuades serta dimasukkan
kedalam autoclave dengan suhu 1210 C selama 15 menit. Selanjutnya, Mueller-
Hinton tersebut ditaruh di water bath hingga suhu turun menjadi ± 500 C.
Mueller-Hinton dituangkan kedalam cawan petri serta diinkubasi dengan suhu
370C selama 24 jam untuk mengetahui sterilitas media. Bila media tampak jernih
(steril) atau tidak ada koloni bakteri maka media bisa digunakan sebagai
penanaman bakteri Salmonella typhi.
4.10.4 Pembuatan standar kekeruhan larutan (Larutan Mc. Farland)
Larutan H2SO4 0,36 N sebanyak 99,5 ml dicampurkan dengan larutan
BaCl2.2H2O 1,175% sebanyak 0,5 ml dalam Erlenmeyer, lalu dikocok sampai
terbentuk larutan yang keruh.
4.10.5 Pembuatan suspensi bakteri
Kekeruhan yang setara dengan standar kekeruhan larutan Mc. Farland
dapat diperoleh dengan mengambil bakteri uji yang telah diinokulasi
menggunakan kawat ose steril lalu disuspensikan kedalam tabung berisi 2 ml
larutan NaCl 0,9%.
34
4.10.6 Inokulasi bakteri pada media agar
Bakteri uji diambil dengan lidi kapas steril, lalu ditanamkan pada media
agar miring dengan digores. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 370C selama 24
jam.
4.10.7 Pembuatan larutan kontrol negative dan kontrol positif
Kontrol negatif yang digunakan dalam pengujian adalah larutan metanol.
Kontrol positif yang digunakan dalam pengujian adalah ciprofloxacin.
4.10.8 Penyiapan larutan uji
Ekstrak yang telah ditimbang dan disimpan dalam wadah gelas atau botol
yang tertutup dengan berat 0.05 gr, 0.1 gr, 0.2 gr, dan 0.4 gr dan sudah diberi label
pada botol, diencerkan atau dilarutkan dengan menambahkan larutan metanol
1000 cc pada masing-masing botol, kemudian aduk hingga ekstrak larut dalam
botol.
4.10.9 Pengujian aktivitas antibakteri dengan metode difusi agar
Pengujian dilakukan dengan metode difusi agar (Kirby-Bauer). Celupkan
swab kapas yang telah steril ke dalam suspensi bakteri, peras swab kapas dengan
memberikan menekan ke dinding tabung suspensi bakteri untuk menghindari
cairan yang banyak berpindah ke lempeng uji agar Mueller-Hinton (MH).
Selanjutnya usapkan swab kapas ke lempeng agar MH secara merata ke seluruh
permukaan agar dan biarkan biakan agar mengering selama 3-5 menit pada suhu
ruangan (25oC). Selanjutnya cakram diletakkan di atas media agar dengan
menggunakan pinset. Setiap piringan yang berukuran diameter 10 cm diletakkan 6
35
cakram yang masing-masing mengandung: 1) metanol; 2) ciprofloxacin; 3)
ekstrak daun sirsak konsentrasi50 mg/mL(P1) ; 4) ekstrak daun sirsak konsentrasi
100 mg/mL ; 5) ekstrak daun sirsak konsentrasi 200 mg/mL ; 6) ekstrak daun
sirsak konsentrasi 400mg/mL.
4.10.10 Pengamatan data pengukuran
Pengamatan dilaksanakan setelah 1 x 24 jam masa inkubasi. Setelah
inkubasi, diamati aktivitas antibakteri dengan melihat zona bening di sekitar paper
disc yang kemudian diukur dengan menggunakan jangka sorong.
4.11 Analisis Data
Data pada penelitian ini akan dianalisis dan disajikan dalam bentuk tabel
dan narasi.
4.12 Jadwal Penelitian
No Jenis Kegiatan Bulan I Bulan II Bulan III Bulan IV
1 Persiapan peralatan
2 Persiapan daun Annona
muricata
3 Persiapan specimen Salmonella
typhi
4 Pembuatan ekstrak daun
Annona muricata
5 Pengujian dan pengukuran hasil
eksperimen
6 Analisis hasil eksperimen
36
7 Penyusunan draft dan
penyelesaianlaporan
37
BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN
5.1Hasil Ekstraksi Daun Sirsak
Daun sirsak dari tanaman spesies Annona muricata yang digunakan pada
penelitian didapatkan dari Desa Takmung, Kecamatan Banjarangkan, Kabupaten
Klungkung, Bali. Daun sirsak yang digunakan adalah daun sirsak dewasa dan
tidak terserang hama. Daun yang sudah dicuci bersih kemudian dipotong menjadi
bagian yang lebih kecil kemudian dikeringkan tanpa menggunakan sinar matahari
pada suhu kamar. Daun sirsak yang sudah kering kemudian dihaluskan dengan
menggunakan blender serta diayak dengan menggunakan saringan sehingga
diperoleh serbuk daun sirsak dengan berat 330 gram. Serbuk daun dimaserasi
dengan metanol dan filtrat hasil maserasi kemudian dievaporasi sehingga
diperoleh ekstrak kental yang berwarna hijau kehitaman.
5.2 Hasil Uji Fitokimia
Uji fitokimia dilakukan untuk mengetahui jenis senyawa metabolit
sekunder yang terdapat didalam ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata).
Penulis melakukan uji terhadap beberapa senyawa metabolit sekunder dasar
seperti alkaloid, saponin, flavonoid, tannin, steroid, triterpenoid, fenol, dan
glikosida di Laboratorium Fitokimia Farmasi FK UNUD.
Prosedur dan hasil pengujian adalah sebagai berikut :
a. Penyiapan Larutan Uji
Sebanyak 20 mg ekstrak daun sirsak dilarutkan kedalam 20 metanol 96%.
38
b. Uji untuk flavonoid
Sebanyak 1 ml larutan uji diuapkan, dibasahkan sisanyadengan aseton ,
ditambahkan sedikit serbuk halus asam borat dan serbuk halus asam oksalat ,
dipanaskan hati–hati di atas penangas air dan dihindari pemanasan yang
berlebihan. Kemudian dicampur sisa yang diperoleh dengan 10 mleter dan
diamati dengan sinar ultraviolet 366 nm. Larutan berflurorensensi
kuningmenunjukkan adanya flavonoid.
Gambar 5.1 Larutan uji yang dibuat dari
20 mg ekstrak metanol daun sirsak kental
Gambar 5.2Hasil uji fitokimia positif flavonoid
karena berfluroresensi kuning dibagian pinggir.
39
c. Uji untuk saponin
Sebanyak 2 ml larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 10
mlaquadest dan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Terbentuk buih
yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit, setinggi 1 cm sampai 10 cm, dan
pada penambahan 1 tetes asam klorida 2N, buih tidak hilang menyatakan bahwa
ekstrak mengandung saponin.
Gambar 5.3 Hasil uji fitokimia positif saponin, terlihat buih pada permukaan
larutan yang ditunjukan oleh anak panah
d. Uji untuk fenol
Sebanyak 2 ml ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan
larutan FeCl3 2%. Terbentuk warna hitam pekat atau biru keunguan menandakan
adanya senyawa fenol.
40
Gambar 5.4 Hasil uji fitokimia fenol dinyatakan positif karena terbentuk
warna kehitaman setelah diberi larutan FeCl3 2%
e. Uji untuk alkaloid
Sebanyak 2 ml larutan ekstrak uji diuapkan di atas cawan porselin hingga didapat
residu. Residu kemudian dilarutkan dengan 5 ml HCl 2N. Larutan yang didapat
kemudian dibagi kedalam 4 tabung reaksi.
Tabel 5.1 Hasil Uji Fitokimia Alkaloid
Tabung 1 Blanko ( asam encer) Larutan pembanding
Tabung 2 Pereaksi Mayer Terbentuk endapan putih
Tabung 3 Pereaksi Bouchardat Terbentuk endapan hitam
Tabung 4 Pereaksi Wagner Terbentuk endapan coklat
41
f. Uji untuk steroid dan triterpenoid (Reaksi Liebermann-Burchard)
Sebanyak 2 mL larutan uji diuapkan dalam cawan penguap. Residu dilarutkan
dengan 0,5 ml kloroform, kemudian ditambahkan 0,5 ml asam asetat anhidrat.
Gambar 5.8 Larutan Blanko Gambar 5.7 Hasil uji mayernegatif,
tidak tampak endapan putih pada
larutan
Gambar 5.5 Hasil uji
bouchardatpositif, karena terbentuk
endapan hitam
Gambar 5.6 Hasil uji wagner positif,
karena terbentuk endapan cokelat
dipermukaan larutan
42
Selanjutnya ditambahkan dengan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung.
Terbentuk cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan larutan menunjukkan
adanya triterpenoid, sedangkan bila muncul cincin biru kehijauan menunjukkan
adanya steroid.
g. Uji untuk tannin
Sebanyak 2 ml ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan
larutan Pb asetat 10% Terbentuk endapan putih menandakan adanya senyawa
tanin.
Gambar 5.11Terdapat endapan putih dari hasil uji
fitokimia, yang berarti ekstrak positif mengandung
tannin
Gambar 5.9Hasil Uji Fitokimia
Steroidpositif, pada pengamatan terdapat
cincin biru kehijauan
Gambar 5.10Hasil uji fitokimia
triterpenoidmenunjukan negatif
43
h. Uji untuk glikosida
Sebanyak 2 ml larutan ditambahkan 5 ml asam asetat anhidrat P. Kemudian
diambahkan10 tetes asam sulfat P. Terjadi warna hijau kebiruan, menunjukkan
adanya glikosida.
Tabel 5.2 Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Metanol Daun Sirsak (Annona
muricata)
NO
IDENTIFIKASI
GOLONGAN
SENYAWA
METODE
PENGUJIAN PENGAMATAN* HASIL
1 Alkaloid
Meyer Tidak terbentuk
endapan putih
_
Bouchardat Terbentuk endapan
hitam
+
Wagner Terbentuk endapan
coklat
+
Gambar 5.12Terdapat perubahan warna hijau
kebiruan pada hasil uji fitokimia, yang berarti
ekstrak positif mengandung glikosida
44
2 Saponin Foam Terbentuk busa yang
stabil
+
3 Flavonoid Pew Terbentuk warna
kuning intensif
+
4 Steroid Lieberman-
Burchard
Terbentuk cincin
warna biru kehijauan
+
5 Triterpenoid Lieberman-
Burchard
Tidak Terbentuk
cincin kecoklatan _
6 Fenol FeCl310% Terbentuk warna biru
kehitaman
+
7 Glikosida Lieberman-
Burchard
Terbentuk warna
Hijau kebiruan
+
8 Tanin Pbasetat 10% Terbentuk endapan
putih
+
5.3 Hasil Uji Antibakteri
Pengukuran diameter zona hambat dilakukan setelah lempeng agar dengan
bakteri Salmonella typhi diinkubasi didalam inkubator selama 18-24 jam dengan
suhu 370C. Diameter zona hambat diukur menggunakan jangka sorong dengan
ketelitian 0,05 mm pada zona bening di sekitar cawan petri.
45
Gambar 5.13 Hasil Uji Ekstrak Metanol Daun Sirsak (Annona
muricata)terhadap Pertumbuhan Bakteri Salmonella typhi Secara In Vitro
Pada penelitian ini digunakan 4 buah cawan petri dengan inkubasi koloni
bakteri Salmonella typhi sesuai 108 CFU/ml dibuat kekeruhan yang setara dengan
0,5 MacFarland. Pada masing-masing cawan petri yang berisi bakteri Salmonella
typhi, diletakkan 6 buah disk yang terdiri dari1) metanol(K1); 2)
ciprofloxacin(K2); 3) ekstrak daun sirsak konsentrasi 50 mg/mL(P1) ; 4) ekstrak
daun sirsak konsentrasi 100 mg/mL(P2); 5) ekstrak daun sirsak konsentrasi 200
mg/mL(P3); 6) ekstrak daun sirsak konsentrasi 400mg/mL(P4).
Dari zona hambat yang ditunjukkan pada gambar di atas, pengukuran
dilakukan dari beberapa sisi lingkaran kemudian dirata-ratakan sehingga
46
didapatkan hasil rerata K1 = 0,00 mm, K2 = 32,25 P1 = 0,00 mm, P2 = 0,00 mm,
P3 = 0,00 mm, dan P4 = 0,00 mm. Hasil dapat dilihat pada tabel 5.3.
Tabel 5.3 Data Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Ekstrak
MetanolDaun Sirsak (Annona muricata) terhadap Pertumbuhan Bakteri
Salmonella typhi Secara In Vitro
NO K1
(mm)
K2
(mm)
P1
(mm)
P2
(mm)
P3
(mm)
P4
(mm)
1 0,00 35,00 0,00 0,00 0,00 0,00
2 0,00 31,00 0,00 0,00 0,00 0,00
3 0,00 32,00 0,00 0,00 0,00 0,00
4 0,00 31,00 0,00 0,00 0,00 0,00
5.4 Pembahasan
Hasil pengukuran diameter zona hambat dengan metode disk diffusion
menunjukan bahwa ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata) tidak
memberikan efek antibakteri pada bakteri gram negatif Salmonella typhi secara in
vitro. Berbeda dengan hasil yang telah diperoleh oleh penelitian terdahulu,
pengujian ekstrak metanol daun sirsak yang dilakukan pada kelompok bakteri
gram negatif menunjukan adanya aktifitas anti bakteri seperti yang dilakukan oleh
Ginda Haro, et al (2014), yang menguji pada bakteri Escherichia coli, dimana
pada konsentrasi minimalnya (5mg/mL) mampu menghambat pertumbuhan
bakteri dengan zona inhibisi 8.0 mm (Ginda Haro,2014). Dian Riani dkk(2016),
yang juga menguji ekstrak metanol daun sirsak pada bakteri gram
47
negatifEscherichia coli memperoleh hasil bahwa ekstrak yang digunakan mampu
menghambat pertumbuhan bakteri secara in vitro dengan diameter zona hambat
3.0 mm (Dian R, 2016).
Sebagian besar penelitian pendahuluan yang menguji aktivitas antibakteri
pada ekstrak daun sirsak, menggunakan bakteri gram negatif yang berasal dari
spesies Escherichia coli, maka dari itu dapat dipahami apabila hasil yang peneliti
dapatkan berbeda dengan apa yang didapat oleh penelitian sebelumnya. Perbedaan
ini dapat terjadi mengingat spesies bakteri yang digunakan berasal dari spesies
yang berbeda. Spesies bakteri yang berbeda akan menimbulkan mekanisme
pertahanan yang berbeda pula terhadap antibakteri, baik dari komponen dinding
sel bakteri maupun materi genetik yang dibawa.
Perbedaan hasil uji penelitian ini dapat pula terjadi karena adanya
kemungkinan resistensi bakteri yang digunakan sebagai sampel uji. Resistensi
bakteri secara genetik terhadap zat tertentu perlu diperhitungkan mengingat
sampel berasal dari isolat pasien Lab. Mikrobiologi RSUP Sanglah. Mekanisme
strain bakteri yang mengalami resistensi terhadap antibiotik bisa diakibatkan dari
pemakaian antibiotik dalam jangka waktu yang relatif lama dan terus-menerus,
yang memungkinkan bakteri membentuk mekanisme pertahanan diri.Selain itu,
faktor kepatuhan dari diri pasien, juga dapat memengaruhi terjadinya resistensi
antibiotik jika pasien tidak memiliki kepatuhan dalam mengkonsumsi antibiotik
dengan benar (Silvan J,2013).
Hasil uji fitokimia yang dilakukan di Lab Farmasi Universitas Udayana
menyatakanbahwa ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata) mengandung
metabolit sekunder yang bersifat anti bakteri seperti flavonoid, steroid, alkaloid,
48
saponin, dan tannin.Flavonoid dilaporkan memiliki mekanisme sebagai
antibakteri. Adapun mekanisme reaksi antibakteri yang ditimbulkan oleh
flavonoid seperti mampu menginhibisi sintesis asam nukleat bakteri, menginhibisi
fungsi dari membran sitoplasmik, serta mampu menginhibisi metabolisme energi
pada bakteri(Tim Cushnie, 2005). Steroid tersebar di alam sebagai fraksi lipid dari
tanaman maupun hewan. Steroid dibentuk oleh bahan alam yang disebut sterol.
Sterol merupakan senyawa yang terdapat pada lapisan malam (lilin) daun dan
buah yang berfungsi sebagai pelindung diri dari serangan serangga dan serangan
mikroba. Saponin berfungsi sebagai antibakteri dengan menyebabkan kebocoran
protein dan enzim dari dalam sel. Selain itu saponin dapat menjadi antibakteri
karena zat aktif permukaannya mirip detergen. Kemiripan sifat saponin dengan
detergenakanmenyebabkan penurunan tegangan permukaan dinding sel bakteri,
merusak permeabilitas membran dan akan sangat mengganggu kelangsungan
hidup bakteri. Alkaloid sebagai antibakteri bekerja dengan caramengganggu
komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga lapisan dinding sel
tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel. Selain itu, komponen
alkaloid diketahui dapat berfungsi sebagai interkelator DNA dan menghambat
enzim topoisomerase sel bakteri. Taninsendiri merupakan senyawa yang bersifat
lipofilik, sehingga mudah terikat pada dinding sel dan mengakibatkan kerusakan
dinding selbakteri(Dian R, 2016).
Hasil uji fitokimia yang dilakukan peneliti dengan uji fitokimia pada
penelitian sebelumnya memang memiliki kesamaan, yang menyatakan bahwa
ekstrak metanol daun sirsak memiliki potensi sebagai antibakteri apabila dilihat
dari metabolit sekunder yang dikandungnya. Namun hasil uji in vitro yang peneliti
49
lakukan pada bakteri jenis gram negatif dalam hal ini adalah bakteri Salmonella
typhi memberikan hasil bahwa potensi antibiotik yang dimiliki ekstrak metanol
daun sirsak tidak memberikan efek antibiotik pada bakteri tersebut. Perbedaan
hasil uji ini akan sangat tergantung pula pada efektifitas ekstrak yang digunakan.
Efektifitas ekstrak yang digunakan pada masing-masing penelitian sangat
dipengaruhi olehadanya variasi biologis dari tanaman yang digunakan. Tempat
asal dari tanaman sirsak yang daunnya digunakan, diketahui dapat memengaruhi
jumlah kandungan bahan aktif yang ada. Faktor-faktor lingkungan seperti suhu
udara, kelembapan relatif, radiasi matahari, angin, suhu tanaman, jenis unsur hara,
ketersediaan air, ketercukupan cahaya dalam proses fotosintesis sangat
memengaruhi fungsi fisiologis, bentuk anatomis, dan siklus hidup tumbuhan.
Faktor lingkungan inilah yang mungkin memengaruhi kadar senyawa metabolit
sekunder yang dihasilkan oleh daun (Melisa R,2015).
Perbedaan hasil uji antibakteri antara peneliti satu dengan lainnya dapat
pula dipengaruhi oleh ekstrak bahan alam yang digunakan. Tidak adanya
standarisasi pembuatan ekstrak bahan alam antara laboratorium satu dengan yang
lain akan menimbulkan hasil yang berbeda pula. Selain prosedur standar
pembuatan ekstrak, faktor lain yang dapat memengaruhi mutu ekstrak yang
digunakan adalah faktor kimia seperti jenis dan jumlah senyawa kimia serta
metode ekstraksi dan pelarut yang digunakan (Melisa R,2015).
50
BAB VI
SIMPULAN DAN SARAN
6.1 Simpulan
Adapun simpulan berdasarkan hasil dan pembahasan yang telah
dipaparkan adalah ekstrak metanol daun sirsak(Annona muricata)tidakdapat
menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella typhisecara in vitro. Hal ini
disebabkan oleh perbedaan jenis bakteri gram negatif yang digunakan dengan
penelitian terdahulu, adanya mekanisme pertahanan bakteri Salmonella typhi
baik dari dinding dan materi genetik yang dibawa yang belum dapat
dihancurkan oleh kandungan metabolit sekunder dari ekstrak metanol daun
sirsak, adanya kemungkinan resistensi yang dimiliki oleh strain bakteri yang
digunakan, perbedaan kandungan metabolit skunder tanaman sirsak yang
digunakan yang sangat tergantung oleh faktor lingkungan tempat tumbuhan
berasal, serta perbedaan standarisasi laboratorium dalam proses pembuatan
ekstrak yang digunakan pada penelitian.
6.2 Saran
Adapun beberapa saran yang dapat diberikan melalui penelitian ini antara lain:
a. Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk uji antibakteri ekstrak metanol
daun sirsak dengan konsentrasi larutan yang berbeda untuk mengetahui
konsentrasi yang dapat memberikan efek secara in vitro pada bakteri
Salmonella typhi.
51
b. Masih perlu dilakukan penelitian lanjutan menggunakan pelarut selain
metanol seperti etanol, n-heksana, etil asetat dan kloroform terhadap
bakteri Salmonella typhi dan bakteri gram negatif lainnya.
c. Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk uji anti bakteri menggunakan
bagian lain dari tanaman sirsak seperti kulit buah, kulit batang, dan biji
sirsak untuk menemukan cadangan sumber anti bakteri di masa depan.
52
DAFTAR PUSTAKA
CDC. Diaksespada 15 Agustus 2014. Diunduh dari :
http://www.cdc.gov/nczved/divisions/dfbmd/diseases/typhoid_fever/technical.htm
l#incidence
DaunSirsak. Diunduh dari :
http://tehherbalbali.blogspot.co.id/2013/10/daun-sirsak.htmldiaksespada 1Februari
2016
Dian R, Kartika D, dkk. 2016.
IdentifikasiSenyawaMetabolitSekundersertaUjiAktivitasEkstrakDaunSirsaksebag
aiAntibakteri. Molekul. Vol 11 N0.1 ; 101-111
Endrini S, et al. 2014. Annonamuricata leaves have strongest cytotoxic activity
against breast cancer cells. UniversaMedicina. Univ Med;33:179-84
Haro G, et al. 2014. Study Of The Antibacterial Activities Of Soursop
(Annonamuricata L.) Leaves. International Journal of PharmTechResearch
CODEN(USA). Vol.6, No.2
Kavita N., ShivannarT.C., et al. Antimicrobial Susceptibility Of Salmonella Typhi
In India. Journal Infect DevCtries. 2010. 4(20): 070-073.
Mandal B.K., et al. 2008. PenyakitInfeksiEdisiKeenam. Erlangga. Hal: 144-145
Melisa R, dkk. 2015. UjiDayaHambatEkstrakDaunSirsak (Annonamuricata)
terhadapPertumbuhanStaphylococcus aureussecaraIn Vitro. Pharmacon
:JurnalIlmiahFarmasi. Vol 4 No 4
Onyechi, et al. 2012. Nutrient, Phytochemical Composition and Sensory
Evaluation OfSoursop (Annonamuricata) Pulp and Drink in South Eastern
53
Nigeria. International Journal of Basic & Applied Sciences IJBAS-IJENS
Vol:12 No:06
PanduanLengkapTeknikdan Cara BudidayaSirsakTanamanBerkhasiat. 2015
http://www.ruangtani.com/10-panduan-lengkap-teknik-dan-cara-budidaya-
sirsak-tanaman-berkhasiat/
Solomon-W et al. 2014. Phytochemical Screening and Antimicrobial activities of
Annonamuricata (L) leaf extract. American Journal of Biological,
Chemical and Pharmaceutical Sciences. Vol.2, No 1
Sarman Singh. 2001. Symposium: Typhoid FeverPathogenesis and Laboratory
Diagnosis. Journal Indian Academy of Clinical Medicine. Vol. 2, No. 1
and 2 http://medind.nic.in/jac/t01/i1/jact01i1p17.pdf
Soheil ZM, et al. 2015. Review Annonamuricata (Annonaceae): A Review of Its
Traditional Uses, Isolated Acetogenins and Biological Activities.
International Journal of Molecular Sciences ISSN 1422-0067
Silvan J. 2013. PolaSensitivitasIn VitroSalmonella
typhiterhadapAntibiotikKlorampenikol, AmoksisilindanKotrimoksazol di
BagianAnak RSUD Ulin Banjarmasin periode Mei-September 2012.
BerkalaKedokteran. Vol 9 No 1 : 25-34
SirsakdanManfaatnyaBagiKesehatan. 2013.
http://m.kompasiana.com/ellygun/sirsak-manfaatnya-bagi-
kesehatan_552854846ea834f7588b458bdiaksespadaSenin, 25 Januari
2016.
Syamsuhidayat SS, Hutapea JR. 1991. InventarisTanamanObat Indonesia.
DepartemenKesehatanRI :BadanPenelitiandanPengembanganKesehatan.
Hal.56
54
TaksonomiSalmonella typhi. Diaksespada 15 Agustus
2014.http://microbes.ucsc.edu/cgibin/hgGateway?hgsid=439197&clade=e
ukaryotaprotista&org=Salmonella+typhi+Ty2&db=0
Tim Cushnie. 2005. Review :Antimicrobial Activity of Flavonoids. International
Journal of Antimicrobial Agents 26. 343-356
WHO. Background Document:TheDiagnosis,Treatment And Prevention Of
Typhoid Fever. Communicable Disease Surveillance and
ResponseVaccines and Biologicals. 2003. Hal 1-48
diaksesmelaluihttp://whqlibdoc.who.int/hq/2003/WHO_V&B_03.07.pdf
Widoyono.2011. PenyakitTropisEdisiKedua. Erlangga. Hal:40-45