pengecatan mikrobiologi isti (1)
TRANSCRIPT
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
1/23
1
PENGECATAN MIKROORGANISME
BAB I
Pendahuluan
A. Latar Belakang
Menurut Cohn, yang disebut cat bakteri atau mikroorganisme
adalah suatu senyawa organik yang mengandung gugus chromofor
dengan gugus auxochrom yang terkait didalam satu cincin benzene(Djide, 2015 !
"akteri atau mikroorganisme lainnya da#at dilihat dengan
mikrosko# biasa tan#a #engecatan yaitu dengan cara$cara khusus,
misalnya dengan handing dro#!
%engenalan bebera#a metode #engecatan, meru#akan hal yang
sangat #enting khususnya dalam mengidenti&ikasi bentuk mor&ologi #ada
mikroba! %ada mikroba tertentu, %engecatatan mikroba menjadi sangat
#enting bukan hanya untuk mengatahui bentuk mor&ologi tumbuhan
namun juga untuk mengetahui #erbedaan$#erbedaan bentuk mor&ologi
mikroba itu berdasarkan karakteristiknya dalam berikatan dengan zat
warna!
%engecatan 'ram meru#akan salah satu teknik #engecatan yang
dikerjakan di laboratorium mikrobiologi untuk ke#entingan identi&ikasi
mikroorganisme! Mor&ologi mikrosko#ik mikroorganisme yang di#eriksa
dan si&atnya yang khas terhada# #engecatan tertentu (#engecatan 'ram
da#at digunakan untuk identi&ikasi awal!
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
2/23
2
PENGECATAN MIKROORGANISME
%ada #raktikum #engecatan dilakukan tiga metode #engecatan
yaitu #engecatan sederhana, #engecatan gram dan #engecatan negati&
dimana untuk membandingkan #engamatan struktur sel bakteri gram
negati e dengan bakteri gram #ositi&
B. Rumusan Masalah
)da#un rumusan masalah dalam #raktikum ini adalah sebagai
berikut *
1! )#a #erbedaan dari #engecatan sederhana, #engecatan 'ram, dan
#engecatan negati&+
2! "agaimana metode dan langkah$langkah dalam melakukan
#engecatan sederhana, #engecatan 'ram, dan #engecatan negati&+
! -enis #ewarna a#a saja yang digunakan dalam #engecatan
sederhana, #engecatan 'ram, dan #engecatan negati&+
C. Maksud Praktikum
)da#un maksud dari #ercobaan ini adalah mengetahui dan
memahami cara$cara #engecatan suatu bakteri atau mikroorganisme!
D. Tujuan Praktikum
1! Mengamati mor&ologi bakteri dengan mengggunakan metode
#engecatan sederhana, #engecatan negati& dan #engecatan 'ram
(#ositi& dan negati& !
2! Menentukan de&erensiasi bakteri dengan metode mengggunakan
#engecatan 'ram!
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
3/23
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
4/23
4
PENGECATAN MIKROORGANISME
BAB II
Kajian Pustaka
A. Teori Umum
%ewarna (stain meru#akan garam$garam yang tersusun atas ion
#ositi& dan negati e yang salah satunya berwarna dan disebut kromo&or!
"ila kromo&or berada #ada ion #ositi&, disebut sebagai #ewarna basa
(basic dye dan bila kromo&or berada #ada ion negati e disebut sebagai
#ewarna asam ( acidic dye (#ratiwi, 200/ !
Menurut Cohn, yang disebut cat bakteri atau mikroorganisme adalah
suatu senyawa organik yang mengandung gugus chromofor dengan
gugus auxochrom yang terkait didalam satu cincin benzene (Djide, 2015 !
arena sebagian besar mikroorganisme tidak berwarna, maka
untuk da#at melakukan #engamatan di bawah mikrosko# cahaya
di#erlukan #ewarnaan mikroorganisme dengan menggunakan #ewarna!
%ewarnaan mikroorganisme #ada dasarnya adalah #rosedur mewarnai
mikroorganisme dengan menggunakan zat warna yang da#at
menonjolkan struktur tertentu dari mikroorganisme yang ingin kita amati!
ebelum mikroorganisme da#at diwarnai, mikroorganisme tersebut harus
terlebih dahulu di&iksasi agar terikat (menem#el #ada kaca objek
(microsco#e slide ! an#a adanya &iksasi, maka #emberian zat warna
#ada mikroorganisme yang dilanjutkan dengan #rosedur #encucuian zat
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
5/23
5
PENGECATAN MIKROORGANISME
warna dengan air mengalir da#at menyebabkan mikroorganisme ikut
tercuci (%ratiwi, 200/ !
)da tiga macam #rosedur #ewarnaan yaitu #ewarnaan sederhana
(simple stain , #ewarnaan di&erensial ( differential stain , dan #ewarnaan
khusus ( special stain ! %ada #ewarnaan sederhana hanya digunakan satu
macam #ewarna dan bertujuan mewarnai seluruh sel mikroorganisme
sehingga bentuk seluler dan struktur dasarnya da#at terlihat (#ratiwi,
200/ !
%ewarnaan sederhana! %emberian warna #ada bakteri atau jasad$
jasad renik lain dengan menggunakan larutan tunggal suatu #ewarna
#ada la#isan ti#is, atau olesan, yang sudah di&iksasi, dinamakan
#ewarnaan sederhana! 3a#isan tadi digenangi dengan larutan #ewarna
selama jangka waktu tertentu, kemudian larutan itu dicuci dengan air dan
kaca objeknya dikeringkan dengan kertas #engisa# (Michael, 201 !
%ewarnaan di&erensial, #rosedur #ewarnaan yang menam#ilkan
#erbedaan diantara sel$sel mikroba atau bagian$bagian sel mikroba
disebut teknik #ewarnaan di&erensial! %ewarnaan gram, salah satu teknik
#ewarnaan di&ernsial yang #aling #enting dan #aling luas digunakan untuk
bakteri ialah #ewarnaan gram (Michael, 201 !
ediaan yang diwarnai 4 #ewarnaan #re#arat * digunakan berbagai
metode 4 teknik #embuatan #re#arat (ha#us, smear dan metode
#ewarnaan yang sesuai dengan jenis dan si&at cat biologis dan materi
yang diwarnai, selain #ewarnaan umum, terda#at metode #ewarnaan
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
6/23
6
PENGECATAN MIKROORGANISME
khusus yang ber&ungsi untuk mengamati struktur 4 bagian mor&ologi dari
mikroba, misal #ewarnaan ka#sul, s#ora, &lagel, granula, inti dan lain$lain
( arti, 2015 !
6ntuk mengetahui adanya gerakan bakteri ( bacterial motility yang
da#at membantu identi&ikasi bakteri da#at dilakukan* perwarnaan flagel,
adanya &lagella menunjukkan adanya si&at motil bakteri, medium uji
motilitas, dengan menggunakan semisolid yang diinokulasi bakteri dengan
jarum membentuk garis lurus, jika terlihat ada gerakan bakteri #ada
medium, #emeriksaan bakteri sediaan basah dibawah mikrosko# da#at
menunjukkan gerakan berenang bakteri, misalnya Rhodospirilum rubrum
dengan #embesaran 15007 ( oedarto, 2008 !
Pengaruh substrat se#erti telah disebutkan terdahulu bahwa tia#
cat basa atau cat asam da#at bereaksi dengan konstituen$konstien sel
tertentu! 9leh karena itu substrat organic se#erti li#ida$li#ida, #rotein$
#rotein, asam$asam nuklein dan karbohidrat, juga akan mem#engaruhi
#engecatan biologis (Djide, 2015 !
Intensi!ikasi "enge#atan untuk mengintensi&ikasi cat da#at
dilakukan bebera#a cara se#erti mem#ertinggi kadar cat, mem#ertinggi
suhu #engecatan(:0 o $;0 o C atau menambah suatu mordant! Mordant
adalah suatu substansi kimia yang da#at menyebabkan sel$sel bakteri
atau mikroorganisme da#at dicat lebih intensi& atau menyebabkan cat
terikat lebih kuat #ada jaringan sel dibandingkan a#abila #ada cara
#engecatan tidak diberikan mordant (Djide, 2015 !
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
7/23
7
PENGECATAN MIKROORGANISME
B. Uraian Bahan
1! )lkohol (Dirjen %9M ! 1;8;
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
8/23
8
PENGECATAN MIKROORGANISME
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
9/23
9
PENGECATAN MIKROORGANISME
elarutan * ukar larut dalam air, agak sukar larut dalam
etanol (;5 % dan dalam asam asetat glasial
%, larutannya warna lembayung tua!
%enyim#anan * Dalam wadah tertutu# baik
egunaan * ebagai cat utama atau 'ram )
dalam#engecatan 'ram!
6. a&ranin (Ditjen %9M, 1;8;
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
10/23
10
PENGECATAN MIKROORGANISME
KA$IA% PRAKTIKUM
A. Alat
)da#un alat F alat yang digunakan dalam #raktikum ini adalah
"otol sem#rot, 'ege# kayu, Mikrosko#, 9bjek dan deck glass, 9se bulat,
9se lurus, %i#et tetes, #iritus!
B. Bahan
)da#un bahan yang digunakan adalah )lkohol asam, )?uadest,
sam#el bakteri air 3ejja, "iakan bakteri Pseudomonas aeruginosa, ristal
iolet, 3arutan Mordan, 3arutan
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
11/23
11
PENGECATAN MIKROORGANISME
2! Diambil secara ase#tis 1 ose sus#ense bakteri dan diratakan di
atas gelas obyek! Dibiarkan #re#arat tersebut kering di udara
>! etelah kering #re#arat di&iksasi dengan cara di#anaskan di atas
lam#u s#iritus5! etelah dingin, noda #ada gelas obyek ditetesi dengan cat
sederhana 1 atau 2 tetes dan dibiarkan 1 atau 2 menit:! Dicuci dengan air mengalir sam#ai sisa$sisa cat tercuci seluruhnya8! Dikeringkan di udara dan diamati di bawah mikrosko#
C! %engecatan 'ram
1! Disia#kan #re#arat olesan bakteri
2! Dikeringkan di udara, setelah kering di&iksasi di atas lam#u s#iritus
! etelah dingin, diteteskan cat '=)M ) sebanayak 2$ tetes,
dibiarkan 1 menit
>! Dicuci dengan air mengalir, dikeringkan di udara atau kertas isa#
5! Diteteskan larautan '=)M ", di biarkan selama 1 menit
:! Dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan
8! Ditetskan larutan '=)M C selama 0 detik
/! Dicuci dengan air mengalr dan dikeringkan
;! Diteteskan larutan '=)M C selama 2 menit
10!Dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan
11! Diamati dengan mikrosko# dengan #erbesaran kuat dan
menggunakan minyak imersi
12!Digambar hasil$hasil #engecatan tersebut!
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
12/23
12
PENGECATAN MIKROORGANISME
BAB I&
KA$IA% 'A(IL PRAKTIKUM
A. 'asil Praktikum
). Penge#atan (ederhana
%o Bakteri Bentuk %ama #at Pengamata
n
) Pseudomonas
aeruginosa
"atang
(bacillus
Metilen
blue
"akteri
berwarna
biru
*. Penge#atan %egati!
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
13/23
13
PENGECATAN MIKROORGANISME
%o Bakteri Bentuk %ama #at Pengamatan
) Pseudomonasaeruginosa
"atang(bacillus
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
14/23
14
PENGECATAN MIKROORGANISME
"! %embahasan
%ada #ercobaan ini dilakukan #engecatan #ada bakteri
Pseudomonas aeruginosa dengan metode #engecatan sederhana,
#engecatan negati&, dan #engecatan gram! ujuan dilakukannya
#engecatan untuk memudahkan melihat struktur bakteri yang tidak
berwarna!
%ada metode #engecatan sederhana menggunakan metilen blue
yang meru#akan cat warna basa! Metode ini sangat sederhana dan ce#at!
"erdasarkan #engamatan bakteri Pseudomonas aeruginosa terlihat
bentuk "atang (bacillus dan "akteri berwarna biru
%ada metode #engecatan negati& menggunakan cat nigrosin yang
bersi&at asam yang bermuatan negati& yang menyebabkan cat ini tidakakan mewarnai #ermukaan yang bermuatan negati&! al ini dimaksudkan
untuk memberi latar belakang untuk bakteri yang akan diamati!
"erdasarkan #engamatan bakteri Pseudomonas aeruginosa berbentuk
"atang (bacillus
%ada #engecatan gram menggunakan em#at jenis cat yaitu gram
) berisi kristal iolet, gram " berisi mordan, gram C berisi alkohol asam,
dan gram D berisi sa&ranin! )lasan #enggunaan kristal iolet untuk
memberikan warna ungu #ada sel bakteri dan didiamkan selama 1 menit
agar melekat sem#urna di dinding se bakteri! %enggunaan mordan
dimaksudkan untuk mem&iksasi #ewarna #rimer yang disera#
mikroorganisme dan untuk mem#erkuat #engikatan warna oleh bakteri!
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
15/23
15
PENGECATAN MIKROORGANISME
)lasan #enambahan alkohol yaitu untuk mencuci atau menghilangkan
kelebihan zat warna #ada sel bakteri! emudian digunakan sa&ranin
dengan tujuan mewarnai kembali sel$sel yang telah kehilangan #ewarna
utama setelah #erlakuan dengan alkohol! %ewarna sa&ranin masuk
kedalam sel dan menyebabkan sel menjadi berwarna merah #ada bakteri
gram negati& sedangkan #ada bakteri gram #ositi& dinding selnya terhidrasi
dengan #erlakuan alkohol, #ori$#ori mengkerut, daya rembes dinding sel
dan membran menurun sehingga #ewarna sa&ranin tidak da#at masuk
sehingga sel berwarna ungu!
%emberian #ewarna yang bergantian dengan waktu tertentu
disebabkan karena zat$zat warna tersebut da#at berikatan dengan
kom#onen dinding sel bakteri dalam waktu singkat!
6ntuk #engecatan sederhana dilakukan dengan cara disia#kan alat
dan bahan yang akan digunakan, kemudian diambil satu ose sus#ensi
bakteri secara ase#tis! atu ose sus#ensi bakteri tersebut diratakan di
atas gelas objek, lalu di&iksasi! elanjutnya ditetesi dengan Methylen "lue
sebanyak 1 F 2 tetes! )lasan #enambahan Methylen "lue yaitu untuk
memberikan warna #ada sel bakteri agar mudah diamati, dimana zat
warna yang bersi&at basa (Methylen "lue akan bereaksi dengan struktur
sel yang bersi&at asam membentuk kom#leks warna! emudian didiamkan
selama 15 detik, kemudian dicuci dengan air mengalir dan sisa air disera#
dengan tissue! erakhir diamati dibawah mikrosko#!6ntuk #engecatan negati& disia#kan alat dan bahan yang akan
digunakan! emudian diteteskan dengan 1 tetes nigrosin di#inggir objek
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
16/23
16
PENGECATAN MIKROORGANISME
gelas, lalu diambil satu ose biakan murni dan dicam#ur dengan
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
17/23
17
PENGECATAN MIKROORGANISME
termasuk bakteri 'ram #ositi& maka akan teta# berwarna ungu karena
kom#leks #ersenyawaan kristal iolet$iodium teta# terikat #ada dinding
sel! edangkan jika termasuk bakteri 'ram negati& berwarna #ucat atau
tidak berwarna karena larutan #emucat melarutkan li#id dan
menyebabkan #ori$#ori dinding sel membesar, sehingga meningkatkan
daya larut #ersenyawaan kristal iolet$iodium #ada dinding sel!
elanjutnya ditambahkan dengan a&ranin ('ram D , yang digunakan
sebagai cat #enutu#, sebanyak 1 tetes selama 1 menit lalu dicuci dengan
air mengalir dan sisa airnya disera# dengan tissue! erakhir ditutu#
dengan dek gelas lalu diamati di bawah mikrosko#! )lasan dilakukannya &iksasi #ada #engecatan sederhana dan
#engecatan 'ram yaitu melekatkan sel #ada objek glas, mencegah
mengkerutnya globula #rotein sel, membunuh mikroba karena sel dalamkeadaan mati lebih mudah diwarnai dari#ada sel dalam keadaan hidu#,
mele#askan glanular #rotein menjadi gugus reakti&, mencegah terjadinya
otolisis sel, yaitu #roses #ecahnya sel yang disebabkan oleh enzim yang
ada didalamnya, dan merubah daya ikat warna!"akteri$'ram #ositi& berwarna ungu disebabkan kom#leks zat warna
kristal iolet$yodium teta# di#ertahankan meski#un diberi larutan #emucat,
sedangkan bakteri 'ram$negati& berwarna merah karena kom#leks
tersebut larut sewaktu #emberian larutan #emucat dan kemudian
mengambil zat warna kedua yang berwarna merah!
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
18/23
18
PENGECATAN MIKROORGANISME
BAB &
K-(IMPULA% DA% (ARA%
A. Kesim"ulan
"erdasarkan #raktikum yang telah dilakukan maka da#at
disim#ulkan bahwa *
1! %ada #engecatan sederhana dengan menggunakan cat Metilen blue
diamati bakteri Pseudomonas aeruginosa memiliki bentuk mor&ologi
batang ("acilus dengan warna biru!2! %ada #engecatan negati& dengan menggunakan cat
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
19/23
19
PENGECATAN MIKROORGANISME
>! %ada #engecatan 'ram diamati bakteri #ada sam#el air #ermandian
3ejja memiliki bentuk mor&ologi bulat (coccus dan berwarna merah
menandakan bakteri tersebut masuk golongan 'ram negati&!
B. (aran
ebaiknya asisten lebih te#at waktu hadir #ada saat #raktikum
agar #raktikum berjalan lebih ce#at dan lebih meluangkan waktu untuk
berdiskusi ke#ada asisten mengenai materi tersebut!
DA TAR PU(TAKA
Djide,
arti, )!, !,2015, Mikrobiologi esehatan , )
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
20/23
20
PENGECATAN MIKROORGANISME
LAMPIRA% ). (kema Kerja
a. %engecatan ederhana
sia#kan gelas objek
ratakan 1 ose bakteri diatas gelas objek secara ti#is
&iksasi
tetesi metilen blue 1$2 tetes
biarkan selama 1$2 menit
cuci dengan air mengalir dan dikeringkan
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
21/23
21
PENGECATAN MIKROORGANISME
amati dibawah mikrosko#
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
22/23
22
PENGECATAN MIKROORGANISME
b. %engecatan
-
8/17/2019 Pengecatan Mikrobiologi ISTI (1)
23/23
23
PENGECATAN MIKROORGANISME
c. %engecatan 'ram
sia#kan gelas objek
oleskan bakteri
&iksasi
tambahkan 2$ tetes larutan ristal iolet, dibiarkan selama 1 menit
cuci dengan air mengalir, dikeringkan
tetesi larutan mordan, dibiarakan selama 1 menit
cuci dan keringkan
tetesi larutan alkohol asam, dibiarkan selama 0 detik
cuci dan keringkan
tetesi larutan sa&rinin, dibiarkan selama 0 detik
cuci dan keringkan
amati dibawah mikrosko#
ISTI APRILYANIE .R RAHMA150 2014 0113