perc. 2 protein dan asam amino.pdf

8/18/2019 Perc. 2 Protein dan Asam Amino.pdf

1/6

.

l)cnurrtun

Praktikum

lliokinria

201

4'

.BAGIAN

II

.

PROTEIN

DAN

ASAM

AMINO

'

A.

UfI

SIFAT

SIFAT

PROTEIN

Kelarutan

protein dalam

suatu

cairan

dipengaruhi

oleh

berbagai

faktor,

antara

lain

pada

pH

isolistrik,

kebanyakan

protein

sangat

mudah

untuk

diendapkan.

Sebaliknya

pada

pada

pH

diatas

atau

dibawah

titik

isolistrik

kelarutan

protein

sangat

meningkat.

sementara

itu

kelarutan

protein akan

meningkat

dalam

selang

suhu

tertentu,

yaitu kira-kira

Ooc

-

40.c.

peningkatan

suhu

sampai

di

atas

suhu

50oc

menyebabkan

protein tidak

mantap

dan

mulai

terdenaturasi.

Pada

suhu

rendah,

pelarut organik

yang

bersifat

polar

seperti

alcohol

dan

aseton

dapat

menurunkan

kelarutan

protein dalam

air

karena

zat-zat

tersebut

memiliki

konstanta

dielektrik

cairan

yang

lebih

rendah

dari

air'

Garam

logam

berat

seperti

Ag

Pb

dan

Hg

dapat

berikatan

dengan

protein

membentuk

endapan

logam'protein

yang kuat

sehingga

protein mengalami

denaturasi.

Apabila

terdapat

garam-garam

anorganik

dengan

prosentase

tinggi

dalam

larutan

protein, maka

kelarutan

protein

berkurang

sehingga

mengakibatkan

pengendapan.

Teori

menyebutkan bahwa

sifat

itu

terjadi

karena kemampuan

ion

garam

untuk

terhidrasi

sehingga

berkompetisi

dengan

molekul

protein

untuk

mengikat

air.

TUJUAN

PERCOBAAN

Tujuan

percobaan

ini

adalah

untuk

mengetahui

sifat

keiarutan

dan

denaturasi

yang berkaitan

dengan

protein

albumin.

1.

PENGENDAPANDENGANGARAM.

BAHAN

:

Larutan

Protein

albumin

Larutan

[NH+)zSO+

Reagen

untuk

uji

biuret

:

Pipet

tetes

dan

tabung

reaksi

ALAT


2/6

l)cnuntun

l)raktikLrrn

lliokirnia

20 I

4

PROSEDUR

fenuhkan

10 mL

larutan

protein

dengan

amonium

sulfat.

Untuk

pekerjaan

ini

yang

harus

dilakukan

:

pertama tambahkan

sedikit dari

garam tersebut.

Aduk

hingga

larut

kemudian

tambahkan

sedikit

amonium

sulfat

dan

aduk

secara

terus menerus

sehingga

sedikit

garam tertinggal

(tidak

larut)

apabila

larutan telah

jenuh,

kemudian

saring.

Uji

kelarutan

dari

endapan

di dalam

air dan uji

endapan

dengan

reagen Millon,

sedangkan

filtratnya

dengan

uji

Biuret'

2.

Ulr KOAGULASI

Bahan : asam asetat

1

M

Reagen

Millon

Alat

: Pipet tetes

Tabung

reaksi

Prosedur

Tambahkan

2 tetes

asam

asetat

1

M kedalam

5 ml. Larutan

protein

letakkan

tabung

reaksi

dalam

air

mendidih

selama

5 menit.

Ambil

endapan

dengan

batang

pengaduk.

Uji

kelarutan

endapan

di dalam

air

dan

uji

endapan

dengan

reagen

Millon,

Pertanyaan

:

1,

Mengapa

ditambahkan

asam?

2.

Protein

apa

yang

menggumpal

pada

saat

pendidihan?

3.

PENGENDAPANDENGANATKOHOL

Perhatikan

tabel

berikut

dan ikuti

petunjuk

di dalam tabel

;

Tabung

1

2

3

Larutan

albumin

HCIO,l

M

NaOH

0,1

M

Buffer

asetat

pH

Etil Alkohol9So/o

5ml

Lml

6ml

5ml

1-

ml

6ml

5ml

1ml

6ml

Pertanyaan

1.

Tabung-tabung

mana

yang

menunjukkan

protein

tidak

larut?

2.

f

elaskan

mengapa

keadaan

tsb dapat

teriadi?

larutan

protein

air

pipet

ukur

5

ml


3/6

l)enuntun

Praktikum

lliokimia 20 l4

4.

DENATURASI PROTEIN

Bahan

: larutan albumin

HCI

0,1

M

NaOH 0,1

M

Prosedur:

Tabung

1 2

3

Larutan albumin

HCIO,l

M

NaOH

0,1

M

Buffer

asetat

pH

= 4

5ml

1ml

5ml

1ml

5ml

1ml

Tempatkan ketiga tabung

dalam

air

mendidih

selama

15 menit

dan didinginkan

I

l

dalam temperatur kamar.

Pada tabung mana

yang

kelihatan mengendap.

Untuk

tabung

1

dan

2

tambahkan 10

ml

buffer

asetat

pH

4.

Tuliskan hasilnya.

Pertanyaan:

1. Sifat fisik

apa

yang

mempengartrhi

kelarutan

protein

dalam

percobaan

ini

2. Mengapa

perlu

dilakukan

pemanasan?

3.

Bandingkan

hasil

perlakuan pertama

dan

kedua

pada

larutan

protein,

apa

kesimpulan

anda?

4. Apakah

ada

metode

lain

yang

di

gunakan

untuk

denaturasi

protein

5.

Perubahan

kimia

apa

yang

berhubungan

dengan

denaturasi

telur

B.

Uii sifat-sifat

ionik

asam amino

.

Suatu

protein pada

umumn)'a

mengandung

sejumlah

asam

amino

bermuatan

positif (basal

dan sejumlah

lagi

yang

bermuatan

negatif

(asamJ,

tergantung

pada

pH

larutan dan

banyaknya asam amino basa atau

asam.

Atas

dasar tersebut

masing-

masing

asam

amino akan

memiliki

daerah kapasitas

buffer

dan

nilai

pKa-nya masing-

masing

bila dititrasi dengan

larutan

basa.

Perhatikan dan

isilah

tabel

berikut :

Volume

asam

HCI 0,5

[mL)

pH

Sampel

[a)

Blanko

[b)

Cr

=

a'b


4/6

Pcnuntun

l)raktikuln

lliokimia 20 I 4

Volume basa

NaOH

0,5

(mL)

pH

Sampel

(xJ

Blanko

(y)

Cz

=

x-y

Pertanyaan

:

1. Buatlah

kurva titrasi

di

atas

dengan memetakan

Ci dan

Cz terhadap

pH

2. Apa

perbedaan

kurva Cr

dan Cz?

3. Apa

kesimpulan anda?

C. PENENTUAN

KADAR

PROTEIN

DALAM SAMPEL DENGAN

METODE BIURET

TEORI

Penentuan protein

secara

biuret

berdasarkan atas

pengukuran

serapan

cahaya

oleh

ikatan

kompleks

yang

warnanya

ungu. Hal ini terjadi

apa bila

protein

bereaksi

dengan

ion tembaga dalam

lingkungan

alkali

TUJUAN

'1,.

Untuk

mengetahui

prinsip

pengukuran kadar

protein

sampel dengan metode

Biuret

2.

Untuk

mengetahui

kadar

protein

dalam

sampel

BAHAN

Reagen

Biuret : larutan

1,,5

g

(CuSO+SHzO)

dan

6

gram

garam

rochelle

(NaKC+Oo.O)

kedalam

500 mL

air

kedalam labu

takar

1 L.

Kemudian

tambahkan

300

ml NaOH

10%

sambil dikocok

-

kocok lalu tambahkan

air

hingga tamda

batas.

Apabila

pembuatan

kurang

baik

dapat

terjadi

endapan

hitam

atau merah.

Reagen

demikian ini

tidak

dapat dipakai,

Larutan

standar

protein

:

buatlah larutan

standar serum

albumin murni

atau

kasein

dalam air dalam

kadar

10

mg/ml.

Untuk

mudah

larutnya

tambahkan

beberapa tetes

NaOH

3ol0.

Alat :

Pipet

tetes

tabung reaksi

Labu

takar

spektronik

2 D


5/6

l)enuntun

Praktikum

Iliokimia

20

I

4

Prosedur

:

pipet ke

dalam tabung

reaksi L

ml

larutan

protein

yang

mengandung

1-10

mg/ml

protein.

Tambahkan

4

ml

larutan

reagen

biuret.

Kocok

dan

diamkan

selama

30

menit

padasunukamar.Bacaserapannyapadapanjanggelombang540nm.Untukblanko

dipakaicampuranlmlairdan4mlreagenbiuretyangjugadidiamkanselama30

menitpadasuhukamar'HukumLambertBeerberlakuuntuklarutan-larutanprotein

antara

l

dan

10

mg/ml.

Pereaksi

Sample

yang

digunakan

adalah

telur,

tahu'

bakso'

tepung

terlgu'

Tugas

Can

PertanYaan

l.Tentukanpanjanggelombangmaksimumuntukpengukuransampeldengan

sPektrofotometer

Z.

Buatlah

kurva

standar

dan

tetapkan

protein

larutan

yang diberikan'

3.

Berikan

penjelasan

tentang

hukum

Lambert

Beer'

4. Senyawa

apa

yang dapat

mengganggu

cara

Biuret

seperti

diatas

5.

Tuliskan

reaksi

Biuret

dengan

larutan

protein

Uii

Warna

Protein

Uii

Biuret

Ambil

3

ml

larutan

protein

ditambah

1

ml

NaOH

40%'

Tambahkan

bertetes-tetes

larutan

cuso+

0,50/o

sehingga

terjadi warna

merah muda atau ungu'

Intensitas

warna

menunjukkan

jumlah

ikatan

peptide

dalam

sampel'

Uii

XantoProtein

Ambil

3

ml

larutan

protein

ditambah

1

ml

HNO3

pekat'

Panaskan

campuran

tsb

dan

laruta-r

meniadi

kuning.

Dinginkan

kemudian

tambahkan

ammonia

hingga

warnanya

berubah

menjadi

jingga'

Nomor

Tabung

Biuret

0,4

mL

i

0,6

mL


6/6

Penuntun

Praktikunt

lliokirnia

20

I

4

Uii

Ninhidrin

Atur

pH

dari larutan

protein

0,5%o

sampai

pH

7.

Ambil

1

ml

larutan

dan

tambahkan

L0

tetes

larutan

Ninhidrin

0,2o/o. Panaskan

campuran

pada

suhu

100"C

selama 10 menit.

Amati

perubahan

warna

yang

teriadi.

Uii

Millon

2

ml

larutan

protein

ditambah

1 ml

pereaksi

merkurisulfat.

Panaskan campuran,

mungkin

teriadi

endapan kuning.

Dinginkan

dengan

air lalu

tambahkan

1 tetes

larutan NaNOz

1.%.

Panaskan

lagi

endapan

atau

larutannya

amenjadi

merah.

Uii Hopkins-Cole

1 ml larutan

protein

ditambah

1

tetes

larutan

formaldehid

encer

kemudian

ditambah

1 tetes

pereaksi

merkurisulfat.

Campuran

tsb

kemudian

ditambah 1

ml asam

sulfat

pekat

melalui dinding

tabung

reaksi

yang

dimiringkan

sehingga

terbentuk dua

lapisan. Pada biddang

batas terlihat

adanya

cincin

ungu.

fika

digojog maka

seluruh

larutan

menjadi

ungu.

Hidrolisis

Protein

dan

Uii Adanya

Belerang

1

ml larutan

protein

ditambah

L ml larutan

NaOH 40% dipanaskan selama 1 menit.

Tambahkan 1

tetes

Pb-asetat akkan

terjadi

warna hitam

karena

terjadinya

endapan

PbS.

perc. 2 protein dan asam amino.pdf

Documents