percorso multimediale il seguente documento illustra le tecniche per il rilievo ed il conteggio di...
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Percorso multimediale
Il seguente documento illustra le tecniche per il rilievo ed il conteggio di indici microbiologici in acque minerali con la tecnica delle membrane
filtranti.Le analisi sono condotte sia utilizzando terreni
tradizionali che con l’impiego dei più recenti mezzi cromo-fluorogenici
(one step).
Le ricerche descritte riguardano i seguenti parametri
E. ColiEnterococchi intestinali
Parte prima
E. Coli
tecnica two steps
Clicca per avviarel’animazione
16 ore24 ore> 48 ore
Dinamiche di crescita – AT7+TTC
Quale tradizionale terreno two steps è raffigurato nella foto?
AT7+TTC
m-FC
NO
Questo è m-FC
Isolamento su AT7+TTCIndica le colonie target
target
Non target TTC positiva
Non target TTC positiva
Non target parziale inibizione
target
target
target
Non target TTC negativa
target
OK!!!
AT7+TTC è un tradizionale terreno two steps, rileva fermentazione lattosio associata a termotolleranza.
Il target in uscita è “coliformi fecali”.La normativa impone il rilievo di E. coli, quindi saranno
necessarie prove di conferma
Procediamoche cosa prevede la prossima fase?
Clicca sull'immagine giusta
Trapianto in BBVBL con incubazione a 37/44°C Semina in Mac Conkey agar
NOOK
Clicca sull'immagine giustaIl percorso di conferma adesso prevede:
Sottocoltura in MCA Test biochimici
OK
NO
Nella prossima slide dovrai selezionare i test
differenziali corretti
Test di conferma E. coliTest differenziali
OK!!!
Non necessario
Seleziona dal seguente elenco i test necessari
Indolo
Catalasi
Ossidasi (negativo)
Solfuro (negativo)
Solfuro (positivo)
Ornitina decarbossilasi
OK!!!
OK!!!
NO!!!
OK!!!
Test differenziali
Ornitina decarbossilasiSIM
Test differenziali
Codifica numericaENTEROTUBE II
E. Coli e coliformi totali
Tecnica one step
procedi
I terreni one step per E. coli e coliformi totaliLa foto mostra 2 colonie target b-GUD positive, e numerose colonie b-GAL positive
quale terreno è rappresentato in figura?
Chromatic DETECTION
ECX-GLUC
TBX
NO, su questo terreno non è rilevata la b-GUD
NO questo terreno non rileva la b-GAL
NO questo terreno non rileva la b-GAL
Chromagar ECC
OK!!!
Dettagli Chromagar ECCselezionare le proprietà
Contiene un b-glucuronide(detector per b-GUD)
Violetto etile
Contiene un b-galattoside(detector per b-GAL)
Nella versione standard non è selettivo
OK!!!
NO!!!Fermentazione lattosio
NO!!!
OK!!!
OK!!!
Sali biliari n°3 NO!!!
selettive
differenziali
I terreni one step per E. coli e coliformi totaliClicca sul pulsante, visualizza le foto a luce naturale ed UV che mostrano 3 colonie targetb-GAL positive e b-GUD positive, di quale terreno fluoro-cromogenico si tratta?
Chromagar ECC
ECX-GLUC
TBX
NO, su questo terreno i b-GUD sviluppano colonie blu-verde ed i b-GAL colonie color malva
NO questo terreno non rileva la b-GAL
NO questo terreno non rileva la b-GAL
C-EC agar
OK!!!
Luce naturale/UV
I terreni one step per E. coli
La foto mostra 2 colonie target b-GUD positive, quale terreno è rappresentato in figura?
Chromagar ORIENTATION
M-FC
TBX
NO, questo terreno non rileva la b-GUD
NO, terreno two steps
OK!!!
I terreni one step per E. coliECX-Gluc
La foto mostra varie colonie target, rispondi alle domande
Quale attività enzimatica evidenziano?
Quale colore mostrano le colonie target?
Questo terreno permette di rilevare tutti gli E. coli?
Sono b-GUD positive
Blu-verde
No, solo quelli tipici (b-GUD positivi)
94-97%
Conferme dirette
INDOLO diretto su C-EC agar
INDOLO su tradizionale TW (in alto)e su ECX-Gluc (a dx)
Visibile a sx il test eseguito su TBX (caratteristica non specifica per questo terreno)
Parte seconda
Enterococchi intestinali
tecnica two steps
Quale tradizionale terreno two steps è raffigurato nella foto?Clicca sul tag giusto
S&B
KF
BEA
NO
Questo è S&B
NO
Questo è BEA
Isolamento su KFIdentifica le colonie target e non target
NON TARGET
TARGETTARGET
NON TARGET
NON TARGET
NON TARGET
NON TARGET
TARGET
OK!!!
Isolamento su KFIndicare le colonie target
TARGET
TARGET
TARGET
TARGET
NON TARGET
TARGET
TARGET?
SUGGERIMENTOLe colonie gialle con centro arancio mostrano minore capacità di ridurre il
TTC, tuttavia devono essere ritenute target
TARGET
Dettagli KFselezionare le proprietà
Bile
Sodio azide
Riduzione TTC
Esculina
NO!!!
OK!!!Fermentazione maltosio
OK!!!
NO!!!
OK!!!
b-Glucuronidasi NO!!!
selettive
differenziali
Conferme su BEA
Conferma in piastra
Esempio di conferma diretta
Questo è BEAL’idrolisi dell’esculina è resa evidente mediante l’annerimento mostrato sul retro della piastra.Clicca sul pulsante per alternare la vista fronte /retro
Fronte/retro
Conferma direttaaltro esempio
Dettagli BEAselezionare le proprietà selettive
Sodio azide
Bile 40%
Riduzione TTC
Idrolisi esculina
OK!!!
NO!!!Fermentazione maltosio
OK!!!
NO!!!
NO!!!
b-GAL NO!!!
Dettagli BEAselezionare le proprietà differenziali
Fermentazione lattosio
Bile 40%
Riduzione TTC
Idrolisi esculina
NO!!!
NO!!!Fermentazione maltosio
NO!!!
OK!!!
NO!!!
b-GAL NO!!!
Il percorso di conferma adesso prevede:
Test sierologiciTest fisiologici
Clicca sull'immagine giusta
NOOK
Test di conferma Enterococchi
SBAGLIATO
OK!!!
Seleziona dal seguente elenco i test necessari
Motilità
Catalasi
Ossidasi
Crescita a 45°C
Alotolleranza (BHI NaCl 6,5%)
Toll. 40% bile
SBAGLIATO
OK!!!
OK!!!
OK!!!
Alotolleranza (BHI NaCl 6,5%)Termoresistenza (BHI a 45°C 24/48 h
PYR
Enterococchiintestinali
Tecnica one step
procedi
E.C.O.A.GAREnterococcus chromogenic Ottaviani & Agosti
E.C.O.A.GAREnterococcus chromogenic Ottaviani & Agosti
La foto mostra varie tipologie di colonie, individua quelle target
Rosa-rosso
Bianco-grigio
Turchese-azzurro
NO
NO
OK!!!
Percorsi didattici alternativi
Il rilievo dei target E. coli, coliformi totali ed enterococchi intestinali può essere eseguito anche con altri terreni di
ultima generazione.Tali mezzi, sebbene progettati per rilevare gli UTI (gli organismi responsabili di infezioni del tratto genito-
urinario), sono utilizzati a scopo didattico per ricercare i suddetti target anche in matrici alimentari e nelle acque.
Chromagar orientation
Chromatic detection
Chromagar orientationLa foto mostra colonie target di E. coli, coliformi totali ed enterococchi intestinali.
Individua le varie tipologie e verifica la tua risposta cliccando sui pulsanti corrispondenti
E. coli
Enterococchi
Coliformi totali
Colonie rosa-rosso magenta
Colonie turchese
Blu-blu metallico
Altri
Bianco-giallo
Chromagar orientation
E. coli
Coliformi totali
Coliformi totali
Enterococchi
Enterococchi
Coliformi totali
Individua le colonie target
Chromatic detection Clicca sulle immagini per una descrizione
Enterococchi
Coliformi totali (in blu) e non target (bianche)
Mix E. coli e coliformi totali
Chromatic detectiondettagli
Grazie e buon lavoro
Tutti i contenuti inclusi nella presentazione sono stati prodotti ed elaborati presso ITIS “G. Galilei “ Livorno dai docenti del gruppo disciplinare di biologia con il
supporti degli studenti delle classi quinte BIO 2011