pewarnaan
TRANSCRIPT
![Page 1: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/1.jpg)
PEWARNAAN
Cherry Siregar, dr, MKes
![Page 2: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/2.jpg)
Pewarnaan
bakteri : Transparan Morfologi sulit dilihat
Pewarnaan morfologi bakteri mudah dilihat Mikroskop ukuran, bentuk, penataan dan
beberapa struktur
identifikasi bakteri
![Page 3: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/3.jpg)
1. pewarnaan sederhana2. pewarnaan diferensial
- pewarnaan gram- pewarnaan tahan asam
3. pewarnaan khusus- pewarnaan endospora- pewarnaan kapsul- pewarnaan flagella
![Page 4: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/4.jpg)
Pembuatan Hapusan Bakteri
Persiapkan gelas objek Beri label dengan pensil kaca atau spidol Membuat hapusan Fiksasi
![Page 5: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/5.jpg)
GUNA FIKSASI :
Mempertahankan bentuk & ukuranMembunuh mikroorganismeMerekatkan sediaan ke permukaan
kaca slide supaya tidak mudah hanyut sewaktu digenangi dengan bahan cat
![Page 6: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/6.jpg)
Prosedur pembuatan hapusan bakteri
1. Bersihkan gelas objek agar tidak berlemak, layang kan diatas nyala api
2. Beri label dengan pensil kaca atau spidol
3. Teteskan satu tetes aquadest atau garam faal pada gelas objek
4. Ambil sediaan yang hendak diwarnai dengan menggunakan sengkelit.
![Page 7: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/7.jpg)
5. Suspensikan sediaan tersebut pada tetesan aquadest pada gelas objek lalu sebarkan dengan gerakan memutar agar rata. Luas sediaan 1-2 cm2
6. Sediaan dibiarkan mengering di udara,
7. Lewatkan diatas nyala api sebanyak 3 kali
![Page 8: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/8.jpg)
![Page 9: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/10.jpg)
Heat Fixation
![Page 11: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/11.jpg)
1. Pewarnaan sederhana
satu macam zat pewarna ( single dye )
methylen blue, crystal violet, safranain atau fuchsin
Memberikan informasi berupa:
- morfologi
- penataan sel.
![Page 12: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/12.jpg)
Cell Arrangements:
![Page 13: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/13.jpg)
Prosedur pewarnaan sederhana
1. Lakukan fiksasi dari koloni atau dari sediaan langsung
2. Lumuri dengan zat warna methylen blue selama 30-60 detik
3. Cuci dengan air
4. Keringkan di udara.
5. Sediaan siap untuk dilihat dibawah mikroskop.
![Page 14: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/14.jpg)
![Page 15: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/15.jpg)
2. Pewarnaan diferensial
![Page 16: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/16.jpg)
Pewarnaan gram
Dr Hans Christian Gram (1884) Bakteri dibedakan dalam 2 golongan:
1. Bakteri gram positif : ungu
2. Bakteri gram negatif : merah
Komposisi kimiawi dinding sel bakteri
![Page 17: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/17.jpg)
Thick peptidoglycan
90% peptidoglycan Teichoic acids 1 layer Not many
polysaccharides In acid-fast cells,
contains mycolic acid
Gram-positive cell walls Gram-negative cell walls
• Thin peptidoglycan• 5-10% peptidoglycan• No teichoic acids• 3 layers• Outer membrane has
lipids, polysaccharides
• No acid- fast cells (mycolic acid)
Karakteristik dinding sel bakteri gram positif dan gram negatif
![Page 18: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/19.jpg)
Bakteri gram positif Ikatan warna violet dengan jodium tidak dapat dilepaskan dengan peluntur ( alkohol)
Bakti gram negatf ikatan tersebut terlepas sehingga protoplasma mengambil zat warna counterstain ( safranin)
ungu
merah
![Page 20: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/20.jpg)
Metode pewarnaan gram
![Page 21: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/21.jpg)
PROSEDUR KERJA
Buat sediaan hapusan Tuang zat warna gentian violet menggenangi
sediaan selama 5 menit Cuci dengan air kran 5-10 detik Genangi dengan larutan lugol 1 menit Cuci dengan air kran 5-10 detik Sediaan dilunturkan dengan aseton alcohol
selama 10 detik Segera dicuci dengan air kran Genangi dengan Fuchsin air selama 1-2 menit Cuci kembali dengan air kran, lalu keringkan. Siap
untuk diperiksa
![Page 22: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/22.jpg)
Prosedur Pewarnaan Gram
![Page 23: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/23.jpg)
Hasil pewarnaan Gram
Gram positive coccus Gram negative bacilliStaphylococcus Spp E.coli
![Page 24: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/24.jpg)
Gram positive bacteria 1. Cocci
- Staphylococcus aureus- Streptococcus pyogenes- Streptococcus pneumoniae- Gafkya tetragena- Sarcina lutea
2. Rods/basil :- Clostridium tetani- Clostridium botulinum- Bacillus anthracis- Bacillus subtilis- Corynebacterium diphteriae - Bacillus cereus
![Page 25: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/25.jpg)
Gram negative bacteria 1. Cocci
- Neisseria gonorrhoe- Neisseria meningitidis
2. Rods/basil- Escherichia coli- Salmmonella thyposa - Shygella dysentriae- Klebsiella pneumonia- Proteus vulgaris- Haemophylus influenzae- Pseudomonas sp.- Enterobacter sp.
![Page 26: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/26.jpg)
3. Coma
- Vibrio cholerae
- Vibrio parahaemolyticus
4. Spiral
- Treponema pallidum
- Borellia recurentis
- Leptospira icterohaemorrhagic
- Campylobacter jejuni
- Helicobacter pylori
![Page 27: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/27.jpg)
Pewarnaan Bakteri Tahan Asam (BTA)
Umumnya bakteri dapat diwarnai dengan pewarnaan gram
Mycobacterium
- tidak dapat diwarnai dengan pewarnaan gram
- pewarnaan tahan asam
![Page 28: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/28.jpg)
Bakteri Tahan Asam ( BTA) : sukar diwarnai Sekali mengikat pewarna carbol fuchsin
(merah) maka akan mempertahankan warna tersebut walaupun dilunturkan dengan acid alkohol
Pewarnaan :• Ziehl Neelsen• Tan Thiam Hok-Devulder
•Auramine - Rhodamine
![Page 29: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/29.jpg)
Pewarnaan Metode Ziehl Neelsen
![Page 30: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/30.jpg)
Letakkan sediaan dgn bagian hapusan menghadap keatas diatas rak pewarnaan
Genangi seluruh permukaan dengan Carbol fuchsin
1 2
Panaskan sediaan dengan sulut api sampai menguap, diamkan 5 menit
3
Bilas sediaan dengan air mengalir
4
![Page 31: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/31.jpg)
Jangan ada percikan ke sediaan lain
Genangi dengan asam alkohol (dekolorisasi)
5 6
Bilas sediaan dengan air mengalir
7
genangi permukaan sediaan dengan methylene blue 10-20 detik ( counterstaining)
8
![Page 32: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/32.jpg)
ilas sediaan dengan air mengalir
Keringkan sediaan pada rak pengering
9 10
![Page 33: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/33.jpg)
BTA (+)
![Page 34: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/34.jpg)
Spore: hijau Vegetative cell: merah
pewarnaan sporametode Schaeffer-fulton
![Page 35: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/35.jpg)
Pewarnaan spora menurut Schaeffer Fulton
1. Siapkan sediaan yang terfiksasi
2. Genangi dengan larutan MALACHITE GREEN 5%. Panaskan perlahan-lahan,tapi jangan sampai mengering
3. Bilas dengan air keran
4. Genangi dengan SAFRANIN
5. Bilas dengan air keran
6. Keringkan
![Page 36: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/36.jpg)
Pewarnaan kapsulMetode Gins BurriMetode Welch
Metode Hiss Metode Muir
![Page 37: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/37.jpg)
Pewarnaan flagella
• Flagella terlalu halus jika dilihat dengan menggunakan mikroskop cahaya.• Metode: pewarnaan Gray pewarnaan Leifson pewarnaan Leifson dimodifikasi•
![Page 38: PEWARNAAN](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022012301/5571fa2d4979599169917ab2/html5/thumbnails/38.jpg)
Metode pewarnaan Gray dengan memberikan suspensi koloid dari tannic acid salt yang akan mengendap pada flagella sehingga diameter flagella lebih besar dan kemudian diwarnai dengan carbolfuchsin , flagella dapat dilihat dengan mikroskop cahaya.