Slide 1

PEWARNAAN GRAM DAN TAHAN ASAMIBNU KHARISMANG0010095Mengapa perlu mewarnai bakteri?Tanpa pewarnaan, bakteri terlalu transparan sehingga sukar dilihat secara langsung pada mikroskop. Untuk membantu pengamatan morfologi dan sifat-sifat bakteri.Membantu identifikasi bakteri.Pewarnaan BakteriJenis-jenis pewarnaan bakteri yang dikenal adalah:Pewarnaan sederhana, ex:- Carbol fuchsin- Gentian violet- Methylen blue 2. Pewarnaan diferensial, ex:- Pewarnaan Gram - Perwarnaan tahan asamPEWARNAAN GRAMPewarnaan GramPewarnaan Gram menggunakan dua macam zat warna Pewarna I (crystal violet)

Decolorizer (alcohol 90%)

BAKTERI

BAKTERI GRAM (-)

BAKTERI GRAM (+)

Pewarna II (safranin)Pewarna II (safranin)CV- ; CV+ Mordant (kalium iodida)Bakteri yang tahan terhadap peluntur akan mempertahankan pewarna pertama Berwarna ungu-> Gram positifBakteri yang tidak tahan terhadap peluntur akan menyerap pewarna kedua Berwarna merah-> Gram negatif

Prinsip Pewarnaan Gram

Pewarna Pertama:Crystal violet Mordant: Kalium IodidaPeluntur: Alkohol 90% Pewarna Kedua:Safranin Dinding Sel Bakteri Gram (+) dan (-)Bakteri Gram positif: Dinding selnya terdiri dari lapisan peptidoglikan yang lebih tebal (90%)Bakteri Gram negatif: Dinding selnya terdiri dari lapisan peptidoglikan yang tipis (90%). Bakteri Gram (+) memiliki lipid < bakteri Gram (-)Reaksi Gram positif maupun Gram negatif disebabkan oleh perbedaan struktur dinding sel bakteri

Contoh bakteri gram positif-Bentuk coccus: Streptococcus, Staphylococcus, Pneumococcus, Peptococcus-Bentuk batang: Corynobacterium, Bacillus, ClostridiaContoh bakteri gram negatifBentuk coccus: Neisseria, VeilonellaBentuk batang: E. coli, Shigella, Salmonella, Klebsiella, Hemophillus, Pasteurella, Fusobacterium, BrucellaBakteri Gram (+) yang sering terwarnai sebagai Gram (-)???Hasil Pewarnaan Gram

N. gonorrhoeaeStaphylococcus sp.

PEWARNAAN TAHAN ASAMDinding Sel Bakteri Tahan AsamDinding sel kuman tahan asam terdiri dari peptidoglikan, arabinogalaktan, dan lipid (lapisan lilin). 50% dari lapisan lilin ini adalah asam mikolat

Pewarnaan Tahan AsamKandungan lilin yang tinggi->sukar diwarnaiSupaya dapat mewarnai bakteri tahan asam perlu menghilangkan lapisan lilin pada dinding sel: pemanasan (Ziehl Neelsen)Metode Ziehl Neelsen:Zat warna pertama (carbol fuchsin) + pemanasan-> peluntur (HCl dan Alcohol)-> zat warna kedua (methylen blue)

Setelah terwarnai Bakteri tahan asam akan mempertahankan pewarna pertama (merah) dengan sangat kuat dan tahan terhadap asam dan alkoholBakteri tidak tahan asam akan melepaskan pewarna pertama dan mengikat pewarna kedua (biru)Sehingga bakteri terbagi menjadi:Bakteri tahan asam->MerahBakteri tidak tahan asam->Biru

Prosedur Pewarnaan Tahan AsamZIEHL NIELSENPewarna pertama: Fuchsin basis Menghilangkan lipid : pemanasanPeluntur: Alcohol & HCl Pewarna kedua: Methylen Blue

Contoh bakteri tahan asam:Mycobacterium tuberculosisMycobacterium lepraeNocardia spActinomyces spHasil Pewarnaan Bakteri Tahan Asam Metode Ziehl Neelsen

TERIMA KASIH