plagiat merupakan tindakan tidak terpuji - core.ac.uk · dan suspensi liposom yang mengandung...
TRANSCRIPT
PERBANDINGAN KEMAMPUAN PENETRASI MULTIEMULSI A/M/A
DAN SUSPENSI LIPOSOM YANG MENGANDUNG EKSTRAK
METANOL KELOPAK BUNGA ROSELLA (Hibiscus sabdariffa L.)
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Yolana Kwartono
NIM : 118114170
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2015
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
i
PERBANDINGAN KEMAMPUAN PENETRASI MULTIEMULSI A/M/A
DAN SUSPENSI LIPOSOM YANG MENGANDUNG EKSTRAK
METANOL KELOPAK BUNGA ROSELLA (Hibiscus sabdariffa L.)
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Yolana Kwartono
NIM : 118114170
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2015
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Genius is 1% talent dan 99% percent hard work
Albert Einstein
Kupersembahkan skripsi ini untuk...
Tuhan yang selalu memberkati dan memberiku kekuatan serta kesehatan,
Papa Mama dan keluargaku tercinta atas doa, dukungan, dan kasih sayang,
Teman-teman dan sahabatku terkasih,
Serta almamaterku
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji Syukur kepada Tuhan Yesus Kristus dan Bunda Maria berkat kasih
karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian serta penyusunan
skripsi yang berjudul ―Perbandingan Kemampuan Penetrasi Multiemulsi A/M/A
dan Suspensi Liposom yang mengandung Ekstrak Metanol Kelopak Bunga
Rosella (Hibiscus Sabdariffa L.)‖ yang disusun untuk memenuhi persyaratan
memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Farmasi (S.Farm) dapat
dikerjakan dengan baik dan lancar.
Proses pelaksanaan skripsi ini tidak akan berhasil tanpa adanya bantuan
dan dukungan dari berbagai pihak, sehingga pada kesempatan ini penulis
mengucapkan terima kasih kepada :
1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah mengijinkan
penulis menjalankan pembelajaran selama masa studi.
2. Prof. Dr. Sri Noegrohati, Apt. selaku Dosen Pembimbing Skripsi yang telah
memberikan pengarahan, bantuan, tuntutan, kritik dan saran sejak awal
penelitian hingga akhir penyusunan skripsi ini.
3. Dr. Erna Tri Wulandari, Apt. dan Beti Pudyastuti, M.Sc., Apt. selaku dosen
penguji atas segala masukan dan bimbingannya.
4. Agustina Setiawati, M.Sc., Apt. selaku Kepala Penanggungjawab
Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam
penggunaan fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian ini.
5. Pak Sanjaya atas waktu dan segala ilmu yang diberikan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
6. Pak Mus, Pak Kayat, Pak Heru, Pak Wagiran, Pak Parlan, Pak Kunto, Pak
Bima, dan Pak Bimo selaku laboran Laboratorium Fakultas Farmasi yang
telah membantu penulis dalam proses pelaksanaan penelitian di laboratorium.
7. Keluargaku tercinta terutama Papa dan Mama yang selalu memberi motivasi,
perhatian, dukungan dan doa demi kelancaran studi dan penyusunan naskah
skripsi.
8. Partner terkasih Ko Jimmy Pieter Chua atas doa, motivasi, dukungan, nasihat,
yang diberikan selama penulis menjalani studi
9. Teman seperjuangan skripsi dan sahabat : Eva Mayangsari, Me Li untuk
kesabaran, kebersamaan, dan suka dukanya
10. Teman sepermainan Dara Prabandari, Monita Natalia Siregar atas keceriaan,
kebersamaan, suka duka, semangat, motivasi, doa, dukungan, dan nasihat
yang diberikan selama peneliti menjalani studi
11. Seluruh dosen dan teman-teman FST-B 2011, serta seluruh angkatan 2011
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
12. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu sehingga penulis
dapat menyelesaikan tugas akhir ini dengan baik.
Penulis menyadari bahwa semakin banyak kekurangan dalam penelitian
dan penyusunan skripsi ini mengingat keterbatasan dan kemampuan penulis,
sehingga sangat diharapkan adanya masukan dan saran yang membangun untuk
penulis. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca dan berguna bagi
dunia ilmu pengetahuan
Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ............................................................................................ i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI BERJUDUL ......................................... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .......................................................................... iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................... v
LEMBAR PENYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ..... vi
PRAKATA ................................................................................................... vii
DAFTAR ISI .................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ............................................................................................. xii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xiii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xv
INTISARI .................................................................................................. xvi
ABSTRACT ................................................................................................. xvii
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 1
PENDAHULUAN ............................................................................................... 1
A. Latar Belakang .............................................................................................. 1
1. Perumusan masalah .................................................................................. 4
2. Keaslian penelitian ................................................................................... 4
3. Manfaat .................................................................................................... 5
B. Tujuan Penelitian ............................................................................................ 5
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ................................................................... 7
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
A. Rosella .......................................................................................................... 7
B. Antosianin .................................................................................................... 9
C. Multiemulsi ................................................................................................ 13
D. Monografi Bahan Tambahan ....................................................................... 17
E. Suspensi Liposom ....................................................................................... 23
F. Kulit ........................................................................................................... 27
G. Sinar Matahari ............................................................................................ 30
H. Enhancer .................................................................................................... 32
I. Uji Penetrasi In Vitro .................................................................................. 34
J. Spektrofotometri Derivatif .......................................................................... 36
K. Landasan Teori ........................................................................................... 38
L. Hipotesis ..................................................................................................... 40
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ........................................................... 41
A. Jenis Penelitian ........................................................................................... 41
B. Variabel Penelitian ...................................................................................... 41
C. Definisi Operasional ................................................................................... 42
D. Bahan Penelitian ......................................................................................... 43
E. Alat Penelitian ............................................................................................ 44
F. Tata Cara Penelitian .................................................................................... 44
G. Analisis Hasil.............................................................................................. 56
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................. 58
A. Penetapan Bobot Tetap Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella ............... 59
B. Uji Penetrasi Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella ............................... 59
C. Optimasi Formula Multiemulsi A/M/A ....................................................... 61
D. Pembuatan Multiemulsi A/M/A .................................................................. 67
E. Evaluasi Multiemulsi A/M/A ...................................................................... 69
F. Evaluasi Sediaan Suspensi Liposom ............................................................ 74
G. Kurva Baku Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella ................................. 76
H. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan
multiemulsi dan suspensi liposom ............................................................... 80
I. Statistik Uji T penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom ................................................... 91
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 93
A. Kesimpulan ................................................................................................. 93
B. Saran ................................................................................................... 93
LAMPIRAN ................................................................................................... 99
BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................... 113
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Klasifikasi emulgator .................................................................. 17
Tabel 2. Variabel untuk tiap uji ................................................................ 47
Tabel 3. Formula optimum emulsi primer A/M ........................................ 66
Tabel 4. Formula optimum multiemulsi A/M/A ........................................ 67
Tabel 5. Perbandingan koefisien permeabilitas beberapa spesies
terhadap air ................................................................................. 81
Tabel 6. Uji F standar deviasi suspensi liposom dan multiemulsi
A/M/A ........................................................................................ 92
Tabel 7. Uji signifikasi rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak
bunga rosella yang terpenetrasi kekulit dalam suspensi
liposom dan multiemulsi A/M/A ................................................. 92
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Kelopak bunga rosella .................................................................. 8
Gambar 2. Struktur utama antosianin ........................................................... 10
Gambar 3. Perubahan struktur kimia antosianin terhadap pH ....................... 11
Gambar 4. Gambaran skema dan mikroskop multiemulsi A/M/A ................. 13
Gambar 5. Struktur Tween 80 ...................................................................... 18
Gambar 6. Struktur Span 80 ......................................................................... 19
Gambar 7. Struktur setil alkohol................................................................... 20
Gambar 8. Struktur dimethicone ................................................................... 21
Gambar 9. Struktur xanthan gum ................................................................. 22
Gambar 10. Ilustrasi pembentukan liposom .................................................... 24
Gambar 11. Klasifikasi liposom berdasarkan ukuran dan jumlah bilayer ........ 25
Gambar 12. Mekanisme pelepasan obat dari liposom ..................................... 26
Gambar 13. Struktur dan fungsi kulit ............................................................. 27
Gambar 14. Jalur umum zat aktif dalam menembus kulit ............................... 29
Gambar 15. Sel difusi Franz .......................................................................... 34
Gambar 16. Penentuan gradien dari spektrum orde 0 ...................................... 37
Gambar 17. Spektrogram derivatif orde 0 hingga 5 ........................................ 38
Gambar 18. Rangkaian alat sel difusi Franz ................................................... 47
Gambar 19. Kurva uji penetrasi ekstrak rosella .............................................. 60
Gambar 20. Organoleptis multiemulsi A/M/A ................................................ 69
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
Gambar 21. Pengamatan uji kelarutan ............................................................ 71
Gambar 22. Foto partikel emulsi primer A/M dan multiemulsi A/M/A ........... 72
Gambar 23. Hasil uji mekanik (sentrifugasi) .................................................. 73
Gambar 24. Hasil uji volume creaming 28 hari setelah pembuatan ................. 74
Gambar 25. Organoleptis suspensi liposom .................................................... 75
Gambar 26. Foto partikel suspensi liposom (perbesaran 40x) ......................... 76
Gambar 27. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
metanol ....................................................................................... 77
Gambar 28. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
aquadest ..................................................................................... 79
Gambar 29. Hubungan dermal absorption orto-fenilfenol dengan waktu
pada beberapa jenis kulit ............................................................. 82
Gambar 30. Kurva multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada
kompartemen donor .................................................................... 84
Gambar 31. Kurva sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada
kompartemen akseptor ................................................................ 86
Gambar 32. Kurva sediaan mutiemulsi A/M/A dan suspensi liposom yang
tertahan di dalam kulit ................................................................ 89
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Spektrum antosianin pada ekstrak metanol kelopak bunga
rosella (Hibiscus sabdariffa L.) ................................................. 100
Lampiran 2. Penetapan bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella
(Hibiscus sabdariffa L.) ............................................................ 101
Lampiran 3. Data hasil optimasi emulsi primer A/M ..................................... 102
Lampiran 4. Data hasil optimasi multiemulsi ................................................ 103
Lampiran 5. Perhitungan mikromeritik ......................................................... 104
Lampiran 6. Data Derivated Kurva Baku Ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam metanol ............................................................... 106
Lampiran 7. Data Derivated Kurva Baku Ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam aquadest .............................................................. 107
Lampiran 8. Jumlah larutan ekstrak metanol kelopak bunga rosella Yang
Terpenetrasi Ke dalam Kulit ..................................................... 108
Lampiran 9. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
multiemulsi A/M/A yang terpenetrasi ke dalam kulit ................ 109
Lampiran 10. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam suspensi
liposom yang terpenetrasi ke dalam kulit .................................. 109
Lampiran 11. Uji T untuk jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang
tertahan dalam kulit .................................................................. 110
Lampiran 12. Spektrum derivatif kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam pelarut aquadest .................................................. 112
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
INTISARI
Rosella merupakan tanaman yang banyak mengandung antosianin yang
bermanfaat sebagai antioksidan. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dapat
masuk ke dalam kulit namun kemampuan penetrasinya bervariasi, sehingga
diperlukan vesikel berupa multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom guna
menjaga kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam
kulit. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui sifat fisis dan stabilitas fisis
sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella hasil optimasi
formula dan mengetahui apakah sediaan multiemulsi A/M/A mampu memberikan
kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam kulit yang
lebih baik dibandingkan sediaan suspensi liposom
Penelitian ini menggunakan rancangan eksperimental murni yang bersifat
eksploratif yaitu mencari formula multiemulsi A/M/A yang optimal yang
ditunjukkan dengan sifat fisis dan stabilitas fisis. Kemampuan penetrasi ekstrak
metanol kelopak bunga rosella dianalisis dengan melakukan uji penetrasi in vitro
menggunakan metode sel difusi Franz. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella yang terpenetrasi ke dalam kulit diukur dengan menggunakan metode
spektrofotometri UV-VIS derivatif.
Hasil penelitian menunjukkan formula multiemulsi A/M/A yang optimal
dan analisis statistik menunjukkan bahwa ekstrak metanol kelopak bunga rosella
dalam multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom memberikan kemampuan
penetrasi yang berbeda signifikan.
Kata kunci: ekstrak metanol kelopak bunga rosella, multiemulsi, suspensi
liposom, sel difusi Franz
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvii
ABSTRACT
Roselle (Hibiscus sabdariffa L.) is a plant that contains anthocyanins that
are useful as an antioxidant. Methanol extract of roselle flower petals can
penetrate into the skin but the penetration rate is not constant, so it necessary to
form in multi-emulsion W/O/W dan the suspension of liposomes in order to keep
penetration rate of methanol extract of roselle flower petals into the skin. The aim
of this study were to get the optimal formula of multi-emulsion dan compare the
penetration capability of the methanol extract of roselle flower petals multi-
emulsion W/O/W dan the suspension of liposomes into the skin.
This study is an experimental design that is purely explorative study to
get an optimum formula of multi-emulsion W/O/W indicated with optimal
physical properties dan stability. Penetration capability of methanol extract of
roselle flower petals was analyzed by conducting in vitro penetration test using
Franz diffusion cell method. The amount of roselle extract which was penetrated
into the skin was measured using UV-VIS spectrophotometry derivatives.
The results were obtained an optimal multi-emulsion formula W/O/W
optimal dan statistical analysis showed that the penetration capability of roselle
extract in multiemulsi W/O/W and the suspension of liposomes differ
significantly.
Key word: methanol extract of roselle flower petals, multi-emulsion, liposom
suspension, Franz diffusion cell
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Indonesia merupakan negara beriklim tropis yang terletak di sepanjang
garis ekuator. Sebagai negara tropis, Indonesia mendapatkan intensitas sinar
matahari yang lebih besar. Penyinaran sinar matahari secara terus menerus dapat
berdampak buruk bagi kulit. Sinar matahari yang masuk ke bumi dan mendapat
perhatian khusus yaitu sinar ultraviolet (UV). Sinar UV yang masuk ke bumi
dibagi menjadi dua yaitu sinar UV-A merupakan penyebab radiasi paling tinggi
dan dapat menembus kulit sampai bagian dermis sehingga dapat merusak sel yang
berada di dalamnya dan sinar UV B juga berpotensi merusak kulit namun hanya
sampai lapisan luar kulit (epidermis). Adanya radiasi sinar UV ini maka akan
memicu terbentuknya radikal bebas dalam tubuh terutama kulit sehingga dapat
berdampak buruk bagi kulit yaitu pigmentasi kulit, kerutan (penuaan dini),
kerusakan kulit, serta kanker kulit. Adanya kosmetik yang bersifat antioksidan
diharapkan mampu mencegah terbentuknya Reactive Oxygen Species (ROS) di
dalam kulit terutama pada lapisan epidermis dan dermis.
Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) merupakan tanaman tropis yang secara
luas terdapat di Indonesia dan sejak awal 1970-an, tanaman ini mendapat banyak
perhatian khusus karena berpotensi sebagai sumber pewarna makanan alami,
farmasi, dan kometik (Suzery, Lestari, dan Cahyono, 2010). Kelopak bunga
rosella mengandung sumber penting seperti vitamin, mineral, dan komponen
bioaktif seperti asam organik, phytosterol, dan polifenol, beberapa diantaranya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
memiliki efek antioksidan. Senyawa fenolik yang berperan penting dalam kelopak
bunga rosella yaitu antosianin yang memberikan pigmen warna merah pada
kelopak bunga rosella (Rocha, Bonnlaender, Sievers, Pischel, Heinrich, 2014).
Antosianin merupakan senyawa turunan kation flavilium di mana
terdapat kekurangan elektron pada inti struktur sehingga sangat reaktif dan
menyebabkan antosianin mudah terdegradasi. Oksigen, cahaya, dan suhu
diketahui dapat menyebabkan rusaknya antosianin serta perubahan warna pada
antosinin sangat berpengaruh pada berbagai faktor seperti pH, suhu,
kopigmentasi, asam askorbat, dan enzim (Hui dan Sherkat, 2005). Senyawa
fenolik inilah yang berkontribusi dalam memberikan sifat antioksidan. Menurut
penelitian yang dilakukan oleh Pinsuwan, Amnuaikit, Ungphaiboon, dan Itharat
(2010), kelopak bunga rosella memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50
sebesar 8,45 ± 0,35 mg/ml.
Kelopak bunga rosella merupakan sumber antosianin yang berfungsi
sebagai antioksidan guna menanggulangi terbentuknya radikal bebas dalam
epidermis dan dermis. Penelitian pendahuluan yang dilakukan oleh peneliti
terhadap ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang diaplikasikan pada kulit
hewan percobaan menggunakan sel difusi Franz menunjukkan bahwa penetrasi
antosianin sangat bervariasi. Hal ini diduga karena kerusakan antosianin dalam
ekstrak metanol kelopak bunga rosella sebelum berpenetrasi ke dalam kulit akibat
terpapar udara dan sinar, juga pengaruh berbagai reaksi dengan senyawa dan
enzim dalam kulit seperti polifenoloksidase, peroksidase, glikosidase, dan
esterase. Strategi untuk membawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella supaya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
dapat berpenetrasi ke dalam lapisan kulit target (epidermis dan dermis) dalam
keadaan terlindungi dari pengaruh yang dapat menurunkan bioaktivitas antosianin
yaitu dengan teknologi enkapsulasi.
Mengingat kepolaran ekstrak metanol kelopak bunga rosella, maka
pembawa enkapsulasi yang dipilih dalam penelitian ini yaitu multiemulsi dan
suspensi liposom. Multiemulsi merupakan sistem kompleks yang biasa dikenal
dengan emulsi dalam emulsi, memiliki struktur yang fleksibel, mampu menjerap
dan melindungi zat aktif yang bersifat hidrofilik dalam water inner phase, aplikasi
dalam industri kosmetik multiemulsi mampu memberikan sensasi nyaman dengan
pelepasan zat aktif yang lebih lambat. Selain itu juga akan memberikan sifat
mudah tercuci dengan air
Liposom merupakan suatu vesikel berbentuk bulat dan kecil yang di
dalamnya terdapat cairan yang dibungkus dengan satu atau lebih membran lipid
bilayer yang umumnya terbuat dari fosfolipid alam dan kolesterol di mana mampu
mengenkapsulasi dan efektif untuk penghantaran senyawa aktif baik yang bersifat
hidrofilik maupun hidrofobik dan dapat digunakan sebagai vesikel non toksik
untuk senyawa aktif yang larut, ukuran partikel pada liposom umumnya kecil.
Sediaan multiemulsi A/M/A yang memiliki efek antioksidan diharapkan
mampu meningkatkan stabilitas antosianin sehingga secara tidak langsung dapat
memberikan perlindungan kemampuan penetrasi dan tertahannya dalam organ
target ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam kulit yang lebih baik
daripada suspensi liposom ekstrak metanol kelopak bunga rosella dikarenakan
ukuran partikel dan entrapment efficiency sediaan multiemulsi yang lebih besar
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
daripada sediaan suspensi liposom sehingga dapat mengenkapsulasi ekstrak
metanol kelopak bunga rosella dalam jumlah banyak dan memberikan
kemampuan penetrasi serta tertahan dalam organ target ekstrak metanol kelopak
bunga rosella di dalam kulit yang lebih baik daripada suspensi liposom.
Studi yang dilakukan pada penelitian ini meliputi penetapan bobot tetap
ekstrak metanol kelopak bunga rosella, optimasi formula multiemulsi A/M/A,
pembuatan multiemulsi A/M/A, serta uji perbandingan kemampuan penetrasi
ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan
sediaan suspensi liposom.
1. Perumusan masalah
a. Bagaimana sifat dan stabilitas fisis sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak
metanol kelopak bunga rosella hasil optimasi formula?
b. Apakah sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimum mempunyai
kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang
lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan
epidermis dan dermis?
2. Keaslian penelitian
Penelitian yang terkait dengan penelitian ini sejauh penelusuran
penulis yaitu: ―Liposome-Containing Hibiscus sabdariffa Calyx Extract
Formulations with Increased Antioxidant Activity, Improved Dermal
Penetration dan Reduced Dermal Toxicity oleh Pinsuwan, dkk (2010).
Penelitian yang akan dilakukan terdapat perbedaan yaitu pada liposom yang
mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella disuspensikan dalam air
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
dan dibandingkan dengan ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
sediaan multiemulsi A/M/A.
Sejauh penelusuran pustaka oleh peneliti, penelitian mengenai
perbandingan kemampuan penetrasi multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom
yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga belum pernah dilakukan.
3. Manfaat
a. Manfaat teoritis
Penelitian ini menambah informasi bagi dunia ilmu pengetahuan,
khususnya dalam ilmu kefarmasian mengenai formulasi sediaan
multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella dan
kemampuan multiemulsi A/M/A sebagai pembawa ekstrak metanol
kelopak bunga rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam
berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan dermis.
b. Manfaat praktis
Penelitian ini akan menghasilkan sediaan multiemulsi A/M/A
ekstrak metanol kelopak bunga rosella dan menambah variasi sediaan
kosmetik antioksidan yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga
rosella.
B. Tujuan Penelitian
1. Mengetahui sifat fisis dan stabilitas fisis sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak
metanol kelopak bunga rosella hasil optimasi formula
2. Mengetahui apakah sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimum
mempunyai kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke
dalam lapisan epidermis dan dermis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Rosella
1. Klasifikasi Umum
Kerajaan : Plantae
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Bangsa : Malvales
Suku : Malvaceae
Marga : Hibiscus
Jenis : Hibiscus sabdariffa L.
(Maryani dan Kristiana, 2005)
2. Morfologi
Rosella merupakan herba tahunan yang bisa mencapai ketinggian 0,5-
3 meter. Batangnya bulat, tegak, berkayu, dan berwarna merah. Daunnya
tunggal, berbentuk bulat telur, pertulangan menjari, ujung tumpul, tepi
bergerigi, dan pangkal berlekuk. Bunga rosella yang keluar dari ketiak daun
merupakan bunga tunggal. Bunga ini mempunyai 8 – 11 helai kelopak yang
berbulu panjgannya 11 cm, pangkalnya saling berlekatan dan berwarna merah
ditunjukkan pada gambar 1. Bagian inilah yang sering dimanfaatkan sebagai
bahan makanan dan minuman. Mahkota bunga berbentuk corong, terdiri dari 5
helai, panjangnya 3-5 cm. Buahnya berbentuk kotak kerucut, berambut,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
terbagi menjadi 5 ruang, dan berwarna merah. Bentuk biji menyerupai ginjal,
berbulu dengan panjang 5 mm dan lebar 4 mm (Maryani dan Kristiana, 2005).
Gambar 1. Kelopak bunga rosella (Maryani dan Kristiana, 2005)
3. Kandungan kimia
Kandungan kimia dalam bunga rosella yang erat kaitannya dengan
efek farmakologi yaitu asam organik, antosianin, polisakarida dan flavonoid.
Asam organik yang terkandung pada rosella merupakan kandungan kimia
yang memiliki persentase paling tinggi. Asam organik yang terkandung
meliputi asam sitrat, hydroxycitric acid, hibiscus acid, malic, oxalic, ascorbic
acid dan tartaric acid. Antosianin merupakan turunan kelompok flavonoid
dan merupakan pigmen alami yang terkandung pada bunga rosella dan
memiliki aneka ragam warna yang dipengaruhi oleh pH. Beberapa peneliti
mengindentifikasi delphinidin-3-sambubiose (delphinidin-3-O-(2-O-β-D-
xylopyranosyl)- β-D-glucopyranoise) dan sianidin-3-sambubioside (sianiding-
3-O-(2-O- β-D-xylopyranosyl)- β-D—glucopyranoise) merupakan antosianin
utama yang terdapat dalam ekstrak metanol kelopak bunga rosella (Rocha,
dkk, 2014).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
4. Kegunaan
Bunga rosella dapat bermanfaat sebagai antibakteri, antifungi,
antipiretik, hepatoprotektif, antikanker dan antioksidan. Beberapa penelitian
baik secara in vitro maupun in vivo menemukan bahwa ekstrak metanol
kelopak bunga rosella memiliki efek antioksidan yang poten (Rocha dkk.,
2014). Aktivitas antioksidan yang ditimbulkan ekstrak metanol kelopak bunga
rosella disebabkan oleh efek scavenging yang kuat terhadap oksigen reaktif
dan radikal bebas, menghambat aktivitas xanthine oksidase, melindungi sel
dari kerusakan yang disebabkan oleh lipid peroksidasi, menghambat Cu2+
dalam mediasi oksidasi LDL, dan membentuk Thiobarbituric acid reactive
substances (TBARs) (Rocha dkk., 2014).
B. Antosianin
Antosianin merupakan metabolit sekunder dari keluarga flavonoid, dalam
jumlah besar dapat ditemukan dalam buah-buahan dan sayur-sayuran, tidak
berbahaya, dan mudah larut dalam air. Pigmen ini memiliki aneka ragam warna
seperti jingga, merah muda, merah, ungu, dan biru (Pazmino, Giusti, Wrolstad,
dan Gloria, 2001). Flavonoid memiliki aktivitas antioksidan dan berperan penting
dalam mencegah penyakit kanker, diabetes, serta penyakit lainnya (Konczak dan
Zhang, 2004).
Antosianin terdiri dari cincin aromatik (A) yang mengikat cincin
heterosiklik (C) yang mengandung oksigen, di mana juga diikat oleh ikatan
karbon-karbon yang mengikat cincin aromatik (B) seperti ditunjukkan pada
gambar 2 (Konczak dan Zhang, 2004). Secara kimia semua antosianin merupakan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
turunan suatu struktur aromatik tunggal, yaitu sianidin, dan semuanya terbentuk
dari pigmen sianidin dengan penambahan atau pengurangan gugus hidroksil,
metilasi dan glikosilasi (Harbone, 1996).
Sifat fisika dan kimia dari antosianin dilihat dari kelarutannya, antosianin
larut dalam pelarut polar seperti metanol, aseton, kloroform atau dengan air yang
diasamkan dengan asam klorida atau asam format. Antosianin memiliki rumus
molekul C15H110 dengan berat molekul yaitu 207,08 gram/mol (Fennema, 1996).
Dilihat dari penampakan warna, antosianin mempunyai panjang gelombang
maksimum 514 – 545 nm (Harborne, 1996).
Gambar 2. Struktur utama antosianin (Rocha dkk., 2014)
Warna dan stabilitas pigmen antosianin bergantung pada struktur
molekul secara keseluruhan. Substitusi pada struktur antosianin akan berpengaruh
pada warna antosianin di mana pada kondisi asam, struktur antosianin ditentukan
oleh banyaknya substitusi pada cincin B. Semakin banyak substitusi OH akan
menyebabkan warna semakin biru (pelargonidin sianidin delphinidin),
sedangkan metoksilasi menyebabkan warna menjadi semakin merah (sianidin
peonidin pelargonidin pelargonidin – 3- glukosida) (Hui dan Sherkat, 2005).
Kestabilan antosianin dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu:
1. Pengaruh pH. Warna dan struktur pigmen antosianin dalam medium cair
dipengaruhi oleh pH. Terdapat 4 bentuk struktur pigmen antosianin yaitu basa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
quinonoidal warna biru, kation flavilium merah(R+), basa karbinol tak
berwarna, dan kalkon tak berwarna seperti ditunjukkan pada gambar 3.
Kation flavilium merah, dan basa karbinol tak berwarna merupakan 2 senyawa
yang sangat penting ketika terjadi perubahan pH dari pH 1-6. pH 4-6, kation
flavilium merah akan mendominasi, sedangkan pada pH yang tinggi basa
karbinol biru meningkat dan warna menjadi lemah. Hilangnya warna
disebabkan oleh hidrasi posisi C2 pada kation flavilium merah (Hui dan
Sherkat, 2005).
Gambar 3. Perubahan struktur kimia antosianin terhadap pH (Hui dan Sherkat, 2005)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
2. Pengaruh suhu. Degradasi pigmen antosianin dipengaruhi oleh suhu, di mana
suhu dapat mengubah kesetimbangan 4 tipe antosianin menjadi kalkon tak
berwarna. Perubahan yang terjadi ini bersifat irreversible. Antosianin
terhidroksilasi kurang stabil pada keadaan panas daripada antosianin
termetilasi terglikosilasi atau termetilasi (Hui dan Sherkat, 2005).
Quinonoid Flavilium Basa karbinol Kalkon
3. Pengaruh enzim. Adanya enzim glikosidase dan enzim polifenoloxidase dapat
menyebabkan hilangnya warna dari pigmen antosianin. Enzim glikosidase
akan menghidrolisis ikatan glikosida dan memproduksi gula serta aglikonnya
sehingga antosianidin menjadi kurang larut air dan produksi warna menjadi
berkurang. Enzim polifenoloksidase akan mengoksidasi antosianin yang
mengandung oksigen dan o-difenol. Enzim polifenoloksidase akan
mengoksidase o-difenol menjadi o-benzoquinon yang akan bereaksi dengan
antosianin untuk membentuk antosianin teroksidasi dan produk degradasi (Hui
dan Sherkat, 2005).
4. Pengaruh kopigmenasi. Kopigmen merupakan penggabungan antosianin
dengan antosianin atau komponen organik lainnya di mana dapat
meningkatkan stabilitas dan intensitas warna antosianin sehingga sehingga
penyerapan warna pada panjang gelombang maksimum meningkat (Shi, J.,
Mazza, G., dan Maquer, M.L., 2002).
5. Pengaruh oksigen. Oksigen dapat bereaksi dengan ikatan rangkap dua dari
pigmen antosianin sehingga warna yang dihasilkan berkurang. Antosianin
yang disimpan dibawah kondisi vakum atau dijenuhkan dengan nitrogen akan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
lebih stabil daripada antosianin yang terpapar dengan oksigen. Hal ini
mengimplementasikan bahwa kemasan produk yang mengandung antosianin
harus memiliki penghalang oksigen yang tinggi atau headspace kemasan
diminimalisir untuk mencegah terjadinya degradasi antosianin selama
penyimpanan dan pemasaran (Shi, dkk., 2002).
6. Pengaruh cahaya. Secara umum, cahaya dapat mempercepat dekomposisi
pigmen antosianin. Adanya cahaya membuat antosianin tereksitasi melewati
transfer elektron yang dapat mempengaruhi pigmen terdekomposisi fotokimia
(Shi, dkk., 2002).
C. Multiemulsi
Multiemulsi merupakan suatu sistem dispersi cairan kompleks yang
dikenal dengan istilah ‗emulsi dalam emulsi‘, di mana droplet suatu dispersi
cairan (air dalam minyak atau minyak dalam air) didispersikan ke cairan lainnya
(air atau minyak) untuk menghasilkan multiemulsi A/M/A atau M/A/M (Lutz dan
Aserin, 2008).
Gambar 4. Gambaran skema dan mikroskop multiemulsi A/M/A (Lutz dan Aserin, 2008)
Umumnya droplet pada multiemulsi bersifat polidispersi. Ukuran droplet
diameter globul rata-rata multiemulsi umumnya sedikit lebih besar berkisar antara
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
15 – 50 µm dengan terdiri dari 50 – 100 droplet air pada setiap globul minyak
dalam emulsi, sedangkan yang lainnya dapat lebih kecil berkisar antara 2 – 5 µm
yang akan terdiri dari satu atau beberapa droplet air untuk setiap globul minyak
dalam emulsi (Garti dan Bisperink, 1998).
Pembuatan multiemulsi dapat dilakukan secara konvensional dengan
beberapa metode yaitu sonikasi, agitasi dan inversi fase (Meyers, 2006). Metode
pembuatan emulsi ganda yang paling umum yaitu metode inversi fase
menggunakan proses emulsifikasi 2 tahap dengan dua jenis emulgator. Emulgator
hidrofobik didesain untuk menstabilkan emulsi air dalam minyak sedangkan
emulgator hidrofilik untuk menstabilkan emulsi minyak dalam air (Garti dan
Bisperink, 1998). Pembuatan emulsi air dalam minyak menggunakan kondisi
kecepatan pengadukan yang tinggi (ultrasonifikasi dan homogenisasi) agar
memperoleh droplet yang kecil, sedangkan tahap emulsifikasi kedua dibuat tanpa
pengadukan yang berlebihan karena dapat merusak droplet emulsi primer (Garti,
1997).
Kegunaan utama sistem multiemulsi adalah membatasi dan melindungi
sistem untuk pelepasan terkendali dari zat aktif. Namun, emulsi ganda dapat
dimanfaatkan dalam berbagai bidang, diantaranya:
1. Aplikasi dalam industri makanan, emulsi ganda tipe A/M/A dapat
meningkatkan kelarutan dari bahan tertentu, bahan larut, dan tidak larut
minyak, namun mampu melindungi reservoir cairan untuk molekul yang
sensitif terhadap aktivitas lingkungan luar seperti oksidasi, cahaya, dan enzim,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
dan mampu menjerap reservoir untuk melindungi rasa dan aroma yang
diinginkan (Lutz dan Aserin, 2008).
2. Aplikasi dalam industri kosmetik, multiemulsi A/M/A akan memberikan
sensasi nyaman dengan pelepasan zat aktif yang lebih lambat. Selain itu juga
akan memberikan sifat mudah tercuci dengan air (Lutz dan Aserin, 2008).
3. Sebagian besar aplikasi berhubungan dengan industri farmasetika, sediaan
multiemulsi akan memberikan keuntungan dalam meningkatkan efek
kemoterapi dari obat antikanker, imobilisasi obat, pengobatan overdosis obat,
dan melindungi insulin dari degradasi enzimatik (Lutz dan Aserin, 2008).
4. Aplikasi dalam industri agrikultur, emulsi ganda dapat berperan sebagai
sistem lepas lambat untuk penyubur dan pestisida (Lutz dan Aserin, 2008).
5. Aplikasi dalam kesehatan, zat aktif yang bersifat hidrofilik dapat dilarutkan
pada fase air internal dari globul emulsi, yang menunjukkan pelepasan obat
diperpanjang, dan dapat mengurangi efek toksik (Kumar, Kumar, dan
Mahadevan, 2012).
Kelebihan sistem multiemulsi yaitu biokompatibel, biodegradasi, dan
memiliki struktur yang fleksibel, mampu menjerap dan melindungi zat aktif yang
bersifat hidrofilik dan lipofilik, serta untuk pelepasan obat lepas lambat atau
terkontrol. Selain kelebihan tersebut, terdapat beberapa kelemahan seperti sulit
untuk diformulasikan, ukuran partikel besar dan rentan dari degradasi fisika dan
kimia (Kumar, dkk., 2012).
Tekanan osmotik akan berpengaruh terhadap kestabilan multiemulsi.
Multiemulsi tipe A/M/A pemecahan emulsi dapat terjadi karena tekanan osmotik
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
yang tidak sama antara fase cair dalam dan luar. Tekanan osmotik pada fase air
luar lebih tinggi daripada fase air dalam sehingga akan menyebabkan penyusutan
cairan droplet dalam atau pecahnya lapisan minyak. Sodium klorida atau elektrolit
lainnya ditambahkan pada fase air dalam maupun fase air luar pada multiemulsi
tipe A/M/A yang dapat bermigrasi melewati lapisan minyak dan sampai pada fase
cair lainnya melalui perpindahan melalui miselar terbalik, difusi melewati lamella
emulgator tipis yang bergantung pada fluktuasi ketebalan minyak, dan
perpindahan melalui emulgator terhidrasi (Benichou, Aserin dan Garti, 2004 ; Jiao
dan Burgess, 2008).
Tekanan Laplace muncul disebabkan karena tegangan permukaan
campuran dua cairan pada lengkungan antarmuka ketika cairan satu terdispersi
sebagai droplet ke cairan lainnya. Tekanan Laplace pada proses emulsifikasi
menyebabkan suatu emulsi menjadi tidak efisien secara termodinamika. Untuk
membentuk droplet yang kecil, sangat melengkung, dibutuhkan energi yang lebih
besar. Penambahan konsentrasi garam yang mendekati optimal pada fase dalam
berada antara tekanan Laplace dan tekanan osmotik pada droplet cairan dalam
sehingga mencapai stabilitas maksimum (Jiao dan Burgess, 2008).
Stabilitas merupakan masalah utama dalam sistem multiemulsi. Empat
mekanisme yang mungkin dapat menyebabkan ketidakstabilan multiemulsi yaitu:
1) koalesense droplet air internal; 2) koalesense droplet minyak; 3) pecahnya
lapisan minyak yang menyebabkan hilangnya droplet air internal; dan 4)
pindahnya air dan senyawa hidrofilik melalui lapisan minyak. Hal ini dapat terjadi
dengan dua cara yaitu: 1) melalui transportasi misel terbalik yang dibentuk oleh
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
emulgator lipofilik; dan 2) difusi sederhana karena adanya perbedaan osmotik
pada kedua fase air (Kumar, dkk., 2012).
D. Monografi Bahan Tambahan
1. Emulgator
Emulgator merupakan suatu molekul yang memiliki rantai
hidrokarbon nonpolar dan polar pada tiap ujung rantai molekulnya. Emulgator
memiliki kemampuan menarik fase air dan fase minyak sekaligus, serta dapat
menempatkan diri di antara kedua fase tersebut. Keberadaan emulgator ini
akan menurunkan tegangan permukaan fase air dan fase minyak (Friberg,
Quencer, dan Hilton, 1996). Secara umum, jenis emulgator dibagi menjadi 3
seperti yang ditunjukkan pada tabel 1 (Troy dan Beringer, 2006).
Tabel 1. Klasifikasi emulgator
Tipe Tipe
lapisan
Contoh
Sintetik Monomol
ekular
Anionik Kationik
1. Sabun Quaternary ammonium
compounds
a. Potassium Laurate Cetyltrimethyllammonium
bromide
b. Triethanolamine
stearate
Lauryldimethylbenzylammonium
chloride
2. Sulfates Nonionic
a. Sodium lauryl
Sulfate
Polyoxyethylene fatty alcohol
ethers
b. Alkyl
polyoxyethylene
sulfates
Sorbitan fatty acid esters
3. Sulfonates Polyoxyethylene sorbitan fatty
acid esters
a. dioctyl sodium
sulfosuccinate
Polyoxyethylene
polyoxypropylene block
copolymers (poloxamers)
Lanolin alcohols and ethoxylated lanolin alcohols
Natural Multimol
ekular
Hydrophilic colloids
a. acacia
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
b. gelatin
monomol
ekular
a. lecithin
b. Cholesterol
Finely
divided
solids
Solid
particle
Colloidal clays
a. bentonite
b. Veegum
Metallic hydroxides
a. Magnesium
hydroxide
(Troy dan beringer, 2006)
Surfaktan merupakan senyawa yang mampu menurunkan tegangan
permukaan. Senyawa ini memiliki struktur rantai panjang serta memiliki
gugus lipofil maupun hidrofil dalam molekulnya. Emulgator dalam fase air
akan berorientasi sehingga bagian hidrofiliknya akan masuk ke cairan.
Adsorpsi molekul emulgator pada permukan cairan menyebabkan terjadinya
penurunan tegangan permukaan. Pada penambahan emulgator, tegangan
permukaan mula – mula akan turun sangat cepat mencapai harga tertentu yang
selanjutnya tidak akan berkurang meskipun dilakukan penambahan emulgator.
Harga tertentu ini dikenal dengan CMC (critical micelle concentration)
(Voight, 1995).
a. Polioksietilen sorbitan monooleat (Tween 80)
Gambar 5. Struktur Tween 80
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
Tween 80 (gambar 5) berbentuk cairan kental berwarna kuning
terang sampai kuning sawo. Tween 80 bersifat non toksik. Tween 80
mudah larut dalam air, etanol, minyak tumbuhan, etil asetat, metanol,
tetapi tidak larut dalam minyak mineral. Tween 80 memiliki nilai HLB 15.
Konsentrasi yang digunakan yaitu 1% - 15% apabila digunakan sebagai
emulgator tunggal. Apabila dikombinasikan dengan surfaktan lipofilik,
konsentrasi yang diperbolehkan yaitu 1% - 10% (Rowe, Sheskey, dan
Quinn, 2009). Penggunaan Tween 80 dalam farmasi yakni sebagai
emulsifying agent, wetting agent, penetrating agent, dan diffusian (Som,
Bhatia, dan Yasir, 2012).
b. Sorbitan monooleat (Span 80)
Gambar 6. Struktur Span 80
Span 80 (gambar 6) berbentuk cairan kental berwarna kuning
terang. Span 80 tidak larut air, tetapi larut dalam pelarut organik. Span 80
memiliki nilai HLB 4,3. Span 80 sering digunakan dalam kosmetik,
produk makanan, dan formulasi farmasi sebagai surfaktan non ionik.
Aplikasi bagi sediaan farmasi, Span 80 sering digunakan sebagai
emulgator dalam sediaan krim, emulsi, dan salep untuk sediaan topikal.
Ketika digunakan sendiri, akan menghasilkan emulsi A/M dan
mikroemulsi, tetapi sering dikombinasikan dengan polisorbat dalam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
jumlah yang sesuai untuk menghasilkan emulsi air dalam minyak atau
minyak dalam air atau krim. Konsentrasi yang digunakan yaitu 1% - 15%
apabila digunakan sebagai emulgator tunggal. Apabila dikombinasikan
dengan surfaktan hidrofilik, konsentrasi yang diperbolehkan yaitu 1% -
10% (Rowe dkk., 2009).
2. Parafin cair
Parafin dalam sediaan topikal digunakan untuk meningkatkan titik
leleh atau meningkatkan pengerasan (bahan pengeras). Parafin tidak
menyebabkan toksik ataupun iritasi. Parafin cair berbentuk cairan kental dan
tidak berwarna. Konsentrasi yang digunakan dalam sediaan topikal yaitu 1,0%
– 32,0% (Rowe dkk., 2009). Parafin cair dapat berfungsi sebagai emolien
untuk mencegah dehidrasi pada saat sediaan diaplikasikan ke kulit (Tranggono,
2007).
3. Setil alkohol
Gambar 7. Struktur setil alkohol
Setil alkohol (gambar 7) berupa kristal putih, tidak larut air,
bercampur dengan alkohol, glikol dan miyak kosmetik (Windholz, 1976).
Sediaan lotion, krim dan salep, setil alkohol digunakan sebagai emolien,
penyerap air, dan pembantu pengemulsi. Setil alkohol dapat digunakan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
sebagai emolien karena dapat mengabsorbsi air yang ada pada lingkungan
sehingga kulit akan terjaga kelembabannya. Setil alkohol sebagai stiffening
agent karena dapat menambah viskositas dan konsistensi sediaan emulsi. Setil
alkohol digunakan sebagai pembantu emulgator tipe A/M karena dapat
mengikat fase air dan minyak dalam sistem emulsi sehingga dapat mengurangi
jumlah penambahan emulgator lain dalam sediaan. Setil alkohol dapat
digunakan sebagai stiffening agent dengan konsentrasi 2% - 10% (Rowe dkk.,
2009).
4. Dimethicone
Gambar 8. Struktur dimethicone
Dimethicone (gambar 8) berupa cairan tak berwarna dengan berbagai
viskositas. Aplikasi dalam emulsi topikal, biasanya ditambahkan pada fase
minyak sebagai antifoaming agent. Konsentrasi dimethicone dalam sediaan
krim, lotion dan salep yaitu 10% - 30% (Rowe dkk., 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
5. Xanthan gum
Gambar 9. Struktur xanthan gum
Xanthan gum (gambar 9) berwarna krem hingga putih, tidak berbau,
mudah mengalir dan berupa serbuk yang halus. Xanthan gum tergolong dalam
gum polisakarida dengan berat molekul yang besar. Umumnya digunakan untuk
sediaan oral maupun topikal, tidak toksik dan kompatibel dengan hampir semua
bahan farmasetika. Gel xanthan gum umumnya bersifat pseudoplastik. Aplikasi
dalam bentuk larutan, xanthan gum stabil terhadap enzim, garam, asam dan basa.
Xanthan gum bersifat anionik dan umumnya tidak kompatibel dengan surfaktan
kationik, polimer atau pengawet karena memungkinkan terjadi pengendapan.
Konsentrasi surfaktan anionik dan amfoterik diatas 15% b/v dapat menyebabkan
pengendapan pula pada larutan xanthan gum (Rowe dkk., 2009).
Xanthan gum termasuk stabilisator multiemulsi hidrokoloid. Suatu
hidrokoloid secara signifikan mampu meningkatkan stabilitas multiemulsi karena
membantu enkapsulasi yang lebih baik pada fase dalam sehingga mencegah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
pelepasan tidak terkendali dari bahan yang terjerap. Stabilisasi emulsi ganda ini
dapat dicapai karena adanya stabilisasi deplesi. Stabilisasi deplesi diperoleh dari
partikel koloidal yang diberikan oleh makromelekul yang terbebas di larutan (Lutz
dan Aserin, 2008).
E. Suspensi Liposom
Liposom merupakan suatu vesikel berbentuk bulat dan kecil yang di
dalamnya terdapat cairan yang dibungkus dengan satu atau lebih membran lipid
bilayer yang umumnya terbuat dari fosfolipid alam dan kolesterol (Jesorka dan
Orwar, 2008). Liposom mampu mengenkapsulasi dan efektif untuk penghantaran
senyawa aktif baik yang bersifat hidrofilik maupun hidrofobik dan dapat
digunakan sebagai vesikel non toksik untuk senyawa aktif yang larut. Liposom
dapat membawa obat dalam satu atau tiga kompartemen yaitu: 1) senyawa aktif
yang larut air berada pada central aqueous core; 2) senyawa aktif larut minyak
berada pada lapisan membran; 3) peptida dan protein berukuran kecil berada pada
permukaan air lemak (Bhai, Yadav, Mamatha, dan Prasanth, 2012).
Secara umum, komposisi liposom terdiri dari fosfolipid alam dan atau
sintetik. Phosphatidylcholine (lesitin) dan phosphatidylethanolamine merupakan
dua komponen struktural utama dari sebagian besar membran biologis. Liposom
bilayer juga mengandung komponen tambahan seperti kolesterol, lipid konjugat
hidrofilik polimer, dan air. Kolesterol merupakan komponen tambahan yang
paling sering digunakan untuk meningkatkan karakteristik bilayer pada liposom
dengan cara meningkatkan fluiditas membran, stabilitas bilayer, dan mengurangi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
permeabilitas molekul yang larut air untuk melewati membran (Laouini, Maalej,
Blouza, Sfar, Charcosset, dan Fessi, 2012).
Pemilihan komponen bilayer dilihat dari rigiditas atau fluiditas dan
charge bilayer. Fosfatidilkolin unsaturated yang berasal dari telur atau
fosfatidilkolin kedelai memberikan bilayer yang lebih permeable dan elastis
sehingga dapat berperan sebagai penetration enhancer, dan memfasilitasi
penetrasi molekul obat melalui stratum korneum sedangkan fosfolipid saturated
dengan rantai asil yang panjang seperti dipalmiitoylphos phatidylcholine
membentuk struktur bilayer yang rigid namun impermeable (Akbarzadeh,
Sadabady, Davaran, Joo, Zarghami, Hanifehpour, dkk., 2013).
Liposom terbentuk ketika lipid yang terdiri dari kelompok kepala
hidrofilik dan ekor hidrofobik di dispersikan ke dalam air, membentuk lapisan
tipis lipid bimolekular. Selama agitasi, lapisan lipid bimolekular tipis terhidrasi ini
akan terpisah dan masing-masing akan bergabung membentuk vesikel yang
mencegah interaksi antara hidrokarbon lapisan lipid dengan air sekitarnya,
ditunjukkan pada gambar 10 (Jesorka dan Orwar, 2008).
Gambar 10. Ilustrasi pembentukan liposom (Jesorka dan Orwar, 2008)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
Ukuran vesikel merupakan parameter terpenting dalam mendeterminasi
liposom serta ukuran dan jumlah bilayer mempengaruhi jumlah obat yang
terenkapsulasi dalam liposom. Berdasarkan ukuran dan jumlah bilayer, liposom
dapat diklasifikasikan menjadi lima yaitu:
1. Small Unilamellar Vesicles (SUV). Liposom berukuran 20 – 100 nm dan
terdiri dari 1 lapis bilayer
2. Large Unilamellar Vesicles (LUV). Liposom berukuran >100 nm dan terdiri
dari 1 lapis bilayer
3. Giant Unilamellar Vesicles (GUV). Liposom berukuran >1000 nm dan terdiri
dari 1 lapis bilayer
4. Oligolamellar Vesicles (OLV). Liposom berukuran 100 – 500 nm dan terdiri
dari >1 lapis bilayer
5. Multilamellar Vesicles (MLV). Liposom berukuran >500 nm dan terdiri
dari >1 lapis bilayer
(Laouini, dkk., 2012).
Gambar 11. Klasifikasi liposom berdasarkan ukuran dan jumlah bilayer (Laouini,
dkk., 2012)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
Liposom dimanfaatkan sebagai pembawa obat dengan alasan vesikel ini
dapat memberikan keuntungan seperti: liposom dapat mengarahkan obat pada
target tertentu misalnya pada long circulating liposomes yang bekerja pada target
selektif area patologis tertentu; liposom dapat berfungsi sebagai reservoir obat
yang melepaskan obat secara perlahan sehingga akan meningkatkan efektivitas
obat dan memperpanjang masa edar obat di dalam darah; liposom dapat
melindungi obat yang tidak stabil (antimikrobia, antioksidan, dan senyawa
bioaktif); liposom dapat melindungi obat dari degradasi sebelum mencapai target
dan melindungi pasien dari efek samping yang berbahaya (Akbarzadeh, dkk.,
2013).
Mekanisme pelepasan obat melalui liposom dengan cara pertama
melakukan fusi dengan membran sel plasma dengan menyisipkan lipid bilayer
liposom ke membran plasma, kedua menstimulasi pelepasan obat yang
terkdanung dalam liposom ke ruang interstisial untuk selanjutnya substansi secara
aktif diambil oleh sel melalui transport paraseluler ditunjukkan pada gambar 12
(Akbarzadeh, dkk., 2013).
Gambar 12. Mekanisme pelepasan obat dari liposom (Wilczewska, 2012)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
F. Kulit
Kulit merupakan organ tubuh paling besar yang melapisi seluruh tubuh.
Luas kulit pada manusia rata – rata sekitar 2 m2 dengan berat 10 kg jika ditimbang
dengan lemaknya atau 4 kg jika tanpa lemak, atau beratnya 16% dari berat badan
seseorang (Kusantati, Prihatin, dan Wiana, 2008). Struktur dan fungsi dari kulit
manusia terdiri dari empat bagian utama yaitu stratum korneum, viable epidermis,
dermis, dan jaringan subkutan yang ditunjukkan pada gambar 13.
Gambar 13. Struktur dan fungsi kulit (Walters, 2002)
Struktur kulit meliputi bagian – bagian di bawah ini:
1. Stratum korneum yang disebut juga non viable epidermis merupakan lapisan
terluar dari kulit yang merupakan penghalang utama masuknya zat asing. Rata
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
– rata ketebalan stratum korneum yaitu 10 – 20 µm dengan struktur terdiri dari
brick dan mortar yang merupakan barrier pengontrol kecepatan dalam
absorbsi transdermal (Walters, 2002).
2. Epidermis merupakan bagian dari kulit yang berlapis-lapis dengan ketebalan
0,06 mm pada kelopak mata dan 0,08 mm pada telapak tangan dan telapak
kaki. Epidermis tidak terdapat pembuluh darah (Benson, 2012).
3. Dermis mempunyai ketebalan yang bervariasi tergantung lokasi kulit. Dermis
memiliki dua lapisan yaitu papillary layer yang berisi susunan tipis daris erat
kolagen dan reticular layer yang tersusun dari seraat kolagen tebal dan
tersusun sejajar dengan permukaan kulit (Brannon, 2007). Dermis
mengandung banyak pembuluh darah yang memiliki peran penting dalam
pengaturan suhu tubuh dan tekanan darah. Jaringan kapiler yang luas dalam
stratum papiler berfungsi untuk mengatur suhu tubuh dan memberi makan
epidermis di atasnya yang tidak memiliki pembuluh darah sendiri (Junquera
dan Kelley, 1997).
4. Jaringan subkutan merupakan lapisan lemak dan jaringan ikat yang di
dalamnya terdapat pembuluh darah dan syaraf. Lapisan ini berperan untuk
pengaturan suhu kulit maupun suhu tubuh (Brannon, 2007).
Penetrasi obat melintasi stratum korneum dapat terjadi karena adanya
proses difusi melalui dua mekanisme, yaitu melalui jalur transepidermal dan jalur
transppendageal (gambar 14)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
Gambar 14. Jalur umum zat aktif dalam menembus kulit (Lane, 2013)
1. Jalur transepidermal. Jalur ini merupakan jalur difusi melalui stratum korneum
yang terjadi melalui 2 jalur yaitu jalur transselular yang berarti jalur melalui
protein di dalam sel dan melewati daerah yang kaya akan lipid, dan jalur
interseluler yang berarti jalur melalui ruang antar sel. Penetrasi pada jalur
transepidermal berlangsung melalui dua tahap yakni pertama, pelepasan obat
dari pembawa ke stratum korneum tergantung koefisien partisi obat dalam
pembawa dan stratum korneum. Kedua, difusi melalui epidermis dan dermis
dibantu oleh aliran pembuluh darah dalam lapisan dermis (Benson, 2012).
2. Jalur transappendageal. Jalur ini merupakan jalur masuknya obat melalui
folikel rambut dan kelenjar keringat yang disebabkan karena adanya pori-pori
di antaranya, sehingga memungkinkan obat berpenetrasi. Penetrasi obat
melalui jalur transepidermal lebih baik daripada jalur transappendageal,
karena luas permukaan pada jalur transappendageal lebih kecil (Benson, 2012).
Faktor – faktor yang mempengaruhi absorbsi perkutan yaitu:
1. Konsentrasi obat dalam sediaan. Konsentrasi obat dalam sediaan semakin
tinggi maka jumlah obat yang diabsorbsi per unit luas permukaan akan
semakin besar.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
2. Luas permukaan tempat absorbsi. Apabila luas permukaan tempat absorbsi
semakin besar, maka jumlah obat yang diabsorbsi per unit luas permukaan
akan semakin besar.
3. Karakteristik pembawa. Pembawa yang mudah menyebar pada permukaan
kulit akan meningkatkan absorbsi. Pembawa yang dapat meningkatkan
kelembaban kulit akan meningkatkan absorbsi.
4. Hidrasi kulit. Hidrasi stratum korneum akan meningkatkan penetrasi obat ke
dalam kulit.
5. Afinitas obat terhadap kulit obat harus mempunyai afinitas terhadap kulit yang
lebih besar daripada terhadap pembawa
6. Koefisien partisi obat. Koefisien partisi obat mempengaruhi kelarutan obat
dalam minyak dan air.
7. Cara aplikasi obat pada kulit. Pengolesan dan penggosokkan obat pada kulit
akan meningkatkan penetrasi obat ke dalam kulit.
8. Tempat aplikasi obat. Tempat aplikasi obat berpengaruh terhadap kemampuan
penetrasi obat. Aplikasi pada bagian kulit yang telah tipis akan meningkatkan
penetrasi obat daripada aplikasi pada bagian kulit yang lebih tebal.
9. Waktu kontak obat dengan kulit. Semakin lama waktu kontak obat dengan
kulit maka akan meningkatkan penetrasi obat ke dalam kulit.
(Ansel, 2005)
G. Sinar Matahari
Sinar matahari merupakan sumber dari radiasi elektromagnetik. Ketika
memancarkan radiasi, sebagian dari sinar matahari masuk ke bumi melewati
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
atmosfer hingga kemudian sampai ke permukaan bumi. Jumlah dari total radiasi
matahari yang sampai ke bumi disebut insolasi (Kiil dan Houmoller, 2013).
Spektrum elektromagnetik yang dipancarkan oleh matahari terdiri dari sinar
tampak dan radiasi sinat tampak dekat seperti sinar X, ultraviolet, inframerah dan
gelombang radio (Solarradiation, 2013). Sinar matahari ketika sampai di atmosfer
akan dipantulkan oleh lapisan ozon, sedangkan sisanya diserap dan diubah
menjadi panas (Kiil dan Houmoller, 2013).
Radiasi sinar ultraviolet merupakan penyebab berbagai kerusakan kulit,
termasuk kanker. Radiasi yang dipancarkan sinar matahari terdiri dari beberapa
jenis. Salah satunya yaitu sinar ultraviolet (UV) yang terdiri dari beberapa jenis
dengan panjang gelombang yang berbeda (Anna, 2015). Sinar ultraviolet (UV)
merupakan bagian dari spektrum elektromagnetik yang mempunyai panjang
gelombang antara 40 sampai 400 nm. Spektrum UV dibagi menjadi UV vakum
(40-190 mn), UV jauh (190-220 nm), UV C (220-290 nm), UV B (290-320 nm),
dan UV A (329-400 nm) (National Aeronautics dan Space Administration, 2007).
Sinar UV A merupakan penyebab radiasi sinar UV paling tinggi. Radiasi
sinar ini dapat menembus kulit sampai bagian dermis dan dapat merusak sel yang
berada di dalamnya. Efek yang ditimbulkan akibat radiasi sinar ini yaitu
pigmentasi kulit (timbul bercak hitam pada kulit), kerusakan kulit, dan kerutan
(penuaan dini). Sinar UV B juga berpotensi merusak kulit namun hanya sampai
lapisan luar kulit (epidermis). Sinar UV B membantu tubuh untuk mengolah
vitamin D pada pagi hari terutama sebelum jam 10 pagi namun sinar ini
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
menyebabkan kerusakan fotokimia pada DNA sel sehingga memicu timbulnya
kanker kulit (Mutia, 2015).
H. Enhancer
Enhancer kimia merupakan senyawa yang dapat meningkatkan penetrasi
perkutan obat dengan berpartisi pada stratum korneum dan mengubah susunan
lipid-protein yang ada di kulit. Perubahan ini menyebabkan perubahan sifat dan
penurunan pertahanan pada stratum korneum. Enhancer kimia dapat
meningkatkan permeabilitas stratum korneum melalui beberapa mekanisme yaitu :
(1) meningkatkan fluiditas lipid di kulit; (2) melalui hidrasi jalur polar; (3) melalui
aksi keratolitik; (4) meningkatkan kelarutan obat; dan (5) meningkatkan partisi
stratum korneum (Kumar dan Philip, 2007).
Enhancer kimia yang dapat berperan sebagai penetrating enhancer yaitu:
1. Asam lemak. Keefektifan asam lemak sebagai senyawa peningkat penetrasi
ditentukan dari panjang rantai karbon. Panjang rantai karbon C7 - C12, akan
meningkatkan penetrasi suatu obat, namun apabila panjang rantai karbon
diatas 12 maka akan menurunkan penetrasi zat. Efektifitas optimal asam
lemak sebagai senyawa peningkat penetrasi yaitu pada asam lemak dengan
panjang karbon C9 – C12 karena mempunyai koefisien partisi dan afinitas
yang sesuai dengan kulit. Asam lemak yang mempunyai panjang rantai karbon
yang pendek tidak mempunyai lipofilisitas yang sesuai untuk penetrasi. Asam
lemak yang mempunyai panjang rantai karbon yang lebih panjang akan
mempunyai afinitas terhadap lemak stratum korneum sehingga dapat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
memperlambat penetrasi. Asam lemak yang banyak digunakan sebagai
senyawa peningkat penetrasi yaitu asam oleat (Pathan dan Setty, 2009).
2. Minyak esensial dan terpen. Senyawa ini bekerja dengan memodifikasi sifat
alami pelarut stratum korneum serta senyawa ini dapat menurunkan waku lag
penetrasi (Pathan dan Setty, 2009).
3. Urea. Urea bekerja dengan menghidrasi stratum korneum dan dengan
membentuk kanal difusi hidrofilik. Urea siklik memiliki gugus polar dan non
polar sehingga mekanisme peningkat penetrasi disebabkan oleh aktivitas
hidrofilik dan oragnisasi lipid di stratum korneum(Pathan dan Setty, 2009).
4. Azon. Azon merupakan enhancer kimia pertama yang didesain sebagai
senyawa peningkat penetrasi. Azon bekerja dengan cara mempengaruhi lipid
sfingosin dan seramida yang secara alami ditemukan dilapisan kulit bagian
atas (Pathan dan Setty, 2007).
5. Surfaktan. Penambahan surfaktan ke dalam suatu formula berfungsi untuk
melarutkan senyawa aktif yang bersifat lipofilik. Surfaktan juga mempunyai
potensi untuk melarutkan lipid pada lapisan stratum korneum. Surfaktan
biasanya terdiri dari alkil lipofilik atau aril rantai lemak dengan gugus
hidrofilik pada bagian kepala. Surfaktan yang biasanya digunakan yaitu
polioxyethylene alkyl ether (Brij) dan polyoxythylene sorbitan fatty acid ester
(Tween). Studi DSC pada surfaktan non ionik mengindikasikan bahwa
surfaktan akan berinteraksi dengan kulit dan mengubah struktur lipid dan
meningkatkan permeabilitas di mana kemampuan surfaktan mempengaruhi
kulit tergantung dari sifat fisika kimianya (Lane, 2013).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
I. Uji Penetrasi In Vitro
Uji penetrasi in vitro dilakukan guna mengukur kecepatan dan jumlah
senyawa yang melewati kulit, yang mana hal tersebut tergantung pada obat,
bentuk sediaan, eksipien, bahan peningkat penetrasi dan variabel formulasi
lainnya. (Witt dan Bucks, 2003). Kelebihan utama uji penetrasi in vitro yaitu
kondisi penelitian yang dilakukan dapat dikontrol secara presisi seperti variabel
kulit dan material yang digunakan. Namun hal ini dapat menimbulkan kerugian
seperti informasi terkait metabolism, distribusi, dan efek aliran darah terhadap
permeasi tidak dapat diketahui (Walters, 2002).
Salah satu metode in vitro untuk mengukur jumlah obat yang terpenetrasi
ke kulit yaitu dengan menggunakan sel difusi Franz. Sel difusi Franz merupakan
sel difusi tipe vertikal untuk mengetahui penetrasi suatu senyawa ke dalam kulit
secara in vitro. Sel difusi Franz terdiri dari dua kompartemen yaitu kompartemen
donor dan kompartemen akseptor yang dipisahkan oleh membran seperti
ditunjukkan pada gambar 15 (Walters, 2002).
Gambar 15. Sel difusi Franz (Bartosova dan Bajgar, 2012)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
Membran yang dapat digunakan uji penetrasi in vitro yaitu kulit tikus,
babi, marmot, kelinci, ular, manusia, atau membran kulit sintetik. Kulit manusia
merupakan pilihan utama untuk uji penetrasi in vitro namun sulit untuk
didapatkan sehingga banyak digunakan kulit tikus sebagai penggantinya (Nair dan
Panchagula, 2004). Bagian kulit manusia yang sering digunakan yaitu kulit
abdominal atau breast sedangkan kulit hewan yang biasanya digunakan yaitu
bagian flank dan back (rat) dan flank dan ear (babi) (Bartosova dan Bajgar, 2012).
Uji penetrasi in vitro menggunakan kulit tikus dapat memberikan informasi yang
berguna untuk memanipulasi desain pemberian obat secara transdermal, sehingga
dapat dicapai permeasi obat yang menembus kulit (Al-saidan, Krishnaih,
Chdanrasekhar, Lalla, Rama, Jayaram, dkk., 2004).
Cara melakukan uji penetrasi dengan sel difusi Franz yaitu sejumlah
tertentu zat diaplikasikan pada membran dan dibiarkan berpenetrasi secara difusi
pasif melalui membran. Mengetahui jumlah zat yang terpenetrasi maka dilakukan
sampling pada cairan kompartemen akseptor selama waktu tertentu hingga
mencapai kondisi tunak. Cairan dari kompartemen akseptor yang diambil harus
digantikan dengan cairan awal sejumlah volume yang di ambil. Hal ini bertujuan
untuk menjaga volume dalam cairan akseptor tetap konstan dan untuk menjaga
supaya cairan di kompartemen akseptor tetap dalam keadaan tunak (Witt dan
Bucks, 2003).
Faktor yang perlu diperhatikan dalam uji penetrasi secara in vitro yaitu:
1. Pemilihan membran. Penggunaan kulit manusia sebagai membran uji
memiliki beberapa kesulitan seperti mendapatkan kulit manusia tersebut,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
kesulitan mengontrol jenis kelamin, ras, umur, dan kondisi kulit, sehingga
untuk uji penetrasi secara in vitro bisa digunakan kulit hewan sebagai
penggantinya seperti kulit tikus, babi, marmot, kelini, dan ular (Wiechers,
1989).
2. Larutan donor. Senyawa yang dilarutkan atau yang terkdanung dalam
pembawa akan berdifusi dari pembawa menuju ke permukaan kulit sebelum
obat diabsorpsi. Pembawa dapat mempengaruhi pelepasan senyawa dan
berinteraksi dengan stratum korneum. Faktor yang mempengaruhi pelepasan
obat yaitu sifat fisikokimia zat aktif dan pembawa seperti kelarutan, ukuran
molekul, viskositas dan polaritas (Wiechers, 1989).
3. Larutan akseptor. Larutan yang digunakan sebaiknya tidak hanya berperan
sebagai penerima obat yang mengalami penetrasi di dalamnya tetapi juga yang
menyediakan air, bahan-bahan biokimia dan ion-ion yang diperlukan
membran kulit dalam mempertahankan fungsinya (Skelly, 1987). Larutan
yang dapat digunakan sebagai larutan akseptor seperti larutan fisiologis salin,
larutan ringer, atau larutan fisiologis lainnya yang relevan. Faktor lain yang
perlu diperhatikan yaitu suhu, kelarutan senyawa dalam medium dan
pengadukan (Friend, 1992).
J. Spektrofotometri Derivatif
Spektrofotometri derivatif merupakan salah satu metode spektrofotometri
yang dapat digunakan untuk analisis senyawa campuran baik organik maupun
anorganik secara langsung tanpa harus melakukan pemisahan terlebih dahulu
walaupun dengan panjang gelombang yang berdekatan. Metode ini merupakan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
teknik analisis yang menggunakan sistem turunan orde 1 hingga 5 dari spektrum
spektrofotometri UV-VIS. Kurva spektrum derivatif menggambarkan nilai
turunan absorbansi suatu senyawa terhadap panjang gelombang seperti yang
ditunjukkan pada persamaan berikut:
n
Dx,λ = f…………………………………………………………(1)
Nilai n menunjukkan orde derivatif dan nDx,λ merupakan nilai derivatif pada orde
ke-n dari suatu spektrum absorbansi substansi X terhadap panjang gelombang
(Marczenko dan Balcerzak, 2000).
Proses yang terjadi dalam derivatisasi data spektra adalah
pendiferensialan kurva secara matematis yang tak lain adalah menentukan
kemiringan/gradien serapan antara panjang gelombang tertentu secara menyeluruh
seperti tampak dalam gambar 16.
Gambar 16. Penentuan gradien dari spektrum orde 0 (Nurhidayati, 2007)
Penentuan besar gradien secara individual adalah plot dA/dλ terhadap λ
untuk mendapatkan plot derivatif pertama. Plot derivatif pertama ini dapat
diturunkan lagi dengan cara yang sama untuk mendapatkan harga d2A/dλ2, yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
bila diplotkan terhadap panjang gelombang menghasilkan plot derivatif kedua.
Pengulangan proses ini menghasilkan orde yang lebih tinggi, plot derivatif ke-n,
atau dnA/ dnλ terhadap λ. Sebagai ilustrasi proses pengulangan, dari derivat kenol
sampai dengan kelima ditunjukkan pada gambar 17 (Nurhidayati, 2007).
Gambar 17. Spektrogram derivatif orde 0 hingga 5 (Kus, Marczenko dan Obarski,
1996)
Metode spektrofotometri derivatif memberikan sensitivitas dan
selektivitas yang tinggi dibdaningkan metode spektrofotometri normal (orde 0).
Hasil selektivitas yang lebih tinggi didapatkan dengan mengurangi atau
mengeleminasi noise tanpa mengurangi sinyal penting, serta mengurangi
kesalahan yang disebabkan oleh spektrum senyawa lain dalam sampel yang
tumbang tindih (Marczenko dan Balcerzak, 2000).
K. Landasan Teori
Sinar ultraviolet merupakan salah satu spektrum radiasi dari sinar
matahari yang terdiri dari tiga jenis yaitu sinar UV A, UV B, dan UV C. Radiasi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
sinar UV A merupakan penyebab radiasi paling tinggi dan dapat menembus kulit
hingga bagian dermis sedangkan radiasi UV B juga berpotensi merusak kulit
namun hanya sampai lapisan luar (epidermis). Efek dari radiasi sinar UV A dan
UV B ini dapat menyebabkan pigmentasi kulit, kerusakan kulit, penuaan dini,
serta memicu timbulnya kanker kulit. Adanya kosmetik yang bersifat antioksidan
diharapkan dapat mencegah timbulnya ROS di dalam kulit terutama pada lapisan
epidermis dan dermis (Mutia, 2015).
Hibiscus sabdariffa L. atau yang biasa dikenal dengan rosella telah
diketahui memiliki aktivitas antioksidan karena adanya kandungan fenolik di
dalam bunga rosella. Salah satu kandungan fenolik yang ada di rosella yaitu
antosianin. Antosianin merupakan metabolit sekunder dari famili flavonoid
(Konczak dan Zhang, 2004).
Berdasarkan struktur serta sifatnya, stabilitas antosianin sangat
dipengaruhi oleh lingkungan seperti cahaya, suhu, dan oksigen. Studi kondisi
penyimpanan multiemulsi yang dilakukan oleh Li (2015) menunjukkan kondisi
optimum penyimpanan multiemulsi yaitu pada suhu -4 , tertutup rapat,
terlindung dari cahaya dan adanya pemberian gas nitrogen. Penggunan ekstrak
metanol kelopak bunga rosella secara topikal dapat menyebabkan iritasi pada kulit
(Pinsuwan dkk, 2010). Selain itu hasil penelitian pendahuluan yang dilakukan
peneliti menunjukkan kemampuan penetrasi yang dihasilkan bervariasi.
Berdasarkan target aksi antosianin sebagai penangkal radiasi sinar UV,
stabilitas antosianin, dan kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga
rosella maka dibutuhkan sebuah vesikel untuk menjaga stabilitas antosianin dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella supaya dapat
tertahan di lapisan epidermis dan dermis sehingga tidak masuk ke sistemik.
Vesikel yang digunakan yaitu multiemulsi dan suspensi liposom. Multiemulsi
memiliki kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam
kulit yang lebih baik daripada suspensi liposom dikarenakan ukuran partikel pada
multiemulsi lebih besar daripada suspensi liposom menyebabkan multiemulsi
lebih tertahan di dalam kulit (lapisan epidermis dan dermis). Ukuran partikel
suspensi liposom yang lebih kecil memungkinkan suspensi liposom lebih mudah
untuk menembus lapisan-lapisan pada kulit sehingga dapat masuk ke sistemik.
Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang terpenetrasi ke dalam
kulit dapat diketahui dengan melakukan uji penetrasi secara in vitro menggunakan
sel difusi Franz. Selanjutnya ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang
terpenetrasi ke dalam kulit dan yang tersisa dalam kulit di ukur dengan
menggunakan spektrofotometri derivatif.
L. Hipotesis
1. Formula optimum multiemulsi yang terbentuk bertipe A/M/A, homogen,
memiliki pH sesuai dengan pH kulit, dan stabil selama 28 hari, pada suhu
penyimpanan -4 , dan pemberian gas nitrogen ditandai dengan tidak adanya
pemisahan fase.
2. Sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimum mempunyai kemampuan
sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang lebih baik dari
pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan
dermis.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Jenis Penelitian
Penelitian ini merupakan rancangan eksperimental murni yaitu untuk
mengetahui sifat dan stabilitas fisis sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol
kelopak bunga rosella dan mengetahui apakah sediaan multiemulsi A/M/A yang
telah optimum mempunyai kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol
kelopak bunga rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam
berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan dermis.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas
Variabel bebas dalam penelitian ini dibagi menjadi dua, yaitu:
a. Variabel bebas dalam formulasi yaitu konsentrasi eksipien dan HLB
multiemulsi A/M/A.
b. Variabel bebas dalam uji penetrasi dengan sel difusi Franz yaitu waktu
pengambilan sampel penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella,
ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A
dan suspensi liposom.
2. Variabel tergantung
Variabel tergantung dalam penelitian ini dibagi menjadi dua, yaitu:
a. Variabel tergantung dalam formulasi yaitu sifat fisis dan stabilitas sediaan
multiemulsi A/M/A hasil optimasi formula.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
b. Variabel tergantung dalam uji penetrasi dengan sel difusi Franz yaitu
kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam
kulit.
3. Variabel pengacau terkendali
Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini dibagi menjadi dua, yaitu:
a. Variabel pengacau terkendali dalam formulasi yaitu cahaya dan udara
selama pembuatan multiemulsi A/M/A.
b. Variabel pengacau terkendali dalam uji penetrasi dengan sel difusi Franz
yaitu kondisi hewan uji, homogenitas sediaan, suhu, dan kecepatan
pengadukan.
4. Variabel pengacau tak terkendali
Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini dibagi menjadi dua,
yaitu:
a. Variabel pengacau tak terkendali dalam formula optimum yaitu
kelembaban ruangan tempat pembuatan.
b. Variabel pengacau tak terkendali dalam uji penetrasi dengan sel difusi
Franz yaitu ketebalan kulit, waktu penyimpanan kulit, dan berat sediaan
yang diaplikasikan.
C. Definisi Operasional
1. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella merupakan ekstrak kental kelopak
bunga rosella berwarna merah tua dengan pelarut metanol.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
2. Liposom ekstrak metanol kelopak bunga rosella adalah suatu vesikel yang
terdiri dari satu lapis fosfolipid bilayer yang di dalamnya mengandung ekstrak
metanol kelopak bunga rosella
3. Suspensi liposom adalah sediaan cair yang mengandung liposom ekstrak
metanol kelopak bunga rosella yang didispersikan ke dalam air
4. Multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella adalah sistem
multiemulsi A/M yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella
yang didispersikan dalam fase air dengan bantuan emulgator.
5. Emulgator adalah suatu senyawa yang berfungsi untuk menggabungkan fase
minyak dengan fase air.
6. Multiemulsi A/M/A atau suspensi liposom dalam sampel larutan buffer fosfat
pH 4 yang dianalisis merupakan sediaan semisolid atau sediaan cair yang
terpenetrasi ke dalam kompartemen akseptor yang berisi larutan PBS pH 4.
7. Sel difusi Franz adalah serangkaian alat sel difusi Franz dengan ukuran
water jacket 9 mm, lipatan dasar datar (ground o-ring), dan volume
kompartemen akseptor 3 mL.
8. Waktu pengambilan sampel adalah waktu yang diperlukan untuk mengambil
sampel pada kompartemen donor dan kompartemen akseptor pada sel difusi
Franz .
D. Bahan Penelitian
Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dan suspensi liposom diperoleh
dari Sanjayadi, aquadest dan aquabidest diperoleh dari laboratorium Farmasi
USD, Tween 80 (pro analysis ,Merck), metanol (pro analysis, Merck), NaCl (pro
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
analysis, Merck), KCl (pro analysis, Merck), Na2HPO4 (pro analysis, Merck),
KH2PO4 (pro analysis, Merck), HCl approx. 37% (pro analysis, Merck), setil
alkohol (pharmaceutical grade), MgSO4 (pharmaceutical grade), dimethicone
(pharmaceutical grade) diperoleh dari PT. Bratachem, Span 80 (pharmaceutical
grade), xanthan gum (pharmaceutical grade), parafin (pharmaceutical grade)
diperoleh dari PT. Bratachem, kulit tikus betina galur wistar, larutan ringer laktat
yang diproduksi oleh PT. Widatra Bhakti, dan nitrogen teknis diperoleh dari CV.
Perkasa.
E. Alat Penelitian
Hotplate Scilogex MS-H-S, waterbath Elbanton, mixer merk Miyako,
alat-alat gelas, sel difusi Franz, termometer, seperangkat alat spektrofotometer
UV-Vis Shimadzu UV-1800, seperangkat alat mikroskop, timbangan
analitik/digital scale (Mettler Toledo), flakon, aluminium foil, sonikator (Retsch),
table top sentrifuse model PLC-03, mikro pipet (Socorex), spuit injeksi 1ml, dan
penggaris segitiga (zigel).
F. Tata Cara Penelitian
1. Ekstraksi kelopak bunga rosella
Lima kilogram bunga rosella segar yang diperoleh dari Pontianak
dicuci dengan air mengalir sebanyak tiga kali, kemudian dicuci dengan
aquadest. Bunga rosella yang telah dicuci selanjutnya di maserasi dengan
metanol sebanyak lima Liter menggunakan ultraturrax. Maserasi dilakukan
pada suhu ruangan selama dua hari. Supernatan yang terbentuk disaring
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
menggunakan corong buchner dengan kertas saring whatman no 1. Filtrat
yang diperoleh selanjutnya di pekatkan dengan rotary evaporator pada suhu
40 sehingga menghasilkan ekstrak metanol kelopak bunga rosella. Ekstrak
metanol kelopak bunga rosella yang dihasilkan di simpan pada botol fase
gerak yang telah dilapisi dengan aluminium foil, dijenuhkan dengan N2 dan
disimpan pada suhu -4 hingga analisis berikutnya. Proses ekstraksi ini
dilakukan oleh Sanjayadi.
2. Penetapan bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella
Cawan porselen yang hendak digunakan dikeringkan terlebih dahulu
selama 30 menit. Kemudian cawan porselen yang telah dikeringkan ditara.
500 µL ekstrak metanol kelopak bunga rosella dimasukkan ke dalam cawan
porselen dan ditimbang seksama cawan porselen beserta isinya. Kemudian
dikeringkan dengan waterbath pada suhu 40 – 50 selama 1 jam.
Kemudian ditimbang lagi hingga 2 kali penimbangan berturut-turut berbeda
tidak lebih dari 0,5 mg tiap gram sisa yang ditimbang (Direktorat Jenderal
Pengawasan Obat dan Makanan, 1979).
3. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella
Studi penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella mengikuti
Organization for Economic Co-operation Development (OECD) Guideline for
The Testing of Chemicals (Skin Absorption: in vitro Method) tahun 2004 yang
disertai beberapa modifikasi oleh peneliti. Studi penetrasi pada penelitian ini
memerlukan langkah-langkah seperti pembuatan larutan PBS, preparasi kulit
tikus sebagai membran difusi, pemasangan alat sel difusi Franz (FDC), dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen
akseptor atau donor.
a. Pembuatan 10 mM Phospate Buffer Saline (PBS) pH 4. Sebanyak 800 mL
Aquabidest dimasukkan dalam gelas beker 1 L, kemudian ditambahkan 8 g
NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na2HPO4, dan 0,24 g KH2PO4 diaduk dengan
pengaduk magnetik hingga larut sempurna. Derajat keasaman larutan
diukur dengan pH meter, dan pH larutan dibuat 4 dengan penambahan HCl.
Larutan dipindahkan dalam labu takar 1 L, kemudian ditambahkan
aquabidest sampai tanda. Larutan ini akan digunakan medium pada
kompartmen akseptor.
b. Preparasi kulit tikus betina galur wistar sebagai membran difusi. Tikus
dikorbankan dengan eter. Bulu pada tikus yang telah dikorbankan dicukur
hingga bersih dengan menggunakan pisau pencukur bulu. Kulit tikus
bagian punggung diambil, dibentangkan pada lilin, lalu dihilangkan
lapisan lemaknya. Kulit dipotong sesuai dengan ukuran yang diinginkan
yaitu 2,5 cm x 2,5 cm. Kulit yang telah dipotong dicuci dengan larutan
ringer laktat hingga bersih. Kulit yang telah disiapkan dimasukkan ke
dalam flakon yang berisi larutan ringer laktat kemudian disimpan dalam
lemari es.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
Gambar 18. Rangkaian alat sel difusi Franz
c. Pemasangan alat sel difusi Franz (FDC). Sebelum digunakan kulit tikus
dihidrasi terlebih dahulu dengan larutan ringer laktat selama 30 menit.
Berdasarkan gambar 18, maka kulit dipasang pada FDC dengan bagian
stratum korneum menghadap ke bagian kompartemen donor, lalu
kompartemen akseptor diisi dengan PBS sebanyak 2,7 mL dan
dimasukkan magnetic stirrer. Sebanyak 100 µl ekstrak metanol kelopak
bunga rosella diaplikasikan pada kompartemen donor. Selama FDC
beroperasi, suhu dijaga pada 31 – 33 , pada kompartemen akseptor
tidak diperbolehkan adanya gelembung selama proses berlangsung, dan
diaduk dengan magnetic stirrer dengan kecepatan 300 rpm.
d. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada
kompartemen akseptor. Pengambilan sampel pada uji penetrasi dengan
menggunakan FDC dilakukan sebanyak 6 kali dengan kulit tikus yang
berbeda yang dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Variabel untuk tiap uji
Percobaan ke- I II III IV V VI
Waktu pengambilan
sampel (jam) 1 2 3 4 5 6
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
Sebanyak 100 µL ekstrak metanol kelopak bunga rosella diambil lalu
diaplikasikan pada stratum korneum. Selanjutnya cairan PBS dalam
kompartemen akseptor diambil pada jam yang tercantum pada tabel 2.
Selanjutnya cairan PBS langsung di ukur dengan menggunakan
spektrofotometri UV-VIS. Langkah ini diulangi sebanyak tiga kali
sehingga terdapat tiga variasi jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella pada kompartemen akseptor yang diaplikasikan.
e. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada
kompartemen donor. Setiap pengambilan cairan PBS pada kompartemen
akseptor yang ditunjukkan dalam tabel 2, maka ekstrak metanol kelopak
bunga rosella pada kompartemen donor dibilas dengan aquadest. Ekstrak
metanol kelopak bunga rosella dibilas dengan 1,5 mL aquadest, lalu
dimasukkan ke labu takar 5 mL dan ditambahkan dengan aquadest hingga
batas selanjutnya diukur dengan spektrofotometer UV – Vis.
4. Optimasi formula multiemulsi A/M/A
Optimasi formula multiemulsi A/M/A yang dilakukan yaitu optimasi
konsentrasi HLB emulsi primer yang akan digunakan (5 – 5,8); optimasi
kecepatan pengadukan emulsi primer yang akan digunakan (kecepatan 4 dan 5
pada mixer); optimasi lama pencampuran emulsi primer yang akan digunakan
(10 menit – 20 menit); optimasi konsentrasi stiffening agent yang akan
digunakan (4% - 10%); optimasi konsentrasi anti foaming agent yang akan
digunakan (2% - 8%); optimasi jumlah emulsi primer yang ditambahkan
(27,8g – 47,8g); optimasi konsentrasi emulgator sekunder yang digunakan (2%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
- 6%); dan optimasi lama pencampuran multiemulsi (10 menit – 20 menit).
Hasil optimasi dipilih yang menghasilkan % pemisahanan fase yang paling
sedikit pada setiap perlakuan.
5. Pembuatan multiemulsi A/M/A
Proses pembuatan multiemulsi pada penelitian ini disiapkan dalam
dua tahap yaitu pembuatan emulsi primer A/M dan pembuatan multiemulsi
A/M/A
a. Pembuatan emulsi primer tipe A/M). Tween 80 dan ekstrak metanol
kelopak bunga rosella dilarutkan dalam fase air internal. Span 80,
dimethicone, setil alkohol, ditambahkan ke dalam parafin cair dan diaduk
hingga homogen. Masing-masing fase dipanaskan pada suhu 50 ± 3 .
Fase air ditambahkan sedikit demi sedikit ke dalam fase minyak, diaduk
dengan mixer selama 10 menit hingga homogen. Keseluruhan proses
pencampuran disertai dengan penjenuhan nitrogen, lampu ruangan
dimatikan, serta wadah ditutup dengan menggunakan aluminium foil.
b. Pembuatan multiemulsi tipe A/M/A. Fase air yang digunakan dalam fase
cair eksternal dibagi menjadi 2 bagian (2:1). Emulgator sekunder (Tween
80) dilarutkan dalam fase air pertama (2 bagian). Xanthan gum
dikembangkan dalam fase air kedua (1 bagian) hingga terbentuk massa gel
yang homogen. Setelah terbentuk massa gel yang homogen, maka
dicampurkan ke fase air pertama (2 bagian) dan diaduk hingga homogen.
Emulsi primer A/M yang telah ditimbang, sedikit demi sedikit
ditambahkan pada fase cair eksternal yang telah mengandung Tween 80
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
dan xanthan gum dan sambil diaduk menggunakan mixer selama 10 menit
hingga homogen. Keseluruhan proses pencampuran disertai dengan
penjenuhan nitrogen, lampu ruangan dimatikan, serta wadah ditutup
dengan menggunakan aluminium foil. Multiemulsi A/M/A yang telah jadi
dimasukkan ke dalam flakon yang telah dibungkus dengan aluminium foil
dan dijenuhkan dengan nitrogen sebelum ditutup rapat dengan parafilm.
6. Evaluasi sediaan multiemulsi
Evaluasi sediaan multiemulsi dilakukan pada 1 hari setelah
pembuatan multiemulsi. Evaluasi yang dilakukan meliputi sifat fisik sediaan
dan stabilitas sediaan. sifat fisik sediaan yang dilakukan yaitu pengujian
organoleptis, pengukuran pH, penentuan tipe emulsi, dan pengukuran
mikromeritik. Stabilitas sediaan yang dilakukan yaitu uji mekanik dan uji
volume creaming.
a. Pengujian organoleptis. Uji organoleptis dilakukan dengan mengamati bau,
warna, dan homogenitas sediaan multiemulsi pada 1 hari setelah
pembuatan
b. Penetapan pH. Sejumlah multiemulsi dioleskan pada kertas indikator dan
kemudian ditentukan pH dari sediaan tersebut (Direktrorat Jenderal
Pengawasan Obat dan Makanan, 1979).
c. Penentuan tipe emulsi. Sejumlah emulsi primer dan multiemulsi masing –
masing dilarutkan pada minyak dan air. Selanjutnya dilakukan pengamatan
secara visual untuk menentukan apakah emulsi primer bertipe A/M atau
M/A dan apakah multiemulsi bertipe A/M/A atau M/A/M. Jika emulsi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
primer larut dalam minyak, maka tipe emulsi primer A/M dan apabila
multimulsi larut dalam air, maka tipe multiemulsi A/M/A (Martin, 1990).
d. Pengukuran mikromeritik. Uji mikromeritik dilakukan pada 1 hari setelah
pembuatan. Sebelum dilakukan pengukuran, perlu dilakukan kalibrasi
pada lensa mikroskop. Cara pengujian mikromeritik yaitu sejumlah
multiemulsi dan emulsi primer masing-masing dioleskan pada gelas objek,
kemudian diletakkan pada meja benda pada mikroskop. Ukuran globul
yang terdispersi pada multiemulsi diamati. Penentuan objek, digunakan
pembesar lemah kemudian diganti pembesar kuat (Martin, 1990).
e. Uji mekanik. Sediaan multiemulsi dimasukkan ke dalam tabung
sentrifugasi, kemudian dilakukan sentifugasi pada kecepatan 5000 rpm
selama 20 menit. Hasil sentrifugasi dapat diamati dengan adanya
pemisahan atau tidak (Mahmood, Akhtar, dan Manickam, 2014).
f. Uji volume creaming. Multiemulsi ditempatkan pada tabung berskala
kemudian diamati pada 28 hari setelah pembuatan, untuk melihat
perubahan tinggi pemisahan fase akibat creaming. Multiemulsi disimpan
pada suhu -4 , dijenuhkan dengan gas nitrogen, tertutup rapat, serta
terlindung dari cahaya.
7. Evaluasi sediaan suspensi liposom
Suspensi liposom yang diperoleh dari Sanjayadi terbuat dari
fosfatidilkolin dan kolesterol, selanjutnya dilakukan evaluasi sediaan suspensi
liposom pada 1 hari setelah pembuatan suspensi liposom. Evaluasi yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
dilakukan meliputi sifat fisik sediaan yaitu pengujian organoleptis, penetapan
pH dan pengukuran mikromeritik.
a. Pengujian organoleptis. Uji organoleptis dilakukan dengan mengamati bau,
warna, dan homogenitas sediaan suspensi liposom pada 1 hari setelah
pembuatan
b. Penetapan pH. Sejumlah suspensi liposom dioleskan pada kertas indikator
dan kemudian ditentukan pH dari sediaan tersebut (Direktrorat Jenderal
Pengawasan Obat dan Makanan, 1979).
c. Pengukuran mikromeritik. Uji mikromeritik dilakukan pada 1 hari setelah
pembuatan. Sebelum dilakukan pengukuran, perlu dilakukan kalibrasi
pada lensa mikroskop. Cara pengujian mikromeritik yaitu sejumlah
suspensi liposom di oleskan pada gelas objek, kemudian diletakkan pada
meja benda pada mikroskop. Ukuran globul yang terdispersi pada suspensi
liposom diamati. Penentuan objek, digunakan pembesar lemah kemudian
diganti pembesar kuat (Martin, 1990).
8. Pembuatan kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella
Penelitian ini menggunakan dua kurva baku ekstrak metanol kelopak
bunga rosella yaitu kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
metanol dan kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
aquadest.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
a. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol
1) Larutan stok (0,4% ⁄ ). Sebanyak 0,1 mL ekstrak metanol kelopak
bunga rosella dilarutkan dalam metanol p.a dan diencerkan dalam
labu takar 25 mL hingga batas tanda.
2) Pembuatan larutan seri baku. Sebanyak 100; 200; 300; 400; 500 dan
600 µL larutan dari larutan stok dilarutkan ke dalam labu takar 10
mL, dan diencerkan dengan metanol p.a hingga batas tanda.
b. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest
1) Larutan stok (1% ⁄ ). Sebanyak 0,1 mL ekstrak metanol kelopak
bunga rosella dilarutkan dalam aquadest dan diencerkan dalam labu
takar 10 mL hingga batas tanda.
2) Pembuatan larutan seri baku. Sebanyak 80; 90; 100; 200; 300; 400;
500; 600; 700; 800; 900 dan 1000 µL larutan dari larutan stok
diambil kemudian dilarutkan ke dalam labu takar 5 mL, dan
diencerkan dengan aquadest hingga batas tanda.
9. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan
multiemulsi A/M/A dan dalam suspensi liposom
Studi penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan
multiemulsi dan dalam suspensi liposom, mengikuti Organization for
Economic Co-operation Development (OECD) Guideline for The Testing of
Chemicals (Skin Absorption: in vitro Method) tahun 2004 yang disertai
beberapa modifikasi oleh peneliti. Studi penetrasi pada penelitian ini
memerlukan langkah-langkah seperti pembuatan larutan PBS dan preparasi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
54
kulit tikus sebagai membran difusi yang telah dijelaskan pada tatacara
penelitian poin 3a dan 3b, pemasangan alat sel difusi Franz (FDC) dan
penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan
multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada kompartemen akseptor atau
donor.
a. Pemasangan alat sel difusi Franz (FDC). Sebelum digunakan kulit tikus
dihidrasi terlebih dahulu dengan larutan ringer laktat selama 30 menit.
Berdasarkan gambar 18, maka kulit dipasang pada FDC dengan bagian
stratum korneum menghadap ke bagian kompartemen donor, lalu
kompartemen akseptor diisi dengan PBS sebanyak 2,7 mL dan
dimasukkan magnetic stirrer. Sebanyak 100 µl ekstrak metanol kelopak
bunga rosella dalam suspensi liposom atau 100 mg sampel ekstrak metanol
kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A diaplikasikan
pada kompartemen donor. Selama FDC beroperasi, suhu dijaga pada 31
– 33 , pada kompartemen akseptor tidak diperbolehkan adanya
gelembung selama proses berlangsung, dan diaduk dengan magnetic
stirrer dengan kecepatan 300 rpm.
b. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
multiemulsi dan dalam suspensi liposom pada kompartemen akseptor.
Pengambilan sampel pada uji penetrasi dengan menggunakan FDC
dilakukan sebanyak 6 kali dengan kulit tikus yang berbeda yang dapat
dilihat pada tabel 2. Sebanyak 100 µL ekstrak metanol kelopak bunga
rosella atau ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam suspensi liposom
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
atau 100 mg sampel ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan
multiemulsi diambil lalu diaplikasikan pada stratum korneum. Selanjutnya
cairan PBS dalam kompartemen akseptor diambil pada jam yang
tercantum pada tabel 2. Selanjutnya cairan PBS langsung di ukur dengan
menggunakan spektrofotometri UV-VIS. Langkah ini diulangi sebanyak
tiga kali sehingga terdapat tiga variasi jumlah ekstrak metanol kelopak
bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi
dan dalam suspensi liposom pada kompartemen akseptor yang
diaplikasikan.
c. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
multiemulsi dan dalam suspensi liposom pada kompartemen donor. Setiap
pengambilan cairan PBS pada kompartemen akseptor yang ditunjukkan
dalam tabel 2, maka ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak
metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi dan dalam suspensi
liposom pada kompartemen donor dibilas dengan aquadest atau metanol.
Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam suspensi liposom yang
masih tersisa pada kompartemen donor dibilas dengan 1,5 mL aquadest,
lalu dimasukkan ke labu takar 5 mL dan ditambahkan dengan aquadest
hingga batas selanjutnya diukur dengan spektrofotometer UV – Vis.
Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi yang masih
tersisa pada kompartemen donor dibilas dengan 3 mL metanol, lalu
dituang dalam tabung sentrifuse dan di-vortex, selanjutnya di-degassing
selama 20 menit dan di-sentifuse dengan kecepatan 5000 rpm selama 30
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
menit. Sebanyak 2,5 mL supernatan yang terbentuk diambil dengan
menggunakan mikropipet, lalu dimasukkan ke dalam labu takar 5 ml dan
ditambahkan dengan metanol hingga batas tanda. Selanjutnya diukur
dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis.
G. Analisis Hasil
Pada penelitian ini, analisa hasil yang dilakukan yaitu:
1. % pemisahan fase
% pemisahan fase untuk mendapatkan formula optimum dihitung
dengan cara:
% pemisahan =
................................(2)
2. Kurva baku
Persamaan kurva baku didapatkan dengan membuat kurva antara
konsentrasi (mg/ml) vs tinggi derivat (cm), dari kurva akan didapatkan nilai
slope (b), intersep (a), dan linearitas (r) yang selanjutnya dapat digunakan
untuk membuat persamaan kurva baku y = bx+a.
3. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol
kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan dalam suspensi
liposom
Konsentrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol
kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan dalam suspensi liposom
baik pada kompartemen donor maupun kompartemen akseptor dihitung
berdasarkan persamaan kurva baku yang telah diperoleh di mana y = tinggi
derivat yang diperoleh dari pengukuran spektrofotometri UV-VIS metode
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
derivatif, a = intersep, b = slope, sehingga didapatlah nilai x berupa
konsentrasi (mg/mL).
Konsentrasi yang didapatkan selanjutnya dikalikan dengan faktor
pengenceran sehingga didapatkan jumlah (mg) ekstrak metanol kelopak bunga
rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan
dalam suspensi liposom pada kompartemen donor maupun kompartemen
reseptor. Jumlah (mg) ekstrak rosella yang didapatkan dibagi dengan berat
mula-mula pengaplikasian sampel dan dikali 100% sehingga didapatkan
jumlah (%) ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak
bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan dalam suspensi liposom pada
kompartemen donor maupun kompartemen reseptor.
Jumlah (%) ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol
kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom yang
tertahan pada kulit dihitung dengan cara massa total pengaplikasian sampel –
(jumlah (%) pada kompartemen donor + Jumlah (%) pada kompartemen
akseptor). Selanjutnya dibuat hubungan antara waktu pengambilan sampel vs
jumlah (%) ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak
bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom pada
kompartemen donor, kompartemen akseptor, serta yang tertahan dalam kulit.
4. Uji statistik
Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella baik pada suspensi
liposom maupun multiemulsi A/M/A yang tertahan dalam kulit selanjutnya
diuji statistik dengan t-test pada taraf kepercayaan 95%.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui sifat dan stabilitas fisis
sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella hasil optimasi
formula dan mengetahui apakah sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimum
mempunyai kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella
yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan
epidermis dan dermis.
Ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang digunakan pada penelitian
ini diperoleh dari Sanjayadi. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang didapat
selanjutnya dilakukan uji kualitatif menggunakan spektrofotometri UV-VIS untuk
memastikan apakah dalam ekstrak metanol kelopak bunga rosella mengandung
antosianin yang memiliki aktivitas antioksidan. Hasil yang diperoleh
menunjukkan ekstrak metanol kelopak bunga rosella mengandung antosianin pada
panjang gelombang 537 nm seperti yang ditunjukkan pada lampiran 1.
Penelitian ini menggunakan metanol sebagai pelarut untuk ekstraksi
kelopak bunga rosella. Pemilihan metanol sebagai pelarut karena kandungan
kimia antosianin yang terkandung dalam rosella lebih mudah larut dalam metanol,
sehingga peneliti menggunakan metanol sebagai pelarut supaya semua kandungan
kimia antosianin yang terkandung dalam kelopak bunga rosella diharapkan dapat
terekstraksi dengan sempurna. Namun, pada sediaan kosmetik tidak
diperbolehkan mengandung metanol karena dapat menyebabkan iritasi pada kulit.
Oleh karena itu, sebelum digunakan untuk formulasi maka metanol yang menjadi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
59
pelarut ekstrak perlu diuapkan terlebih dahulu sehingga perlu adanya penetapan
bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella sebelum formulasi, selanjutnya
dilakukan uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella untuk mengetahui
kemampuan penetrasi dari ekstrak rosella, kemudian dilakukan optimasi formula
untuk mendapatkan formula multiemulsi yang optimum dan dilanjutkan dengan
uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi
dan dalam suspensi liposom.
A. Penetapan Bobot Tetap Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella
Tujuan dilakukannya bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella
yaitu untuk mendapatkan bobot kering dari ekstrak metanol kelopak bunga rosella
setelah proses pemanasan atau penguapan pelarut. Hasil yang didapat setiap 0,5
mL ekstrak metanol kelopak bunga rosella sama dengan 0,5117 gram ekstrak
kering kelopak bunga rosella seperti yang ditunjukkan pada lampiran 2. Hasil ini
selanjutnya akan digunakan untuk perhitungan konsentrasi ekstrak metanol
kelopak bunga rosella baik dalam sediaan maupun kurva baku.
B. Uji Penetrasi Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella
Tujuan uji penetrasi ekstrak rosella yaitu untuk mengetahui kemampuan
penetrasi larutan ekstrak rosella kedalam kulit. Sebanyak 100 µL larutan stok
ektrak rosella 1,25%v/v diaplikasikan pada stratum korneum dan dilakukan
pengambilan sampel pada kompartemen akseptor maupun kompartemen donor
pada interval waktu tertentu. Hasil yang didapat ditunjukkan pada gambar 19.
Gambar 19 menunjukkan bahwa pada kompartemen akseptor semakin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
60
bertambahnya waktu, jumlah ekstrak rosella yang terpenetrasi berkurang. Hal ini
sesuai dengan nilai koefisien korelasi yang didapat yaitu -0,3495. Nilai koefisien
korelasi minus menunjukkan bahwa variabel x (waktu pengambilan sampel)
berbanding terbalik dengan variabel y (jumlah ekstrak rosella yang terpenetrasi).
Apabila dibuat persamaan regresi didapatkan nilai y = 39,32293 - 4,89500 x.
Gambar 19. Kurva uji penetrasi ekstrak rosella
Nilai slope menunjukkan bahwa selama 6 jam kemampuan ekstrak
metanol kelopak bunga rosella yang masuk ke kompartemen akseptor terjadi
penurunan sebesar 4,8949, sehingga dapat diduga bahwa larutan ekstrak rosella
dapat masuk ke dalam kulit namun kemampuan penetrasi yang diberikan
berkurang seiring waktu dan bervariasi. Hal ini dimungkinkan oleh beberapa
faktor seperti ketebalan kulit yang digunakan antar jam berbeda, pengaruh
berbagai reaksi dengan senyawa dan enzim dalam kulit seperti polifenoloksidase;
peroxidase; glikosidase; dan esterase, terjadi kerusakan antosianin dalam ekstrak
-10
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
0 2 4 6 8
jum
lah
ek
stra
k r
ose
lla (
%)
waktu (jam)
donor
akseptor
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
61
metanol kelopak bunga rosella sebelum berpenetrasi ke dalam kulit akibat
terpapar pada udara dan sinar.
Gambar 19 pada kompartemen donor menunjukkan bahwa semakin
bertambahnya waktu sisa jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang
tersisa pada kompartemen donor meningkat, terlihat pada garis korelasi
mengalami kenaikan dengan nilai koefisien korelasi yang didapat yaitu 0.089.
Persamaan regresi yang didapat yaitu y = 68,48568 + 0,41939 x. Nilai slope
menunjukkan bahwa selama 6 jam jumlah ekstrak rosella yang tersisa pada kulit
mengalami kenaikan. Hal ini mungkin disebabkan karena kesalahan ketika
pencucian, di mana ketika pencucian masih ada ekstrak rosella yang tidak tercuci
sehingga tidak semua ekstrak rosella yang tertinggal pada kulit dapat terukur, atau
terpapar oleh udara dan sinar selama pengerjaan.
Berdasarkan penjelasan pada Gambar 19 dapat diduga bahwa larutan
ekstrak rosella dapat masuk ke dalam kulit namun kemampuan penetrasinya tidak
konstan sehingga diperlukan vesikel yang mampu memberikan kemampuan
penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella supaya tetap konstan.
C. Optimasi Formula Multiemulsi A/M/A
Optimasi pembuatan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dibagi menjadi dua yaitu optimasi pada emulsi primer A/M ekstrak
metanol kelopak bunga rosella dan optimasi ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam multiemulsi A/M/A. Optimasi emulsi primer A/M ekstrak metanol
kelopak bunga rosella terlebih dahulu menentukan nilai HLB yang akan
digunakan; menentukan kecepatan pengadukan; menentukan lama pencampuran
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
62
dan komponen lain yang dibutuhkan untuk membentuk emulsi primer A/M
ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang stabil. Setelah mendapatkan formula
optimum emulsi primer A/M yang stabil, kemudian dilanjutkan dengan optimasi
multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella. Parameter yang
dilihat untuk menentukan sediaan yang dihasilkan telah optimum yaitu dengan
menghitung % pemisahan fase creaming yang terjadi. % pemisahan yang paling
sedikit menunjukkan bahwa emulsi yang dihasilkan stabil, dapat dilihat pada
lampiran 3 dan 4.
1. Optimasi emulsi primer A/M
a. Optimasi nilai HLB yang akan digunakan
Optimasi emulsi primer A/M ekstrak metanol kelopak bunga
rosella, terlebih dahulu ditentukan nilai HLB yang akan digunakan. Nilai
HLB yang digunakan pada optimasi ini yaitu 5; 5,3; 5,5 dan 5,8 dengan
kecepatan pengadukan 4 selama 10 menit. Setelah didiamkan selama 1
hari, pada keempat HLB terjadi fenomena ketidakstabilan emulsi berupa
creaming, dengan %pemisahan berturut-turut yaitu 66%; 64,6%; 60%; dan
56%. Creaming dapat terjadi dimungkinkan karena jumlah emulgator yang
digunakan kurang cukup kuat untuk mengurangi tegangan antar muka
emulsi primer A/M pada HLB tersebut.
Emulsi primer A/M pada penelitian ini menggunakan dua
emulgator yaitu emulgator hidfobik berupa ester asam lemak sorbitan
monooleat (Span 80) dan emulgator hidrofilik ester asam lemak
polioksietilen sorbitan monooleat (Tween 80) dengan konsentrasi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
63
emulgator 10% karena berdasarkan Rowe dkk. (2009), kombinasi dua
emulgator ini cukup mampu menstabilkan emulsi primer A/M.
Pemilihan emulgator gabungan dikarenakan emulgator gabungan
dapat menghasilkan pengurangan tegangan antar muka yang lebih besar
dibandingkan emulgator tunggal sehingga emulsi yang dibentuk akan lebih
stabil karena karakteristik hidrofilik dan lipofilik emulgator seimbang
(Rowe dkk., 2009).
b. Optimasi kecepatan pengadukan emulsi primer
Tujuan menentukan kecepatan pengadukan ini yaitu untuk
mengetahui kecepatan pengadukan yang dapat menghasilkan emulsi
primer yang stabil. Kecepatan pengadukan yang digunakan yaitu
kecepatan 4 dan kecepatan 5. Pemilihan kecepatan 4 dan kecepatan 5
karena untuk membuat multiemulsi diperlukan kecepatan pengadukan
yang lebih tinggi untuk membuat emulsi primer supaya droplet yang
terbentuk lebih kecil. Hasil yang didapat setelah didiamkan 1 hari emulsi
dengan kecepatan pengadukan 5 menghasilkan % pemisahan yang lebih
sedikit yaitu 52% sedangkan pada kecepatan 4 yaitu 56% sehingga peneliti
memilih kecepatan pengadukan 5.
c. Optimasi lama pencampuran emulsi primer
Tujuan menentukan lama pencampuran emulsi primer yaitu untuk
mengetahui waktu pencampuran yang dibutuhkan untuk mendapatkan
emulsi primer yang stabil. Lama pencampuran yang digunakan yaitu 10,
15, dan 20 menit, dan dari ketiga waktu yang digunakan, setelah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
64
didiamkan selama 1 hari terjadi creaming. Namun % pemisahan yang
dihasilkan tidak terlalu berbeda sehingga peneliti memilih lama
pencampuran 10 menit, karena lama pencampuran tidak terlalu
berpengaruh terhadap stabilitas multiemulsi. Hasil pengamatan dapat
dilihat pada lampiran 3c.
d. Optimasi konsentrasi stiffening agent
Tujuan menentukan konsentrasi stiffening agent yaitu untuk
mengetahui konsentrasi stiffening agent yang dibutuhkan supaya dapat
menghasilkan emulsi primer A/M yang stabil. Stiffening agent merupakan
suatu zat yang ditambahkan ke dalam formulasi yang berfungsi untuk
meningkatkan konsistensi dan viskositas sediaan. Stiffening agent yang
digunakan dalam formulasi ini yaitu setil alkohol.
Konsentrasi stiffening agent yang digunakan pada optimasi yaitu
4; 4,5; 5; 5,5; 6; 8; dan 10%. Hasil pengamatan dapat dilihat pada lampiran
3d. Berdasarkan ketujuh konsentrasi yang digunakan tersebut, hanya
konsentrasi 6% yang menghasilkan emulsi primer A/M yang stabil.
Namun, sediaan yang dihasilkan membentuk foaming. Selain sebagai
stiffening agent, setil alkohol juga dapat memfasilitasi pengangkutan
emulgator dari antarmuka minyak/air ke fase minyak sehingga dapat
mengarahkan mempercepat penggabungan terbentuknya droplet internal.
e. Optimasi konsentrasi anti foaming agent
Tujuan menentukan konsentrasi anti foaming agent yaitu untuk
mengetahui konsentrasi anti foaming agent yang dibutuhkan supaya dapat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
65
menghasilkan emulsi primer A/M yang stabil. Tujuan penambahan anti
foaming agent pada penelitian ini yaitu untuk mengurangi busa yang
terbentuk yang disebabkan adanya penambahan setil alkohol sehingga
dapat mengurangi resiko kerusakan ekstrak metanol kelopak bunga rosella
akibat adanya udara dari busa. Optimasi konsentrasi anti foaming agent
(dimethicone) yang digunakan pada penelitian ini yaitu 2%; 4%; 6%; dan
8%. Setelah 1 hari pembuatan emulsi primer, pada semua konsentrasi, %
pemisahan fase yang dihasilkan 0% namun dilihat dari penampilannya,
pada konsentrasi dimetichone 2%, 4%, dan 6% menunjukkan adanya
tanda-tanda ketidakstabilan pada emulsi berupa keretakan, sedangkan pada
konsentrasi 8% tidak menimbulkan tanda-tanda ketidakstabilan, sehingga
peneliti memilih konsentrasi dimethicone yang digunakan yaitu 8%.
Mekanisme dimethicone sebagai anti foaming agent yaitu (1)
droplet dimetichone akan masuk ke dalam liquid film (antara gelembung)
dan dengan segera akan menutupi busa sehingga terjadi penurunan
tegangan permukaan yang menyebabkan terjadinya pemecahan film; (2)
droplet dimetichone masuk ke dalam liquid film antara gelembung
kemudian menyebar disekitar partikel busa dan membentuk monolayer
campuran pada permukaan gelembung. apabila monolayer yang terbentuk
telah stabil, maka akan mengacaukan film (Colas, Siang dan Ulman, 2006).
Berdasarkan semua optimasi emulsi primer A/M, maka diperoleh
formula optimum emulsi primer A/M seperti ditunjukkan pada tabel 3.
Selanjutnya akan dilakukan optimasi multiemulsi A/M/A.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
66
Tabel 3. Formula optimum emulsi primer A/M
Formula Berat (gram)
Minyak 60,31
Span 80 7,48
Tween 80 1,22
Setil alkohol 5,56
Dimethicone 7,41
MgSO4 0,61
Aquadest 17,41
2. Optimasi multiemulsi A/M/A
a. Menentukan jumlah emulsi primer
Optimasi multiemulsi A/M/A diawali dengan menentukan rasio
emulsi primer A/M yang akan diemulsikan ke fase air eksternal. Rasio
yang digunakan yaitu 27,8; 37,8; dan 47,8 g. Hasil pengamatan dapat
dilihat pada lampiran 4a. Berdasarkan ketiga rasio tersebut yang
memberikan multiemulsi yang stabil selama 1 hari yaitu rasio emulsi
primer 37,8 g.
b. Menentukan konsentrasi emulgator sekunder
Tujuan menentukan konsentrasi emulgator sekunder yaitu untuk
mengetahui konsentrasi emulgator sekunder yang dibutuhkan supaya dapat
menghasilkan multiemulsi A/M/A yang stabil. Konsentrasi Tween 80 yang
digunakan pada optimasi yaitu konsentrasi 2%; 4%; dan 6%. Hasil
pengamatan dapat dilihat pada lampiran 4b. Berdasarkan ketiga
konsentrasi tersebut setelah didiamkan selama 3 hari, hanya konsentrasi 2%
yang dapat menghasilkan multiemulsi A/M/A yang stabil, sehingga
konsentrasi Tween 80 yang digunakan yaitu 2%. Emulgator sekunder yang
digunakan yaitu Tween 80. Menurut Rowe dkk. (2009), Tween 80 dapat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
67
dikatakan sebagai emulsifying agent pada emulsi minyak dalam air,
apabila masuk rentang konsentrasi 1 – 15%.
c. Menentukan lama pencampuran multiemulsi
Tujuan menentukan lama pencampuran multiemulsi yaitu untuk
mengetahui lama pencampuran pembuatan multiemulsi supaya dapat
menghasilkan emulsi primer A/M yang stabil. Lama pencampuran yang
digunakan yaitu 10, 15, dan 20 menit. Hasil optimasi menunjukkan dari
ketiga waktu yang digunakan, setelah didiamkan selama 1 hari, tidak
terjadi creaming, sehingga peneliti memilih lama pencampuran 10 menit,
dikarenakan lama pencampuran tidak terlalu berpengaruh terhadap
stabilitas multiemulsi.
Berdasarkan hasil optimasi multiemulsi A/M/A maka didapatkan
formula optimum multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga
rosella. Formula optimum yang didapatkan ditunjukkan pada tabel 4.
Tabel 4. Formula optimum multiemulsi A/M/A
Formula Berat (gram)
Emulsi Primer 37,72
Tween 80 2,00
Xanthan gum 0,40
Aquadest eksternal 59,88 mL
D. Pembuatan Multiemulsi A/M/A
Pembuatan multiemulsi diawali dengan tahap pembuatan emulsi primer
tipe A/M. Emulsi primer dibuat dengan cara mengemulsikan aquadest yang telah
ditambahkan Tween 80, magnesium sulfat, dan ekstrak metanol kelopak bunga
rosella ke dalam campuran minyak yang terdiri dari parafin cair, Span 80,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
68
dimethicone dan setil alkohol. Emulsi dihomogenkan dengan mixer kecepatan 5
selama 10 menit agar diperoleh ukuran globul yang kecil. Energi yang besar
terbukti mampu memperkecil ukuran globul. Semakin kecil ukuran globul maka
emulsi primer semakin stabil. Emulsi primer yang stabil mampu meningkatkan
kestabilan emulsi sekunder. Parafin cair pada emulsi primer ini berfungsi sebagai
fase minyak serta emolien yang dapat mencegah dehidrasi pada saat sediaan
diaplikasikan ke kulit. Selain itu parafin cair akan menghasilkan multiemulsi yang
lebih stabil dibandingkan dengan multiemulsi yang dihasilkan dari minyak nabati
(Kumar, dkk., 2012).
Sejumlah emulsi primer A/M diemulsikan ke dalam fase cair eksternal
yang ditambahkan Tween 80 dan xanthan gum sebagai agen peningkat viskositas.
Emulsi diaduk menggunakan mixer dengan kecepatan rendah (kecepatan 1) agar
tidak memecah droplet air dalam emulsi primer A/M akibat energi tinggi. Peran
xanthan gum dalam multiemulsi A/M/A yaitu sebagai biopolymer hidrofilik yang
mampu meningkatkan stabilitas emulsi ganda dengan mencegah pelepasan tak
terkendali dari bahan yang terjerap dan membantu proses enkapsulasi droplet fase
dalam dengan lebih baik (Lutz dan Aserin, 2008). Peran magnesium sulfat dalam
multiemulsi A/M/A yaitu sebagai elektrolit untuk mencegah adanya tekanan
osmotik antara fase air internal dengan fase air eksternal.
Keseluruhan proses pembuatan disertai dengan penjenuhan nitrogen,
lampu ruangan dimatikan, serta wadah yang digunakan dilapisi dengan aluminium
foil. Setelah tercampur homogen, multiemulsi kemudian disimpan dalam wadah
yang tidak tembus cahaya serta dialiri gas nitrogen terlebih dahulu kemudian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
69
ditutup rapat untuk mencegah kontaminasi serta penguraian aktivitas antioksidan
karena cahaya.
Proses pembuatan multiemulsi pada penelitian ini menggunakan dua
tahap proses emulsifikasi dengan menggunakan dua jenis emulgator. Emulgator
hidrofobik ditujukan untuk menstabilkan antarmuka dari emulsi air dalam minyak,
sedangkan emulgator hidrofilik untuk menstabilkan emulsi minyak dalam air.
Pembuatan emulsi primer A/M membutuhkan kecepatan pengadukan yang lebih
besar dibandingkan dalam pembuatan emulsi sekunder M/A. Hal ini bertujuan
untuk mencegah pecahnya droplet internal yang telah terbentuk.
E. Evaluasi Multiemulsi A/M/A
1. Pengamatan organoleptis
Pengamatan organoleptis dilakukan dengan mengamati warna, bau,
dan homogenitas sediaan multiemulsi dan suspensi liposom. Berdasarkan hasil
pengamatan, multiemulsi memiliki warna merah muda seperti yang
ditunjukkan pada gambar 20. Warna merah muda pada multiemulsi
disebabkan oleh warna ekstrak metanol kelopak bunga rosella sendiri yang
berwarna merah sangat dominan mempengaruhi warna sediaan. Multiemulsi
yang dihasilkan berbau khas dan homogen. Uji organoleptis ini sangat penting
dikarenakan untuk menilai kenyaman dari sediaan multiemulsi.
Gambar 20. Organoleptis multiemulsi A/M/A
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
70
2. Penetapan pH multiemulsi
Tujuan penetapan pH multiemulsi yaitu untuk mengetahui apakah pH
multiemulsi yang dihasilkan telah sesuai dengan pH kulit. Uji pH pada
penelitian ini dilakukan dengan menggunakan indikator kertas pH. Sediaan
multiemulsi yang dihasilkan memiliki pH 4 yang disebabkan karena pH
ekstrak metanol kelopak bunga rosella sendiri yaitu 4. pH multiemulsi yang
dihasilkan telah sesuai dengan pH kulit yaitu 4 – 6 (Lambers, Piessens, Bloem,
Pronk, dan Finkel, 2006). pH sediaan untuk pengaplikasian secara topikal
tidak boleh terlalu asam dan tidak boleh terlalu basa. Apabila terlalu asam
dapat mengiritasi kulit dan apabila terlalu basa dapat menyebabkan kulit
bersisik.
3. Uji penentuan tipe emulsi primer A/M dan multiemulsi A/M/A
Langkah pertama yang dilakukan dalam penentuan tipe multiemulsi
yaitu menentukan tipe emulsi primer terlebih dahulu kemudian menentukan
tipe multiemulsi. Pengujian tipe emulsi primer dan multiemulsi dilakukan
dengan metode kelarutan. Berdasarkan hasil pengamatan, menunjukkan
emulsi primer larut dalam minyak, sehingga dapat dikatakan emulsi primer
yang dihasilkan merupakan tipe air dalam minyak (A/M) ditunjukkan pada
gambar 21a. Emulsi primer yang dibuat harus tipe emulsi A/M karena untuk
membuat multiemulsi A/M/A maka perlu menyiapkan emulsi primer A/M
terlebih dahulu. Apabila emulsi primer yang dihasilkan bukan tipe A/M maka
multiemulsi tidak akan terbentuk. Multiemulsi yang dihasilkan larut dalam air,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
71
sehingga dapat dikatakan bahwa fase luar multiemulsi merupakan air dan tipe
multiemulsi yang dihasilkan yaitu A/M/A ditunjukkan pada gambar 21b.
(a) (b)
Gambar 21. Pengamatan uji kelarutan (a) emulsi primer larut dalam minyak, (b)
multiemulsi larut dalam air
4. Pengukuran mikromeritik
Tujuan dilakukannya pengukuran mikromeritik yaitu untuk
mengetahui ukuran partikel multiemulsi yang dihasilkan. Pengukuran
mikromeritik sediaan multiemulsi menggunakan mikroskop Optilab. Hasil
pengukuran mikromeritik dapat dilihat pada lampiran 5. Rata-rata ukuran
partikel emulsi primer yaitu 4,543 µm yang dapat dilihat pada gambar 22a,
sedangkan ukuran partikel multiemulsi yaitu 12,191 µm yang dapat dilihat
pada gambar 22b. Berdasarkan ukuran partikel multiemulsi yang dihasilkan
dapat diduga bahwa multiemulsi yang dihasilkan dapat masuk ke kulit karena
jarak interselular antar korneosit pada kulit yaitu 0,1 mm (Higaki, Amnuaikit,
dan Kimura, 2003).
Ukuran rata-rata diameter globul multiemulsi pada umumnya sedikit
lebih besar, berkisar antara 15-50 µm yang terdiri dari 50-100 droplet air
dalam setiap globul minyak dalam emulsi, sedangkan yang lainnya dapat lebih
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
72
kecil, berkisar antara 2-5 µm dan terdiri dari satu atau beberapa droplet air
dalam setiap globul minyak dalam emulsi (Garti dan Bisperink, 1998).
(a)
(b)
Gambar 22. Foto partikel (a) emulsi primer A/M; (b) multiemulsi A/M/A (perbesaran 40x)
5. Uji mekanik (sentrifugasi)
Tujuan uji mekanik yaitu untuk mengetahui apakah sediaan
multiemulsi yang dihasilkan dapat stabil terhadap pengadukan yang sangat
kuat. Setelah dilakukan uji mekanik (sentrifugasi), terjadi pemisahan fase
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
73
menjadi 4 bagian seperti yang ditunjukkan pada gambar 23. Lapisan pertama
merupakan lapisan minyak, lapisan kedua merupakan multiemulsi yang belum
pecah, lapisan ketiga fase air, dan lapisan keempat berupa xanthan gum.
Penentuan tiap lapisan pada uji mekanik ini berdasarkan berat jenis setiap
bahan. Hal ini membuktikan bahwa multiemulsi yang dihasilkan masih kurang
stabil terhadap penggojokkan yang sangat kuat akibat pemisahan gravitasional
yang dipercepat.
Gambar 23. Hasil uji mekanik (sentrifugasi)
6. Evaluasi volume creaming
Tujuan evaluasi volume creaming yaitu untuk mengetahui apakah
multiemulsi yang telah disimpan mengalami creaming atau tidak yang dapat
menyebabkan distribusi zat aktif yang tidak merata. Setelah 28 hari pembuatan
pada kondisi penyimpanan optimum, multiemulsi yang dihasilkan belum
menunjukkan adanya ketidakstabilan berupa creaming seperti yang
ditunjukkan pada gambar 24.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
74
Gambar 24. Hasil uji volume creaming 28 hari setelah pembuatan
Hal ini dikarenakan adanya penambahan agen peningkat viskostas
berupa xanthan gum yang cukup dapat menghambat laju creaming. Selain itu,
emulgator eksternal juga cukup kuat mampu menjaga agar globul minyak
tidak mengalami koalesen yang dapat menyebabkan pemisahan fase.
F. Evaluasi Sediaan Suspensi Liposom
1. Pengamatan organoleptis
Pengamatan organoleptis dilakukan dengan mengamati warna, bau,
dan homogenitas suspensi liposom. Berdasarkan hasil pengamatan, suspensi
liposom memiliki warna merah seperti yang ditunjukkan pada gambar 25.
Warna merah pada suspensi liposom disebabkan oleh warna ekstrak metanol
kelopak bunga rosella sendiri yang berwarna merah sangat dominan
mempengaruhi warna sediaan. suspensi liposom yang dihasilkan tidak berbau
dan homogen. Uji organoleptis ini sangat penting dikarenakan untuk menilai
kenyaman dari sediaan suspensi liposom tersebut.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
75
Gambar 25. Organoleptis suspensi liposom
2. Pengukuran pH suspensi liposom
Tujuan penetapan pH suspensi liposom yaitu untuk mengetahui
apakah pH multiemulsi yang dihasilkan telah sesuai dengan pH kulit. Uji pH
pada penelitian ini dilakukan dengan menggunakan indikator kertas pH.
Sediaan multiemulsi yang dihasilkan memiliki pH 4 yang disebabkan karena
pH ekstrak metanol kelopak bunga rosella sendiri yaitu 4. pH suspensi
liposom yang dihasilkan sesuai dengan pH kulit yaitu 4 – 6 (Lambers dkk.,
2006). pH sediaan untuk pengaplikasian secara topikal tidak boleh terlalu
asam dan tidak boleh terlalu basa. Apabila terlalu asam dapat mengiritasi kulit
dan apabila terlalu basa dapat menyebabkan kulit bersisik.
3. Pengukuran mikromeritik
Tujuan pengukuran mikromeritik suspensi liposom yaitu untuk
mengetahui ukuran partikel suspensi liposom. Pengukuran mikromeritik
suspensi liposom menggunakan mikroskop Optilab. Hasil pengukuran
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
76
mikromeritik dapat dilihat pada lampiran 3. Rata-rata ukuran partikel suspensi
liposom yaitu 2,450 µm seperti yang ditunjukkan pada gambar 26.
Gambar 26. Foto partikel suspensi liposom (perbesaran 40x)
Liposom yang dihasilkan termasuk kategori Giant Unilamellar Vesicles
(GUV). Berdasarkan ukuran partikel suspensi liposom yang dihasilkan dapat
diduga bahwa suspensi liposom yang dihasilkan dapat masuk ke kulit karena jarak
interselular antar korneosit pada kulit yaitu 0,1 mm (Higaki dkk., 2003).
G. Kurva Baku Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella
Fungsi kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella yaitu untuk
mengetahui apakah metode analisis dapat memberikan hasil yang linear antara
konsentrasi analit dengan respon uji yang kemudian dibuat kurva kalibrasi untuk
mendapatkan persamaan regresi linear. Kurva baku atau kurva kalibrasi
menyatakan hubungan antara konsentrasi analit pada beberapa seri baku dengan
respon instrument. Respon instrument pada spektrofotometri UV-VIS derivative
yaitu tinggi derivat.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
77
Menurut ICH, dalam menguji linearitas setidaknya menggunakan 5
tingkat konsentrasi dan linearitas tercapai ketika nilai koefisien relasi (r) ≥ 0,9985.
Slope dari persamaan kurva baku akan memberikan gambaran tentang sensitivitas
(Chan, dkk., 2004). Dalam penelitian ini untuk mencari regresi linear digunakan
working solution. Working solution merupakan larutan yang dipreparasi dari
larutan stok yang kemudian diencerkan dengan pelarut yang sesuai dan membuat
konsentrasi yang diinginkan.
1. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol
Tujuan pembuatan kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella
dalam metanol yaitu untuk menghitung jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam sediaan multiemulsi pada kompartemen donor, kompartemen
akseptor, dan yang tertahan di dalam kulit. Enam seri konsentrasi baku esktrak
rosella dibuat dengan cara melarutkan esktrak rosella menggunakan metanol
p.a kemudian diukur menggunakan spektrofotometri UV-VIS derivatif.
Selanjutnya konsentrasi seri larutan baku ekstrak metanol kelopak bunga
rosella diplotkan terhadap tinggi derivatif spektrum derivat menggunakan
aplikasi Powerfit v.6.05 yang dikeluarkan oleh Universiteit Utrecht Faculteit
Scheikund.
Gambar 27. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.00 0.10 0.20 0.30
tin
ggi d
eriv
at
(cm
)
konsentrasi (mg/ml)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
78
Berdasarkan gambar 27 didapatkan persamaan kurva baku y =
1,32798x – 0,02313 dengan nilai koefisien relasi r = 0,997. Dilihat dari nilai r
yang didapat sudah memenuhi persyaratan yang ditetapkan oleh ICH yaitu
sekurang-kurangnya 5 konsentrasi dan hasil koefisien relasi yang didapatkan
sebesar 0,997 menunjukan 99,7% perubahan tinggi derivat dipengaruhi oleh
perubahan konsentrasi analit (ekstrak metanol kelopak bunga rosella). Hal ini
menunjukkan hasil uji linearitas memenuhi syarat yang ditentukan oleh ICH
dimana konsentrasi berbanding linear terhadap respon uji (tinggi derivat).
Berdasarkan persamaan kurva baku, dapat dihitung nilai LOD dan LOQ untuk
mengetahui konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat dideteksi.
LOD merupakan konsentrasi atau jumlah analit yang berbeda signifikan dari
blanko dan dapat dideteksi oleh instrumen. LOQ merupakan kadar terkecil
dari sampel yang masih bisa dikuantifikasi.
Berdasarkan data persamaan kurva baku yang diperoleh dari Powerfit
v.6.05, didapatkan nila Sa = 4,97043x10-2
. Apabila nilai Sa dimasukkan ke
dalam rumus LOD dan LOQ maka didapatkan nilai LOD sebesar 0,1235
mg/mL dan nilai LOQ sebesar 0,3743mg/mL. Nilai slope dari persamaan
kurva baku yaitu 1,32798.
2. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest
Tujuan pembuatan kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella
dalam aquadest yaitu untuk menghitung jumlah ekstrak metanol kelopak
bunga rosella dalam sediaan suspensi liposom pada kompartemen donor,
kompartemen akseptor, dan yang tertahan di dalam kulit. Sebanyak 10 seri
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
79
konsentrasi baku esktrak rosella dibuat dengan cara melarutkan masing-
masing esktrak rosella menggunakan aquadest kemudian diukur menggunakan
spektrofotometri UV-VIS derivatif. Selanjutnya konsentrasi seri larutan baku
ekstrak metanol kelopak bunga rosella diplotkan terhadap nilai tinggi derivatif
spektrum derivat menggunakan aplikasi Powerfit v.6.05 yang dikeluarkan oleh
Universiteit Utrecht Faculteit Scheikund.
Gambar 28. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest
Berdasarkan gambar 28 didapatkan persamaan kurva baku y =
1,94163x – 0,18860 dengan nilai koefisien korelasi (r) = 0,99953. Nilai r yang
didapat sudah memenuhi persyaratan yang ditetapkan oleh ICH yaitu
sekurang-kurangnya 5 konsentrasi dan hasil koefisien korelasi yang
didapatkan sebesar 0,9991 menunjukan 99,91% perubahan tinggi derivat
dipengaruhi oleh perubahan konsentrasi analit (ekstrak metanol kelopak bunga
rosella). Berdasarkan persamaan kurva baku yang didapat maka nilai LOD dan
LOQ dapat dihitung. LOD merupakan konsentrasi atau jumlah analit yang
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
0 0.5 1 1.5 2 2.5
tin
gg
i d
eriv
at
(cm
)
Konsentrasi (mg/ml)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
80
berbeda signifikan dari blanko dan dapat dideteksi oleh instrumen. LOQ
merupakan kadar terkecil dari sampel yang masih bisa dikuantifikasi.
Berdasarkan data persamaan kurva baku yang diperoleh dari Powerfit
v.6.05, didapatkan nila Sa = 1,87650x10-2
apabila nilai Sa dimasukkan ke
dalam rumus LOD dan LOQ maka didapatkan nilai LOD sebesar 0,0319
mg/mL dan nilai LOQ sebesar 0,0966 mg/mL. Nilai slope dari persamaan
kurva baku yaitu 1,9416.
H. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan
multiemulsi dan suspensi liposom
Uji penetrasi secara in vitro pada penelitian ini menggunakan sel difusi
Franz (FDC). Uji penetrasi ini untuk mengetahui jumlah ekstrak metanol kelopak
bunga rosella yang terpenetrasi ke kulit selama kurun waktu 6 jam pada ekstrak
metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan dalam
suspensi liposom.
1. Larutan 10mM Phospate Buffer Saline (PBS) pH 4
Tujuan dibuatnya Phospate Buffer Saline pH 4 sebagai sebagai
medium pada kompartemen akseptor FDC. Larutan yang hendak digunakan
sebagai medium pada kompartemen akseptor tidak boleh menggangu sistem
kulit karena dapat mempengaruhi difusi zat.
2. Preparasi kulit tikus betina galur wistar sebagai membran difusi
Studi penetrasi ini menggunakan kulit tikus sebagai membran dan
FDC sebagai aparatusnya. Peneliti menggunakan kulit tikus sebagai membran
karena cukup mudah diperoleh, biaya yang murah, dan penanganannya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
81
sederhana (Godin dan Touitou, 2007). Berdasarkan tabel 5 dapat dilihat bahwa
koefisien permeabilitas rat galur wistar tidak terlalu berbeda dengan kulit
manusia dibandingkan spesies yang lainnya.
Tabel 5. Perbandingan koefisien permeabilitas dari beberapa spesies terhadap air
Spesies Galur Koefisien Permeabilitas terhadap air (cm/h x
10-5
)
Manusia 93
Rat Alpk/AP 103
Hairless mouse 103
Mouse Alpk/AP 144
Hairless mouse 350
Guinea pig
Dunkin-Hartley 442
Rabbit New Zealdan White 253 (Scott, Walker, dan Dugard, 1986)
Membran yang digunakan yaitu kulit punggung tikus betina galur
Wistar yang berumur 2-3 bulan karena semakin tua umur tikus, maka
ketebalan stratum korneum akan semakin besar sehingga permeabilitasnya
akan semakin rendah (Walters, 2002). Dilihat dari ketebalan struktur kulitnya,
kulit tikus memiliki kesamaan secara struktural dengan kulit manusia yaitu
2,09 mm untuk kulit tikus dan 2,97 mm untuk kulit manusia (Godin dan
Touitou, 2007). Studi absorbsi perkutan ortho-phenylphenol yang dilakuan
Cnubben dan colleagues (2002), menunjukkan penetrasi senyawa pada kulit
utuh manusia dan tikus (epidermis dan dermis) lebih lambat daripada bagian
epidermis pada manusia dan tikus seperti yang ditunjukkan pada gambar 29.
Hal ini menunjukkan bahwa ketebalan kulit berpengaruh terhadap studi
absorbsi perkutan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
82
Gambar 29. Hubungan dermal absorption orto-fenilfenol dengan waktu pada beberapa jenis
kulit
Supaya bisa digunakan sebagai membran sel difusi Franz, tikus yang
telah dikorbankan dicukur bulunya dengan hati-hati. Hal ini bertujuan untuk
mencegah robeknya kulit yang akan digunakan. Selanjutnya lemak subkutan
dihilangkan karena lemak dapat mempengaruhi penetrasi obat melalui kulit.
Kulit yang telah dihilangkan lemak subkutannya dicuci terlebih dahulu dengan
larutan ringer laktat selanjutnya dapat langsung digunakan atau bisa disimpan
dalam freezer. Berdasarkan Organization for Economic Co-operation
Development (OECD) Guideline for The Testing of Chemicals (Skin
Absorption: in vitro Method), kulit hewan yang akan digunakan dapat
disimpan selama beberapa bulan pada suhu -200C dan telah dilaporkan tidak
menunjukkan perubahan permeabilitas dibandingkan dengan kulit segar.
3. Pemasangan alat Sel difusi Franz (FDC)
Sebelum kulit digunakan sebagai membran difusi, kulit perlu
dihidrasi terlebih dahulu dengan Phospate Buffer Saline pH 4 selama kurang
lebih 30 menit pada suhu ruang. Proses hidrasi ini ditujukan untuk
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
83
mengkondisikan kulit ke kondisi semula sebelum disimpan dalam lemari
pendingin sampai sebelum digunakan.
Membran yang digunakan diletakkan antara kompartemen donor dan
kompartemen akseptor, di mana membran harus kontak langsung dengan
cairan akseptor supaya sediaan yang diaplikasikan pada membran dapat
terpenetrasi menembus kulit dan masuk dalam cairan akseptor. Selama proses
berlangsung, suhu tetap dijaga dengan thermostat sebesar 31oC – 33
oC di
mana pada suhu tersebut menggambarkan kondisi suhu tubuh. Untuk
menghomogenkan bahan aktif yang terpenetrasi ke cairan akseptor, maka pada
cairan akseptor perlu adanya pengadukan dengan magnetik stirrer dengan
kecepatan 300 rpm selama proses berlangsung. Semakin tinggi kecepatan
pengadukan maka akan menimbulkan gelembung udara pada perbatasan
antara membran kulit dengan kompartemen cairan akseptor sehingga akan
menghalangi kontak langsung antara membran kulit dengan kompartemen
cairan akseptor, sedangkan semakin rendah kecepatan pengadukan maka akan
sulit untuk menghomogenkan bahan aktif yang terpenetrasi ke kulit.
4. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
multiemulsi A/M/A dan dalam suspensi liposom pada kompartemen
akseptor dan kompartemen donor
Tujuan penetapan ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
sediaan multiemulsi dan suspensi liposom dalam kompartemen akseptor FDC
yaitu untuk mengetahui kemampuan penetrasi sediaan multiemulsi dan
suspensi liposom yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
84
yang dapat menembus kulit selama interval waktu tertentu sedangkan tujuan
penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan
multiemulsi dan suspensi liposom pada kompartemen donor yaitu untuk
mengetahui seberapa banyak sediaan multiemulsi dan suspensi liposom yang
mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tidak dapat
terpenetrasi ke dalam kulit.
a. Perbandingan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
sediaan multiemulsi A/M/A dan dalam suspensi liposom pada
kompartemen donor
Tujuan membandingkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan dalam suspensi liposom
pada kompartemen donor yaitu untuk mengetahui jumlah ekstrak metanol
kelopak bunga rosella antara sediaan multiemulsi A/M/A dengan sediaan
suspensi liposom yang tidak dapat terpenetrasi ke dalam kulit di mana
selanjutnya akan digunakan untuk menghitung mass balance.
Gambar 30. kurva multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada kompartemen
donor
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 2 4 6 8
jum
lah
ek
strak
ro
sell
a (
%)
waktu (jam)
liposom
multiemulsi A/M/A
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
85
Gambar 30 menunjukkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella baik dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom pada
kompartemen donor mengalami penurunan. Namun penurunan yang
terjadi telah sesuai teori di mana semakin bertambahnya waktu jumlah
ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertinggal pada kompartemen
donor berkurang. Laju penurunan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella pada kompartemen donor ditunjukkan dengan nilai slope pada
persamaan regresi yang didapat. Persamaan regresi yang didapat pada
sediaan multiemulsi A/M/A yaitu y = 29,474 – 1,7704x, sedangkan pada
sediaan suspensi liposom yaitu y = 74,47 – 3,6762x. Berdasarkan nilai
slope yang diperoleh, nilai slope pada sediaan multiemulsi A/M/A lebih
kecil yaitu 1,7704 daripada nilai slope pada sediaan suspensi liposom yaitu
3,6762. Hal ini menunjukkan bahwa laju penurunan jumlah ekstrak
metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A lebih kecil
daripada sediaan suspensi liposom sehingga dapat diduga bahwa ekstrak
metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan suspensi liposom lebih cepat
masuk ke dalam kulit dibandingkan dengan ekstrak metanol kelopak
bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A.
b. Perbandingan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada kompartemen
akseptor
Tujuan membandingkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
86
kompartemen akseptor yaitu untuk mengetahui jumlah ekstrak metanol
kelopak bunga rosella antara sediaan multiemulsi A/M/A dengan sediaan
suspensi liposom yang masuk ke kompartemen akseptor di mana
selanjutnya akan digunakan untuk menghitung mass balance.
Gambar 31. Kurva sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada
kompartemen akseptor
Gambar 31 menunjukkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella baik dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom pada
kompartemen akseptor mengalami kenaikan. Kenaikan yang terjadi telah
sesuai teori di mana semakin bertambahnya waktu jumlah ekstrak metanol
kelopak bunga rosella yang masuk pada kompartemen akseptor bertambah.
Namun hal ini tidak diinginkan pada penelitian ini karena efek antosianin
sebagai antioksidan dalam menangkal radiasi sinar UV ditujukan pada
lapisan epidermis dan dermis kulit. Radiasi sinar UV hingga menembus
lapisan dermis akan memicu terbentuknya radikal bebas dalam tubuh
terutama kulit sehingga dapat berdampak buruk bagi kulit yaitu pigmentasi
kulit, kerutan (penuaan dini), kerusakan kulit, serta kanker kulit. Jika
0
10
20
30
40
50
0 2 4 6 8
jum
lah
ek
strak
rose
lla (
%)
waktu (jam)
liposom
multiemulsi A/M/A
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
87
antosianin dapat menembus kulit tikus hingga terdeteksi dalam
kompartemen akseptor, diasumsikan bahwa antosianin tidak tertahan di
kulit dan efektivitas sebagai antioksidan berkurang. Laju kenaikan jumlah
ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen akseptor
ditunjukkan dengan nilai slope pada persamaan regresi yang didapat.
Persamaan regresi yang didapat pada sediaan multiemulsi A/M/A yaitu y =
5,8347 + 0,3766x sedangkan pada sediaan suspensi liposom yaitu y = -
2,2796 + 6,1409x.
Berdasarkan nilai slope yang diperoleh, nilai slope pada sediaan
multiemulsi A/M/A lebih kecil daripada nilai slope pada sediaan suspensi
liposom. Hal ini menunjukkan bahwa laju kenaikan jumlah ekstrak
metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A lebih kecil yaitu
0,3766 daripada sediaan suspensi liposom yaitu 6,1409 sehingga dapat
diduga bahwa ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan
suspensi liposom lebih cepat masuk kedalam kompartemen akseptor
dibandingkan dengan ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
sediaan multiemulsi A/M/A.
Hal ini dimungkinkan karena komponen penyusun yaitu lipid
bilayer pada suspensi liposom menyerupai komponen penyusun pada
membran sel plasma, sehingga ketika suspensi liposom menempel pada
membran sel plasma maka akan melakukan fusi pada membran sel dengan
menyisipkan lipid bilayer ke membran plasma kemudian akan
menstimulasi pelepasan ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
88
terkandung pada suspensi liposom seperti yang ditunjukkan pada gambar
12.
Multiemulsi dimungkinkan dapat menembus stratum korneum
karena adanya surfaktan nonionik yaitu Tween 80 sebagai penetration
enhancer. Surfaktan sendiri memiliki dua mekanisme dalam meningkatkan
penetrasi senyawa melalui kulit yaitu (1) menembus stratum korneum
dengan cara meningkatkan fluiditas, melarutkan, serta mengekstraksi
komponen lipid; (2) surfaktan masuk ke dalam matriks interselular dan
berinteraksi dengan mengikat filamen keratin sehingga korneosit
mengalami gangguan dan akhirnya senyawa dapat masuk (Tyagi, Chandra,
Singh, dan Rahman, 2011).
Pelepasan obat pada multiemulsi dapat terjadi melalui mekanisme
transport difusi dengan cara (1) solubilisasi secara langsung dan difusi
senyawa hidrofilik melalui minyak; (2) permeasi melalui lapisan cairan
yang tipis dan (3) solubilisasi senyawa yang terenkaplusasi dalam
surfactant reverse micelles dan difusi misel melalui fase minyak (Bonnet,
Cansell, Berkaoui, Ropers, Anton, Leal-Calderon, 2007).
5. Perhitungan mass balance ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
multiemulsi dan dalam suspensi liposom
Tujuan perhitungan mass balance yaitu untuk mengetahui gambaran
jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada setiap bagian. Perhitungan
mass balance dapat dilakukan apabila semua bagian yang mengandung
ekstrak metanol kelopak bunga rosella ditentukan jumlahnya. Penelitian ini,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
89
peneliti hanya menetapkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada
kompartemen akseptor, sisa pada kompartemen donor, dan dalam sampel
ketika pengaplikasian. Istilah mass balance pada penelitian ini hanya untuk
menggambarkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada
kompartemen donor, kompartemen akseptor dan yang tertahan di dalam kulit.
Gambar 32. Kurva sediaan mutiemulsi A/M/A dan suspensi liposom yang tertahan
di dalam kulit
Gambar 32 menunjukkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A yang tertahan di dalam kulit
mengalami kenaikan sedangkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella
dalam sediaan suspensi liposom mengalami penurunan. Laju kenaikan dan
penurunan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan di
dalam kulit ditunjukkan dengan nilai slope pada persamaan regresi yang
didapat. Persamaan regresi yang didapat pada sediaan multiemulsi A/M/A
yaitu y = 64,691 + 1,3938x sedangkan pada sediaan suspensi liposom yaitu y
= 27,811 – 2,465x. Jam kelima pada suspensi liposom terlihat jumlah ekstrak
-40
-20
0
20
40
60
80
100
0 2 4 6 8
jum
lah
ek
stra
k r
ose
lla (
%)
waktu (jam)
liposom
multiemulsi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
90
metanol kelopak bunga rosella mengalami penurunan yang sangat tajam
dibandingkan jam-jam sebelumnya. Hal ini dikarenakan ketebalan kulit yang
digunakan tiap jam berbeda sehingga permeabilitas kulit tiap jam berbeda pula
yang mengakibatkan pada jam kelima jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella yang masuk ke kompartemen akseptor banyak sehingga yang tertahan
pada kulit sedikit.
Berdasarkan nilai slope yang diperoleh, laju kenaikan jumlah ekstrak
metanol kelopak bunga rosella sebesar 1,3938 sedangkan pada suspensi
liposom laju penurunan sebesar 2,465. Hal ini menunjukkan bahwa semakin
bertambahnya waktu, jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang
tertahan di dalam kulit semakin banyak sedangkan pada suspensi liposom
semakin bertambahnya waktu jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella
yang tertahan di dalam kulit semakin sedikit, sehingga dapat diduga bahwa
multiemulsi A/M/A dapat memberikan kemampuan penetrasi ekstrak metanol
kelopak bunga rosella yang lebih baik daripada suspensi liposom sehingga
mampu menangkal radiasi sinar UV A pada lapisan epidermis dan dermis.
Berdasarkan penjelasan dari gambar 29, 30, dan 31 dapat
disimpulkan bahwa kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dari kompartemen ke kulit dan dari kulit ke kompartemen akseptor
pada suspensi liposom lebih besar daripada multiemulsi A/M/A sehingga
mengakibatkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan di
dalam kulit lebih sedikit daripada multiemulsi A/M/A. Hal ini bisa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
91
dimungkinkan karena ukuran partikel pada suspensi liposom yang lebih kecil
daripada multiemulsi A/M/A sehingga lebih mudah menembus membran kulit.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Mayangsari (2015)
didapatkan IC50 ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan
multiemulsi A/M/A lebih kecil yaitu sebesar 22457,24 TE/100 gram daripada
suspensi liposom yaitu 84528,39 TE/100 gram. Penelitian entrapment
efficiency (EE) ekstrak rosella dalam multiemulsi A/M/A dan suspensi
liposom yang dilakukan oleh Li (2015) menunjukkan bahwa multiemulsi
A/M/A memiliki EE yang lebih besar dibandingkan suspensi liposom namun
kemampuan multiemulsi A/M/A dalam melindungi zat aktif rosella yang
rendah menyebabkan penurunan aktivitas antioksidan dibuktikan dengan laju
penurunan EE yang lebih tinggi pada multiemulsi A/M/A dibandingkan
liposom. Walaupun IC50 pada multiemulsi A/M/A lebih kecil, EE multiemulsi
A/M/A lebih besar dan kemampuan melindungi ekstrak metanol kelopak
bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A lebih kecil, namun kemampuan
penetrasi multiemulsi A/M/A ke dalam kulit yaitu lapisan epidermis dan
dermis lebih baik daripada suspensi liposom.
I. Statistik Uji T penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom
Tujuan statistik uji T dalam penelitian ini yaitu untuk memastikan apakah
rata-rata jumlah ekstrak rosella yang tertahan dalam kulit berbeda signifikan untuk
2 bentuk sediaan (suspensi liposom dan multiemulsi A/M/A). Peneliti
menggunakan statistik uji T karena dalam penelitian ini membandingkan rata-rata
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
92
jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam 2 populasi sampel yang
berbeda yaitu sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom. Sebelum
melakukan uji T perlu dilakukan uji F terlebih dahulu untuk mengetahui apakah
standard deviasi pada kedua populasi tersebut berbeda signifikan atau tidak.
Berdasarkan hasil perhitungan yang ditunjukkan dalam tabel 6 dapat
disimpulkan standard deviasi kedua populasi berbeda signifikan.
Tabel 6. Uji F standar deviasi suspensi liposom dan multiemulsi A/M/A
Populasi Rata-
rata
Standard
deviasi
F
hitung
Α F tabel kesimpulan
Multiemulsi
A/M/A
1,3938 1,70129
7,6436 0,05 2,723 berbeda
signifikan Suspensi
liposom
-
2,71664
4,70357
Tahap selanjutnya dilakukan uji T. Hasil perhitungan yang ditunjukkan
dalam tabel 7 dapat disimpulkan rata-rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga
rosella yang tertahan di dalam kulit dalam sediaan multiemulsi A/M/A berbeda
signifikan terhadap rata-rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang
tertahan di dalam kulit dalam sediaan suspensi liposom.
Tabel 7. Uji signifikasi rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang
terpenetrasi kekulit dalam suspensi liposom dan multiemulsi A/M/A
Populasi Rata-
rata
Standard
deviasi
T
hitung
Α T tabel kesimpulan
Multiemulsi
A/M/A
1,3938 1,70129
3,4866 0,05 2,09 berbeda
signifikan Suspensi
liposom
-2,71664 4,70357
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
93
\
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Formula optimum multiemulsi yang terbentuk bertipe A/M/A, homogen,
memiliki pH yang sesuai dengan kulit, dan stabil selama 28 hari, pada suhu
penyimpanan -4 , dan pemberian gas nitrogen ditandai dengan tidak adanya
pemisahan fase.
2. Sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimal mempunyai kemampuan
sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang lebih baik dari
pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan
dermis
B. Saran
1. Perlu adanya optimasi lebih lanjut terkait formulasi multiemulsi supaya
sediaan yang dihasilkan bisa lebih optimum.
2. Perlu adanya pertimbangan penggunaan ukuran FDC yang lebih besar untuk
mengurangi variabel tak terkendali yaitu ketebalan membran.
3. Perlu adanya penelitian penetrasi lebih lanjut dengan menggunakan kulit
hewan uji lainnya (misalnya kulit telinga babi) atau kulit manusia, supaya
dapat menggambarkan penetrasi yang sebenarnya
4. Perlu adanya pembanding dengan zat yang telah diketahui penetrasi dan
efeknya
5. Perlu adanya uji kebocoran FDC dan uji TEER sebelum dilakukan penetrasi
dengan FDC.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
94
DAFTAR PUSTAKA
Akbarzadeh, A., Sadabady, R.R., Davaran, S., Joo, S.W., Zarghami, N.,
Hanifehpour, Y., dkk., 2013, Liposome : Clasification, Preparation, and
Application, Nanoscale Research Letters, 8:102, pp. 1 – 9.
Al-Saidan, S.M., Krishnaiah, Y.S.R., Chandrasekhar, D.V., Lalla, J.K., Rama, B.,
Jayaram, B., dkk., 2004, Formulation of An HPMC Gel Drug Reservoir
System With Ethanol-Water As A Solvent System and Limonene As A
Penetration Enhancer for Enhancing In vitro Transdermal Delivery of
Nicordanil, Skin Pharmacol Physicol, 17:310-320.
Ansel, H., 2005, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, Edisi ke 4, UI press, Depok,
hal. 492-494.
Bartosova, L., dan Bajgar, J., 2012, Transdermal Drug Delivery In Vitro Using
Diffusion Cell, Current Medicinal Chemistry, 19:4671-4677.
Benichou, A., Aserin, A., dan Garti, N., 2004, Double Emulsion Stabilized with
Hybrids of Natural Polymers for Entrapment and Slow Release of Active
Matters, Advances in Colloid dan Interface Science, 108-109:29-41.
Benson, H.A., 2012, Topical dan Transdermal Drug Delivery, John Wiley & Sons,
New Jersey, pp. 3-16.
Bhai, S.A., Yadav, V., Mamatha, Y., dan Prasanth, V.V., 2012, Liposomes An
Overview, Journal of Pharmaceutical dan Scientific Innovation, 1(1):13-
21.
Bonnet, M., Cansell, M., Berkaoui, A., Ropers, M.H., Anton, M., dan Leal-
Calderon, F., 2007, Release Rate profiles of magnesium from multiple
W/O/W emulsion, food hydrocolloids, 23(2009):92-101.
Brannon, J.C., 2007, Skin Anatomy, http://www/dermatology.about.com/
skinanatomy. diakses pada tanggal 30 Mei 2015.
Colas, A., Siang, J., dan Ulman,K., 2006, Silicone Antifoams dan Silanes, Dow
Corning Corporation, USA, p.2.
Direktrorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1979, Farmakope Indonesia
Edisi III, DepKes RI, Jakarta, hal. XXXIII, 757.
Dikstein, S. dan Zlotogorski, A., 1994, Measurenment of skin pH, acta derm,
venerol, 185:18 – 20.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
95
Fennema, O.R., 1996, Food Chemistry, Third edition, Marcel Dekker Inc, New
York.
Friberg, S.E., Quencer, L.G., dan Hilton, M.C., 1996, Theory of Emulsions, in
Lieberman, H.A., Rienger, M.M., dan Banker, G.S., Pharmaceutical
Dossage Forms : Disperse Systems, Volume 1, 2nd
ed, Marcell Dekker
Inc, New York, p.57.
Friend, D.R., 1992, In Vitro Permeation Technique, Journal of Control Release,
18:235-248.
Garti, N., 1997, Double Emulsions: Scope, Limitations dan New Achievements,
Colloids dan Surface A Physicochemical and Engineering Aspects, pp.
123,124.
Garti dan Bisperink, 1998, Double Emulsions:Progress and Applications, Current
Opinion in Colloid & Interface Science, 3:657-667.
Harborne, J.B., 1996, Phytochemical Methods: A Guide to Modern Techniques of
Plant Analysis, Springer Science & Business Media, London.
Higaki K, Amnuaikit C, dan Kimura T., 2003, Strategies for Overcoming the
Stratum Corneum: Chemical and Physical Approaches. Am J Drug
Deliv; 1:187-214.
Hui, Y.H., dan Sherkat, F., 2005, Handbook of Food Science, Technology, and
Engineering, Volume 4, CRC Press, Florida, pp. 14-7.
Jesorka, A. dan Orwar, O., 2008, Liposom: Technologies dan Analytical
Applications, Annual Review of Analytical Chemistry, 1:801-832.
Jiao, J. dan Burgess, D.J., 2008, Multiple Emulsion Stability : Pressure Balance
and Interfacial Film Strength, Multiple Emulsion : Technology and
Applications, New Jersey : John Wiley & Sons Inc, pp.1-19.
Junquera, L.C., dan Kelley, O.R., 1997, Histologi Dasar, Terj. Dari Basic
Histologi, oleh Jan Tamboyang, EGC, Jakarta, hal.357-364.
Kiil, L., dan Houmoller, M., 2013, Solar Radiation (Sunlight),
http://climap.net/solar-radiation-sunlight, diakses tanggal 14 Juli 2015
Konczak, I., dan Zhang, W., 2004, Anthocyanins-more than natures colours,
Journal of Biomedicine and Biotechnology, 2004(5):239-240.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
96
Kumar, R., dan Philip, 2007, Review Article Modified Transdermal
Technologies:Breaking The Barriers of Drug Permeation Via The Skin,
Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 6(1):634-644.
Kumar, R., Kumar, M.S., dan Mahadevan, N., 2012, Multiple Emulsion : A
Review, International Journal of Recent Advances in Pharmaceutical
Research, India, 2(1):9-19.
Kus, S., Marczenko, Z., dan Obarski, N., 1996, Derivative UV-VIS
Spectrophotometry In Analytical Chemistry, chem.anal, 41:899-927.
Kusantati, H., Prihatin, P.T., dan Wiana, W., 2008, Tata Kecantikan Kulit,
Direktorat Pembinaan Sekolah Menegah Kejuruan, Jakarta.
Lambers, H., Piessens, S., Bloem, A., Pronk, H., dan Finkel, P., 2006, Natural
Skin Surface pH is on Average Below 5, Which is Beneficial for its
Resident Flora, International Journal of Cosmetic Science, 28:359-370
Lane, M.E., 2013, Skin Penetration Enhancers, International Journal of
Pharmaceutics, 447:12 - 21.
Laouini, A., Maalej, J., Blouza, L., Sfar, S., Charcosset, C., dan Fessi, H., 2012,
Preparation, Characterization dan Applications of Liposomes : State of
The Art, Journal of Colloidal Science and Biotechnology, 1:147-168.
Li, M., 2015, Pengaruh Penyimpanan Terhadap Stabilitas Ekstrak Rosella
(Hibiscus sabdariffa L.) dalam Formulasi Multiemulsi A/M/A dan
suspensi liposom, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Lutz dan Aserin, 2008, Multiple Emulsions Stabilized by Biopolimer, Multiple
Emulsions : Technology Dan Applications, New Jersey : John Wiley &
Sons Inc, pp. 85, 86.
Mahmood, T., Akhtar, N., dan Manickam, S., 2014, Interfacial Film Stabilized
W/O/W Nano Multiple Emulsions Loaded With Green Tea and Lotus
Extracts: Systematic Characterization of Physicochemical Properties
and Shelf-Storage Stability, Journal of Nanobiotechnology, 12(20):1-8.
Marczenko, Z., dan Balcerzak,M., 2000, Separation, Preconcentration Dan
Spechtrophotometry In Inorganic Analysis, Elsevier Science,
Netherldans, pp.34-36.
Maryani, H.dan Krisrtiana, L., 2005, Khasiat dan Manfaat Rosela, PT AgroMedia
Pustaka, Jakarta, hal. 2-33.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
97
Mayangsari, E., 2015, Perbandingan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Rosella
(Hibiscus sabdariffa L.) dalam Multiemulsi A/M/A dan Suspensi
Liposom, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Meyers, D., 2006, Surfactant Science dan Technology, New Jersey: John Wiley &
Sons, Inc, p. 316.
Mutia, S., 2015, Dampak Radiasi Sinar Ultraviolet (UV),
http://101gayahidupsehat.com/dampak-radiasi-sinar-ultraviolet-uv/,
diakses tanggal 14 Juli 2015
Nair, V.B., dan Panchagula, R., 2004, The Effect of Pretreatment With Terpenes
On Transdermal Iontophrotic Delivery of Arginine Vasopressin, IL
FARMACO, 59:575-581.
National Aeronautics, dan Space Administration, 2007, Ultraviolet Waves,
http://missionscience.nasa.gov/ems/10_ultravioletwaves.html, diakses
tanggal 14 Juli 2015
Nurhidayati, L., 2007, Spektrofotometri Derivative Dan Aplikasinya Dalam
Bidang Farmasi, Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 5(2):93-99.
Pathan, I.B., dan Setty, C.M., 2009, Chemical Penetration Enhancers for
Transdermal Drug Delivery Systems, Tropical Journal of
Pharmaceutical Research, 8(2):173-179.
Pazmino, D., Giusti, A.E., Wrolstad, R.E., dan Gloria, B.A., 2001, Anthocyanins
From Oxalis Triangularis As Potensial Food Colorants, Food Chemistry,
75(2):211-216.
Pinsuwan, S., Ammnnuaikit, T., Ungphaiboon, S., dan Itharat, A., 2010, Liposom-
Containing Hibiscus sabdariffa Calyx Extract Formulations with
Increased Antioksidant Activity, Improved Dermal Penetration and
Reduced Dermal Toxicity, J Med Assoc Thai, 93 (7):S216 – S226.
Rocha, I.D.C., Bonnlaender, B., Sievers. H., Pischel, I., dan Heinrich, M., 2014,
Hibiscus Sabdariffa L. – A Phytochemical And Pharmacological Review,
Food Chemistry, 9-11.
Rowe, R., Sheskey, P.J., dan Quinn, M.E., 2009, Handbook of Pharmaceutical
Excipients Sixth Edition, 6th edition, Pharmaceutical Press, USA, pp.
155,233,234,445,446,675,782.
Shi, J., Mazza, G., dan Maquer, M.L., 2002, Functional Food : Biochemical dan
Processing Aspects, Volume 2, CRC Press, Florida, pp. 95-98.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
98
Solarradiation, 2013, Solar Radiation: Sunlight and More,
http://www.solarradiation.net/ diakses tangga 14 Juli 2015
Som, I., Bhatia, K., dan Yasir, M., 2012, Status Of Surfactant As Penetration
Enhancer In Transdermal Drug Delivery, Journal Pharmacy Bioallied
Scienced, 4(1):2-9.
Suzery,M., Lestari, S., dan Chayono, B., 2010, Penentuan Total Antosianin dari
Kelopak Bunga Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) dengan Metode
Maserasi dan Sokhletasi, Jurnal Sains dan Matematika, 18(1):1-6
Tranggono, R.I., 2007, Buku Pegangan Ilmu Pengetahuan Kosmetik, Gramedia,
Pustakan Utama, Jakarta, hal. 11-13, 78, 82-85.
Troy, D.B., dan Beringer, P., 2006, Remington : The Science and Practice of
Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, USA, p. 330.
Tyagi, R.K., Chandra, A., Singh, D., dan Rahman, A., 2009, Transdermal Drug
Delivery System (TDDS) : An Overview, International Journal of
Pharmaceutical Sciences dan Research, India, 2(6):1379-1388.
Voight, R., 1995, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Edisi ke 5, Gajah Mada
University Press, Yogyakarta.
Walters, K.A., 2002, Dermatology dan Transdermal Formulations, Marcel
Dekker, New York, pp.210, 211, 225.
Wiechers, J.W., 1989, The Barrier Function Of The Skin In Relation To
Percutaneous Absorption Of Drugs, Pharmaceutics Weekblad, 11:185-
187.
Wilczewzka, A., Niemirowicz, K., Markiewicz, K.H., dan Car, H., 2012,
Nanoparticle as Drug Delivery Systems, Pharmacological Reports,
64:1020-1037.
Witt,K., dan Bucks, D., 2003, Studying In Vitro : Skin Preparation dan Drug
Release to Optimize Dermatological Formulations, Formulation, Fill &
Finish, pp. 22, 24, 26, 27.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
99
LAMPIRAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
100
Lampiran 1. Spektrum antosianin pada ekstrak metanol kelopak bunga
rosella (Hibiscus sabdariffa L.)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
101
Lampiran 2. Penetapan bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella
(Hibiscus sabdariffa L.)
Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
Berat cawan (gram) 27,4435 22,4916 21,7966
Berat cawan + Isi (gram) 28,0144 23,0566 22,3514
Berat awal (gram) 0,5709 0,5650 0,5547
Berat cawan akhir (gram) 27,5029 22,5462 21,8380
Berat akhir (gram) 0,5155 0,5104 0,5133
Rata – rata berat akhir
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
102
Lampiran 3. Data hasil optimasi emulsi primer A/M
a. Optimasi HLB
No HLB Span 80 Tween 80
Volume
Pemisahan
(ml)
% Pemisahan
1 5 9.35 0.65 16,5 66
2 5,3 9.07 0.93 16,1 64,4
3 5,5 8.88 1.12 15 60
4 5,8 8.60 1.40 14 56
b. Optimasi kecepatan pengadukan
No kecepatan pengadukan volume pemisahan
(ml) % Pemisahan
1 4 14 56
2 5 13 52
c. Optimasi lama pencampuran
No Lama Pencampuran
(menit) Volume Pemisahan (ml)
%
Pemisahan
1 10 13 52
2 15 13 52
3 20 14 56
d. Optimasi konsentrasi stiffening agent
No Konsentrasi
(%)
Volume Pemisahan
(ml) % Pemisahan
1 4 3 12
2 4,5 2,5 10
3 5 2 8
4 5,5 2 8
5 6 0 0
6 8 0 0
7 10 0 0
e. Optimasi konsentrasi anti foaming agent
No Konsentrasi
(%) Volume Pemisahan (ml) % Pemisahan
1 2 0 0
2 4 0 0
3 6 0 0
4 8 0 0
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
103
Lampiran 4. Data hasil optimasi multiemulsi
a. Optimasi rasio emulsi primer
No Rasio (g) Volume Pemisahan (ml) % Pemisahan
1 27,8 1 4
2 37,8 0 0
3 47,8 0.5 2
b. Optimasi konsentrasi emulgator sekunder
No Konsentrasi
(%) Volume Pemisahan (ml) % Pemisahan
1 2 0 0
2 4 2,6 10,4
3 6 2,8 11,2
c. Optimasi Lama Pencampuran
No Lama Pencampuran
(menit) Volume Pemisahan (ml)
%
Pemisahan
1 10 0 0
2 12 0 0
3 15 0 0
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
104
Lampiran 5. Perhitungan mikromeritik
1. Emulsi Primer
t = hari ke-1
n = 75
k = 1+ 3,22log75 = 7,23 = 7
I =
No Rentang ( ) Nilai tengah (d) n nxd
1 2,487 - 3,122 2.805 3 8.414
2 3,123 - 3,758 3.441 17 58.489
3 3,759 - 4,394 4.077 13 52.995
4 4,395 - 5,03 4.713 21 98.963
5 5,031 - 5,666 5.349 11 58.834
6 5,667 - 6,302 5.985 5 29.923
7 6,303 - 6,938 6.621 5 33.103
Jumlah (Σ) 75 340.718
d rata – rata =
2. Multiemulsi A/M/A
t = hari ke-1
n = 75
k = 1+ 3,22log75 = 7,23 = 7
I =
No Rentang ( ) Nilai tengah (d) n nxd
1 9,527 - 10,819 10.173 20 203.463
2 10,820 - 12,113 11.466 24 275.194
3 12,114 - 13,406 12.760 12 153.117
4 13,407 - 14,699 14.053 11 154.583
5 14,700 - 15,992 15.346 6 92.078
6 15,993 - 17,286 16.640 0 0.000
7 17,287 - 18,579 17.933 2 35.866
Jumlah (Σ) 75 914.300
d rata – rata =
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
105
3. Suspensi Liposom
t = hari ke-1
n = 75
k = 1+ 3,22log75 = 7,23 = 7
I =
No Rentang ( ) Nilai tengah (d) n nxd
1 1,063 - 1,481 1.272 7 8.903
2 1,482 - 1,899 1.691 12 20.287
3 1,900 - 2,318 2.109 12 25.311
4 2,319 - 2,737 2.528 15 37.920
5 2,738 - 3,156 2.947 19 55.988
6 3,157 - 3,574 3.365 6 20.193
7 3,575 - 3,993 3.784 4 15.137
Jumlah (Σ) 75 183.738
d rata – rata =
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
106
Lampiran 6. Data Derivated Kurva Baku Ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam metanol
konsentrasi baku (mg/ml) Tinggi derivat (cm)
0.25 0.3
0.20 0.25
0.16 0.2
0.12 0.13
0.08 0.08
0.04 0.03
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
107
Lampiran 7. Data Derivated Kurva Baku Ekstrak metanol kelopak bunga
rosella dalam aquadest
Konsentrasi baku (mg/ml) Tinggi derivat (cm)
2.0468 3.75
1.8421 3.38
1.6374 2.98
1.4328 2.63
1.2281 2.23
1.0234 1.88
0.8187 1.35
0.6140 0.98
0.4094 0.55
0.2047 0.23
0.1842 0.18
0.1637 0.13
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
108
Lampiran 8. Jumlah larutan ekstrak metanol kelopak bunga rosella Yang
Terpenetrasi Ke dalam Kulit
Waktu
Rata – rata jumlah ekstrak
metanol kelopak bunga
rosella pada kompartemen
donor (%)
Rata – rata jumlah ekstrak
metanol kelopak bunga
rosella pada kompartemen
akseptor (%)
Rata – rata jumlah
ekstrak metanol
kelopak bunga rosella
yang tertahan dalam
kulit (%)
1 56.324 30.4133 13.263
2 77.2914 0.0000 22.7086
3 77.2914 60.9895 -38.2809
4 71.0051 41.7400 -12.7451
5 77.2914 0.0000 22.7086
6 60.5172 0.0000 39.4828
Contoh perhitungan uji penetrasi jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella
secara in vitro
Konsentrasi larutan ekstrak metanol kelopak bunga rosella
1. Pada kompartemen donor
Konsentrasi awal ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor
Waktu = 1 jam
Tinggi derivat = 0,08 cm
Persamaan kurva baku y = -0,1886 + 1,9416x
Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang sisa pada kulit
2. Pada kompartemen akseptor
Waktu = 1 jam
Tinggi derivat = 0,08 cm
Persamaan kurva baku y = -0,1886 + 1,9416x
Jumlah ekstrak rosella pada kompartemen akseptor
3. Tertahan dalam kulit
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
109
Lampiran 9. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam
multiemulsi A/M/A yang terpenetrasi ke dalam kulit
Waktu
Rata –rata jumlah ekstrak
metanol kelopak bunga
rosella pada kompartemen
donor (%)
Rata – rata jumlah ekstrak
metanol kelopak bunga
rosella pada kompartemen
akseptor (%)
Rata – rata jumlah
ekstrak metanol
kelopak bunga rosella
yang tertahan dalam
kulit (%)
1 24,0977 15,2552 60,6472
2 24,1601 0,0000 75,8399
3 33,5161 4,9319 61,5520
4 23,7534 0,0000 76,2466
5 14,9606 9,6301 75,4093
6 19,1770 13,0998 67,7273
Contoh perhitungan uji penetrasi jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella
secara in vitro
1. Pada kompartemen donor
Konsentrasi awal ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A
pada kompartemen donor
Waktu = 1 jam
Tinggi derivat = 0,08 cm
Persamaan kurva baku y = -0,028 + 1,3471x
Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang sisa pada kulit
2. Pada kompartemen akseptor
Waktu = 1 jam
Tinggi derivat = 0,08 cm
Persamaan kurva baku y = -0,028 + 1,3471x
Jumlah ekstrak rosella pada kompartemen akseptor
3. Tertahan dalam kulit
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
110
Lampiran 10. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam suspensi
liposom yang terpenetrasi ke dalam kulit
Waktu
Rata – rata jumlah ekstrak
metanol kelopak bunga
rosella pada kompartemen
donor (%)
Rata – rata jumlah ekstrak
metanol kelopak bunga
rosella pada kompartemen
akseptor (%)
Rata – rata jumlah
ekstrak metanol
kelopak bunga rosella
yang tertahan dalam
(%)
1 67,9468 0,0000 32,0532
2 66,4789 23,2719 10,2492
3 60,6075 13,4194 25,9731
4 65,7450 0,0000 34,2550
5 69,4146 47,3919 -16,8065
6 39,4264 31,1983 29,3753
Contoh perhitungan uji penetrasi jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella
secara in vitro
Konsentrasi larutan ekstrak metanol kelopak bunga rosella
1. Pada kompartemen donor
Konsentrasi awal ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor
Waktu = 1 jam
Tinggi derivat = 0,13 cm
Persamaan kurva baku y = -0,1886 + 1,9416x
Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang sisa pada kulit
2. Pada kompartemen akseptor
Waktu = 1 jam
Tinggi derivat = 0 cm
Persamaan kurva baku y = -0,1886 + 1,9416x
Jumlah ekstrak rosella pada kompartemen akseptor = 0 mg = 0%
3. Tertahan dalam kulit
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
111
Lampiran 11. Uji T untuk jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella
yang tertahan dalam kulit
Populasi Rata - Rata Standard Deviasi
(Sb)
Jumlah
(n)
Multiemulsi 1,3938 1,70129 18
Suspensi liposom -2,71664 4,70357 18
i. uji signifikasi standar deviasi dengan uji F
F =
F =
F hitung α F tabel kesimpulan
7,6436 0,05 2,723 berbeda signifikan
ii. uji t untuk melihat signifikasi rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak
bunga rosella yang tertahan dalam kulit antara sediaan multiemulsi dengan
suspensi liposom
Dari hasil perhitungan uji F diatas dapat dilihat SD antara suspensi liposom dan
multiemulsi A/M/A berbeda signifikan, maka degree of freedom untuk uji T
dihitung dengan persamaan :
Perhitungan degree of freedom (df) =
df =
Perhitungan nilai t :
√
√
T hitung α T tabel kesimpulan
3,4866 0,05 2,09 berbeda signifikan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
112
Lampiran 12. Spektrum derivatif kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam pelarut aquadest
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
113
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi dengan judul “Perbandingan
Kemampuan Penetrasi Multiemulsi A/M/A Dan
Suspensi Liposom Yang Mengandung Ekstrak
metanol kelopak bunga rosella (Hibiscus Sabdariffa
L.)” dengan nama lengkap Yolana Kwartono,
merupakan putri kedua dari pasangan Yohanes Abeng
Kwartono dan Ely Helen. Penulis Lahir di Bengkulu, 09
November 1993. Pendidikan formal yang telah ditempuh penulis yaitu TK Sint
Carolus Bengkulu (1997-1999), tingkat Sekolah Dasar di SD Sint Carolus
Bengkulu (1999-2005), tingkat Sekolah Menengah Pertama di SMP Sint Carolus
Bengkulu (2005-2008), tingkat Sekolah Menengah Atas di SMA Sint Carolus
Bengkulu (2008-2011). Pendidikan Informal yang telah ditempuh penulis yaitu
Lembaga Kursus dan Pelatihan ―LKP COLOUR MODELS MANAGEMENT –
ASMAT Pro‖ (2013-2014). Pada tahun 2011, penulis melanjutkan pendidikan
sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Semasa
menempuh pendidikan sarjana, Penulis aktif dalam kegiatan kepanitiaan, seperti
menjadi panitia seminar nasional diabetes mellitus 2011, aksi HIV AIDS 2011,
pelepasan wisuda 2013, serta menjadi asisten praktikum kimia dasar 2012, kimia
analisis 2013, analisa farmasi-validasi metode analisis 2014 – 2015.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI