1

Platelia™ EBV-VCA IgG 1 Πλακέτα - 96 72937 ΕΝΖΥΜΙΚΟΣ ΑΝΟΣΟΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΟΙΟΤΙΚΟ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ IgG ΕΝΑΝΤΙ ΤΟΥ ΙΟΥ EPSTEIN- BARR (ΙΙΚΟ ΚΑΨΙΔΙΚΟ ΑΝΤΙΓΟΝΟ) ΣΤΟΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ

2015/04

1 - ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το παρόν κιτ ανοσοπροσδιορισμού προορίζεται για τον ποιοτικό προσδιορισμό των αντισωμάτων IgG έναντι του καψιδικού αντιγόνου του ιού Epstein-Barr (EBV-VCA) στον ανθρώπινο ορό. Η δοκιμή προσδιορισμού Platelia™ EBV-VCA IgG μπορεί να χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με άλλα οροδιαγνωστικά τεστ για τον ιό Epstein-Barr (Platelia™ EBV-VCA IgM, Platelia™ EBV-EA-D IgG και Platelia™ EB-NA-1 IgG) ως βοήθημα στη διάγνωση της λοιμώδους μονοπυρήνωσης.

2 - ΚΛΙΝΙΚΗ ΑΞΙΑ Η ανίχνευση του ιού Epstein-Barr περιγράφηκε για πρώτη φορά το 1964 από τους Epstein, Achong, and Barr μέσω ηλεκτρονικής μικροσκοπικής μελέτης καλλιεργειών λεμφοβλαστών προερχόμενων από ασθενείς με λέμφωμα Burkitt. Λόγω της χαρακτηριστικής του μορφολογίας, ο EBV ταξινομείται ως μέλος της οικογένειας των ερπητοΐών. Η λοίμωξη από τον EBV μπορεί να εκδηλώσει ένα ευρύ φάσμα κλινικών συμπτωμάτων. Στην πλειοψηφία τους, οι πρωτοπαθείς λοιμώξεις από τον EBV μεταδίδονται μέσω του σάλιου, εμφανίζονται κατά την παιδική ηλικία και είναι υποκλινικές. Στις ΗΠΑ, 50% του πληθυσμού αναπτύσσει αντισώματα EBV πριν από την ηλικία των 5 ετών, ενώ 80% έως την ενηλικίωση. Επίσης, έχουν αναφερθεί περιστατικά λοίμωξης από τον EBV τα οποία σχετίζονται με τη μετάγγιση. Στους νεαρούς ενήλικες, η λοίμωξη από EBV μπορεί να εκδηλωθεί κλινικά ως λοιμώδης μονοπυρήνωση (ΛΜ) με σχετικά ατυπικά συμπτώματα όπως εμπύρετη φαρυγγίτιδα, αμυγδαλίτιδα, λεμφαδενοπάθεια, αδυναμία, κεφαλαλγία, μυαλγία, σπληνο- και ηπατομεγαλία, εξάνθημα και λευκοκυττάρωση. Οι φοιτητές και το στρατιωτικό προσωπικό συχνά αναφέρονται ως πληθυσμός στον οποίο η επίπτωση λοιμώδους μονοπυρήνωσης χαρακτηρίζεται από υψηλή νοσηρότητα. Έχει διατυπωθεί η άποψη ότι κατόπιν της πρωτοπαθούς λοίμωξης από τον EBV, το γονιδίωμά του ενδέχεται να παραμένει στα B-λεμφοκύτταρα προκαλώντας λανθάνουσα λοίμωξη η οποία μπορεί να διαρκέσει για ολόκληρη τη ζωή. Η επανενεργοποίηση της λοίμωξης από τον EBV έχει τεκμηριωθεί σε ανοσοανεπαρκείς ή ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς, π.χ. ασθενείς που έχουν υποβληθεί σε μεταμόσχευση οργάνου, άτομα με κακοήθειες, έγκυες γυναίκες και άτομα προχωρημένης ηλικίας. Αμφιλεγόμενη παραμένει η οριστική ενοχοποίηση του EBV για την κλινική κατάσταση που είναι γνωστή ως «χρόνια λοίμωξη από τον EBV» ή «χρόνια μονοπυρήνωση». Ο ιός Epstein-Barr έχει επίσης συσχετισθεί με την παθογένεση δύο μορφών καρκίνου στον άνθρωπο, το λέμφωμα Burkitt και το καρκίνωμα του ρινοφάρυγγα. Η τεκμηρίωση μέσω μελετών υβριδισμού του DNA καταδεικνύει την παρουσία του γονιδιώματος του EBV σε δείγματα βιοψίας προερχόμενα από άτομα με αυτά τα καρκινώματα. Το λέμφωμα Burkitt συναντάται συχνότερα στην υποσαχάρια Αφρική, ειδικότερα σε παιδιά, και στη Νέα Γουινέα. Οι λοιμώξεις που οφείλονται στην ελονοσία είναι συχνές στους ασθενείς με λέμφωμα Burkitt και θεωρούνται συμπαράγοντες αυτού. Το καρκίνωμα του ρινοφάρυγγα συναντάται στην Ασία, ιδίως στη νότια Κίνα, και ενδέχεται να έχει ως συμπαράγοντες γενετικές ή περιβαλλοντικές επιδράσεις. Λεμφώματα β-κυττάρων, παρεμφερή του αφρικανικού τύπου του λεμφώματος Burkitt, αναφέρθηκαν πρόσφατα σε ασθενείς με Σύνδρομο Επίκτητης Ανοσοανεπάρκειας (AIDS). Έχει διατυπωθεί η άποψη ότι οι ασθενείς με AIDS ενδέχεται να έχουν προδιάθεση στη λοίμωξη/επανενεργοποίηση του EBV εξαιτίας της γενικότερης ανοσοκαταστολής τους. Η δοκιμή προσδιορισμού ετερόφιλων αντισωμάτων αντιπροσωπεύει επί του παρόντος την πλέον διαδεδομένη μέθοδο διάγνωσης της οξείας λοιμώδους μονοπυρήνωσης. Εντούτοις, έως και 20 % των ασθενών με πρωτοπαθή λοίμωξη από τον EBV δεν προκύπτουν θετικοί στη δοκιμή προσδιορισμού ετερόφιλων αντισωμάτων. Επιπλέον, οι δοκιμές (τεστ) ταχέως προσδιορισμού ετερόφιλων αντισωμάτων σε αντικειμενοφόρο πλάκα που διατίθενται στο εμπόριο εμφανίζουν πλασματικά θετικά αποτελέσματα σε ποσοστό έως και 7 %, γεγονός που οφείλεται κυρίως σε τεχνικά σφάλματα κατά την υποκειμενική αναφορά των αποτελεσμάτων της συγκόλλησης ερυθροκυττάρων. 3 - ΒΑΣΙΚΗ ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΟΚΙΜΗΣ Οι τεχνικές ενζυμικού ανοσοπροσροφητικού προσδιορισμού (ELISA) της Bio-Rad βασίζονται στην ικανότητα των βιολογικών υλικών, (π.χ. αντιγόνων) να προσροφώνται σε επιφάνειες από πλαστικό, όπως το πολυστυρένιο (στερεά φάση). Το κιτ Platelia™ EBV-VCA IgG χρησιμοποιεί την τεχνολογία ELISA στην οποία ένα αντιγόνο VCA κεκαθαρμένο μέσω χρωματογραφίας συγγένειας δεσμεύεται στις κοιλότητες μιας μικροπλακέτας. Όταν τα δεσμευμένα στη στερεά φάση αντιγόνα έρχονται σε επαφή με ορό ασθενούς, τότε το ειδικό για το αντιγόνο αντίσωμα δεσμεύεται, εφόσον είναι παρόν, από το αντιγόνο στη στερεά φάση σχηματίζοντας σύμπλοκα αντιγόνου-αντισώματος.

2

Τα μη δεσμευμένα αντισώματα απομακρύνονται μέσω πλύσης. Στη συνέχεια προστίθεται συζυγές αντι-ανθρώπινων IgG αίγας και ραφανιδικής υπεροξειδάσης το οποίο δεσμεύεται από τα σύμπλοκα αντισώματος-αντιγόνου. Το πλεονάζον συζυγές εκπλένεται και ακολουθεί η προσθήκη τετραμεθυλβενζινδίνης (TMB) ως υποστρώματος. Εάν το ειδικό για το αντιγόνο αντίσωμα είναι παρόν στον ορό του ασθενούς, τότε αναπτύσσεται μια κυανή χρώση. Με τη διακοπή της ενζυμικής αντίδρασης μετά από προσθήκη H2SO4 1N, τα περιεχόμενα των κοιλοτήτων χρωματίζονται κίτρινα. Το χρώμα, το οποίο είναι ανάλογο της συγκέντρωσης των αντισωμάτων στον ορό, μπορεί να υποβάλλεται σε ανάγνωση με κατάλληλο φασματοφωτόμετρο ή σε συσκευή ανάγνωσης μικροκοιλοτήτων πλακετών ELISA. Το κιτ Platelia™ EBV-VCA IgG περιέχει κυρίως ιικό καψιδικό αντιγόνο (VCA) για την ανίχνευση των αντισωμάτων IgG που είναι ειδικά για τη λοίμωξη από τον EBV. Τα αντισώματα ανιχνεύονται απουσία των ετερόφιλων αντισωμάτων. Τα επίπεδα των αντισωμάτων IgG έναντι του EBV-VCA, τα οποία παρουσιάζουν αυξημένες τιμές ήδη από το πρώιμο στάδιο της νόσου, λαμβάνουν τιμή κορυφής μετά από 3-4 βδομάδες, και εν συνεχεία μειώνονται για να σταθεροποιηθούν σε χαμηλές τιμές καθόλη τη διάρκεια της ζωής. Οι τεχνικές ενζυμικού ανοσοπροσροφητικού προσδιορισμού είναι συγκρίσιμες ως προς την ευαισθησία, την ειδικότητα και την αναπαραγωγιμότητά τους με άλλες ορολογικές εξετάσεις αντισωμάτων, όπως η μέθοδος ανοσοφθορισμού, η δοκιμασία καθήλωσης του συμπληρώματος, η εξέταση αιμοσυγκόλλησης και οι ανοσοπροσδιορισμοί.

4 - ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΤΟΥ ΚΙΤ Όλα τα αντιδραστήρια προορίζονται αποκλειστικά για διαγνωστική χρήση in vitro.

Ετικέτα Φύση των αντιδραστηρίων Παρουσίαση

R1 Microplate

Μικροπλακέτα : 12 ταινίες (των 8 κοιλοτήτων έκαστη) επιχρισμένες με κεκαθαρμένο καψιδικό αντιγόνο του EBV (αδρανοποιημένο), συσκευασμένες σε θήκη αλουμινίου με αποξηραντικό μέσο /δείκτη υγρασίας.

1

R2 Concentrated

Washing Solution (20x)

Συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης (20 x) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris (pH 7,2 ± 0,2) που περιέχει 1% Tween® 20. Συντηρητικά : Proclin™ 300 (0,1%).

1 x 50 ml

R3 Non

Reactive control

Μάρτυρας (ανθρώπινος) μη αντιδρών στα αντισώματα IgG αντι-EBV-VCA, αρνητικός στα αντισώματα HBs Ag, HIV-1, HIV-2 και HCV. Συντηρητικά : αζίδιο του νατρίου (< 0,1%) και πενικιλίνη/στρεπτομυκίνη (0,01%).

1 x 0,4 ml

R4α Positive Control I

Μάρτυρας I (ανθρώπινος) θετικός στα αντισώματα IgG αντι-EBV-VCA, αρνητικός στα αντισώματα HBs Ag, HIV-1, HIV-2 και HCV. Συντηρητικά : αζίδιο του νατρίου (< 0,1%) και πενικιλίνη/στρεπτομυκίνη (0,01%).

1 x 0,4 ml

R4β Positive Control II

Μάρτυρας II (ανθρώπινος) θετικός στα αντισώματα IgG αντι-EBV-VCA, αρνητικός στα αντισώματα HBs Ag, HIV-1, HIV-2 και HCV. Συντηρητικά : αζίδιο του νατρίου (< 0,1%) και πενικιλίνη/στρεπτομυκίνη (0,01%).

1 x 0,4 ml

R5 Calibrator

Βαθμονομητής (ανθρώπινος) για αντισώματα IgG αντι-EBV-VCA, με ειδικό για το κιτ παράγοντα αναγραφόμενο στην εξωτερική ετικέτα της συσκευασίας, αρνητικός στα αντισώματα HBs Ag, HIV-1, HIV-2 και HCV. Συντηρητικά : αζίδιο του νατρίου (< 0,1%) και πενικιλίνη/στρεπτομυκίνη (0,01%).

1 x 0,4 ml

R6 Conjugate Συζυγές : αντιανθρώπινα αντισώματα IgG αίγας συζευγμένα με ραφανιδική υπεροξειδάση. Συντηρητικά : Proclin™ 300 (0,1%) και γενταμυκίνη.

1 x 16 ml

R7 Diluent I Αραιωτικό I: ρυθμιστικό διάλυμα έτοιμο προς χρήση (pH 7,5 ± 0,2). Συντηρητικά : Proclin™ 300 (0,1%). 1 x 30 ml

R9 Chromogen TMB

Διάλυμα χρωμογόνου/υποστρώματος (έτοιμο προς χρήση): Τετραμεθυλοβενζινίδη (TMB). Το αντιδραστήριο θα πρέπει να παραμένει συσκευασμένο όταν δεν χρησιμοποιείται. Ειδάλλως, είναι πιθανός ο σχηματισμός ιζήματος στις κοιλότητες αντίδρασης.

1 x 15 ml

R10 Stopping Solution

Διάλυμα διακοπής της αντίδρασης (έτοιμο προς χρήση): Θειικό οξύ 1N 1 x 15 ml

Φύλλο καταγραφής των εργασιών προσδιορισμού

3

5 - ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ Προφυλάξεις Η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων εξαρτάται από τη σωστή εφαρμογή των ακόλουθων Ορθών Εργαστηριακών Πρακτικών: • Μην χρησιμοποιείτε αντιδραστήρια των οποίων η ημερομηνία λήξης έχει παρέλθει. • Μην αναμιγνύετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες κατά τη διάρκεια μιας συγκεκριμένης δοκιμής. ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ: Η χρησιμοποίηση παρτίδων διαφορετικών από εκείνες που περιλαμβάνονται στο κιτ είναι εφικτή, υπό την

προϋπόθεση ότι χρησιμοποιείται η ίδια παρτίδα κατά τη διάρκεια μιας συγκεκριμένης δοκιμής: διάλυμα πλύσης (R2), διάλυμα χρωμογόνου/υποστρώματος (R9) και διάλυμα διακοπής της αντίδρασης (R10)· τα αντιδραστήρια αυτά μπορούν να χρησιμοποιούνται με τα κιτ Platelia™ EBV-VCA IgM, Platelia™ EBV-EA-D IgG και Platelia™ EB-NA-1 IgG του καταλόγου της εταιρίας μας. Το αραιωτικό I (R7) μπορεί να χρησιμοποιείται με το κιτ Platelia™ EBV-EA-D IgG καθώς και με το κιτ Platelia™ EB-NA-1 IgG. Για περισσότερες πληροφορίες, επικοινωνήστε με την υπηρεσία τεχνικής υποστήριξης της εταιρίας μας.

• Πριν από τη χρήση, είναι απαραίτητο να περιμένετε 30 λεπτά μέχρι να σταθεροποιηθούν τα αντιδραστήρια σε θερμοκρασία δωματίου.

• Προβείτε σε προσεκτική ανασύσταση των αντιδραστηρίων, αποφεύγοντας τυχόν μόλυνση. • Μην διεξάγετε τη δοκιμή παρουσία δραστικών ατμών (όξινων, αλκαλικών ατμών και ατμών αλδεΰδης) ή σκόνης διότι μπορεί

να αλλοιωθεί η ενζυμική δράση του συζυγούς. • Χρησιμοποιείτε υαλικά σχολαστικά πλυμένα και ξεπλυμένα με απιονισμένο νερό ή, κατά προτίμηση, υλικά μίας χρήσης. • Μην αφήνετε τη μικροπλακέτα να στεγνώσει κατά το διάστημα που μεσολαβεί μεταξύ του τερματισμού της διαδικασίας

πλύσης και της κατανομής του αντιδραστηρίου. • Η ενζυμική αντίδραση είναι ιδιαίτερα ευαίσθητη σε μεταλλικά ιόντα. Για τον λόγο αυτό, κανένα μεταλλικό στοιχείο δεν πρέπει

να έρχεται σε επαφή με τα διάφορα διαλύματα συζυγούς ή υποστρώματος. • Το διάλυμα χρωμογόνου/υποστρώματος πρέπει να είναι άχρωμο. Τυχόν χρωματισμός του υποδεικνύει ότι το αντιδραστήριο

δεν πρέπει να χρησιμοποιηθεί και ότι πρέπει να αντικατασταθεί. Χρησιμοποιείτε νέο επιστόμιο πιπέτας για κάθε δείγμα. • Η πλύση της μικροπλακέτας είναι βασικό στάδιο της διαδικασίας: τηρείτε τον συνιστώμενο αριθμό κύκλων πλύσης και

βεβαιωθείτε ότι οι κοιλότητες γεμίζουν πλήρως και, εν συνεχεία, εκκενώνονται πλήρως. Τυχόν ανεπαρκής πλύση μπορεί να οδηγήσει σε ανακριβή αποτελέσματα.

• Ποτέ μην χρησιμοποιείτε το ίδιο δοχείο για να κατανείμετε το συζυγές και το διάλυμα ανάπτυξης. • Ελέγχετε τις πιπέτες και τον λοιπό εξοπλισμό για την ακρίβεια και τη σωστή λειτουργία τους. • Μην αλλάζετε τη διαδικασία του προσδιορισμού.

Οδηγίες για την υγεία και την ασφάλεια Όλα τα παρεχόμενα αντιδραστήρια προορίζονται για διαγνωστική χρήση in vitro. • Κατά τον χειρισμό των αντιδραστηρίων, φοράτε γάντια μίας χρήσης. • Μην αναρροφάτε με το στόμα. • Το υλικό ανθρώπινης προέλευσης που χρησιμοποιείται για την προετοιμασία των αντιδραστηρίων υποβλήθηκε σε δοκιμή και

βρέθηκε μη αντιδρών στο επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας Β (HBS Ag), στα αντισώματα του ιού της ηπατίτιδας C (HCV) και στα αντισώματα των ιών της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (anti-HIV1 και anti-HIV2). Δεδομένου ότι καμία μέθοδος δεν μπορεί να εγγυηθεί με απόλυτη βεβαιότητα την απουσία μολυσματικών παραγόντων, συνιστάται ο χειρισμός των αντιδραστηρίων ανθρώπινης προέλευσης και των δειγμάτων των ασθενών ως ικανών να μεταδώσουν μολυσματικές ασθένειες

• Οποιοδήποτε υλικό έρχεται σε απευθείας επαφή με δείγματα και αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης, καθώς και με διαλύματα πλύσης, πρέπει να θεωρείται μολυσματικό υλικό.

• Αποφεύγετε το πιτσίλισμα των δειγμάτων ή των διαλυμάτων τα οποία περιέχουν δείγματα. • Τυχόν λεκέδες από πιτσίλισμα πρέπει να ξεπλένονται με λευκαντικό αραιωμένο κατά 10 %. Εάν το μολυσματικό ρευστό είναι

οξύ, οι λεκέδες πρέπει αρχικά να αδρανοποιούνται με διττανθρακικό νάτριο και στη συνέχεια να καθαρίζονται με λευκαντικό και να στεγνώνονται με απορροφητικό χαρτί. Το υλικό που χρησιμοποιείται για τον καθαρισμό πρέπει να απορρίπτεται στο ειδικό δοχείο που προβλέπεται για μολυσμένα απορρίμματα.

• Τα δείγματα, τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης, καθώς και το μολυσμένο υλικό και τα μολυσμένα προϊόντα πρέπει να απορρίπτονται μετά από απολύμανση. - είτε μέσω βύθισης σε λευκαντικό τελικής συγκέντρωσης 5 % σε υποχλωριώδες νάτριο επί 30 λεπτά, - ή μέσω αποστείρωσης σε κλίβανο στους 121°C επί τουλάχιστον 2 ώρες.

Η αποστείρωση σε κλίβανο στους 121°C επί τουλάχιστον μία ώρα αποτελεί την καλύτερη μέθοδο αδρανοποίησης του ιού HIV και του ιού της ηπατίτιδας Β. ΠΡΟΣΟΧΗ : ΜΗΝ ΕΙΣΑΓΕΤΕ ΣΤΟΝ ΚΛΙΒΑΝΟ ΑΠΟΣΤΕΙΡΩΣΗΣ ΔΙΑΛΥΜΑΤΑ ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΠΕΡΙΕΧΟΥΝ ΥΠΟΧΛΩΡΙΩΔΕΣ ΝΑΤΡΙΟ. • Τα χημικά προϊόντα πρέπει να χρησιμοποιούνται και να απορρίπτονται σύμφωνα με τις Ορθές Εργαστηριακές Πρακτικές. • Αποφεύγετε οποιαδήποτε επαφή του ρυθμιστικού διαλύματος υποστρώματος, του χρωμογόνου και του διαλύματος διακοπής

της αντίδρασης με το δέρμα ή τον βλεννογόνο (κίνδυνος τοξικότητας, ερεθισμού και εγκαυμάτων) • Ορισμένα αντιδραστήρια περιέχουν αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Το αζίδιο νατρίου ενδέχεται να αντιδράσει με τις

υδραυλικές σωληνώσεις του εργαστηρίου και να σχηματίσει αζίδια χαλκού ή μολύβδου. Τα αζίδια αυτά είναι εκρηκτικά. Για την αποφυγή του σχηματισμού αζιδίων, ξεπλένετε τους σωλήνες με άφθονο νερό κάθε φορά που απορρίπτετε στον νιπτήρα διαλύματα που περιέχουν αζίδιο κατόπιν αδρανοποίησης.

4

• Για συστάσεις αναφορικά με τους κινδύνους και τις προφυλάξεις που σχετίζονται με κάποια χημικά συστατικά αυτού του κιτ εξέτασης, ανατρέξτε στα εικονογραφήματα που αναφέρονται στις ετικέτες και στις πληροφορίες που παρέχονται στο τέλος των οδηγιών χρήσης. Το Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας διατίθεται στη διεύθυνση www.bio-rad.com.

6 - ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΟ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΟ ΥΛΙΚΟ • Αναμικτήρας περιδίνησης. • Συσκευή ανάγνωσης μικροπλακετών εξοπλισμένη με φίλτρα 450 nm (*). • Δοχείο απορριμμάτων για προϊόντα που ενέχουν βιολογικό κίνδυνο. • Υποχλωριώδες νάτριο (λευκαντικό) και διττανθρακικό νάτριο. • Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. • Βαθμονομημένοι κύλινδροι. • Γάντια μίας χρήσης από λάτεξ. • Προστατευτικά γυαλιά. • Απορροφητικό χαρτί. • Αυτόματες ή ημιαυτόματες πιπέτες ή πολυπιπέτες μεταβλητού ή σταθερού όγκου για τη μέτρηση και την κατανομή 10, 100

και 1000 µl. • Χειροκίνητη, ημιαυτόματη ή αυτόματη συσκευή πλύσης μικροπλακετών (*). • Δοκιμαστικοί σωλήνες μιας χρήσης. (*)Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τον εξοπλισμό που συνιστάται από το τεχνικό μας τμήμα, επικοινωνήστε με την εταιρία μας. 7- ΑΝΑΣΥΣΤΑΣΗ ΚΑΙ ΦΥΛΑΞΗ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Το κιτ θα πρέπει να φυλάσσεται στους 2 έως 8°C έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στη συσκευασία (εκτός εάν αναφέρονται ειδικές οδηγίες). Αφήνετε τα αντιδραστήρια να σταθεροποιούνται σε θερμοκρασία δωματίου (21 έως 25°C) πριν από τη χρήση. Τοποθετείτε εκ νέου όλα τα αντιδραστήρια στο ψυγείο αμέσως μετά τη χρήση. 1) Αντιδραστήρια έτοιμα προς χρήση • Αντιδραστήριο 1 (R1): μικροπλακέτα Κάθε δίσκος των 12 ταινιών είναι συσκευασμένος σε σακούλα σφραγισμένη με ταινία αλουμινίου. Κόψτε τη σακούλα με ψαλίδι ή νυστέρι 0,5- 1 cm επάνω από την ταινία. Επανατοποθετείστε αμέσως τις αχρησιμοποίητες ταινίες εντός της σακούλας. Κλείστε ξανά με προσοχή τη σακούλα και φυλάξτε την σε θερμοκρασία 2 έως 8°C. Κατ΄ αυτόν τον τρόπο οι ταινίες παραμένουν σταθερές για 1 μήνα. • Αντιδραστήριο 3 (R3): μη αντιδρών μάρτυρας: • Αντιδραστήριο 4a (R4a): θετικός μάρτυρας I • Αντιδραστήριο 4b (R4b): θετικός μάρτυρας II • Αντιδραστήριο 5 (R5): βαθμονομητής • Αντιδραστήριο 6 (R6): συζυγές • Αντιδραστήριο 7 (R7): αραιωτικό I: • Αντιδραστήριο R9 (R9): Διάλυμα χρωμογόνου/υποστρώματος • Αντιδραστήριο 10 (R10): διάλυμα διακοπής της αντίδρασης 2) Αντιδραστήρια προς ανασύσταση • Αντιδραστήριο 2 (R2): διάλυμα πλύσης συμπυκνωμένο 20 φορές Αραιώστε 60 ml του συμπυκνωμένου κατά 20 φορές διαλύματος πλύσης σε 1,2 l απεσταγμένου και/ή απιονισμένου νερού ούτως ώστε να προκύψει διάλυμα έτοιμο προς χρήση. Αναμείξτε καλά. Μετά την αραίωση, φυλάξτε το διάλυμα στους 2 έως 8°C για διάστημα 5 ημερών. 8- ΔΕΙΓΜΑΤΑ Συλλέξτε δείγμα αίματος σύμφωνα με τη συνήθη πρακτική. Στη δοκιμή υποβάλλονται μη αραιωμένα δείγματα. Για την αποφυγή αιμόλυσης, διαχωρίστε το συντομότερο δυνατόν τον ορό από το πήγμα ή τα ερυθροκύτταρα. Τυχόν εκτεταμένη αιμόλυση ενδέχεται να επηρεάσει τις επιδόσεις της δοκιμής. Δείγματα τα οποία περιέχουν συσσωματώματα πρέπει να καθαρίζονται με φυγοκέντρηση πριν από τη διεξαγωγή της δοκιμής. Τα αιωρημένα συσσωματώματα ή σωματίδια μπορούν να προκαλέσουν πλασματικά θετικά αποτελέσματα. Τα δείγματα μπορούν να φυλάσσονται στους 2 έως 8°C εφόσον ο προσδιορισμός διεξάγεται εντός 5 ημερών, ή μπορούν να καταψύχονται στους -20°C για αρκετούς μήνες. Αποφεύγετε τους επαναλαμβανόμενους κύκλους ψύξης/απόψυξης. Εάν τα δείγματα προορίζονται για μεταφορά, τότε πρέπει να συσκευάζονται σύμφωνα με τους ισχύοντες κανονισμούς σχετικά με τη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων. ΜΗΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙΤΕ ΜΟΛΥΣΜΕΝΟΥΣ, ΥΠΕΡΛΙΠΑΙΜΙΚΟΥΣ, ΙΚΤΕΡΙΚΟΥΣ ΟΡΟΥΣ, ΟΡΟΥΣ ΠΟΥ ΕΧΟΥΝ ΥΠΟΣΤΕΙ

ΥΠΕΡΑΙΜΟΛΥΣΗ Ή ΟΡΟΥΣ ΑΔΡΑΝΟΠΟΙΗΜΕΝΟΥΣ ΜΕ ΘΕΡΜΟΤΗΤΑ.

5

9- ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ Τηρείτε πιστά την προτεινόμενη διαδικασία. Για την επικύρωση των αποτελεσμάτων της δοκιμής, χρησιμοποιείτε σε κάθε σειρά προσδιορισμών τον βαθμονομητή και τους μάρτυρες. Τηρείτε την ακόλουθη Ορθή Εργαστηριακή Πρακτική : 1. Καθορίστε προσεκτικά το σχέδιο κατανομής των δειγμάτων και της διαδικασίας ταυτοποίησης. 2. Προετοιμάστε το αραιωμένο διάλυμα πλύσης (R2) (βλ. ενότητα 7). 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A B1 S2 B R3 S3 C R4a S4 D R4b S5 E R5 S6 F R5 S7 G R5 S8 H S1 S9 3. Αφαιρέστε τη θήκη των δίσκων και τις ταινίες (R1) από την προστατευτική σακούλα. Εισαγάγετε τον επιθυμητό αριθμό των

επιχρισμένων με αντιγόνο ταινιών εντός του πλαισίου για τις μικροκοιλότητες. Προβλέψτε 1 κοιλότητα για το τυφλό αντιδραστήριο, 3 κοιλότητες για τον βαθμονομητή, και 1 κοιλότητα για κάθε αρνητικό, θετικό I και θετικό II μάρτυρα.

4. Τα δείγματα, οι μάρτυρες και ο βαθμονομητής πρέπει να υποβάλλονται σε περιδίνηση πριν από τη χρήση. Αραιώστε τα

δείγματα, τον βαθμονομητή, τους θετικούς και τους αρνητικούς μάρτυρες σε αναλογία 1:21 (π.χ. 10 µl + 200 µl) προσθέτοντας το αραιωτικό δείγματος I (R7) σε δοκιμαστικούς σωλήνες αραίωσης ή σε πλακέτα αραίωσης

5. Κατανείμετε 100 µl κάθε αραιωμένου βαθμονομητή, μάρτυρα ή δείγματος ασθενούς σε κάθε κοιλότητα. Κατανείμετε 100 µl του αραιωτικού δείγματος I (R7) στην πρώτη κοιλότητα που προορίζεται για το τυφλό αντιδραστήριο.

6. Επωάστε τη μικροπλακέτα επί 20 ± 2 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (21-25°C). 7. Αναρροφήστε τα περιεχόμενα όλων των κοιλοτήτων στο ειδικό δοχείο απορριμμάτων που προβλέπεται για προϊόντα που

ενέχουν βιολογικό κίνδυνο (περιέχουν υποχλωριώδες νάτριο). Προσθέστε αμέσως σε κάθε κοιλότητα 300 µl διαλύματος πλύσης κατ’ ελάχιστο. Αναρροφήστε ξανά. Επαναλάβετε αυτήν τη διαδικασία τουλάχιστον 4 φορές (τουλάχιστον 5 πλύσεις στο σύνολο). Εάν χρειασθεί, στεγνώστε τη μικροπλακέτα αναποδογυρίζοντάς την επάνω σε απορροφητικό χαρτί. Ακολουθήστε την ίδια διαδικασία ακόμη και εάν χρησιμοποιείτε αυτόματη συσκευή πλύσης.

8. Κατανείμετε 100 µl του έτοιμου προς χρήση συζυγούς (R6) σε όλες τις κοιλότητες. 9. Επωάστε επί 20 ± 2 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (21-25°C). 10. Εκκενώστε αναρροφώντας όλες τις κοιλότητες και πραγματοποιήστε 5 πλύσεις όπως περιγράφεται παραπάνω. 11. Κατανείμετε γρήγορα 100 µl διαλύματος χρωμογόνου/υποστρώματος (R9) σε κάθε κοιλότητα. 12. Αφήστε την αντίδραση να εξελιχθεί στο σκοτάδι για 10± 2 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (21 έως 25°C). Μην

χρησιμοποιείτε κολλητική ταινία κατά τη διάρκεια αυτής της επώασης. Το διάλυμα χρωμογόνου/υποστρώματος παίρνει κυανή απόχρωση στις κοιλότητες που περιέχουν ανιχνεύσιμα επίπεδα

αντισωμάτων IgG. 13. Προσθέστε 100 µl διαλύματος διακοπής της αντίδρασης σε κάθε κοιλότητα. Ανακινείστε κτυπώντας απαλά την πλακέτα. Η

προσθήκη του διαλύματος διακοπής της αντίδρασης προκαλεί μεταβολή του χρώματος από κυανό σε κίτρινο. 14. Περιμένετε για τουλάχιστον 5 λεπτά και προβείτε σε ανάγνωση. Σκουπίστε προσεκτικά τη βάση της μικροπλακέτας. Σε μήκος

κύματος 450 nm, μηδενίστε την ένδειξη της συσκευής ανάγνωσης στο τυφλό αντιδραστήριο και μετρήστε την οπτική πυκνότητα κάθε κοιλότητας. Η ανάγνωση της μικροπλακέτας θα πρέπει να λαμβάνει χώρα εντός 30 λεπτών από την προσθήκη του διαλύματος διακοπής της αντίδρασης (οι ταινίες πρέπει πάντα να φυλάσσονται μακριά από το φως πριν από την ανάγνωση).

15. Ελέγξτε εάν σε όλα τα αποτελέσματα, οι τιμές ανάγνωσης συμφωνούν με το σχέδιο κατανομής πλακετών και δειγμάτων και το σχέδιο ταυτοποίησης.

10- ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ 1) Υπολογισμός της μέσης τιμής οπτικής πυκνότητας 1. Μέση οπτική πυκνότητα του βαθμονομητή οριακής τιμής – Υπολογίστε τη μέση τιμή της οπτικής πυκνότητας του

βαθμονομητή οριακής τιμής βάσει των τριών τιμών οπτικής πυκνότητας που προσδιορίστηκαν για τον βαθμονομητή R5. Σε περίπτωση που οποιαδήποτε από αυτές εμφανίζει απόκλιση μεγαλύτερη από 15 % από τη μέση τιμή, αγνοήστε την και υπολογίστε τον μέσο όρο των δύο άλλων τιμών.

2. Συντελεστής Διόρθωσης – Για κάθε παρτίδα κιτ προσδιορίζεται ένας Συντελεστής Διόρθωσης των ημερήσιων διακυμάνσεων που σημειώνονται κατά τις δραστηριότητες προσδιορισμού και οι οποίες αποδίδονται στη θερμοκρασία δωματίου και στον χρόνο διεξαγωγής του προσδιορισμού. Ο Συντελεστής Διόρθωσης αναγράφεται στο φιαλίδιο του βαθμονομητή.

3. Οριακή Τιμή Βαθμονομητή – Για κάθε προσδιορισμό, υπολογίστε την οριακή τιμή του βαθμονομητή πολλαπλασιάζοντας τον Συντελεστή Διόρθωσης επί τη μέση οπτική πυκνότητα του βαθμονομητή οριακής τιμής που υπολογίσατε στο βήμα 1.

6

4. Τιμή ISR – Για κάθε δείγμα, υπολογίστε τον λόγο ανοσολογικής κατάστασης (ISR) διαιρώντας την τιμή της οπτικής

πυκνότητας του δείγματος διά την οριακή τιμή του βαθμονομητή που υπολογίσατε στο βήμα 3. Παράδειγμα: Τιμές οπτικής πυκνότητας του βαθμονομητή = 0,380, 0,400, 0,420 Μέση οπτική πυκνότητα του βαθμονομητή = 0,400 Συντελεστής διόρθωσης = 0,5 Οριακή τιμή του βαθμονομητή = 0,5 x 0,400 = 0,200 Οπτική πυκνότητα των ορών του ασθενούς = 0,600 Τιμή ISR = 0,600/0,200 = 3,00 2) Επικύρωση του προσδιορισμού 1. Η οπτική πυκνότητα του τυφλού αντιδραστηρίου (όταν διαβάζεται σε σχέση με τον αέρα) πρέπει να είναι < 0,150 στα 450 nm

: OD RB < 0,150 2. Η οπτική πυκνότητα του αρνητικού μάρτυρα R3 πρέπει να είναι ≤ 0,250 στα 450 nm (όταν διαβάζεται σε σχέση με το τυφλό

αντιδραστήριο): OD R3 ≤ 0,250 3. Η τιμή της οπτικής πυκνότητας για κάθε βαθμονομητή R5 πρέπει να είναι ≤ 0,250 στα 450 nm (όταν διαβάζεται σε σχέση με

το τυφλό αντιδραστήριο): OD R5 ≤ 0,250 4. Η οπτική πυκνότητα του θετικού μάρτυρα R4β πρέπει να είναι ≥ 0,500 στα 450 nm (όταν διαβάζεται σε σχέση με το τυφλό

αντιδραστήριο): OD R4β ≥ 0,500 5. Οι τιμές ISR (Λόγος Ανοσολογικής Κατάστασης) για τον αρνητικό, τον θετικό I και τον θετικό II μάρτυρα (R3, R4α, R4β)

πρέπει να εμπίπτουν στο αντίστοιχο εύρος τιμών που αναγράφεται στα φιαλίδια. Εάν οι τιμές αυτές δεν εμπίπτουν στο αντίστοιχο εύρος τιμών, η δοκιμή πρέπει να θεωρείται άκυρη και να επαναλαμβάνεται.

3) Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Οι τιμές ISR (Λόγος Ανοσολογικής Κατάστασης) για τους ασθενείς ερμηνεύονται όπως περιγράφεται στη συνέχεια:

Τιμή ISR Αποτελέσματα Ερμηνεία

≤ 0,90 Αρνητικό Μη σημαντικά επίπεδα ανιχνεύσιμων αντισωμάτων IgG έναντι του EBV-VCA. Τα άτομα αυτά θεωρούνται μη μολυσμένα από τον EBV αλλά ευαίσθητα στην πρωτοπαθή λοίμωξη.

0,91-1,09 Αμφιλεγόμενο Τα δείγματα πρέπει να υποβληθούν εκ νέου σε δοκιμή

≥ 1,10 Θετικό

Σημαντικά επίπεδα ανιχνεύσιμων αντισωμάτων IgG έναντι του EBV-VCA. Θεωρούνται ένδειξη τρέχουσας ή παρελθούσας λοίμωξης. Τα άτομα αυτά ενδέχεται να είναι φορείς μετάδοσης της λοίμωξης από τον EBV, χωρίς αυτό να σημαίνει αναγκαστικά ότι ο ιός είναι στο συγκεκριμένο στάδιο μεταδοτικός.

1. Στη συνέχεια παρατίθεται η συνιστώμενη μέθοδος αναφοράς των ληφθέντων αποτελεσμάτων· «Τα ακόλουθα αποτελέσματα

ελήφθησαν με τη δοκιμή Platelia™ EBV-VCA IgG. Οι τιμές που ελήφθησαν με διαφορετικές μεθόδους δεν μπορούν να χρησιμοποιούνται ως εναλλάξιμες. Το ύψος των αναφερόμενων επιπέδων IgG δεν μπορεί να συσχετίζεται με τίτλο τελικού σημείου».

2. Για την περιγραφή μιας συνολικής εικόνας της λοίμωξης από τον EBV, χρησιμοποιούνται τέσσερις διακριτές τάξεις αντισωμάτων EBV: τα IgM έναντι του EBV-VCA, τα IgG έναντι του EBV-VCA, τα IgG έναντι του EBV-EA και τα IgG έναντι του EBV-NA. Η ακρίβεια της ερμηνείας της λοίμωξης από τον EBV αποτελεί συνάρτηση των αποτελεσμάτων που παρέχουν τα προαναφερθέντα αντισώματα στο σύνολό τους, και ως εκ τούτου η διάγνωση δεν θα πρέπει να βασίζεται στα αποτελέσματα μίας και μοναδικής δοκιμής.

3. Τα δείγματα που εξακολουθούν να παρέχουν αμφιλεγόμενα αποτελέσματα μετά την επανειλημμένη υποβολή τους σε δοκιμή, θα πρέπει να υποβάλλονται εκ νέου σε δοκιμή μέσω εναλλακτικής μεθόδου, π.χ. μέσω της τεχνικής ανοσοφθορισμού (IFA). Εάν τα αποτελέσματα παραμένουν ακόμη και με αυτήν τη δοκιμή αμφιλεγόμενα, πρέπει να λαμβάνεται και άλλο δείγμα.

4. Τα χαρακτηριστικά των επιδόσεων του παρόντος προϊόντος έχουν καθοριστεί βάσει ενός βαθμονομητή. Εάν ο πελάτης επιθυμεί τη χρήση γραμμικής καμπύλης δόσης-απόκρισης παράλληλα με τον προσδιορισμό, τότε θα πρέπει να ορίσει τουλάχιστον δύο επιπλέον βαθμονομητές.

5. Για την εκτίμηση τυχόν σημαντικής μεταβολής των επιπέδων αντισωμάτων σε ζεύγη ορών, αμφότερα τα δείγματα πρέπει να υποβάλλονται σε δοκιμή εις διπλούν στο πλαίσιο του ίδιου προσδιορισμού. Για την αξιολόγηση τυχόν σημαντικής μεταβολής των επιπέδων αντισωμάτων σε ζεύγη ορών, η μέση τιμή ISR αμφότερων των δειγμάτων (οξείας φάσης και φάσης ανάρρωσης) πρέπει να υπερβαίνει το 1,00.

4) Επιπολασμός Περίπου 80-90 % του ενήλικου πληθυσμού των ΗΠΑ είναι οροθετικοί στα αντισώματα IgG έναντι του EBV-VCA. Οι τίτλοι των αντισωμάτων αυτών ενδέχεται να ποικίλλουν ανάλογα με τη χρησιμοποιούμενη μέθοδο. Τα αντισώματα IgG έναντι του EBV αναπτύσσονται στα πρώιμα στάδια της λοιμώδους μονοπυρήνωσης και τα επίπεδά τους μεγιστοποιούνται εντός 3-4 εβδομάδων από την έναρξη της λοίμωξης. Ο τίτλος τους παρουσιάζει σταδιακή μείωση για να σταθεροποιηθεί τελικά σε επίπεδα που διατηρούνται καθόλη της διάρκεια της ζωή του ατόμου. Αυξημένα επίπεδα αντισωμάτων έναντι του EBV ενδέχεται να εμφανίζουν ασθενείς που πάσχουν από καρκίνωμα του ρινοφάρυγγα, λέμφωμα Burkitt, νόσο του Hodgkin, σαρκοείδωση και συστηματικό ερυθηματώδη λύκο.

7

5) Όρια χρήσης 1. Η χρήση του κιτ σε διαδικασίες ή πρακτικές δοκιμών διαφορετικές από αυτές που περιγράφονται στο παρόν ένθετο ενδέχεται

να αποφέρει αμφιλεγόμενα αποτελέσματα. • Η μη επαναληψιμότητα των αντιδράσεων οφείλεται συχνά σε:

- Ανεπαρκή πλύση των μικροπλακετών, - Ακατάλληλο χρονισμό των σταδίων επώασης, - Μόλυνση των αρνητικών δειγμάτων με ορό ή πλάσμα με υψηλό τίτλο αντισωμάτων, - Μόλυνση του διαλύματος ανάπτυξης με οξειδωτικούς παράγοντες (λευκαντικό, μεταλλικά ιόντα…), - Μόλυνση του διαλύματος διακοπής της αντίδρασης.

• Τυχόν μολυσμένοι, ικτερικοί, λιπαιμικοί οροί, οροί που έχουν υποστεί αιμόλυση ή οροί αδρανοποιημένοι με θερμότητα μπορούν να προκαλέσουν εσφαλμένα αποτελέσματα και ως εκ τούτου πρέπει να αποφεύγονται.

• Τα χαρακτηριστικά των επιδόσεων δεν προσδιορίστηκαν για καμία άλλη θεμέλια ουσία πέραν του ορού. 2. Το ιατρικό προσωπικό θα πρέπει να ερμηνεύει τα αποτελέσματα της παρούσας δοκιμής σε συνδυασμό με άλλα κλινικά

ευρήματα και διαγνωστικές διαδικασίες. • Το παρόν κιτ προορίζεται για τη μέτρηση των αντισωμάτων IgG σε δείγματα ασθενών. Η εμφάνιση θετικών αποτελεσμάτων

σε νεογνά πρέπει να ερμηνεύεται με προσοχή, δεδομένου ότι τα μητρικά IgG μεταφέρονται παθητικά από τη μητέρα στο έμβρυο πριν από τη γέννηση. Γενικά, οι δοκιμές προσδιορισμού των IgM ως δεικτών της λοίμωξης ενδείκνυται σε παιδιά ηλικίας κάτω των 6 μηνών. Οι τιμές που λαμβάνονται με την παρούσα μέθοδο προσδιορισμού προορίζονται για χρήση αποκλειστικά ως διαγνωστικό βοήθημα. Το ιατρικό προσωπικό πρέπει να ερμηνεύει τα αποτελέσματα βάσει του ιστορικού του ασθενούς, των ευρημάτων της σωματικής εξέτασης και άλλων διαγνωστικών πρακτικών. Δεν έχουν καθοριστεί τα χαρακτηριστικά των επιδόσεων της δοκιμής όταν αυτή διεξάγεται σε ασθενείς με καρκίνωμα του ρινοφάρυγγα, λέμφωμα Burkitt και άλλες λεμφαδενοπάθειες και νόσους που σχετίζονται με τον EBV, πέραν της σχετιζόμενης με αυτόν μονοπυρήνωσης. Τα αποτελέσματα της υποβολής ορού προερχόμενου από ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς στη δοκιμή Platelia™ EBV-VCA IgG πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Δεν έχουν καθοριστεί τα χαρακτηριστικά των επιδόσεων του παρόντος προσδιορισμού για δείγματα που προέρχονται από παιδιά.

• Τυχόν σημαντική αύξηση των επιπέδων των αντισωμάτων είναι ενδεικτική πρόσφατης αντιγονικής διέγερσης. Η μη σημαντική αύξηση των επιπέδων των αντισωμάτων δεν αποκλείει το ενδεχόμενο λοίμωξης από τον EBV. Τα δείγματα που συλλέγονται αρκετά πρώιμα κατά την εξέλιξη μιας λοίμωξης ενδέχεται να μην περιέχουν ανιχνεύσιμα επίπεδα αντισωμάτων IgG. Στις περιπτώσεις αυτές, συνιστάται η διεξαγωγή δοκιμής προσδιορισμού των αντισωμάτων IgM, ή η λήψη δεύτερου δείγματος ορού 10 - 21 ημέρες αργότερα και η υποβολή του σε δοκιμή παράλληλα με το αρχικό δείγμα προκειμένου να προσδιοριστεί η ορομετατροπή η οποία είναι ενδεικτική πρωτοπαθούς λοίμωξης.

• Η παρουσία αντισωμάτων IgG έναντι του EBV ενδέχεται να μην διασφαλίζει προστασία από τη νόσο. Ο Λόγος Ανοσολογικής Κατάστασης (ISR) που προκύπτει κατά τον προσδιορισμό των αντισωμάτων σε ένα και μοναδικό δείγμα δεν συσχετίζεται με τη δριμύτητα των κλινικών συμπτωμάτων της λοιμώδους μονοπυρήνωσης.

11- ΕΠΙΔΟΣΕΙΣ 1- Σχετική Ευαισθησία και Ειδικότητα βάσει Χαρακτηρισμού του Ορού Σύνολο 205 τυχαίων δειγμάτων προερχόμενων από δύο διαφορετικούς πληθυσμούς υπεβλήθη σε δοκιμή προσδιορισμού με το κιτ Platelia™ EBV-VCA IgG καθώς και με ένα κιτ δοκιμής ανοσοφθορισμού που διατίθεται στο εμπόριο. Ελήφθησαν δείγματα ορού από πληθυσμό μελέτης, αποτελούμενο από φυσιολογικούς περιπατητικούς αιμοδότες σε μεγάλο πανεπιστήμιο της Καλιφόρνιας και σε δημόσιο ίδρυμα υγείας των Ανατολικών ΗΠΑ. Τα αποτελέσματα αυτά συνοψίζονται στον ακόλουθο πίνακα. 1η δοκιμή ανοσοφθορισμού (IFA) του εμπορίου

Platelia™ EBV-VCA IgG

Αποτέλεσμα Θετικό Αρνητικό

Θετικό 193 0

Αμφιλεγόμενο 1 0

Αρνητικό 2 9

Για τη διασαφήνιση των 2 αποτελεσμάτων που βρέθηκαν πλασματικά θετικά με την πρώτη δοκιμή IFA του εμπορίου, χρησιμοποιήθηκε δεύτερη δοκιμή IFA του εμπορίου για τον προσδιορισμό των αντισωμάτων IgG έναντι του EBV- VCA. Το αμφιλεγόμενο αποτέλεσμα που προέκυψε με τη δοκιμή Platelia™ EBV-VCA IgG (συνολικά 1) θεωρήθηκε μη προσδιορίσιμο και δεν συμπεριλήφθηκε στους ακόλουθους υπολογισμούς της σχετικής ειδικότητας και ευαισθησίας: Ειδικότητα: 100 % (11/11) Ευαισθησία: 100% (193/193)

8

2 - Επαναληψιμότητα (Ακρίβεια στο πλαίσιο του ίδιου προσδιορισμού) Η ακρίβεια της δοκιμής Platelia™ EBV-VCA IgG αξιολογήθηκε με τη βοήθεια τριών ορών (ενός αρνητικού, ενός ήπια θετικού και ενός θετικού) καθένας εκ των οποίων υποβλήθηκε δέκα φορές σε δοκιμή στην ίδια πλακέτα. Τα αποτελέσματα συνοψίζονται στον ακόλουθο πίνακα.

Ορός n Χ S.D. CV

Αρνητικός 10 0,392 0,047 12

Ήπια θετικός 1,195 10 0,038 3,2

Θετικός 10 2,252 0,097 4,3

X = Μέση τιμή ISR S.D. = Τυπική Απόκλιση C.V. = Συντελεστής Μεταβλητότητας 3 - Αναπαραγωγιμότητα (Ακρίβεια στο πλαίσιο του ίδιου προσδιορισμού) Η ακρίβεια της δοκιμής Platelia™ EBV-VCA IgG αξιολογήθηκε με τη βοήθεια τριών ορών (ενός αρνητικού, ενός ήπια θετικού και ενός θετικού) καθένας εκ των οποίων υποβλήθηκε σε δοκιμή δέκα φορές κατά τη διάρκεια τριών διαφορετικών ημερών. Τα αποτελέσματα συνοψίζονται στον ακόλουθο πίνακα.

Ορός n Χ S.D. CV %

Αρνητικός 30 0,42 0,064 15

Ήπια θετικός 30 1,02 0,054 4,2

Θετικός 30 2,44 0,149 6,1

Οι συντελεστές μεταβλητότητας είναι μικρότεροι από 10 % στα θετικά δείγματα. 4 – Διασταυρούμενη αντιδραστικότητα Τα ακόλουθα 8 δείγματα ορού υποβλήθηκαν σε δοκιμή προσδιορισμού με το κιτ Platelia™ EBV-VCA IgG και βρέθηκαν αρνητικά.

Δείγμα EBV ANA

(αντιπυρηνικό αντίσωμα)

CMV (Κυτταρο-μεγαλοϊός)

VZV (ιός της ανεμο-βλογιάς-έρπητα

ζωστήρα)

HSV 1 (ιός του απλού

έρπητα 1)

HSV 2 (ιός του απλού

έρπητα 2)

Platelia™ EBV-VCA

IgG

472 – – + + + – Αρνητικό

595 – – – + + – Αρνητικό

617 – – – + + – Αρνητικό

616 – + – + + – Αρνητικό

631 – – – + – – Αρνητικό

632 – – + + – – Αρνητικό

638 – – + + + + Αρνητικό

660 – – – + – – Αρνητικό

9

12- ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 1. Epstein, M.A., B.B. Achong, and Y.M. Barr. 1964. Virus Particles in Cultured Lymphoblasts from Burkitt's Lymphoma.

Lancet. 1: 702-703. 2. Epstein, M.A., Y.M. Barr, and B.G. Achong. 1965. Studies with Burkitt's Lymphoma. Wistar Inst. Sympos. Monogr. 4: 69-82. 3. Schooley, R.T. and R. Dolin. 1985. Epstein-Barr Virus (Infectious Mononucleosis). In: Principles and Practice of Infectious

Diseases, 2nd Edition. Mandell, G. L., R. G. Douglas, and J. E. Bennett. (eds). John Wiley and Sons, New York. pp 97 - 982.

4. Sumaya, C.V. 1985. Serological Testing for Epstein-Barr Virus-Developments in Interpretations. J. Inf. Dis. 151 (6): 984-987. 5. Tobi, M., and S.E. Straus. 1985. Chronic Epstein-Barr Virus Disease: A Workshop Held by the National Institute of Allergy

and Infectious Diseases. Ann. Intern. Med. 103 (6(pt.1)): 951-953. 6. Sumaya, C.V. 1986. Infectious Mononucleosis and Other EBV Infections: Diagnostic Factors. Lab Mgmt. Oct., 37-46. 7. Birx, D.L., R.R. Redfield, and G. Tosarto. 1986. Defective Regulation of Epstein-Barr Virus Infection in Patients with

Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) or AIDS-Related Disorders. New Eng. J. Med. 314 (14): 874-879. 8. Ablashi, D.V., et. al. 1985. Firsh International Symposium on Epstein-Barr Virus and Associated Malignant Diseases.

Cancer Res. 45 (8): 3981-3984. 9. Chang, R.S., H. Thompson, and S. Pomerantz. 1985. Epstein-Barr Virus Infections in Homosexual Men with Chronic,

Persistent Generalized Lymphadenopathy. J. Inf. Dis. 151 (3): 459-463. 10. Bakerman, S. 1980. Enzyme Immunoassays. Lab. Mgmt. August, pp 21-29. 11. Engvall, E. and P. Perlmann. 1972. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA. III. Quantitation of Specific Antibodies by

Enzyme-labeled Anti- Immunoglobulins in Antigen Coated Tubes. J. Immunol. 109: 129-135. 12. Engvall, E., and P. Perlman. 1971. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, (ELISA) Quantitative Assay of Immunoglobulin

G. Immunochemistry. 8: 871-874. 13. Engvall, E., and P. Perlman. 1971. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA. Peeters. H., ed. Proteins of the Biological

Fluids. Proceedings of the Nineteenth Colloquium, Brugge, Oxford. Pergamon Press. pp 553 - 556. 14. Engvall, E., K. Jonsson, and P. Perlman. 1971. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. II. Quantitative Assay of Protein

Antigen, Immunoglobulin-G, By Means of Enzyme- Labelled Antigen and Antibody-Coated tubes. Biochem. Biophys. Acta., 251: 427-434.

15. Van Weeman, B.K. and A.H.W.M. Schuurs. 1971. Immunoassay Using Antigen-Enzyme Conjugates. FEBS Letter. 15: 232-235.

16. CDC/NIH Manual. 1993. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 3rd edition. Pp. 18-24. 17. Lennette, E.T. 1985. Epstein-Barr Virus. In: Manual of Clinical Microbiology, Fourth Edition. E.H. Lennette, A. Balows, W.J.

Hausler, Jr. and H.J. Shadomy, eds. ASM. 67:728-732. 18. Tishchendorf, P., et. Al. 1970. Development and Persistence of Immunity to Epstein-Barr Virus in Man. J. Infect Dis.

1222:401-409. 19. Evans, A.S. 1971. The Spectrum of Infections with EB Virus: A Hypothesis. J. Infect. Dis. 124:330-337. 20. Niederman, J.C., R.W. McCollum, G. Henle, and W. Henle. 1968. Infectious Mononucleosis, Clinical Manifestations in

Relation to EB Virus Antibodies. Jama 203:205-209. 21. Henle, W. and G. Henle. 1972. Epstein-Barr Virus: The Cause of Infectious Mononucleosis. In: Oncogenesis and

Herpesviruses. I.M. Biggs and L.H. Payne, eds. Int Agency Res. Cancer Sci. #2, Lyon, pp. 269-274.

10

11

TRINITY BIOTECH USA, 2823 Grits Road, Jamestown, NY, 14701

TRINITY BIOTECH, Bray, Co. Wicklow – Ireland

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax. : +33 (0) 1 47 41 91 33 www.bio-rad.com

2015/04