1

KATA PENGANTAR

Syukur Alhamdulillah kami panjatkan ke hadirat Allah AWT, karena dengan rahmat

dan hidayahNya kami dapat menyeleseikan Penuntun Praktikum Mikrobiologi ini. Penuntun

praktikum ini berisi materi yang mendukung perkuliahaan / teori tentang mikrobiologi secara

umum, misal : mengenal alat-alat yang digunakan apabila bekerja dengan mikroba,

sterilisasi alat dan pembuatan media, Isolasi mikroba, morfologi mikroba, mengenal sifat

fisiologi dan biokimia mikroba, mengetahui pengaruh lingkungan terhadap pertumbuhan

mikroba, serta cara menghitung populasi mikroba.

Sebagai akhir kata, semoga penuntun praktikum ini dapat memberi bimbingan bagi

mahasiswa pengguna dan berguna bagi pembaca secara umum.

Surabaya,

Tim penyusun

2

I. PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Mikrobiologi merupakan suatu ilmu yang mempelajari mikroba secara umum seperti

bakteri, Actinomycetes, jamur, virus dan lainnya. Penuntun praktikum ini merupakan

pelengkap dari buku buku tentang mikrobiologi yang menjadi pedoman kuliah mikrobiologi

sedang materinya disesuaikan dengan silabus wajib nasional untuk mata kuliah mikrobiologi

dalam pedoman akademik.

1.2. Tujuan

Tujuan praktikum mikrobiologi untuk memperkenalkan cara (1) sterilisasi alat dan

media, (2) membuat media, (3) isolasi mikroba, (4) pengamatan morfologi sel dan koloni

mikroba, (5) pengujian sifat fisiologi dan biokimia, 6). mengetahui pengaruh lingkungan

terhadap mikroba dan pengujian mikroba patogen tumbuhan.

3

II. PENGENALAN ALAT DAN MIKROSKOP

Sebelum bekerja dengan mikroba, kita harus mengenal semua alat-alat yang

digunakan, cara menggunakannya dan fungsi dari alat tersebut termasuk mikroskop.Hal

tersebut harus dipahami, agar apa yang kita kerjakan benar dan berjalan dengan baik. Alat-

alat tersebut ada yang terbuat dari kaca dan ada yang dari logam. Alat-alat yang terbuat dari

kaca antara lain ; Erlenmeyer, cawan petri, beker glass, tabung reaksi, kaca pengaduk,

gelas ukur, dan lain-lain. Adapun alat yang terbuat dari logam antara lain adalah jarum ose,

jarum preparat, pinset, scalpel, bor gabus, dan lain-lain.

Mikroskop merupakan alat untuk mengamati mikroba atau histologi sel/jaringan.

Secara garis besar mikroskop terdiri dari 2 bagian yaitu (1) bagian mekanik dan (2) bagian

optik.Bagian mekanik meliputi : statif, tubus, revolver, meja benda, sekrup pengatur tubus

(kasar dan halus), sekrup pengatur kondensor dan sekrup penggerak meja benda. Bagian

optik meliputi : lensa okuler dan obyektif, kondensor dan cermin pengatur cahaya. Lensa

obyektif membentuk bayangan nyata dari preparat, lensa okuler membuat bayangan semu

sehingga bayangan semu tersebut dapat dilihat mata dan kondensor untuk mengatur

intensitas cahaya yang masuk ke mikroskop.

2.2. Tujuan

Mengenalkan alat-alat yang digunakan untuk bekerja dengan mikroba, dan

mengenalkan bagian-bagian dan cara penggunaan mikroskop.

2.3. Tata Kerja

Siapkan semua alat-alat laboratorium seperti Erlenmeyer, cawan petri, beker glass,

tabung reaksi, kaca pengaduk, gelas ukur, dan alat yang terbuat dari logam antara lain

jarum ose, jarum preparat, pinset, scalpel, bor gabus. Semua alat disebut nama alat, cara

menggunakan serta fungsinya dalam laboratorium.

Untuk mikroskop; siapkan preparat kemudian periksa lensa okuler dan obyektif

kemudian atur lensa okuler dan obyektif. Letakkan preparat di atas meja benda dan amati

preparat dengan perbesaran obyektif yang terkecil, bila telah terdapat bayangan lanjutkan

dengan perbesaran obyektif yang besar sampai tampak bayangan nyata ( bayangan obyek

yang sesungguhnya ). Gambar hasil pengamatan anda.

4

III. STERILISASI ALAT, PEMBUATAN DAN STERILISASI MEDIA

3.1. Pendahuluan

Menurut Jutono, Soedarsono, Hartadi, Kabirun, Suhadi, Soesanto (1980), sterilisasi

merupakan suatu usaha untuk membebaskan alat atau media dari segala jenis mikroba.

Sterilisasi alat atau media dapat dikerjakan secara mekanik ( misal : penyaringan ), kimia

(misal : desinfektan), dan fisik (misal : sinar ultra violet) dan cara sterilisasi yang digunakan

tergantung pada jenis dan sifat bahan yang disterilkan (misal : ketahanan terhadap panas).

Sterilisasi dapat dilakukan dengan 4 cara :

e. Sterilisasi dengan pemijaran

f. Sterilisasi dengan udara panas

g. Sterilisasi dengan uap air panas

h. Sterilisasi dengan uap air panas bertekanan

Adapun penjelasan masing-masing cara Sterilisasi tersebut adalah :

e. Sterilisasi dengan pemijaran : cara ini digunakan untuk Sterilisasi alat dari platina/nikrom

denga cara membakar di atas api Bunsen sampai pijar.

f. Sterilisasi dengan udara panas (kering) : Menggunakan oven (hot air Sterilizer) pada

170-180C selama 1-2 jam, digunaka untuk Sterilisasi alat, bahan/media.

g. Sterilisasi dengan uap air panas : menggunakan Ardold steam sterilizer pada 100C

selama 30 menit, digunakan untuk media tumbuh yang tidak tahan terhadap panas tinggi.

h. Sterilisasi dengan uap air bertekanan : menggunakan otoklaf pada 121C selama 25

menit dan tekanan 1-2 atm, digunakan untuk alat dan media/bahan.

3.2. Tujuan

Mengenalkan alat dan cara untuk sterilisasi alat juga cara membuat media/bahan

dan sterilisasi media/bahan.

3.3. Tata Kerja

3.3.1. Sterilisasi Alat

Rendam dan rebus semua alat dari kaca dalam air mendidih untuk menghilangkan

lemak / sisa-sisa jamur / bakteri yang masih melekat pada alat. Dinginkan air kemudian

5

ambil semua alat atau dalam keadaan air agak panas ambil semua alat dengan

menggunakan penjepit dan tampung dalam suatu tempat / bak plastik. Cuci semua alat dari

kaca (misal : cawan petri, tabung reaksi) dengan sabun dan bilas dengan air mengalir.

Keringkan dengan oven pada 70Cselama 24 jam atau kering angin. Bungkus cawan petri

dengan kertas dan sumbat tabung reaksi, Erlenmeyer dengan kapas kemudian sterilkan

dengan oven pada 170C selama 1,5 jam (dihitung setelah temperatur stabil ) atau sterilkan

dengan autoklaf pada 121C selama 25-30 menit dan tekanan 1-2 atm ( dihitung setelah

temperatur dan tekanan stabil ). Untuk skalpel, pinset, jarum Ose bungkus dengan

alumunium foil kemudian sterilkan dengan oven pada 170C selama 1,5 jam (dihitung

setelah temperatur stabil) ,atau dengan pemijaran menggunakan lampu Bunsen, atau

sterilkan dengan autoklaf pada 121C selama 25-30 menit dan tekanan 1-2 atm (dihitung

setelah temperatur dan tekanan stabil ). Ambil alat dan simpan (Jutono, dkk.,1980).

3.3.2. Pembuatan dan Sterilisasi Media

a. Media Nutrient Agar (NA)

- Bahan : 1 g ekstrak daging, 1 g ekstrak khamir, 5 g pepton, 5 g NaCI, 15 g agar-

agar, 1000 ml aquadest (1 resep).

Cara Membuat : Timbang masing-masing bahan dan siapkan. Larutkan ekstrak daging,

ekstrak khamir dalam 200 ml aquadest (larutan I ). Didihkan 800 ml aquadest dan masukan

larutan I kemudian masak sampai mendidih. Ukur pH media (6,8-7,0) dengan kertas lakmus.

Untuk mencapai pH tersebut gunakan larutan NaOH40%. Tambahkan agar-agar dan aduk

sampai larut.

Bila telah siap tuang ke Erlenmeyer sebanyak bagian Erlenmeyer. Sterilkan

dengan autoklaf pada 121C, tekanan 1.5 atm selama 25-30 menit.

b. Media Potato Dekstrosa Agar (PDA)

- bahan : 250 g kentang, 20 g dekstrosa, 15 g agar-agar, 1000 ml aquadest (1 resep).

Cara membuat : Timbang dekstrosa dan agar-agar kemudian siapkan. Kupas kentang

berbentuk dadu kemudian timbang. Rebus kentang dalam 1000 ml aquadest sampai

mendidih dan kentang lunak. Saring air rebusan dan tambahkan aquadest lagi bila

berkurang sampai volume mencapai 1000 ml kembali. Masukan agar-agar sambil aduk

sampai larut. Masukan dekstrosa dan aduk sampai larut.

Bila telah siap tuang ke Erlenmeyer 1/2 bagian Erlenmeyer. Sterilkan dengan

autoklaf pada 121C, tekanan 1.5 atm selama 25-30 menit.

6

IV. ISOLASI

4.1. Pendahuluan

Isolasi, menurut Jutono, dkk., (1980), isolasi adalah proses memisahkan suatu

organisme / mikroba (patogen / non-patogen) dari inang / tempat tumbuh / hidup ke tempat

tumbuh / hidup baru (alami, buatan / sintesis ).

Isolasi bakteri dan jamur umumnya dilakukan dari jaringan tipis dan tebal juga dari daerah

sekitar perakaran dan tanah tempat tumbuh.

4.2. Tata Kerja

4.2.1. Isolasi Bakteri dari Jaringan Tipis

- Bahan : daun sakit (komoditas menyesuaikan), aquadest steril, sublimat 0,1% atau alkohol

70%, media NA steril.

Alat : Jarum Ose, Lampu Bunsen, skalpel, pinset, laminar air flow.

Sediakan media NA dalam cawan petri. Ambil bahan / spesimen sakit bersihkan

sengan aquadest steril. Potong-potong bahan tersebut, pisahkan bagian yang sakit dan

yang sehat. Rendam potongan tersebut dalam larutan sublimat (HgCI2) 0,1% atau alkohol

70% selama 1 menit kemudian cuci dengan aquadest steril hingga alkohol atau sublimat

hilang.

Masukkan potongan bahan yang telah steril ke cawan Petri yang telah diisi aquadest

steril kemudian cacah potongan bahan hingga keluar masa bakterinya dan membentuk

suspensi bakteri.

Ambil suspensi dengan jarum Ose dan goreskan ke media NA dan inkubasikan 24

jam. Amati koloni yang tumbuh dan pindah ke media NA baru dan inkubasikan 24 jam. Bila

tumbuh amati bentuk, warna, wajah, permukaan koloni berdasar buku Dasar-dasar

Mikrobiologi (Dwidjoseputro, 1985). Catat hasil pengamatan pada tabel 2.

4.2.2. Isolasi Bakteri dari Jaringan Tebal

- Bahan : buah sakit (komoditas menyesuaikan), aquadest steril, sublimat 0,1% atau alkohol

70% NA steril.

Alat : jarum Ose, lampu Bunsen, skalpel, pinset, laminar air flow .

7

Sediakan media NA dalam cawan petri. Ambil bahan / spesimen sakit bersihkan

dengan aquadest steril. Bersihkan atau usap bahan sakit dengan alkohol 70% atau sublimat

0,1%. Potong-potong bahan tersebut, pisahkan bagian sakit dan sehat. Rendam potongan

tersebut dalam larutan sublimat (HgCI2) 0,1% atau alkohol 70% selama 1 menit kemudian

cuci dengan aquadest steril hingga alkohol atau sublimat hilang.

Masukan potongan bahan yang telah steril ke cawan petri yang telah diisi aquadest

steril kemudian cacah potongan bahan hingga keluar massa bakterinya dan membentuk

suspensi bakteri.

Ambil suspensi dengan jarum Ose dan goreskan ke media NA dan inkubasikan 24

jam. Amati koloni yang tumbuh dan pndah ke media NA baru dan inkubasikan 24 jam. Bila

tumbuh amati bentuk, warna, wajah, permukaan koloni berdasar buku Dasar-dasar

Mikrobiologi (Dwidjoseputro, 1985). Catat hasil pengamatan pada tabel 2.

4.2.3. Isolasi Bakteri dari Tanah

- Bahan : tanah sekitar tanaman sakit, aquadest steril, media NA steril.

Alat : timbangan, tabung reaksi steril, pengaduk, pipet tetes.

Metode Pengenceran

Timbang 1 g contoh tanah kemudian buat suspensi dalam 10 ml aquadest steril.

Buat 4 seri pengenceran (104) yaitu setiap 1 ml suspensi tanah dilarutkan dalam 9

ml aquadest steril dan setiap suspensi harus dikocok hingga homogen.

Teteskan 1 tetes suspensi terakhir menggunakan pipet tetes ke media NA yang telah

siap dan ratakan. Inkubasikan 24 jam, amati dan catat hasil pengamatan pada Tabel

2.

Metode Penaburan

Timbang 1 g contoh tanah kemudian kering anginkan beberapa saat. Taburkan

sedikit (1 kolong Ose) ke media NA yang telah siap.Inkubasikan 24 jam. Catat hasil

pengamatann pada Tabel 2.

4.2.4. Isolasi Jamur dari jaringan Tebal

- Bahan : buah sakit (komoditas menyesuaikan), aquadest steril, sublimat 0,1% atau alkohol

70%, media PDA steril.

Alat : jarum Ose, lampu Bunsen, skalpel, pinset, laminar air flow.

8

Sediakan media PDA dalam cawan petri. Ambil bahan / spesimen sakit bersihkan

sengan aquadest steril. Bersihkan atau usap bahan sakit dengan alkohol 70% atau sublimat

0,1%. Potong atau ambil bagian yang berbatasan antara sakit dan sehat.

Letakkan potongan bahan pada medai dalam cawan petri, kemudian inkubasikan 2-3

hari. Amati koloni yang tumbuh dan pindah ke media PDA baru dan inkubasikan 2-3 hari.

Bila tumbuh amati koloninya. Catat hasil pengamatan pada tabel 3.

4.2.5. Isolasi Jamur dari jaringan Tipis

- Bahan : daun sakit (komoditas menyesuaikan), aquadest steril, sublimat 0,1% atau

alkohol 70%, media NA steril.

Alat : jarum Ose, Lampu bunsen, skalpel, pinset, laminar air flow.

Sediakan media PDA dalam cawan petri. Ambil bahan / spesimen sakit bersihkan

dengan aquadest steril. Potong-potong bahan tersebut, kemudian rendam potongan

tersebut dalam larutan sublimat (HgCI2) 0,1% atau alkohol 70% selama 1 menit dan cuci

dengan aquadest steril hingga alkohol atau sublimat hilang.

Keringkan potongan di atas kertas kering saring steril beberapa saat kemudian

letakkan pada media. Inkubasikan 2-3 hari dan amati koloni yang tumbuh. Pindah ke media

PDA baru, inkubasikan 2-3 hari. Catat koloni yang tumbuh pada tabel 3.

4.2.6. Isolasi Jamur dari Tanah

- Bahan : tanah sekitar tanaman sakit, aquadest steril, media NA steril.

Alat : timbangan, tabung reaksi steril, pengaduk, pipet tetes.

Metode Pengenceran

Timbang 1 g contoh tanah kemudian buat suspensi dalam 10 ml aquadest steril.

Buat 4 seri pengenceran (104) yaitu setiap 1 ml suspensi tanah dilarutkan dalam 9

ml aquadest steril dan setiap suspensi harus dikocok hingga homogen.

Teteskan 1 tetes suspensi terakhir menggunakan pipet tetes ke media PDA yang

telah siap dan ratakan. Inkubasikan 24 jam, amati dan catat hasil pengamatan pada

tabel 3.

Metode Penaburan

Timbang 1 g contoh kemudian keringanginkan bebrapa saat. Taburkan sedikit (1

kolong Ose) ke media PDA yang telah siap. Inkubasikan 24 jam. Catat hasil

pengamatan pada tabel 3.

9

Tabel 2. Hasil Isolasi Bakteri

No Isolasi dari Bentuk

Koloni

Warna

koloni

Wajah Koloni Permukaan

Koloni

10

Tabel 3. Hasil Isolasi Jamur

No Isolasi Dari Bentuk koloni Warna koloni

11

V.MORFOLOGI KOLONI DAN SEL MIKROBA

A. Pendahuluan

Jamur benang merupakan jamur berbentuk benang multiseluler tidak berklorofil,

selnya tidak mengalami diferensiasi dalam jaringan. Pada umumnya jamur benang hidup

sebagai saprofit atau parasit. jamur benang membentuk pertumbuhan seperti benang

bercabang-cabang yang disebut miselium. Pengamatan morfologi jamur benang sangat

penting untuk identifikasi dan determinasi. Bahkan pengamatan morfologi ini lebih penting

bila dibandingkan dengan pengamatan fisiologi, walaupun pengamatan fisiologi perlu

dilakukan untuk membantu identifikasi dan determinasi jamur sampai spesies. Dalam

pengamatan morfologi secara mikroskopis beberapa hal yang perlu diperhatikan adalah :

hifa, spora seksual, spora aseksual, tangkai (pendukung) badan buah, dan lain-lain.

Pengamatan Bakteridengan menggunakan mikroskop ini hanya dapat untuk

mengamati bentuk sel bakteri, sedangkan untuk mengetahui bagian-bagian sel

dengan teliti dapat dilakukan dengan pengecetan.

Untuk mengetahui bentuk dan warna koloni bakteri dapat dilakukan dengan

menggunakan perlakuan pada media yang telah ditambah tyrosin, sedangkan

konsistensi koloni dilakukan dengan menggunakan media dilakukan dengan

menggunakan media ditambah TTC.

Tujuan :

1. Agar mahasiswa dapat mengetahui cara pengamatan bentuk, warna, konsistensi

koloni dan sel berbagai mikrobia.

2. Agar mahasiswa dapat mengenal berbagai macam bentuk, warna , konsistensi

koloni dan sel berbagai mikrobia.

Bahan :

Biakan murni jamur dan bakteri, media CPG, PDA, lactofenol, alkohol, TTC

dan tyrosin.

Alat :

Gelas benda, cawan petri, jarum ose, lampu bunsen, mikroskop, dan lain-lain.

Cara kerja :

Morfologi koloni jamur dan koloni bakteri.

Untuk mengetahui bentuk dan warna koloni bakteri yaitu :

1. Siapkan biakan murni bakteri.

12

2. Goreskan biakan murni bakteri pada medium CPG yang telah disiapkan di cawan

petri.

3. Bentuk dan warna koloni bakteri diamati diamati setelah berumur 48 jam.

Pembentukan pigmen bakteri diuji dengan cara :

1. Tumbuhkan bakteri pada medium CPG yang ditambah tyrosin.

2. Inkubasikan selama 24-48 jam.

3. Amati pertumbuhan koloninya, terutama di sekitar koloni (bila di sekitar koloni

berwarna cokelat berarti positif).

Konsistensi koloni Bakteri :

1. Tumbuhkan bakteri pada media CPG yang telah ditambah dengan TTC.

2. Inkubasikan pada suhu kamar selama 48 jam.

3. Amati pertumbuhan koloninya.

Pengamatan koloni jamur :

1. Tumbuhkan jamur pada media PDA.

2. Inkubasikan pada suhu kamar selama 4 hari.

3. Amati pertumbuhan koloninya.

Morfologi sel jamur dan bakteri :

Untuk mengetahui morfologi sel jamur

1.Bersihkan gelas benda dengan alkohol sampai bebas dari lemak dan debu,

kemudian ditetesi dengan larutan laktofenol pada bagian tengahnya.

2. Ambil sedikit biakan jamur dengan jarum preparat dan letakkan di atas gelas

benda yang telah diberi laktofenol.

3. Jika masa miselium jamur menggumpal supaya dipisahkan dengan menggunakan

dua buah jarum preparat.

4. Kemudian ditutup dengan gelas penutup. Harus dijaga agar pada waktu

meletakkan gelas penutup jangan sampai terbentuk gelembung-gelembung udara

di dalam preparat.

5. Amati dengan mikroskop perbesaran lemah terlebih dahulu, selanjutnya

perbesaran kuat.

6. Gambar hyfa dan spora jamur dan beri keterangan yang lengkap.

Untuk morfologi sel bakteri :

13

1. Bersihkan gelas benda dengan alkohol sampai bebas dari lemak dan debu,

kemudian ditetesi dengan larutan laktofenol pada bagaian tengahnya.

2. Ambil sedikit biakan dengan jarum ose dan suspensikan dalam air steril.

3. Ambil sedikit suspensi bakteri dengan menggunakan jarum ose.

4. Teteskan 1 tetes suspensi bakteri ke atas gelas benda, kemudian ditutup dengan

gelas penutup. Harus dijaga agar pada waktu meletakkan gelas penutup jangan

sampai terbentuk gelembung-gelembung udara di dalam preparat.

5. Amati dengan mikroskop perbesaran lemah terlebih dahulu, selanjutnyaperbesran

kuat.

6. Gambar dan beri keterangan yang lengkap.

14

VI. PENGUJIAN SIFAT-SIFAT FISIOLOGI DAN BIOKIMIA

A. Pendahuluan

Identifikasi bakteri patogen tanaman ada 2 tahap yaitu : 1). Identifikasi awal dengan

parameter bentuk dan warna dari koloni maupun sel bakteri, 2). Identifikasi lanjutan dengan

uji fisiologi dan biokimia bakteri. Uji fisiologi dan biokimia bakteri meliputi uji gram, oksidase,

katalase dan Oksidasi Fermentasi (OF). Untuk identifikasi bakteri, bakteri dari biakan murni

yang berumur 24-72 jam adalah yang paling baik karena pertumbuhan bakteri

optimal/proses metabolisme paling baik.

Tujuan :

1. Melatih mahasiswa untuk dapat mengidentifikasi bakteri.

2. Mengelompokkan bakteri patogen tanaman berdasar sifat-sifatnya.

Bahan :

Biakan murni bakteri, media CPG, NA, KOH, H2O2, Kovacs media untuk uji OF

Alat :

outoklaf, Jarum ose, tabung reaksi, gelas benda, dll

Cara Kerja :

Pengujian fisiologi dan biokimia

1.Pengujian gram

a. Teteskan KOH 3% pada gelas benda.

b. Letakkan satu ose koloni bakteri yang diambil dari biakan murni berumur 48 jam,

pada gelas benda yang telah diberi KOH 3%.

c. Lakukan gerakan berputar-putar dengan menggunakan jarum ose dan tarik-tarik

ke atas.

d. Jika larutan KOH menjadi lentur seperti benang dengan panjang kurang lebih 0,5

2 cm berarti reaksi positif sebagai gran negatif.

2. Uji katalase atau reduksi hydrogen peroksida

a. Goreskan biakan bakteri yang telah berumur 48 jam pada gelas benda.

b. Teteskan H2O2 5% pada gelas benda.

c. Tunggu selama 1 2 detik, bila terjadi gelembung udara, menunjukan bahwa

bakteri mereduksi H2O2.

15

3. Uji Oksidasi

a. Goreskan satu ose bakteri yang berumur 24 48 jam pada kertas saring yang

telah diperlukan dengan larutan Kovacs Oxydase.

b. Tunggu selama 10 detik.

c. Apabila pada spot yang ada goresan, kertas berubah warna menjadi ungu berarti

hasil positif.

4. Oksidasi fermentasi = OF (kebutuhan oksigen)

a. Inokulasikan suspensi bakteri pada medium untuk OF test dalam tabung reaksi.

b. Tutup permukaan medium dengan minyak parafin steril setinggi 1 cm, pada salah

satu tabung yang telah diinokulasi.

c. Inkubasikan selama 3 4 hari, selanjutnya amati pertumbuhannya.

16

VII. PENGARUH LINGKUNGAN TERHADAP PERKEMBANGAN MIKROBIA

A. Pendahuluan

Kegiatan suatu mikrobia dipengaruhi oleh faktorfaktor lingkungan atau unsur-unsur

ekologi. Perubahan yang terjadi pada faktor-faktor tersebut dapat mengakibatkan perubahan

sifat morfologi dan fisiologi mikrobia. Faktor-faktor lingkungan meliputi faktor abiotik dan

faktor biotik.

Faktor abiotik adalah faktor yang dapat mempengaruhi kehidupan yang bersifat fisika

dan kimia. Di antara faktor-faktor yang perlu diperhatikan adalah temperatur, pH,

kelembaban, sinar, dan lain-lain.

B. Temperatur

Masing-masing mikrobia memerlukan temperatur tertentu untuk hidupnya.

Temperatur pertumbuhan suatu mikrobia dapat dibedakan dalam temperatur minimum,

optimum, dan maksimum. Berdasarkan atas perbedaan temperatur pertumbuhannya dapat

dibedakan mikrobia yang psikhrofil, mesofil, dan termofil.

C. pH

Mikrobia dapat tumbuh baik pada daerah pH tertentu, misalnya untuk bakteri pada

pH 6,5 7,5; khamir pada pH 4,0 4,5 ; sedangkan jamur pada daerah pH yang luas.

Setiap mikrobia mempunyai pH minimum, optimum, dan maksimum untuk pertumbuhannya.

Berdasarkan atas perbedaan daerah pH untuk pertumbuhannya dapat dibedakan mikrobia

yang asidofil, mesofil (neutrofil), dan alkalofil. Untuk menahan perubahan pH ke dalam

medium sering ditambahkan larutan buffer.

Tujuan :

1. Agar mahasiswa memahami dan mengetahui pengaruh faktor lingkungan terhadap

pertumbuhan mikrobia.

2. Agar mahasiswa memahami dan mengetahui kisaran temperatur dan pH untuk hidup

jamur dan bakteri.

Bahan :

Biakan murni jamur dan bakteri, medium CPG dan PDA, air steril, dan lain-lain.

Alat :

Cawan petri, tabung reaksi, jarum preparat, jarum ose, dan lain-lain.

17

Cara Kerja :

Pengaruh temperatur terhadap pertumbuhan bakteri dan jamur :

1. Siapkan biakan murni bakteri dan jamur yang berumur 48 jam.

2. Siapkan medium CPG cair dalam tabung reaksi untuk bakteri dan PDA cair untuk

jamur.

3. Inokulasikan 5 tabung yang telah ada medium CPG masing-masing dengan 1 ose

biakan murni bakteri.

4. Inokulasikan 5 tabung yang telah ada medium PDA masing-masing dengan koloni

jamur dengan menggunakan jarum preparat.

5. Pisahkan masing-masing tabung tersebut dan inkubasikan pada temperatur kamar

almari es, 30, 37, dan 47/50 C.

6. Catat pertumbuhan bakteri maupun jamur dengan melihat keadaan / kekeruhan

medium.

Pengaruh pH terhadap pertumbuhan bakteri dan jamur :

1. Siapkan biakan murni dan jamur yang berumur 48 jam

2. Siapkan medium CPG cair dalam tabung reaksi untuk bakteri dan PDA cair untuk

jamur dengan pH yang berbeda yaitu 4;5;6;7;8;10.

3. Inokulasikan 5 tabung yang telah ada medium PDA masing-masing dengan 1 ose

biakan murni bakteri.

4. Inokulasikan 5 tabung yang telah ada medium PDA masing-masing dengan koloni

jamur dengan menggunakan jarum preparat,

5. Pisahkan masing-masing tabung tersebut dan inkubasikan pada temperatur

kamar.

6. Catat pertumbuhan bakteri maupun jamur dengan melihat keadaan / kekeruhan

medium.

18

VIII. PENGUJIAN MIKROBIA PATOGEN TUMBUHAN

A. Pendahuluan

Hampir semua jamur patogen tumbuhan menghabiskan sebagian hidupnya pada

tumbuhan inangnya dan sebagian di dalam tanah atau sisa tumbuhan dalam tanah.

Beberapa jenis jamur melewati seluruh hidupnya pada inang, dan mungkin hanya spora

yang mendarat di tanah, tetapi spora tidak aktif sampai terbawa kembali ke inang untuk

tumbuh dan memperbanyak diri. Jamur menyebabkan gejala lokal atau sistemik pada

inangnya. Umumnya jamur menyebabkan nekrosis, hipotrofi, hiplasia, atau hiperplasia.

Pada banyak penyakit, patogen menghasilkan sebagai struktur pada permukaan inang.

Struktur tersebut meliputi miselium, sklerotium, tubuh buah dan atau spora, yang disebut

tanda yang dapat dibedakan dengan gejala yaitu hanya berkenan dengan penampakan

tumbuhan atau jaringan tumbuhan yang terinfeksi.

Bakteri patogenik tumbuhan menyebabkan gejala hampir sebanyak gejala tumbuhan

yang terinfeksi jamur, bakteri menyebabkan bercak, hawar daun, busuk lunak pada buah,

layu, pertumbuhan yang tidak normal, kudis, kanker dan lain sebagiannya. Hampir semua

bakteri patogenik tumbuhan berkembang dalam tubuh inangnya sebagai parasit dan

sebagian kecil pada sisa tumbuhan atau di dalam tanah sebagai saprofit.

Tujuan :

1. Agar mahasiswa memahami dan mengetahui cara melakukan inokulasi bakteri atau

jamur ke tanaman inang

2. Agar mahasiswa memahami dan mengetahui reaksi suatu tanaman inang terhadap

inokulasi suatu bakteri atau jamur patogen.

Bahan :

Tanaman inang (tomat, cabai), biakan murni bakteri patogen ( Ralstonia

solanacearum), biakan murni jamur patogen (Colletotrichum sp. Atau Fusarium sp.),

air steril.

Alat :

Cawan petri, tabung reaksi, gelas ukur, jarum ose, jarum preparat, dan lain-lain.

Cara Kerja :

Inokulasi bakteri pada tanaman tomat :

1 Siapkan biakan murni bakteri yang telah berumur 24 48 jam.

19

2. Tambahkan air steril sebanyak 5 ml ke dalam tabung reaksi yang ada biakan

murni bakteri.

3. Koloni diambil dengan dikerok-kerok menggunakan jarum ose secara perlahan-

lahan agar media tidak terikut. Setelah semua koloni lepas dari media, tabung

reaksi digoyang-goyang agar homogen.

4. Suspensi bakteri dituang kembali ke tabung reaksi yang kosong.

5. Suspensi biakan murni bakteri diambil dengan menggunakan spet (suntikan).

6. Inokulasi pada tomat dilakukan dengan menyuntikan suspensi langsung pada

bagian pangkal daun atau suspensi bakteri sebanyak 4 ml dituangkan pada

bagian pangkal batang dekat akar dengan cara tanah digali terlebih dahulu dan

akar sedikit dilukai.

7. Inkubasikan di dalam rumah kaca dan amati masa inkubasinya setiap hari dan

perkembangan gejalanya setiap 5 hari sekali.

Inokulasi jamur pada tanaman cabai atau buah cabai :

1. Siapkan biakan murni jamur yang telah berumur 48-72 jam.

2. Tambahkan air steril sebanyak 5 ml ke dalam tabung reaksi yang ada biakan

murni jamur.

3. Koloni diambil dengan cara dikerok-kerok menggunakan jarum ose secara

perlahan-lahan agar media tidak terikut. Setelah semua koloni lepas dari media,

tabung reaksi digoyang-goyang agar homogen.

4. Suspensi jamur dituang kembali ke tabung reaksi yang kosong.

5. Hitung kerapatan spora jamur kurang lebih 10 spora / ml.

6. Inokulasikan suspensi jamur sebanyak 4 ml pada tanaman cabai dengan cara

dituangkan ke pangkal batang dekat akar, tetapi sebelumnya tanah digali dan

akar sedikit dilukai.

7. Inokulasi pada buah cabai, dilakukan dengan cara suspensi jamur diteteskan pada

permukaan buah cabai yang sebelumnya telah dilukai dengan cara ditusuk-tusuk

dengan menggunakan jarum.

8. Amati massa inkubasi setiap hari dan perkembangan penyakit setiap 5 hari sekali.

20

VI. DAFTAR PUSTAKA

Dwidjoseputro, D. 1985. Dasar-dasar Mikrobiologi. Djambatan. Jakarta

Hadioetomo, R.S. 1990. Dasar-dasar Mikrobiologi. PT. Gramedia. Jakarta.

Jutono, J. Soedarsono, S. Hartadi, S. Kabirun, Suhadi, Soesanto. 1980. Pedoman Praktikum Mikrobiologi Umum. Depart. Mikrobiologi. Fak.Pertanian. UGM.

Ni Made L.E. 2001. Penggunaan Mikroorganisme Tanah Antagonis untuk Menekan Pseudomonas solanacearum Penyebab Penyakit Layu pada Tanaman Pisang. Tesis. Program Pascasarjana Univ. Brawijaya Malang. (Tidak Dipublikasi).