Pravidla práce v prostoru BSL2

Školení o bezpečnosti práce v BSL2 prostoru 5.10.2016

BSL - Bio Safety Levellevel popis

BSL1 práce s dobře charakterizovaným biologickým materiálem, nezpůsobuje infekce u zdravých imunokompetentních jedinců

E.coli,...

BSL2 práce s infekčními agens představující mírné nebezpečí pro osoby a prostředí (existuje očkování)

patogeny způsobující boreliózu, klíšťovou encefalitidu, hepatitidu, salmonelózu, příušnice, atd...

BSL3 práce s nebezpečnými infekčními agens, které mohou způsobit závažná až letální onemocnění inhalací infekčního aerosolu

patogeny způsobující mor, tuberkulózu, vzteklinu, žlutou horečku, atd...

BSL4 práce s velmi nebezpečnými infekčními agens způsobzující letální onemocnění po vdechnutí infekčního aerosolu (neexistuje očkováni !!!)

Hemorrhagické horečky (Ebola,..)

Před vstupem do BSL2Očkování proti TBEV povinně všichni !!!

vstup do BSL2 přes hygienickou smyčku:Plášť + kalhoty+přezůvkyV plášti a přezůvkách nechodíme nikdy mimo BSL2 prostor!!!!!!!Veškeré osobní věci necháváme v šatně zamčené ve skříňkách, s sebou pouze deníkDveře do smyčky jsou vždy zavřenéV šatnách jsou vždy zavřeny alespoň dvoje dveře!!!Cizí lidi bez přezůvek posíláme do šaten se přezout

vstup do infekční části BSL2:Mimo pracovní dobu (všední dny od 17:00 + víkendy) povinnost

zapisovat se do knížky před vstupem do BSL2� Studenti bak. stupně do laboratoří mimo pracovní dobu pouze v

nejnutnějších případech a vždy po souhlasu školitele, nikdy práce s ifcí

vstup do jednotlivých laboratoří:Drobné osobní věci (mobil, atd.) v kapse – nikdy nic osobního

nepokládáme na zem ani na pracovní stoly!!!!!Před zahájením jakékoliv práce si navlékneme rukavice Na NIC nesaháme

bez rukavic! (udržení sterility, ochrana zdraví)Výjimka – práce na PCPři pohybu v infekční laboratoři (02073) v době probíhajících pokusů s

infekcí používáme roušku, do laboratoře vždy chodíme v kalhotech a ponožkách

vstup do infekční části BSL2:

Nepouštíme nepovolané lidi, zvané návštěvy, řemeslníci atd. se do infekční části přezouvají ipřevlékají, při práci s virem ještě oblékáme plášť který je k dispozici u vstupu do infekční části

Obecné zásady práce v laboratoři

Popisování a uskladňování vzorků a chemikálií

Biologický a infekční materiál, vzorkyPopisovat! – co to je, jméno, datum vhodným způsobem uskladnitpoužívat skladovací krabičky ne stojánky!!!

Zásobní chemikálie, pufry a médiavhodné uskladnění a manipulace – čtěte instrukce na obale!RT / +4°C / -20°C / -80°CSe sterilními chemikáliemi a médii manipulujeme pouze v čistém boxu pro minimalizaci možnosti jejich kontaminace, před prací si potřebné množství média/chemikálie odlijeme do sterilní kádinky či zkumavky a zásobní lahev uklidíme. nesaháme do zásobních lahví špičkami

BSL2 kalendář a rezervace boxůGoogle účet pro BSL2účet: C.building.BSL2@gmail.comheslo: BSL2calendar

Rezervovat boxy i o víkendech a mimo pracovní dobu

Objednávky pro Evu Výletovou

Kalendář kde zodpovědná osoba

Bioanalyser PCR smyčka (02063), P. VěchtováBorrelia box infekční laboratoř (02073), J. PáleníkováBox zvěřinec zvěřinec (02066), E. VýletováClean box lab. tkáňových kultur (02074), E. VýletováClean box 2 lab. tkáňových kultur (02074)PCR box PCR smyčka (02061), P. VěchtováRotor Gene PCR smyčka (02063), P. VěchtováTBEV box infekční laboratoř (02073), M. Selinger

Průtokový cytometrPřesunut – nová budova PAU (tzv. zvěřinec) 1. patro, „erární“ čip pro přístup kpřístroji kancelář 039

Zapisování :google calendar (https://www.google.com/calendar).user name: pau.lc480password: lightcycler480

Vzít si sebou vše potřebné

Borrelia boxkultury borelií, infikované buňky

Box zvěřinecPitvy, přestýlání, manipulace s

myšmi

Clean boxPříprava ploten, médií,

manipulace s tkáňovýmikulturami, žádná infekce, pitvy, bakterie!

Clean box 2Příprava ploten, médií,

manipulace s tkáňovýmikulturami, žádná infekce, pitvy, bakterie!

Chceme-li celý box, rezervujemeoba clean boxy!

TBEV box manipulace s virem a virem

infikovanými buněčnýmikulturami

Práce v boxechPřed zahájením práce 20 min vysvítit UVdle uvážení (v čistém boxu není nutné), po práci vysvítit vždy!při práci v boxech použité špičky vždy házet do plastových nádobek naplněných 0,5 % persterilem, který je připraven v plastových kanystrechNepokládát nic na rošty po obvodu boxu – porušení laminárního proudění

Po ukončení práce v BSL2

po ukončení práce na přístrojích i boxech zkontrolovat zda jsou čistéa vypnout je (nejen boxy ale i centrifugy, vodní lázeň a mikroskopy)nepokládat vůbec nic do dřezů - rezavíOdpad s persterilem přecedíme přes síto do dřezu, špičky ze sítavyhazujem do košeNebezpečný odpad odnášíme do označených akvar na nebezpečný odpad v umývárně

vždy po sobě ukliďte, použité opláchnuté nádobí v lavoru odneste doumývárny - police špinavé nádobípracovní plochu v boxu otřít papírovým ubrouskem navlhčeným 4%persterilem (jen v infekční laboratoři) a ubrouskem se 70%etanolem, po práci vysvítit UVpokud potřebujete něco vyklávovat, dát to na umývárnu k malémuautoklávupokud potřebujete něco vyklávovat urgentně či potřebujetevyklávovat tekutiny (média, agary, pufry...), musíte informovat p.Výletovou nebo jinou oprávněnou osobupřed odchodem se ujistit že je uzavřen ventil přívodu plynu!

Kde co najítPersteril – zásobní roztok (36%)Pro obě katedry (KME/KMB) společnév biochemické, v TK a INF lab pod dřezemRoztok na odpad v kanystru- 25 ml/5 l vodyroztok na ošetření pracovních ploch ve střičce- 25 ml/1 l vody

Líh denaturovaný 100%Pro obě katedry (KME/KMB) společnév biochemické, v TK a INF lab pod dřezem70% roztok do střičky70ml EtOH/30ml dest H2O

zásobní plast (špičky, ependorfky,….) a sterilní tkáňové sklo ve skříníchna chodbách, jinak ve skříňkách v jednotlivých laboratořích (vždypopsáno)

sterilní PBS - skříňka tkáňová laboratoř, možno podepsat či odlít apodepsat

Protokoly k metodám kancelář 060 – prosklená skříňka

Režim laboratoře tkáňových kulturpouze pro práci s neinfekčním materiálem Po skončení práce špičky přecedit, promýt vodou a vyhodit do odpadkového koše, neinfekční nádobí omýt a umístit do špinavého nádobíneinfekční pitvací nástroje opláchnout pod vodou a umístit do nádoby s dezinfekcí (1,5 % Sekusept Plus), čisté zkumavky od nástrojů, které není třeba mýt, odložit do popsaného akváraDveře nechávat otevřené – klimatizace do chodbyV případě prostojů doplňovat špičky ke sterilizaci

Režim infekční laboratořeNově klimatizace- zavírat dveře pořádpro práci s TBEV, boreliemi, jinými bakteriemiUV v boxech se vypne samo po 20 min, netřeba čekatinfekční odpad se nechává v persterilu do druhého dne, postavit ho vedle dřezu, či do plastové nádoby umístěnéna dřezu. Druhý den se pak opláchne a hodí doinfekčního koše v laboratořiinfekční nástroje se očistí lihem a vloží do nádoby se sekuseptemčisté zkumavky od nástrojů, které není třeba mýt dát do popsaného akváraPřenosná UV lampa – možno zapnout během práce s infekcíStropní UV lampy-v provozu automaticky každý den od 2 do 3 h ráno,možnost zapnutí i mimo tento čas. Zákazvstupu do laboratoře při spuštěných stropních UV lampách!!!

Režim zvěřincevstup pouze se souhlasem zodpovědné osobymanipulace s myšmi se provádí vždy v boxu u zvěřincestudenti smí pracovat s myšmi pod dozorem (či s povolením)člověka k tomu oprávněnéhoPřenosná UV lampamrtvé myši se v papírovém ubrousku zabalí do sáčku a uloží do

lednice na chodbě do akvára s označením spalovnainfekční mrtvé myši se zabalí do papírového ubrousku

namočeného v 0,5 % Persterilu 36 a uloží do lednice na chodbě doakvára s označením infekce – autokláv

PřevlékáníVstupovat pouze v kompletním laboratorním oblečení-tričko, kalhoty,

ponožky�Před každým vstupem:�Obléct si overal, síťku na vlasy, galoše (ponožky!!)�Rouška volitelná (povinná při přestýlání či práci s infekcí)

Dark room, umývárna

Rotory od chlazených centrifug v chladové místnostiNainstalována klimatizace – zavírat dveře

Biochemická laboratořNainstalována klimatizace – zavírat dveřePromývačka ELISA – po skončení vždy promýt destilovanou vodou. Nenechávat PBS s TWEENEM – ucpe seNepoužívat sterilní PBS z TK laboratoře - k dispozici je navážka na 2 litry PBS (rozpustí se v dest H2O)Doplňovat špičky

Nakládání s vysoce toxickými a nebezpečnými látkami

Nejčastěji používané toxické a nebezpečné látky

-zdraví škodlivé - ethidium bromid, toluen, ethylenglykol, chlorofom, isoamylalkohol, ethyl methansulfonát, glutaraldehyd-dráždivé - ethidium bromid, chlorid vápenatý, uhličitany alkalických kovů, 4‘,6-diamidino-2-fenylindol a další cytogenetická barviva-vysoce hořlavé - aceton, ethanol, ethylacetát, methanol, propanol, isopropanol, toluen-extrémně hořlavé - diethylether-toxické - fenol, formamid, formaldehyd, kys. pikrová, methanol, kolcemid-vysoce toxické - oxid osmičelý, kolchicin, dichroman draselný, ethidiumbromid-žíravé - hydroxid sodný a sodný, kyselina chlorovodíková, fosforečná, chloristá, sírová, octová, oxid fosforečný, peroxid vodíku, glutaraldehyd-oxidující - kyselina chloristá, peroxid vodíku-výbušné - kys. pikrová-nebezpečné pro životní prostředí - dichroman draselný, glutaraldehyd -karcinogenní - formaldehyd, dichroman draselný -mutagenní - ethyl methansulfonát, kolchicin, dichroman draselný, ethidiumbromid -teratogenní – formamid

� Výstražné symboly a písmenná označení nebezpečných vlastností – platné do 1.6.2015

Výstražné symboly

� Výstražné symboly a písmenná označení nebezpečných vlastností – platné od 1.6.2015

Globálně harmonizovaný systém klasifikace - GHS

� celosvětový systém označování chemických látek � Aktuálně v EU místo R a S vět :„H věty“(od slova „Hazard“). Tyto věty součástí systému GHS.„EUH věty“ („European Union Specific Hazard Statements“).pro zacházení s látkou jsou zavedeny „P věty“ (od slova

„Precaution“).

H věty (nové) x R a S věty (staré)

� Na rozdíl od R vět jsou H věty a EUH věty strukturovány podle typu rizika spojeného s danou látkou.

� Každá věta je značena písmeny (H nebo EUH) a třemi čísly, v nichž první označuje typ rizikaa další dvě specifikaci věty pro tento typ rizika.

� Číslování netvoří spojité řady. Např. H200 – H260� Mění se i symboly nebezpečnosti (viz. Slide 22)

Bezpečnostní listy

� V biochemické, Tk, infekční laboratoři v šuplících u dřezu označených Bezpečnostní listy, v chladovce

� Tento dokument je souhrnem identifikačních údajů o výrobci nebo dovozci.

� jméno, příjmení, obchodní firma a místo podnikání, jde-li o fyzickou osobu oprávněnou k podnikání, nebo název nebo obchodní firma, právní forma a sídlo, jde-li o osobu právnickou, údajů o nebezpečné látce nebo přípravku a údajů potřebných pro ochranu zdraví a životního prostředí.

Bezpečnostní list umožní osobám, které zacházejí s těmito látkami nebo přípravky, přijímat cílená opatření týkající se ochrany zdraví a životního prostředí. V neposlední řadě jsou údaje z bezpečnostního listu základním zdrojem informací pro oblast bezpečnosti a ochrany zdraví při práci.

Bezpečnostní listy

Bezpečnostní listy

Název : Ethidium bromid3,8-diamino-5-ethyl-6-phenylphenantridium bromid

Číslo CAS : 1239-45-8Číslo ES : Indexové číslo : Klasifikace R věty : R 22; T+; R 26 T; R 36/37/38; R 40Symbol : T+

R věty : R 22-26-36/37/38-68R 22 Zdraví škodlivý při požitíR 26 Vysoce toxický při vdechováníR 36/37/38 Dráždí dýchací orgány a kůžiR 40 Možné nebezpečí nevratných účinků

S věty : S 26-28-36/37-45S 26 Při zasažení očí okamžitě důkladně vypláchněte vodou

a vyhledejte lékařskou pomocS 28 Při styku s kůží okamžitě umyjte velkým množstvím S 36/37 Používejte vhodný ochranný oděv a ochranné rukavice S 45 V případě nehody, nebo necítíte-li se dobře, okamžitě vyhledejte

lékařskou pomoc

Na obalu nebezpečné látky musí být jasně, čitelně a nesmazatelně uvedeny následující údaje:

a)obchodní název látky nebo směsi,b)obchodní firma nebo název, sídlo a telefonní číslo, je-li

dodavatelem právnická osoba, nebo jméno, popřípadě jména, příjmení, bydliště, popřípadě místo podnikání, je-li odlišné od bydliště a telefonní číslo dodavatele, je-li dodavatelem podnikající fyzická osoba,

c) chemický název látky nebo látek v souladu s mezinárodně uznávaným názvoslovím,

d)výstražné symboly a písmenné označení nebezpečných vlastností fyzikálně-chemických a vlastností nebezpečných pro zdraví nebo životní prostředí stanovené prováděcím předpisem,

e)standardní věty označující specifickou rizikovost (H-věty) stanovené prováděcím předpisem,

f) standardní pokyny pro bezpečné zacházení (P-věty) stanovené prováděcím předpisem