DETERMINACIÓN DE LINEZOLID POR CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC)

EN DISTINTAS MUESTRAS BIOLÓGICASGuerrero L1, Sarasa M2, López Y3, Soy D1

1Servicio de Farmacia.2Departament de Investigación Clínica. Palau Pharma (Grupo Uriach)3Servicio de Farmacología Clínica. Hospital Clínic de Barcelona

INTRODUCCIÓNLinezolid es un agente antibacteriano del grupo de las oxazolidinonas que actúa inhibiendo la síntesis de proteínas

bacterianas. Tiene un amplio espectro de actividad frente a microorganismos Gram positivos, tales como estafilococos resistentes a meticilina, neumococos resistentes a penicilina y Enterococcus faecalis y E.Faecium resistentes a vancomicina.

MATERIAL Y MÉTODOS

Se dispone de muestras de plasma, líquido cefalorraquídeo (LCR) y humor vítreo (HV) de varios pacientes. El fármaco se extrae de la matriz biológica mediante una precipitación proteica con ácido perclórico al 3% (1:1 v/v) a partir de 200 mcL de plasma. Posteriormente se centrifuga y se inyectan 100 mcL del sobrenadante obtenido. Las muestras de LCR y HV no requieren de dicho proceso, por lo que se inyecta muestra directa: 100 mcL en el caso de LCR y 50 mcL de HV.

La separación cromatográfica se realiza mediante la elución con una fase móvil compuesta de 80% tampón K2HPO4(15mM; pH = 5) y 20 % acetonitrilo (ACN). El flujo de trabajo es de 1 mL/min y la longitud de la columna cromatográfica utilizada es la NOVAPAK C18 150 * 3.9 mm, con precolumna.

RESULTADOS

Plasma L. Cefalorraquídeo Humor vítreo

Linealidad 0.5 – 100 mcg/mL 0.1 – 10 mcg/mL 0.1 – 10 mcg/mL

t retención 4.44 min 4.64 min 3.99 min

Límite de Cuantificación 0.5 mcg/mL 0.1 mcg/mL 0.1 mcg/mL

Exactitud 94.4 – 106.1% - -

CV intra / CV inter 3.44% / 4.65% - -

CONCLUSIONES

El método se comporta de forma lineal, precisa y exacta. Además es rápido, sensible y de bajo coste económico. La metodología descrita permite determinar las concentraciones de linezolid en distintas matrices biológicas: plasma, LCR y HV, pudiendo ser utilizada como base para estudios de farmacocinética clínica.

Recta de calibración linezolid

0 25 50 75 100 1250

2500

5000

7500

10000

12500

Y = 105.31X - 100.49R2 = 0.9997

[Linezolid; mcg/mL]

Áre

a ba

jo c

urva

m0 1 2 3 4 5 6 7

mAU

0

200

400

600

800

1000

VWD1 A, Wavelength=254 nm (C:\HPCHEM\1\DATA\L-200704\P5-9.D)

1.1

03 1

.173

1.3

26 1

.460

1.6

23 1

.738

1.9

85 2

.209

2.4

40 2

.656

2.8

72

3.3

39 3

.563

4.4

44

Cromatograma muestra plasma

m0 1 2 3 4 5 6

mAU

0

50

100

150

200

250

VWD1 A, Wavelength=254 nm (C:\HPCHEM\1\DATA\L-210605\LCR1-20.D)

1.0

97 1

.232

1.5

59

1.9

80

2.5

61

4.6

42

Cromatograma muestra LCR

m0 1 2 3 4 5 6 7

mAU

0

200

400

600

800

1000

VWD1 A, Wavelength=254 nm (C:\HPCHEM\1\DATA\L-211004\ATO-HV.D)

1.0

03 1

.111

1.3

42 1

.413

1.5

50 1

.683

2.1

36

3.9

92

Cromatograma muestra HV

Conflictos de interesesFinanciado por el CIBER de Enfermedades Respiratorias 06/06/0028 y el fondo de Investigaciones sanitarias (FIS) beca FIS PI070419.

OBJETIVOS

Determinación de concentraciones de linezolid en diferentes muestras biológicas, mediante cromatografía líquida de alta eficacia de fase reversa con posterior detección ultravioleta (HPLC-UV), para su implementación en posterior estudios de farmacocinética clínica.

NO

F

N O

O

HNC

CH3

O

Estructura química del LINEZOLID

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