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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus1Sempre, el pacient primer
Dra. Nieves [email protected]
S. de MicrobiologíaH. Universitario Vall d’Hebron
Barcelona
Eficacia en el manejo de la sepsis: Tècniques ràpides pel
diagnòstic de la sepsis
Girona, 20 de octubre de 2018
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Impacto de la sepsis
A nivel mundial30 000 000 casos de sepsis / año
6 000 000 muertes / año
En España50.000 casos de sepsis / año
(104-148 casos cada 100.000 hab.)17.000 muertes / año
Secuelas de por vida en los supervivientes
4º edición "Surviving Sepsis Campaign: International Guidelinesfor Management of Severe Sepsis
and Septic Shock: 2016”
26 de mayo de 2017, la Asamblea Mundial de la Salud y la WHO
convierten la sepsis en una prioridad de salud mundial
http://www.actionforbetterhealthcare.com/world-sepsis-day-stop-sepsis-save-lives/://www.world-sepsis-day.org/wsd2017/; SOCMIC Sepsis Working Group, et al. Annals of Intensive Care 2017; Bouza C, et al. BMC Infect Dis. 2014; Reinhart K, et al. N Engl J Med. 2017. http://www.semicyuc.org/
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus3Sempre, el pacient primer
Importancia del diagnóstico rápido de la sepsis
Delano MJ, Ward PA. Immunol Rev 2016;274:332
SEPSISConcepto clinico-microbiológico
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus4Sempre, el pacient primer
Necesidad de actuación
adecuada y rápida
No retraso del tratamiento
Necesidad de identificar y
resolver el foco
Sintomatologíainespecífica
¿Causa infecciosa?
Importancia del diagnóstico rápido de la sepsis
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus5Sempre, el pacient primer
Implementación de pruebas de diagnóstico rápido
Messacar K, et al. Journal of Clinical Microbiology. 2017 Mar;55(3):715–23.c
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Idealmente: Point of Care Testing (POC)
Barnes L, et al, Smartphone-based pathogen diagnosis in urinary sepsispatients, EBioMedicine (2018)
1h
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Técnicas convencionales: Hemocultivo
Fácil obtención
Cepa viable AST
20-60 % positivos
> 90% result.
positivos en 24 h
Gold standard
Técnicas fenotípicasconvencionales
Espectometría de masas
Técnicas genéticas
15 min
30 min-3h
1-6h
Hemo positivo
ID + R específica
https://seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimc-procedimientomicrobiologia62.pdf
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30min -2 h
Resultado pos.
10-20 h
36-48 h
28-38 h
22-34 h
Posibilidades diagnósticas:
Oportunidad para el diagnóstico
rápido
Técnología ID Resist. AST Tiempo*
Aglut. part. látex (ImmuLex) Sí No No 10 seg
Inmunocromat. (BinaxNOW) Sí No No 15 min
Test colorim. (β LACTA test) No SÍ No 3.5 h
MALDI-TOF(Bruker / bioMèrieux)
Sí No No 1-18 h
Nefelometría (ALFRED AST) No Sí Sí 3 h
Hibridación (AccuProbe; PNA-FISH)
Sí No No 30 min-2 h
FISH + Análisis celularmorfocinético (ACCELERATE Pheno)
Sí Sí Sí 1.5 h ID<7h AST
Hibridación + Microarray(Verigene)
Sí Si No 2.5 h
PCR simple (GenomEra) Sí No No 1-3 h
PCR múltiplex(GeneXpert; BD MAX)
Sí Sí No 1-6 h
LAMP (Eazyplex) No Sí No 30 min
PCR+Microarray(FilmArray, Unyvero, Sepsis Flow chip, ePlex®)
Sí Sí No 1.5-5 h
ID: Identificación; Resist.: marcador de resistencia: AST: antibiograma; *:tiempo desde la positivización del hemocultivo.
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MALDI-TOF MS (matrix-assisted laser desorption ionizationtime-of-flight mass spectrometry)
Patel R. CID 2013; Hoyos-Mallecot Y. EIMC 2013; Ruiz-Aragón J. EIMC 2018
Esquema general a partir de colonia
Esquema general a partir de hemocultivo
Bruker
VITEK-MS
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus11Sempre, el pacient primer
11
FilmArray™Multiplex PCR System
Escaso volumen 100 μl
Mínima manipulación
3 min
Primer sistema de RT-PCR mutiplex
de 4ª generación
Extracción, amplificación y
detección integrados en una
tira de plástico
Interpretación automática1 h
Donner LM, et al. J Clin Microbiol. 2017 May;55(5):1496-1507.
S: 88-100% E: >90%
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus12Sempre, el pacient primer
30min -2 h
Resultado pos.
10-20 h
36-48 h
28-38 h
Oportunidad de que el diagnóstico sea
realmente rápido
Técnología Tecnología Diana R Tiempo
Light Cycler Septifast Test MGRADE (Roche)
Multiplex Real-time PCR
19 esp. bat., 5 levas y A. fumigatus
mecA 3.5-6 h
MagicPlex Sepsis (Seegene) Multiplex Real-time PCR 85 esp. bat., 5 levas y A. fumigatus
mecAvanA y vanB
6 h
Sepsitest(Molzym)
Broad-range PCR(16S o 18S rRNA)
345 agentes(bacterias y hongos)
No 4-8 h
VYOO (Analytik Jena)
Multiplex Real-time PCR+ Microarray
34 especies bacterianasy 7 fúngicas
mecAvanA, vanBblaSHV, blaCTX-M
7h
T2MR(Byosistems)
T2 Magnetic Resonance 6 esp. bact., 5 levas No 3-5 h
iDTECT Dx Blood * (PathoQuest)
Next-generationsequencing
800 esp bact. y 400 virus
Si 2-3 d
LiDia BSI test* (DNAe) Capt DNA bolasinmunomag.+ Seq chip (ISFETs )
Mayoría interés Si < 5 h
U-dHRM* (machine learning) dPCR + Hign-resolutionmelt analysis on a microfluidic chip
37 agentes bacterianos No < 4 h
Posibilidades diagnósticas a partir de sangre directa:
*Todavía no comercializados.
Marco F. EIMC. 2017; Sinha M, et al. Clinical Microbiology Reviews. 2018
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T2MRMínima manipulación
(<1 min)
Real-time PCR+RM
Test completo en un solo cartucho
Interpretación automática
No amplifica DNA libre
Caro3-5 h
T2MR Candida ufc/ml
C. albicans 2
C. tropicalis 1
C. parapsilosis 3
C. krusei 1
C. glabtata 2
T2MR Bacteria ufc/ml
E.coli 11
K.pneumoniae 2
P. aeruginosa 5
A.baumannii 3
S. aureus 2
E.faecium 5
Arvanitis M CMR 2014; Mylonakis CID 2015; Clancy CJ JAC2018 Angelys JD. JAC 2018
S: 100% E: 98%Sbact: 83% E: 97%
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus14Sempre, el pacient primer
Técnicas genéticas en el diagnóstico de la sepsis
Contras Pros
Huttunen R, et al. IJID. 2013 Opota O, et al.CMI. 2015
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Antibiograma “rápido” directo de hemocultivo:
Recomendaciones para elaboración
antibiograma rápido desde
hemocultivo (RAST)
Basado en estudio de 40 labs.
(6 países)
Diferentes distribuidores
(hemocultivos, discos y MH)
Puntos de corte específicos
para incubación cortas (4h, 6h
y 8h)
ESCMID e-library: EUCAST rapid AST by disc-diffusion directly from blood culture bottles. G. Kahlmeter
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<3-5 h
Sistema abierto(Elección por el usuario de los antibióticos)
Antibiograma cualitativo
Nefelometría
ALFRED 60AST ACCELERATE Pheno System
90 min-7 h
Mínima manipulación
Antibiograma cuantitativo
Electrofiltraciónen gel +
Hibridación in situ + Fluorescencia
ID Especies
Grampos.
S.aureus, EPCN(epid, lugd,
cap/haemol/homi/warn), E.faecalis,
E.faecium, Streptococcus
(pneu/agal/gallol/ mitis/oralis)
Gramneg.
E.coli, Klebsiella (pnue/oxyt), Enterobacter
(cloa/aero), Proteus (mira/vulg),
Citrobacter (freu/ kos),
S. marcescens, P. aeruginosa, A.
baumannii
Levas C.albicans, C. glabrata
AST Antibióticos
Grampos.
MRSA, MLSb, Ampi, Vanco
Ceftarol, Eritro, Dapto, Line
Gramneg.
A+S, PTZ, AZT, Ceftaz, Ceftriax,
Cefep, Erta, Mero,Gen, Tobr, Amik,
Cipro
Antibiograma “rápido” directo de hemocultivo
Sofjan AK, et al. Annals of Pharmacotherapy 2018; Pantel A, JAC 2018; Pancholi P JCM 2018
Giordano C. BioMed Research International. 2018
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus17Sempre, el pacient primer
Posibilidad real: Optimización de procesos
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus18Sempre, el pacient primer
Posibilidad real: Optimización de procesos
F. Preanalítica
• Antisepsia de la piel• Volumen de sangre
extraída• Tiempo desde la extracción
hasta la incubación• Identificación de los
pacientes
F. Analítica
• Tiempo desde la positividad hasta informe Gram
• Tiempo hasta obterner ID• Tiempo hasta AST
F. Postanalítica
• Equipo multidisciplinarconsolidado
• Rápida comunicación de resultados
Peker N et al. CMI (2018) modificada; Cantón R, Gómez G. de la Pedrosa E. EIMC 2017.
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Timbrook TT, et al. Clinical Infectious Diseases. 2017; Donner LM, et al. J Clin Microbiol. 2017
Test de dx molecular disminuyen la mortalidad sólo en presencia de una adecuada optimización del tratamiento
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus20Sempre, el pacient primer
Puntos clave en el diagnóstico microbiológico de la sepsis
Necesidad de equipos transversales que compartan información “en tiempo real”
Adecuación técnica a la disponibilidad y horario del laboratorio. Implicación del equipo
Alertas automatizadas. Optimización de procesos en todas muestras del pac. grave
Verificación del impacto de medidas adoptadas
Búsqueda permanente de mejora y de disminución del tiempo de emisión de resultados
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus21Sempre, el pacient primer
¡Gracias!