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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus1Sempre, el pacient primer
Dra. Nieves [email protected]
S. de MicrobiologíaH. Universitario Vall d’Hebron
Barcelona
Eficacia en el manejo de la sepsis: Tècniques ràpides pel
diagnòstic de la sepsis
Girona, 20 de octubre de 2018
Impacto de la sepsis
A nivel mundial30 000 000 casos de sepsis / año
6 000 000 muertes / año
En España50.000 casos de sepsis / año
(104-148 casos cada 100.000 hab.)17.000 muertes / año
Secuelas de por vida en los supervivientes
4º edición "Surviving Sepsis Campaign: International Guidelinesfor Management of Severe Sepsis
and Septic Shock: 2016”
26 de mayo de 2017, la Asamblea Mundial de la Salud y la WHO
convierten la sepsis en una prioridad de salud mundial
http://www.actionforbetterhealthcare.com/world-sepsis-day-stop-sepsis-save-lives/://www.world-sepsis-day.org/wsd2017/; SOCMIC Sepsis Working Group, et al. Annals of Intensive Care 2017; Bouza C, et al. BMC Infect Dis. 2014; Reinhart K, et al. N Engl J Med. 2017. http://www.semicyuc.org/
Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus3Sempre, el pacient primer
Importancia del diagnóstico rápido de la sepsis
Delano MJ, Ward PA. Immunol Rev 2016;274:332
SEPSISConcepto clinico-microbiológico
Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus4Sempre, el pacient primer
Necesidad de actuación
adecuada y rápida
No retraso del tratamiento
Necesidad de identificar y
resolver el foco
Sintomatologíainespecífica
¿Causa infecciosa?
Importancia del diagnóstico rápido de la sepsis
Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus5Sempre, el pacient primer
Implementación de pruebas de diagnóstico rápido
Messacar K, et al. Journal of Clinical Microbiology. 2017 Mar;55(3):715–23.c
Idealmente: Point of Care Testing (POC)
Barnes L, et al, Smartphone-based pathogen diagnosis in urinary sepsispatients, EBioMedicine (2018)
1h
Técnicas convencionales: Hemocultivo
Fácil obtención
Cepa viable AST
20-60 % positivos
> 90% result.
positivos en 24 h
Gold standard
Técnicas fenotípicasconvencionales
Espectometría de masas
Técnicas genéticas
15 min
30 min-3h
1-6h
Hemo positivo
ID + R específica
https://seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimc-procedimientomicrobiologia62.pdf
30min -2 h
Resultado pos.
10-20 h
36-48 h
28-38 h
22-34 h
Posibilidades diagnósticas:
Oportunidad para el diagnóstico
rápido
Técnología ID Resist. AST Tiempo*
Aglut. part. látex (ImmuLex) Sí No No 10 seg
Inmunocromat. (BinaxNOW) Sí No No 15 min
Test colorim. (β LACTA test) No SÍ No 3.5 h
MALDI-TOF(Bruker / bioMèrieux)
Sí No No 1-18 h
Nefelometría (ALFRED AST) No Sí Sí 3 h
Hibridación (AccuProbe; PNA-FISH)
Sí No No 30 min-2 h
FISH + Análisis celularmorfocinético (ACCELERATE Pheno)
Sí Sí Sí 1.5 h ID<7h AST
Hibridación + Microarray(Verigene)
Sí Si No 2.5 h
PCR simple (GenomEra) Sí No No 1-3 h
PCR múltiplex(GeneXpert; BD MAX)
Sí Sí No 1-6 h
LAMP (Eazyplex) No Sí No 30 min
PCR+Microarray(FilmArray, Unyvero, Sepsis Flow chip, ePlex®)
Sí Sí No 1.5-5 h
ID: Identificación; Resist.: marcador de resistencia: AST: antibiograma; *:tiempo desde la positivización del hemocultivo.
MALDI-TOF MS (matrix-assisted laser desorption ionizationtime-of-flight mass spectrometry)
Patel R. CID 2013; Hoyos-Mallecot Y. EIMC 2013; Ruiz-Aragón J. EIMC 2018
Esquema general a partir de colonia
Esquema general a partir de hemocultivo
Bruker
VITEK-MS
Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus11Sempre, el pacient primer
11
FilmArray™Multiplex PCR System
Escaso volumen 100 μl
Mínima manipulación
3 min
Primer sistema de RT-PCR mutiplex
de 4ª generación
Extracción, amplificación y
detección integrados en una
tira de plástico
Interpretación automática1 h
Donner LM, et al. J Clin Microbiol. 2017 May;55(5):1496-1507.
S: 88-100% E: >90%
Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus12Sempre, el pacient primer
30min -2 h
Resultado pos.
10-20 h
36-48 h
28-38 h
Oportunidad de que el diagnóstico sea
realmente rápido
Técnología Tecnología Diana R Tiempo
Light Cycler Septifast Test MGRADE (Roche)
Multiplex Real-time PCR
19 esp. bat., 5 levas y A. fumigatus
mecA 3.5-6 h
MagicPlex Sepsis (Seegene) Multiplex Real-time PCR 85 esp. bat., 5 levas y A. fumigatus
mecAvanA y vanB
6 h
Sepsitest(Molzym)
Broad-range PCR(16S o 18S rRNA)
345 agentes(bacterias y hongos)
No 4-8 h
VYOO (Analytik Jena)
Multiplex Real-time PCR+ Microarray
34 especies bacterianasy 7 fúngicas
mecAvanA, vanBblaSHV, blaCTX-M
7h
T2MR(Byosistems)
T2 Magnetic Resonance 6 esp. bact., 5 levas No 3-5 h
iDTECT Dx Blood * (PathoQuest)
Next-generationsequencing
800 esp bact. y 400 virus
Si 2-3 d
LiDia BSI test* (DNAe) Capt DNA bolasinmunomag.+ Seq chip (ISFETs )
Mayoría interés Si < 5 h
U-dHRM* (machine learning) dPCR + Hign-resolutionmelt analysis on a microfluidic chip
37 agentes bacterianos No < 4 h
Posibilidades diagnósticas a partir de sangre directa:
*Todavía no comercializados.
Marco F. EIMC. 2017; Sinha M, et al. Clinical Microbiology Reviews. 2018
T2MRMínima manipulación
(<1 min)
Real-time PCR+RM
Test completo en un solo cartucho
Interpretación automática
No amplifica DNA libre
Caro3-5 h
T2MR Candida ufc/ml
C. albicans 2
C. tropicalis 1
C. parapsilosis 3
C. krusei 1
C. glabtata 2
T2MR Bacteria ufc/ml
E.coli 11
K.pneumoniae 2
P. aeruginosa 5
A.baumannii 3
S. aureus 2
E.faecium 5
Arvanitis M CMR 2014; Mylonakis CID 2015; Clancy CJ JAC2018 Angelys JD. JAC 2018
S: 100% E: 98%Sbact: 83% E: 97%
Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus14Sempre, el pacient primer
Técnicas genéticas en el diagnóstico de la sepsis
Contras Pros
Huttunen R, et al. IJID. 2013 Opota O, et al.CMI. 2015
Antibiograma “rápido” directo de hemocultivo:
Recomendaciones para elaboración
antibiograma rápido desde
hemocultivo (RAST)
Basado en estudio de 40 labs.
(6 países)
Diferentes distribuidores
(hemocultivos, discos y MH)
Puntos de corte específicos
para incubación cortas (4h, 6h
y 8h)
ESCMID e-library: EUCAST rapid AST by disc-diffusion directly from blood culture bottles. G. Kahlmeter
<3-5 h
Sistema abierto(Elección por el usuario de los antibióticos)
Antibiograma cualitativo
Nefelometría
ALFRED 60AST ACCELERATE Pheno System
90 min-7 h
Mínima manipulación
Antibiograma cuantitativo
Electrofiltraciónen gel +
Hibridación in situ + Fluorescencia
ID Especies
Grampos.
S.aureus, EPCN(epid, lugd,
cap/haemol/homi/warn), E.faecalis,
E.faecium, Streptococcus
(pneu/agal/gallol/ mitis/oralis)
Gramneg.
E.coli, Klebsiella (pnue/oxyt), Enterobacter
(cloa/aero), Proteus (mira/vulg),
Citrobacter (freu/ kos),
S. marcescens, P. aeruginosa, A.
baumannii
Levas C.albicans, C. glabrata
AST Antibióticos
Grampos.
MRSA, MLSb, Ampi, Vanco
Ceftarol, Eritro, Dapto, Line
Gramneg.
A+S, PTZ, AZT, Ceftaz, Ceftriax,
Cefep, Erta, Mero,Gen, Tobr, Amik,
Cipro
Antibiograma “rápido” directo de hemocultivo
Sofjan AK, et al. Annals of Pharmacotherapy 2018; Pantel A, JAC 2018; Pancholi P JCM 2018
Giordano C. BioMed Research International. 2018
Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus17Sempre, el pacient primer
Posibilidad real: Optimización de procesos
Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus18Sempre, el pacient primer
Posibilidad real: Optimización de procesos
F. Preanalítica
• Antisepsia de la piel• Volumen de sangre
extraída• Tiempo desde la extracción
hasta la incubación• Identificación de los
pacientes
F. Analítica
• Tiempo desde la positividad hasta informe Gram
• Tiempo hasta obterner ID• Tiempo hasta AST
F. Postanalítica
• Equipo multidisciplinarconsolidado
• Rápida comunicación de resultados
Peker N et al. CMI (2018) modificada; Cantón R, Gómez G. de la Pedrosa E. EIMC 2017.
Timbrook TT, et al. Clinical Infectious Diseases. 2017; Donner LM, et al. J Clin Microbiol. 2017
Test de dx molecular disminuyen la mortalidad sólo en presencia de una adecuada optimización del tratamiento
Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus20Sempre, el pacient primer
Puntos clave en el diagnóstico microbiológico de la sepsis
Necesidad de equipos transversales que compartan información “en tiempo real”
Adecuación técnica a la disponibilidad y horario del laboratorio. Implicación del equipo
Alertas automatizadas. Optimización de procesos en todas muestras del pac. grave
Verificación del impacto de medidas adoptadas
Búsqueda permanente de mejora y de disminución del tiempo de emisión de resultados
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Vall d'Hebron Barcelona Hospital Campus21Sempre, el pacient primer
¡Gracias!