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UNIVERSIDAD PRIVADA
ANTONIO GUILLERMO URRELO
Determinación de la actividad antifúngica in vitro del
aceite de Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a
Sporothrix schenckii.
TESIS:
ASESORES:
Mg. Q.F. Jéssica Nathalie Bardales Valdivia.
Q.F. Jaime Alexander Quijada Acuña.
INVESTIGADORAS:
Bach. Cinthya L. Sánchez Soto.
Bach. Rosa D. Bustamante Bautista.
INTRODUCCIÓN:
ESPOROTRICOSIS
Infección micótica de evolución subaguda
o crónica, adquirida por inoculación
traumática o por inhalación de conidios
de Sporothrix schenckii.Se localiza principalmente en cara y en
extremidades torácicas y pélvicas.
INTRODUCCIÓN:
OMS
Más del 80 % de la población mundial
usa la medicina tradicional para cubrir sus
necesidades en la atención primaria,
En nuestro país existe alrededor de 80 mil
especies vegetales de las cuales solamente
2000 se vienen empleando con fines curativos.
Siendo necesario evaluar las propiedades
medicinales de estas plantas.
INTRODUCCIÓN:
POR TALES MOTIVOS
Se decidió determinar el efecto antifúngico
del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a
Sporothrix schenckii para contribuir con una
fuente de información acerca de su actividad
y a la disminución de la incidencia de este
problema que afecta a un alto
porcentaje de la población.
OBJETIVOS:
GENERAL:
Determinar la actividad antifúngica in vitro del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena“Pachachamcua” frente a Sporothrix schenckii.
ESPECÍFICOS:
Extraer el aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua”.
Comparar los resultados obtenidos de la actividad antifúngica in vitro de las diferentes
concentraciones del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua” apoyados
con una prueba estadística.
Comparar los resultados obtenidos de la actividad antifúngica in vitro de las diferentes
concentraciones del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a
los grupos controles apoyados con una prueba estadística.
Determinar la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de las hojas de Saturejanubigena “Pachachamcua” frente a Sporothrix schenckii.
MARCO TEÓRICO:
ESPOROTRICOSIS
EPIDEMIOLOGÍA
Esta micosis se conoce como cosmopolita
debido a su amplia distribución.
Brasil, México, Colombia, Perú, Uruguay,
Venezuela, Costa Rica, Guatemala y los Estados
Unidos de Norteamérica.
Países endémicos de América:
MARCO TEÓRICO:
ESPOROTRICOSIS
ETIOLOGÍA
El agente causal es Sporothrix schenckii, hongo dimórfico que vive como saprófito del
suelo, materia orgánica, vegetales y otros
sustratos.
Se adquiere principalmente por
inoculación traumática de conidios y
rara vez penetra por inhalación.
MARCO TEÓRICO:
ESPOROTRICOSIS
ETIOLOGÍA
Sporothrix schenckii.
Clasificación taxonómica:
Reino: FUNGI.
Phylum: ASCOMYCOTA.
Clase: EUASCOMYCETES.Orden: OPHIOSTOMATALES.
Familia: OPHIOSTOMATACEAE.
Género: Sporothrix.
Especie: S. schenckii.
MARCO TEÓRICO:
ESPOROTRICOSIS
ETIOLOGÍA
Sporothrix schenckii.
Fase filamentosa:
Crece a temperaturas inferiores a 37ºC.
Presenta colonias de crecimiento lento (3-5 días).
Inicialmente claras y húmedas, que
posteriormente se convierten en colonias
duras y arrugadas de color marrón o negro en
su totalidad o por zonas.
MARCO TEÓRICO:
ESPOROTRICOSIS
ETIOLOGÍA
Sporothrix schenckii.
Fase levaduriforme:
Crece a 37ºC en medios enriquecidos y en los
tejidos parasitados.
La colonia tiene aspecto cremoso y brillante
que se torna de color gris o crema.
MARCO TEÓRICO:
ESPOROTRICOSIS
CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS
Puede causar múltiples síndromes, el más
frecuente es la forma cutánea, que se
caracteriza por la aparición de nódulos
ulcerativos o verrucosos que afectan a piel,
tejido subcutáneo y sistema linfático
adyacente.
MARCO TEÓRICO:
Satureja nubigena “Pachachamcua”
CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA:
Reino: PLANTAE.
Filo: ANGIOSPERMAE.
Clase: MAGNOLIOPSIDA.
Orden: LAMIALES.
Familia: LAMIACEAE.
Género: Satureja.Especie: S. nubigena.Autor: (Kunth) Briq.
Altitud: 3000 y 4000 msnm.
Región: Sierra.
MARCO TEÓRICO:Satureja nubigena “Pachachamcua”
CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS:
Planta herbácea, postrada, pequeña, de 10 – 25 cm
de largo y aromática, presenta tallos delgados y
radicantes, flores blancas y hojas pequeñas.
ORIGEN Y DISTRIBUCIÓN:
Originaria del Perú; se encuentra en la parte
alta de los andes, entre los 3000 y 4000 msnm;
crece entre pajonales, en espacios abiertos y
caminos abandonados.
UTILIDAD MÉDICA:
Usado contra el soroche o mal de atura y
para contrarrestar el frio y no es toxica.
MÉTODO DE INVESTIGACIÓN.
DEFINICIÓN DE LA MUESTRA:
Se trabajó con 15 kg de la especie la cual fue
obtenida del distrito José Sabogal, provincia de
San Marcos, departamento de Cajamarca.
Satureja nubigena “Pachachamcua”
Sporothrix schenckii
Se trabajó con cepas aisladas en el Laboratorio
de Referencia de Salud Pública de la DIRESA –
Cajamarca, de pacientes contaminados con el
hongo.
MÉTODO DE INVESTIGACIÓN.
EXTRACCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL:
La extracción del aceite esencial e las hojas se
realizo apoyadas con el equipo llamado alambique
destilador.
Transcurrido el tiempo de la
extracción, agregamos sulfato de
sodio para atrapar los restos de
agua. Posteriormente se midió y se
recogió el aceite esencial en un
frasco de color ámbar con tapa,
almacenándolo en refrigeración
hasta su utilización para evitar
reacciones oxidativas que pudieran
alterar su composición.
DILUCIÓN EN AGAR:
Esta prueba se basa en la inhibición del crecimiento fúngico, mediante la dilución de
la sustancias activas (aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena“pachachamcua”) en el agar, y posteriormente se evidencia por la ausencia de
crecimiento en las placas.
MÉTODO DE INVESTIGACIÓN:
LUEGO SE PROCEDIÓ A SEMBRAR E INCUBAR:
ELABORACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
DILUCIÓN EN AGAR:
CRECIMIENTO LEVADURIFORME
A 25ºC por 15 días.
CRECIMIENTO FILAMENTOSO
A 37ºC por 48 horas.
Aceite esencial de las hojas de “Pachachamcua”/Agar Sabouraud
RESULTADOS
FASE LEVADURIFORME (RESULTADOS OBTENIDOS A LAS 48 H)
Leyenda: (-) No crecimiento. (+) Crecimiento.
Gráfico Nº 01: Resultados obtenidos de todos los grupos de la forma de
crecimiento levaduriforme.
RESULTADOS
FASE FILAMENTOSA (RESULTADOS OBTENIDOS A LOS 15 DÍAS)
Leyenda: (-) No crecimiento. (+) Crecimiento.
Gráfico Nº 02: Resultados obtenidos de todos los grupos de la forma de
crecimiento filamentosa.
RESULTADOS
PRUEBA ESTADISTICA DE MANN - WHITNEY
FASES:
LEVADURIFORME Y FILAMENTOSA
GRUPO PROBLEMA (1-5) VS GRUPO PROBLEMA (1-5) P = 1,000
GRUPO CONTROL VS GRUPO PROBLEMA (1-5) P = 0,025
EVALUACIÓN DE MUESTRAS INDEPENDIENTES VALOR DE “p”
p ˂ de 0,05 = existe diferencia significativa
p ˃ de 0,05 = no existe diferencia significativa.
DISCUSIÓN
No se ha podido encontrar la suficiente información de los aceites esenciales de
Satureja nubigena para justificar el efecto obtenido en el presente trabajo de
investigación, pero posiblemente contenga algunos de los aceites esenciales
presentes en las diversas Saturejas estudiadas.
Algunos de los principales
fitoconstituyentes de la familia
Satureja son el timol y el carvacrol de
los cuales podemos mencionar que:
incrementan la permeabilidad de la membrana citoplasmática dejando que filtren los
constituyentes químicos que son esenciales para el metabolismo, tales como iones,
ATP, ácidos nucleicos y aminoácidos esenciales ocasionando la destrucción del hongo.
CONCLUSIONES:
1. Se determinó la actividad antifúngica in vitro del aceite esencial de las hojas de
Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a Sporothrix schenckii, resultado que se
expresó en los grupos problema de las dos fases de crecimiento, en los cuales se
obtuvo resultado negativo para crecimiento.
CONCLUSIONES:
2. Se extrajo el aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua”
apoyados con el equipo llamado alambique destilador con el método de arrastre de
vapor.
CONCLUSIONES:3. Se comparó los resultados obtenidos de la actividad antifúngica in vitro de las
diferentes concentraciones del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena“Pachachamcua” apoyados con la prueba estadística MANN-WHITNEY la cual arrojó
como resultados tanto para las comparaciones de la fase levaduriforme así como
para la filamentosa un valor de “p” de 1,000 valor mayor a 0,05 lo que indica que no
existe diferencia significativa en las diferentes comparaciones de los grupos
problema concluyendo que el aceite esencial de Satureja nubigena “Pachachamcua”
presenta actividad antifúngica tanto para la fase levaduriforme como para la fase
filamentosa en todas las concentraciones trabajadas.
vsPrueba estadística MANN-WHITNEY
P = 1,000
p ˃ de 0,05 = no existe diferencia significativa.
CONCLUSIONES:4. Se comparó los resultados obtenidos de las diferentes concentraciones del aceite
esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a los grupos
controles apoyados con la prueba estadística MANN-WHITNEY la cual arrojó como
resultados tanto para las comparaciones de la fase levaduriforme así como para la
filamentosa un valor de “p” de 0,025 valor menor a 0,05 lo que indica que existe
diferencia significativa en las diferentes comparaciones de los grupos problema
con los grupos control debido a que en los grupos control se presentó crecimiento en
cada una de las fases concluyendo que el aceite esencial de Satureja nubigena“Pachachamcua” presenta actividad antifúngica tanto para la fase levaduriforme
como para la fase filamentosa en todas las concentraciones trabajadas.
vsPrueba estadística MANN-WHITNEY
P = 0,025
p ˂ de 0,05 = existe diferencia significativa
CONCLUSIONES:5. Se determinó la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de las hojas de
Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a Sporothrix schenckii la cual consistió en
la menor concentración utilizada “5µL/mL de agar” tanto para la fase filamentosa
como para la levaduriforme debido a que en todos los grupos problema se presentó la
actividad antifúngica.
vs vs
Fase levaduriforme Fase filamentosa
(+) (+)(-) (-)
No crecimiento. CrecimientoCrecimiento No crecimiento.
RECOMENDACIONES: Realizar estudios in vivo, ya que Sporothrix schenckii muestra una marcada
susceptibilidad in vitro frente al aceite de las hojas de Satureja nubigena“Pachachamcua”, y en su uso rutinario por parte de la población podría estar
ocurriendo lo mismo.
El aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua”, posee una
importante actividad antifúngica; sin embargo sugerimos que su uso se limite a
pacientes con diagnóstico definitivo y prescrito por un profesional de salud.
Hacer de conocimiento los resultados obtenidos en el presente trabajo de
investigación a las autoridades Regionales de Salud de Cajamarca, para involucrar
en las medidas de prevención a tomar, previos estudios.
En base a estos resultados profundizar otras investigaciones, para determinar
factores de asociación, respecto a otro tipo de infecciones micóticas.
Investigar nuevas formas de tratamiento, para esporotricosis cutánea, en base a los
resultados obtenidos en la presente investigación.
Gracias.
GRACIAS.