presntasi complete
TRANSCRIPT
-
5/28/2018 Presntasi Complete
1/25
-
5/28/2018 Presntasi Complete
2/25
1 Andy Octavian
2 Prasetyo Bayu Aji
3 Musdalifah Noor
-
5/28/2018 Presntasi Complete
3/25
APA ITU Preparat
Sebelum dilakukan pemeriksaanmikroba secara mikroskopis maka
mikroba tersebut harus dipersiapkanterlebih dahulu, agar pemeriksaannyadapat dilihat dengan jelas. Mikrobayang telah dipersiapkan in disebut
Preparat.
?????
-
5/28/2018 Presntasi Complete
4/25
SECARATIDAK
LANGSUNG
PEMBUATANPREPARAT
SECARALANGSUNG
METODEBASAH
METODEBALOK
GANTUNG
METODE
TETESANGANTUNG
-
5/28/2018 Presntasi Complete
5/25
Merupakan metode yang dilakukan untuk mikrobayang tidak tahan terhadap pengeringan (fiksasi) dan
pengecatan (pewarnaan).
Dengan catatan mikroba yang digunakan masih hidup
sehinngga dapat diamati kelakuan dari mikroba,
misalnya gerakannya, pembelahan sel
-
5/28/2018 Presntasi Complete
6/25
1. Metode basah Dengan cara mikroba disuspensikan dalam
cairan kemudian ditetesi di atas kaca obyek
dan ditutup dengan gelas penutup
2. Metode Tetesan Gantung
Awalnya suspensi bakteri ditemukan di atas
kaca penutup. Yang kemudian ditutup denagn
kaca yang telah dibuat khusus, selanjutnya dibalik dan siap diperiksa di mikroskop
-
5/28/2018 Presntasi Complete
7/25
mula-mula disiapkan agar-agaryang dituangkan dalam petridish
ditunggu sampai dingin,
3. Metode Balok Gantung
agar-agar tersebut dipotong-potong dengan ukuran 6mm2kemudian dipindahkandi atasgelas objek yang steril. agar-agar tersebut dipotong-potongdengan ukuran 6mm2 kemudiandipindahkandi atas gelas objekyang steril.
Mikroba yang diperiksa ditaburkan diatas gelas objek yang sudah adaagar-agarnya, kemudian ditutupdengan gelas penutp yang steril.
Diinkubasikan selama beberapamenit kemudian dipindahkan darigelas ke kaca berlubang.
Kemudian ditutup denganparafin dan siap diperiksa dibawah mikroskop.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
8/25
Definisi
pembuatan preparat dengan teknik ini
sering disebut dengan pengecatan ataupewarnaan ayng digunakan untukpemeriksaan sifat morfologi mikroba.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
9/25
Pembuatan lapisna film dan fiksasi1. dengan jarum steril, suspensi mikrobadioleskan di atas kaca obyek hinggamembentuk lapisan film. Kemudiandilakukan fiksasi dengan membakardengan spritus alapisan film tadi beberapakali. Atau dapat juga dilakukan dengan
menambahkan zat kimia seperti campuranasam cuka dan pikrat.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
10/25
Cat Biologis
Cat dibagi menjadi 2 yakni :
1. Cat basis
Garam-garam cat yang ion-ion catnya adalah
kation, contoh : Methylene blue, safranin,netral reddan anionnya adalah Cl, SO, asetat dll
2. Cat Asam
cat yang ion catnya adalh anion-anion dan kation-
kationnya Na, K,Ca, dan NH contoh : eosinat,eosin, congo red, dll
3. Cat-cat lain, seperti : Cat yang bersifat netral danindiferan, misalnya Sudan III dan eosin
-
5/28/2018 Presntasi Complete
11/25
Film mikroba yang telah difiksasi kemudian
direndam dalam larutan zat warna dalam waktu
tertentu setelah itu dicuci dengan air mengalir yang
bersih dan dikeringkan.Lama perendaman dalam zattergantung dari jenis mikroba yang diwarnai.Cat
banyak digunakan adalah methylen blue,gentian
violet,basic fuchsin atausafranin.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
12/25
Ada 2 macam pewarna diferensial yaitu :pewarnaan gram,dan pewarnaan asam secara cepat(acid fast).2.3.2 Pewarnaan Gram
Pengecatan gram meliputi 4 tingkatan yaitu;1.Pemberian cat utama (larutan cat kristal violet)2.Pengintesifan cat utama dengan menambahkanlarutan IKI(mordan)
3.Pencucian (dekolorisasi)denggan larutan alkohol4.Pemberian cat penutup (cat lawan )dalam hal inidigunakan safranin yang berwarna merah.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
13/25
Pengecatan gram dibedakan menjadi Bakteri gram
positif dan negatif.
- Bakteri gram positif ialah bakteri yang mengikat
cat utama dengan kuat sehingga tidak dapat
dilunturkan oleh peluntur dan tidak dapat diwarnai
oleh cat lawan safranin yang berwarna ungu.- Bakteri gram negatif ialah bakteri yang daya
mengikat cat utama tidak kuat sehingga dapat di
lunturkan oleh peluntur dan dapat mengika cat lawan
berwarna merah.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
14/25
Faktor-faktor yang mempengaruhi hasil pengecatan
1. FiksasiCara fiksasi yang paling banyak yang di gunakan
dalam pengecatan bakteri dengan membuat lapisan
suspensi bakteri diatas gelas benda kemudian
dikeringkan dengan cara dilewatkan beberapa kalidiatas nyala lampu spirtus,atau dengan menggunakan
reagensi kimia.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
15/25
2. Substrat
Berdasarkan macam cat yang diserap oleh sel ,
ada tiga tipe sel yaitu :
1. Sel-sel yang Basofil , yaitu sel-sel yang dapet
mengikat cat biasa.2. Sel-sel Asidofil atau oksifil, yaitu sel yang dapat
mengikat cat asam .
3. Sel-sel yang Sudanofil, yaitu sel-sel yang dapat
mengikat cat yang dapat larut dalam minyak.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
16/25
3. Peluntur cat (decolorizer)
Macam-macam peluntur cat , misalnya:1. Peluntur cat yang lemah yaitu alkohol,air, minyak
cengkeh ,aseton dan gliserin.
2. Peluntur cat asam yaitu HCl , H2SO4,HNO3,dan
campuran asam-asam dengan alkohol3. Peluntur cat basis yaitu KOH , NaOH, sabun dan
garam basa
4. Garam- gaaram logam berat yaitu AgNO3
, MgSO4
.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
17/25
4. Intentifikasi Pengecatan
Mordan adalah suatu zat kimia yang dapatmenyebabkan sel bakteri dan dicat lebih intensif atau
menyebabkan cat terikat lebih kuat pada jaringan sel
bila dibandingkan dengan cara pengecatan tanpa
diberi mordan,Ada beberapa macam mordan :
1.Mordan basa yaitu mordan yang bereaksi dengan
anion asam yang berwarna,misalnya alum,FeSO,
kalium antimonium tartrat,asetol piridinium khlorida.2.Mordan Asam yaitu mordanyang bereaksi dengan
cat-cat basa,misalnya asam tanin,asam pikrat,JKJ.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
18/25
5. Cat Penutup (cat lawan)
Sebagai cat penutup yang banyak digunakan ialah
methylene blue,safranin,erythrosin dan lain-lain
tergantung macam pengecatannya.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
19/25
Beberapa Cara Pengecatan
1. Pengecatan NegatifPengecatan ini merupakan pengecatan tidak
langsung,karena yang dicat adalah latar belakangnya
,sedangkan bakteri tidak mengalami pengecatan. Cat yang
banyak digunakan dalam pengecatan negatif ialah
nigrosin dan tinta cina.
2. Pengecatan Sederhana
Pengecatan dilakukan menggunakan satu macam cat saja,
sebelum mengecat dilakukan fiksasi dahulu. Pengecatanini dipakai untuk melihat bentuk bakteri, cat yang sering
digunakan methylen blue, gentian fuchsin, basic fuchsin
-
5/28/2018 Presntasi Complete
20/25
3. Pengecatan Gram
pengecatan gram meliputi 4 tingkatan :
1. Pemberian cat utama (lar.kristal violet)
2. Pengintensifan cat utama dg menambahkan lar.
Mordan (JKJ)
3. Pencucian (gekolorisasi) dengan alkhohol
4. Pemberian cat penutup (cat lawan) larutan safranin yg
berwarna merah
-
5/28/2018 Presntasi Complete
21/25
Faktor-faktor yang dapat menyebabkan variasi
dalam pengecatan gram :1. Perubahan keasaman
pH turun :bakteri gram positifbakteri gram negatif
pH naik :bakteri gram negatif
bakteri gram positif
2. Penyimpangan cara pengecatan
pencucian yang terlalu lama menggunakanalkhohol dapat menyebabkan bakteri gram positifmemberikan hasil seperti gram positif
-
5/28/2018 Presntasi Complete
22/25
3. Faktor mediumbakteri gram positif yg lemah apabila terlalulama ditumbuhkan dalam medium yg mudah difermentasi dapat berubah menjadi gram negatif.
4. Umur bakteribakteri gram positif yang telah menjadi tua ataukurang nutrisi makanan dapat berubah menjadibakteri gram negatif
-
5/28/2018 Presntasi Complete
23/25
5. Perlakuan khusus
bakteri gram positif yg bagian selnya dihilangkandapat larut dalam air panas, eter, atau larutanribonuklease dpt menjadi bakteri gram negatif.
bakteri gram negatif yang dilarutkan dalam lar.Pekat DNA dpt berubah menjadi bakteri grampositif. Cont: E.Choli
-
5/28/2018 Presntasi Complete
24/25
4. Pengecatan Acid fast (pengecatan ziehl nelsen)
pengecatan acid fast termasuk pengecatandifferensial karena dapat membedakan bakteri yg acidfast (tahan terhadap pencucian asam) dan non acidfast (tidak tahan terhadap pencucian asam).
misalnya bakteri yg bergenus Mycobacterium(M.tubercolosis, M.leprae) dan beberapaaktinomisetes apabila bakteri ini dicat dengancarbolfuchsin sambil dipanaskan 90C diataspenangas air selama 4 menit maka lapisan lilinya
lunak dan cat menembus kedalam sel. Setelah dingincat akan terikat oleh sel. Sehingga tidak luntur dgpencucian alkohol maka bakteri tersebut bersifat acidfast.
-
5/28/2018 Presntasi Complete
25/25