proceso tinción de gram
TRANSCRIPT
![Page 1: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/1.jpg)
Tinción de Gram
•Desarrollada por el bacteriólogo Christian Gram en 1884•Permite la rápida evaluación de morfología y complejidad bacteriana•Tinción rápida y Económica•Puede variar según el protocolo usado (necesidad de estandarizar el protocolo)
![Page 2: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/2.jpg)
Portaobjetos Agua destilada Pipetas Pasteur, haza, Mechero. Cristal Violeta Lugol Alcohol acetona Safranina (u otra tinción de contraste)
Reactivos Necesarios
![Page 3: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/3.jpg)
Colocar una pequeña gota de Agua destilada en el portaobjetos (con pipeta por ejemplo)
Re-suspender muestra en el portaobjetos. Secar al mechero.
Procedimiento: Fijación
La gota de agua debe ser pequeña
Se debe calentar por 5 min aprox, hasta que toda el agua se seque.
![Page 4: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/4.jpg)
Se debe colocar Cristal Violeta cubriendo toda la muestra por 1min (variable según lab.)
Se lava con agua corriente
Procedimiento: Tinción
Puede hacerse con gotario o pizeta
![Page 5: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/5.jpg)
Luego debe agregarse el lugol. Este debe aplicarse como el cristal violeta y también debe cubrir la muestra por 1 min. Luego se lava con agua corriente.
Procedimiento: Tinción
![Page 6: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/6.jpg)
El cubrir la muestra con alcohol acetona para decolorarla es el paso más critico del procedimiento. Este debe cubrir la muestra por el tiempo que puede ir de 15s a 30s según corresponda y la reacción debe ser detenida con el lavado con agua corriente. El tiempo debe ser el mismo para todas las muestras.
Procedimiento: Tinción
Al ser tiempos por lo general muy cortos, se recomienda agregar el alcohol mientras ya se tiene la llave del agua corriendo, listo para el lavado.
![Page 7: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/7.jpg)
El último paso consiste en agregar una tinción de contraste, para teñir las bacterias que pierden el cristal violeta. Para esto se agrega safranina cubriendo la muestra por 15s o por 1min, dependiendo. Luego se lava con agua corriente y se deja secar.
Procedimiento: Tinción
![Page 8: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/8.jpg)
Bacterias Gram positivas:◦ Corresponden a las bacterias que mantienen la
coloración del cristal violeta después del alcohol acetona, lo que les da un color violeta/morado.
Resultados: Microscopía
Streptococcus pneumoniaeBacteria Gram positiva, desde cultivo bacteriano en agar sangre.
![Page 9: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/9.jpg)
Bacterias Gram negativas:◦ Corresponden a las bacterias que pierden la
coloración del cristal violeta después del alcohol acetona y se tiñen con el colorante de contraste (safranina), lo que les da un color rosáceo/rojizo.
Resultados: Microscopía
Escherichia coli Bacteria Gram Negativa, cultivo desde agar Macconkey
![Page 10: Proceso tinción de gram](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022082705/55b18827bb61ebc04a8b462d/html5/thumbnails/10.jpg)
Es conveniente estandarizar los tiempos de tinción para cada laboratorio, ya que la calidad y concentraciones de reactivos pueden variar bastante.
Lo más recomendable es realizar el gram de los cultivos de agares enriquecidos y de colonias aisladas y en crecimiento.
Los gram directos de una muestra solo son útiles en ciertos casos.
Las bacterias anaerobias son más difíciles de teñir, esto puede mejorar si se agrega bicarbonato mezclado a las tinciones.
La muestra no debe ser excesiva para poder determinar las otras características de la bacteria, como forma y agrupación.
Recomendaciones Finales