PROSDOCIMI, Francisco C. S.; ZUCCONI, Eder; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; ANDRADE, Renato (c); GODINHO, Hugo (c);

GODINHO, Alexandre (c)

Departamento de Farmacologia e Departamento de MorfologiaICB-UFMG

As construções de barragens hidrelétricas nas grandes bacias fluviais do país, apesar de reconhecidos aspectos utilitários, causam impactos sobre a ictiofauna, como a interrupção de vias migratórias de peixes. Nesses casos, segundo a legislação vigente, é obrigatória a construção de mecanismos – altamente dispendiosos – de transposição de peixes, a não ser que seja comprovado que tal medida é desnecessária. Para verificar a necessidade de construção desses mecanismos em barragens do Rio Grande (MG), deve ser feito um estudo de variabilidade genética entre populações de peixes locais. Com esse objetivo estão sendo isolados e caracterizados locos de microsatélites da espécie Prochilodus scrofa, conhecida popularmente como curimbatá. Para o isolamento desses locos foi construída uma biblioteca de DNA genômico do peixe, que foi hibridizada com seqüências de oligonucleotídeos repetitivas marcadas radioativamente. Os clones positivos estão sendo seqüenciados para a confirmação das regiões de microsatélites e para o reconhecimento das regiões flanqueadoras. Primers complementares às regiões flanqueadoras estão sendo encomendados e está sendo caracterizada a reação de PCR a ser utilizada no estudo genético de populações desses peixes.

Crescimento populacional

Maior demanda de energia elétrica

Construção de represas

Interrupção de vias migratórias

Biblioteca Genômica Isolamento dos clones Hibridização Sequenciamento

Escolha da enzima apropriada para a montagem da biblioteca

Sítio de corte da enzima utilizada deixando extremidades coesivas

Mapa do vetor utilizado

Corte do DNA total com Sau3A

Divisão das frações da biblioteca

Resumo da técnica de montagem de biblioteca genômica

Técnica de transformação bacteriana utilizada (eletroporação)

Isolamento dos clones da biblioteca seguido de PCR ou mini-prep para a posterior aplicação na membrana

Oligonucleotídeos utilizados como sonda: CA, TC, CTT,

ACGA, TA, GGA, AAAG,TATC

Hibridização com sondas radioativas

Uma das membranas utilizadas. Pode-se perceber que os clones foram aplicados em duplicata.

Equipamento de Sequenciamento

automático utilizadoSeqüência de um dos microsatélites encontrados

Seqüência de outro dos microsatélites encontrados

Teste de paternidade

Novos sequenciamentos

Coleta de peixes

PCR dos loci de microsatélite de cada indivíduo.

Gel de poliacrilamida dos produtos de PCR Montagem de tabela com nº e freqüência de MS.

Cálculo da heterozigosidade observada e esperada.

Definição da distância genética e fluxo gênico entre as populações. Verificação da necessidade de construção

de mecanismos de transposição.