proyecto diuretico
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL
DE HUAMANGA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE
FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Proyecto de tesis
ACTIVIDAD DIURÉTICA DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE Calceolaria speciosa Pennell. “huahuillay” EN Cavia porcellus
“cobayo”.
Presentado por:
COAQUIRA APAZA, Betzabeth Hilda.
AYACUCHO – PERÚ2007
I. GENERALIDADES
1.- TILULO
Actividad diurética del extracto hidroalcohólico de Calceolaria speciosa Pennell.
“huahuillay” EN Cavia porcellus “cobayo”.
2.- PERSONAL INVESTIGADOR
2.1.- AUTOR:
COAQUIRA APAZA, Betzabeth Hilda.
Estudiante de la Escuela de Formación Profesional de Farmacia y Bioquímica de la
Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga.
2.2.- ASESOR:
Q.F. José M. DIEZ MACAVILCA, Profesor asociado a dedicación exclusiva, Adscrito al
Departamento Académico de la Facultad de Ciencias Biológicas.
Q.F. Aldo J. TINCO JAYO, Profesor auxiliar a tiempo completo, Adscrito al
Departamento Académico de la Facultad de Ciencias Biológicas.
3.- TIPO DE INVESTIGACIÓN
Básico – Experimental
4.- RÉGIMEN DE INVESTIGACIÓN
Libre
5.- CRONOGRAMA DE TRABAJO
5.1.- DURACIÓN DE PROYECTO:
Duración : 6 meses.
Fecha de inicio : Julio del 2007.
Fecha de término : Diciembre del 2007.
5.2.- CRONOGRAMA:
Nº Actividad/mes Mes 1 Mes 2 Mes 3 Mes 4 Mes 5 Mes 61 Revisión bibliográfica2 Preparación de reactivos3 Implementación de materiales y
equipos4 Evaluación de campo5 Selección y acondicionamiento del
animal6 Aplicación del extracto de
Calceolaria sp. en los cobayos7 Recolección de datos8 Tabulación de datos9 Análisis e interpretación de datos
10 Preparación del informe11 Informe final12 Sustentación
6.- RECURSOS DISPONIBLES
6.1.- RECURSOS HUMANOS:
Un estudiante de Farmacia y Bioquímica
Dos Químico Farmacéuticos
6.2.- RECURSOS MATERIALES:
6.2.1.- Material biológico:
5kg de Calceolaria speciosa Pennell. “huahuillay”
6.2.2.- Unidades de experimentación
25 Cavia porcellus “cobayos” de 400 – 450g de masa corporal.
6.2.2.- Materiales de laboratorio:
02 Pipetas de 1 mL.
01 Pipeta de 5 mL.
01 Pipeta de 10 mL.
O2 Fiolas de 25 mL.
02 Fiolas de 50 mL.
03 Matraces de Erlenmeyer
04 Probetas graduadas de 100 mL.
01 Bureta de 100 mL.
02 Buretas de 10 mL.
03 Embudos de vidrio
05 Vasos de precipitado
03 varillas de vidrio
10 Tubos de prueba
02 Morteros
03 Jeringas de 5 ml
03 Jeringas de 10 ml
05 Papel de filtro
03 Jeringas de 20 ml
02 Sondas
6.2.3.- Reactivos:
05 Litros de agua destilada
Furosemida
Cloruro de sodio al 0.9%
Etanol
Éter etílico
Cloroformo
6.2.4.- Equipos y aparatos:
05 Jaulas de diuresis
05 Jaulas de transporte
01 Cronómetro
05 Embudos de plástico
01 Baño María
01 Balanza analítica
02 Gradillas
02 Soporte Universal
01 Estufa
01 Equipo de soxhlet
6.2.5.- Otros:
3 Guantes quirúrgico
1 Libreta de campo o apunte
Lapiceros
2 Millares papel bon
1 Rollo de cámara fotográfica
Marcadores
Vestuario
7.- PRESUPUESTO
7.1.- BIENES:
Bienes de consumo
Equipos de laboratorio…………………………………S/. 13 000.00
Materiales de laboratorio………………………………… 900.00
Material de limpieza……………………………………… 60.00
Material de escritorio……………………………………. 150.00
Medicamentos…………………………………………… 80.00
Materia prima……………………………………………. 100.00
Vestuario……………………………………………………….... 25.00
Semovientes……………………………………………………... 300.00
7.2.- SERVICIOS:
Material humano…………………………………………………S/. 100.00
Pasaje y gasto de transporte………………………………….. 100.00
Otros servicios de terceros
Impresión………………………………………… 300.00
Publicaciones…………………………………… 400.00
Material fotográfico……………………………… 40.00
Encuadernamiento……………………………… 100.00
Otros……………………………………………… 150.00
S/. 15805.00
8.- FINANCIAMIENTO
U.N.S.C.H………………………………………………………….. S/. 13 980.00
Autofinanciamiento……………………………………………….. 1 825.00
TOTAL S/. 15 805.00
II. PLAN DE INVESTIGACIÓN
1.- PROBLEMA
1.1.- Enunciado del problema:
¿A qué concentración será mayor la actividad diurética del extracto hidroalcohólico de
la Calceolaria speciosa Pennell. “huahuillay” administrado en Cavia porcellus
“cobayo”?
1.2.- Definición y delimitación del problema:
1.2.1.- Definición del problema:
En el Perú, el empleo de productos naturales principalmente de origen vegetal se
encuentra ampliamente difundido a la existencia de una gran diversidad de flora en las
distintas regiones del país (Cornejo, 1987).
Las plantas presentan muchos beneficios como el control de las enfermedades, lo
cual cuyo valor medicinal es otorgado por la presencia de los metabolitos secundarios.
En la actualidad en los países desarrollados como en las vías de desarrollo se
revalora las propiedades curativas de las plantas medicinales y otros aspectos de la
medicina tradicional.
El presente trabajo de investigación se orienta al estudio del efecto diftérico de
Calceolaria sp. “huawillay”. Porque esta planta también es usada como digestiva como
uso tradicional por la población que vive en el campo y las personas que venden
hierbas en el mercado.
1.2.2.- Delimitación del problema:
Se pretende al término de este trabajo de investigación nos ayuda a evaluar la
capacidad diurética de esta planta medicinal, por lo que es usado tradicionalmente en
forma de infusión por sus propiedades diuréticas.
La motivación de este trabajo es determinar la capacidad diurética de esta planta
medicinal y comprobarlo científicamente su efecto.
De comprobarse su efecto esta nos ayudara a usarlo con mayor seguridad como
fitomedicamento debido a su efectividad, económico y su fácil manejo.
2.- MARCO TEÓRICO
2.1.- Antecedentes:
Sobre el estudio de las plantas medicinales como es de la Calceolaria engleriana
como actividad diurética han demostrado la presencia de metabolitos secundarios
como los flavonoides y taninos, por lo tanto otras especies del genero Calceolaria
tendrá diferentes actividades farmacológicas, dando asi una información cientifica ( Del
Castillo, 2002).
Realizaron el tamizaje fitoquímico y determinación de la actividad diurética del
extracto hidroalcohólicode la raíz de Foeniculum vulgare “hinojo” planta nativa de
Ayacucho, utilizando extractos hidroalcohólicos a concentraciones de 100mg/kg,
200mg/kg y 400mg/kg donde hace uso del método de Nail y Col. (Oriundo, 2003).
Realizó el efecto diurético a diferentes concentraciones del extracto acuoso
atomizado de Taraxacum officinale “diente de león”, extracto atomizado a
concentraciones de 100mg/kg, 250mg/kg, 350mg/kg y 500mg/kg donde hace uso del
método de Nail y Col. (Manrique, 2004)
Realizó la evaluacion de la actividad diuretica del extracto atomizado de Bidens
pilosa “sillkau” en cobayos, extracto atomizado a concentraciones de 100mg/kg,
150mg/kg, y 200mg/kg donde hace uso del método de Nail y Col. . (Gonzalez, 2004)
2.2.- Aspectos botánicos de la planta:
2.2.1.- Descripción taxonómica de Calceolaria sp. “huawillay”
DIVISION : ANTOPHYTA (ANGIOSPERMAE)
CLASE : DICOTILEDONEAE
SUBCLASE : METACLAMIDEAS
ORDEN : TUBIFLORALES
FAMILIA : SCROPHULARIACEAE
GENERO : Calceolaria
ESPECIE : Calceolaria speciosa Pennell.
NOMBRE COMUN: “huahuillay”
2.2.2.- Descripción taxonómica del Calceolaria speciosa Pennell.
Son plantas herbáceas y algunas veces son arbustos pequeños.
FLORES hermafroditas, zigomorfas. Cáliz con cuatro divisiones profundas. Corola con
el tubo corto; estambres dos, laterales e insertadas en la base de la corola, filamentos
cortos o largos; anteras biloculares, estilo simple; estigma es cabezuela. Capsula
bilocular, cónica, dehiscente por cuatro valvas, incluida en el cáliz.
INFLORESENCIA cimosas, raro solitarias y de color amarilla.
SEMILLAS numerosas, estriadas o reticuladas. Hierbas perennes, raramente anuales.
HOJAS opuestas o verticiladas, simples o compuestas, enteras o dentadas.
2.2.3.- Distribución geográfica del Calceolaria speciosa Pennell.
El genero se encuentra en los andes del centro y sur de Perú entre los 2000 a 4100
m.s.n.m, especialmente en los departamentos de Ayacucho y Junín.
Se sabe que la Calceolaria va del sur México hasta los andes del sur de la tierra,
desarrollándose mejor en cuestas rocosas y matorrales de montañas secas (Molau,
1988).
Su floración y recolección se da en los meses de primavera andina: abril, mayo,
junio y julio, pero particularmente en el departamento de Ayacucho crece en los meses
de enero y abril, siendo escaso de agosto a diciembre (Aedes, 1998).
Usos medicinales
En el empleo de la medicina tradicional se le atribuye ciertas propiedades
medicinales como: diurético, digestivo, astringente, febrífugo, antiulceroso e
hipoglucemiante también se le describe por su uso para la tos, resfrío y retraso
menstrual; estas son usadas en forma de infusión las hojas y flores frescas
tomándolas después de los alimentos (Soukup, 1991).
El riñón
Los riñones realizan dos funciones fundamentales. En primer lugar, eliminan gran
parte de los productos metabólicos terminales del organismo, y en segundo lugar,
controlan las concentraciones de la mayor parte de los componentes de los líquidos
corporales.
Los dos riñones en conjunto tienen aproximadamente dos millones de nefronas, y
cada una de ellas es capaz de formar orina por separado. Así pues, en la mayor parte
de los casos no es necesario discutir el riñón entero, sino simplemente la función de
una única nefrona para explicar la función renal.
La función básica de la nefrona es limpiara o aclarar el plasma sanguíneo de desecho
a medida que pasa por los riñones. Dentro de estas sustancias que deben ser
eliminados se encuentran particularmente determinados productos terminales del
metabolismo como: urea, acido úrico, uratos y creatinina. También tenemos otras
sustancias como los iones de sodio, potasio cloruro e hidrogeno que tienden a
acumularse en el organismo en cantidades excesivas, así también la función de la
nefrona es evitar la acumulación de estos iones (GUYTON, 1995)
Diuréticos
Los diuréticos reducen el volumen total de agua y sal que esta en el organismo al
incrementar su excreción urinaria. Esto ocurre principalmente debido a que estos
compuestos alteran la resorción del cloruro de sodio en los tubulos renales.
Los diuréticos pueden clasificarse de acuerdo a su estructura química, la ubicación del
efecto de reducir la sal y el agua en las neuronas de los riñones y la actividad
farmacológicas (HELLER, 1990).
Mecanismo de acción
Los diuréticos del asa inhiben la reabsorción de sodio y cloro en la porción
proximal del asa ascendente de Henle e incrementa la excreción de agua.
Los diuréticos tiacidicos y sus homólogos aumentan la excreción urinaria de
sodio y agua por inhibir la resorción sódica en el sitio de dilución cortical del
lado ascendente del asa de Henle.
Los inhibidores de la anhidrasa carbónica mediante bloqueo enzimático,
promueven excreción renal de sodio, potasio, bicarbonato y agua.
Entre los diuréticos diversos, el manitol aumenta la presión osmótica del filtrado
glomerular, inhibiendo la resorción tubular de agua y electrolitos (LITTER,
1997).
Absorción, distribución, metabolismo y excreción
Los diuréticos tiacidicos y sus homólogos se absorben bien del aparato
digestivo y estos diuréticos se distribuyen en todos los tejidos corporales y se
excretan primariamente sin modificar la orina.
Entre los diuréticos del asa de Henle, acido etacrínico estos se absorben
rápidamente después de su administración oral, se metaboliza en el hígado y
se excreta por los riñones. La furosemida se absorbe poco en el aparato
digestivo, solo se metaboliza una pequeña cantidad se excreta por la orina. La
urea se absorbe bien después de la administración oral pero rara vez se
administra por esta vía por que tiene un sabor desagradable. Después de la
administración intravenosa se distribuye a los líquidos intracelulares y
extracelulares incluyendo el líquido cefalorraquídeo. Esto se hidrolizan en el
aparato digestivo por las ureasas bacterianas y se excretan por los riñones
(LITTER, 1997).
Furosemida
La furosemida es un derivado del acido antranilico, posee un núcleo
bencenosulfamilo halogenado adyacente en forma semejante a las tiazidas. Deriva
de un anillo aromático fundamental correspondiente al acido antranilico, con una
cadena lateral que contiene un anillo furano; su potencia y eficacia diurética
depende de todas estas características.
La furosemida administrada por la vía intravenosa, intramuscular o oral, producen
la diuresis en animales y en el hombre normal o con edema, que puede llegar a los
10 litros diarios. La acción del diurético es rápida y de corta duración.
Por la vía oral el efecto comienza a los 30 a 60 minutos, es máximo a los 90 a 120
minutos y dura de 6 a 8 horas.
Por vía intravenosa la diuresis comienza a los 5 a 15 minutos llega al máximo a los
30 a 60 minutos y dura 3 a 5 horas.
La furosemida además de producir un aumento de la eliminación de agua, provoca
una potente saluresis, con una intensa excreción de sodio (natriuresis), cloruro
(cloruresis) y potasio (kaliuresis), con mayor eliminación del anión cloruro es mayor
que el catión de sodio, dicho exceso de cloruro se elimina con iones potasio y
amonio (LITTER, 1997).
3.- HIPÓTESIS
El extracto hidroalcohólico de Calceolaria speciosa Pennell. “huahuillay” presenta
mayor actividad diurética en la concentración mayor administrada en Cavia porcellus
“cobayo”.
4.- IDENTIFICACIÓN DE LAS VARIABLES
4.1.- Variable independiente:
Concentraciones del extracto hidroalcohólico de la Calceolaria speciosa.
“huahuillay”.
Niveles
100mg/kg
250mg/kg
500mg/kg
4.2.- Variable dependiente:
Actividad diurética.
Niveles
Porcentaje de excreción volumétrica urinaria
Frecuencia de excreción urinaria
5.- OBJETIVOS
5.1.- Objetivo general:
Determinar la actividad diurética del extracto hidroalcohólico de Calceolaria
speciosa Pennell. “huahuillay”.
5.2.- Objetivos específicos:
Determinar la concentración optima diurética del extracto hidroalcohólico de
Calceolaria speciosa Pennell. “huahuillay”.
Identificar cualitativamente los metabolitos secundarios de la Calceolaria
speciosa Pennell.
6.- DISEÑO METODOLÓGICO
6.1.- Tipo de investigación:
Básico – Experimental
6.2.- Definición de la población y muestra:
Población
Hojas y flores de Calceolaria speciosa Pennell. “huahuillay” recolectada en
zonas áridas en la provincia de Huancasancos del departamento de Ayacucho.
Muestra
5 kg. de las hojas y flores de Calceolaria speciosa Pennell.
Unidad experimental
25 Cavia porcellus “cobayos” de la misma edad de 400 – 450g de peso.
6.3.- Métodos:
Procedimiento para la recolección de datos
Recolección de la muestra: Recolectar la muestra y secarlo a temperatura
ambiente en un lugar que tenga buena ventilación y cambiando el papel cada
día hasta que se seque completamente.
Preparación de la muestra: Una vez secada, se pulveriza la muestra y se
macera con alcohol de 70º para luego proceder a la filtración, concentrar y
preparar las diferentes concentraciones.
Determinación de la actividad diurética
La metodología empleada para la determinación de la actividad diurética se
basara en el método utilizado por Nail y Col y aplicado en la cátedra de
Farmacología del Área de Farmacia de UNSCH.
En este ensayo se utilizan 25 cobayos con un peso de 400 a 450 gr. A las
cuales se dejan en ayunas unas 18 a 24 horas antes de la prueba, si ser
privadas de agua, se les administra por vía oral mediante una sonda naso
gástrica 50ml/kg de peso una solución de cloruro de sodio 9% y se coloca en
una jaula de diuresis. Después de 15 minutos de hidratación se les pesa se les
administra el producto en estudio y se les coloca en al jaula de diuresis,
recolectando a partir de ese momento la orina cada 30 minutos por un periodo
de cuatro horas.
Para el estudio comparativo del extracto hidroalcohólico se forman cinco
grupos de cinco animales y cada uno distrbuido de la siguiente manera:
Grupo I Blanco administrado con solución de cloruro de sodio 9%
Grupo II Control positivo tratado con furosemida en dosis de 5mg/kg de peso
Grupo III Administrado con extracto hidroalcohólico a dosis de 100mg/kg de peso
Grupo IV Administrado con extracto hidroalcohólico a dosis de 250mg/kg de peso
Grupo V Administrado con extracto hidroalcohólico a dosis de 500mg/kg de peso
Luego de la administración serán colocados individualmente en la jaula de
diuresis para colectar la orina. Para determinar el efecto diurético se procede a
pesar a los animales inmediatamente después de producido la diuresis y por la
diferencia de peso se calcula aproximadamente el volumen perdido, así mismo se
mide en la probeta el volumen de orina eliminado, los que nos permitan determinar
la concentración ideal que muestre una mayor eficacia diurética en relación a la
furosemida tomado como patrón.
La excreción volumétrica urinaria (EVU) se expreso en porcentaje mediante la
siguiente formula:
EVU = Volumen de orina excretado x 100Volumen de líquido administrado
7.- DISEÑO EXPERIMENTAL El diseño que se utiliza para el estudio del presente trabajo de investigación es el Diseño Completamente ramdomizado.
8.- BIBLIOGRAFÍA
1. Cornejo, V. (1987) Las plantas medicinales y su correcta utilización.
Facultad de Ciencias Biológicas UNSCH Ayacucho-Perú.
2. Aedes (1998) Estudio de la biodiversidad vegetal y animal, cuenca
Cotahuasi: flora medicinal. Consejo provincial de la Unión, secretaria
técnica La unión. Arequipa-Perú.
3. Soukup, S (1991) Vocabulario de nombres vulgares de la flora peruana.
Escuela tipográfica salesiana. Colegio Salesiano. Lima-Perú.
4. Litter, M (1997) compendio de farmacología. Editorial Talleres Graficos.
Buenos Aires.
5. Heller, H (1990) Guía profesional de medicamentos. El Manual Moderno.
Segunda edición. México.
6. Guyton, A (1995) Tratado de fisiología Medica. Séptima edición. Editorial
Iberoamericana.