pruebas rapidas farmacologia toxicologia medicina udea
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Pruebas Rápidas De Laboratorio En Farmacología Y Toxicología.
Ana María Restrepo Muñoz Rafael I. Uribe Acevedo
Residentes 1er año Toxicología Clínica Departamento de Farmacología y Toxicología
Facultad de Medicina, U. de Derechos de autor, 2013. Solo para uso educativo, no para uso comercial. Prohibida su distribución sin autorización de la Universidad de Antioquia.
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Laboratorio de farmacología y toxicología
• Dirigido hacia la identificación o cuantificación de un xenobiótico.
• Las técnicas primarias utilizadas son:
Pruebas rápidas Pruebas espectroquímicas Inmunoensayos Técnicas cromatograficas
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Pruebas Rápidas De Laboratorio En Toxicología Y Farmacología
• Son los test mas simples.
• Consisten en una reacción rápida de un xenobiótico con un reactivo químico para producir un producto generalmente de color.
• > frecuente en muestra de orina y o aspirado gástrico.
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Pruebas Rápidas De Laboratorio En Toxicología Y Farmacología
• < sensibles y especificidad.
• Frecuentemente presentan falsos positivos.
• Ocasionalmente falsos negativos.
• Rápidas y económicas
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Pruebas Rápidas Organofosforados
• En tubo de ensayo servir 1ml de contenido gástrico y agregar 1 perla de NaOH.
• Positivo : Aparición de color amarillo.
• Detecta la presencia del radical paranitrofenol y se puede acelerar en baño de maria.
• No en orina por que su color interfiere.
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Pruebas Rápidas Organofosforados
• 1 ml de contenido gástrico o muestra no biológica liquida.
• Se le agrega 1 ml de agua.
• Solo los organofosforados darán como resultado una emulsión de color blanco.
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Pruebas Rápidas Alcoholes
• Los alcoholes son hidrocarburos que contienen un grupo OH.
• El etanol ( C2H5OH )es un liquido transparente altamente volátil, de olor característico y soluble en muchos solventes orgánico.
• Es el elemento activo de las bebidas alcohólicas.
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Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol)
• Reacción del Dicromato de Potasio
• Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de la escena.
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Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol)
Procedimiento: Agregar 0,5 ml de dicromato de K a la muestra, calentar en baño maría durante 3 min.
Resultados: Color observado frente al Dicromato
de potasio: verde
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Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol)
Reacción de Oxido reducción alcoholes y aldehidos
Tomar 1 ml de orina + 1 ml de mezcla sulfocromica.
Color verde = Compuesto volátil reductor
Sensibilidad : 50 ppm
No diferencia entre etanol, metanol, acetonas y aldehídos.
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Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol)
Si es Positiva pasa de naranja a Verde
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Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol)
Muestras: Orina, contenido estomacal y residuos de la escena.
Reactivos: Dicromato de potasio (25 g/l) en ácido sulfúrico (500 ml/l).
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Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol)
Aplicar 50 μl se sol. de dicromato de K a una tira de papel filtro e insertar en el tubo de vidrio que contiene 1 ml de muestra, cerrarlo y colocarlo en un baño de agua hirviendo durante 2 minutos.
Si cambia de naranja a verde indica la presencia de los agentes volátiles reductores como etanol, acetaldehído, metanol y paraldehído.
Sensibilidad: 0,5 g/l.
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Pruebas Rápidas Alcoholes (Metanol)
Muestra: 1ml de Sangre total en un tubo de ensayo con fluoruro de Na. Agregar 2 ml de Acido tricloroacetico ( TCA) al 5% para precipitar las proteínas. Filtrar y tomar 1 ml del filtrado. Agregar 2 gotas de KMnO4, mezclar y esperar 2 minutos. Agregar la cantidad que tome con la punta de la espatula de bisulfito de sodio NaHSO3 y mezclar
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Pruebas Rápidas Alcoholes (Metanol)
Agregar la cantidad que tome con la punta de la espatula de acido cromotropico y mezclar
Agregar lentamente y por las paredes del tubo, 20 gotas de H2SO4 puro
Si es positivo parece un anillo violeta en la interfase
Sensibilidad 10 mg/ 100 ml de sangre
“El EDTA o heparina pueden dar falsos positivo”
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Pruebas Rápida Cianuro
• Es una anión monovalente, volátil y se caracteriza por su olor a almendras amargas.
• La intoxicación es producto de la ingestión de KCN o NaCN, o de la inhalación de vapores de HCN.
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Pruebas Rápida Cianuro
Formación de un complejo azul de ferriferrocianuro (azul de Prusia) con los iones ferrosos.
Muestras: Contenido estomacal, residuos de la escena
Reactivos:
• Solución acuosa de hidróxido de sodio (100 g/l).
• Solución acuosa de sulfato ferroso (100 g/l) recientemente preparada.
• Solución acuosa de ácido clorhídrico (100
ml/l)
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Pruebas Rápida Cianuro • Procedimiento:
Diluir 1 ml de la muestra en 2 ml de hidróxido de Na.
Agregar 2 ml de sol. de sulfato ferroso + ácido clorhídrico hasta disolver el precipitado de hidróxido ferroso.
Positiva: Color Azul, sensibilidad 10 mg/L.
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Pruebas Rápida Salicilatos
• Grupo de sustancias derivadas del acido salicílico, con propiedades analgésicas, antipiréticas y antiinflamatorias.
• C7H6O3
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Pruebas Rápida Salicilatos Folín-Ciocalteu:
-100 gr de tungstato de Na + 25 gr de molibdato en 800 ml de H2O.
-Agregar 50ml de Ac. fosfórico y 100ml de Ac. Clorhidrico, dejar en reflujo 10 h.
-Dejar enfriar y agregar 150 Gr de sulfato de litio + 50ml de H2O y 4-6 gotas de bromo y dejar estabilizar 2h.
-Baño de maría 15´ , dejar enfriar, filtrar y enrasar con 1 L de H2O
- Mantener a 4ºC y dura 4 meses.
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Pruebas Rápida Salicilatos
Muestras: Orina, contenido estomacal, resto de la escena.
Agregar la sol. de tricloruro férrico al 5% o el reactivo de Folín–Ciocalteu a una alícuota de la muestra.
Positiva: - Azul-violaceo con el Cloruro férrico.
- Azul con el Folín-Ciocalteu
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Pruebas Rápida Salicilatos
• Muestra : Orina.
En un tubo de ensayo servir 1 ml de orina
Agregar 1 ml del reactivo de trinder y mezclar
Positivo: Aparición de color violeta.
Las fenotiazinas tambien producen color violeta pero desaparece inmediatamente
El color debido a los salicilatos desaparece al adicionarle H2SO4 al 50%
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Prueba Rápida Paracetamol
• Es un metabolito de la fenacetina, con propiedades analgésicas.
• Físicamente es un polvo cristalino de color blanco, inodoro , de sabor amargo.
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Prueba Rápida Paracetamol Reactivos: Cloruro férrico, Folin-Ciocalteu, Liebermann, Nessler
Liebermann:
-1 gr de nitrito de Na + 10 ml de Ac. Sulfúrico – se debe realizar en frio y bajo campana.
Nessler:
-50 gr de cloruro de Hg + 35 gr de ioduro de K en 200 ml de H2O ( En frio )
-50gr de Hidroxido de Na en 50ml de H20 ( En frio )
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Prueba Rápida Paracetamol
Muestras: Orina, contenido estomacal, residuos de la escena.
Agregar la solución del reactivo a la muestra o a una solución etanólica de la muestra.
Positivo si :
Cloruro férrico: azul Folin-Ciocalteu: azul Liebermann: violeta Nessler: marrón (fugaz)
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Prueba Rapida Acido Borico
• Polvo blanco inodoro o escamas flexibles nacaradas o translucidas.
• Se encuentra como Ac. Borico ( H3BO3 ) o el bórax (tetraborato disodico).
• Utilizado como: Insecticida, fungicida, preservante de madera, agentes limpiadores y removedores.
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Prueba Rapida Acido Borico
• Pesar 50 gramos de la muestra y agregar 5 gotas de H2SO4 + 5 gotas de metanol y encender una llama.
• Positiva: Coloración verde en la llama
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PRUEBAS RÁPIDAS. 1. Reactivos.
2. Fenotiazinas.
3. Antidepresivos tricíclicos.
4. Betabloqueadores.
5. Cocaína.
6. Opio y derivados.
7. Anfetaminas.
8. Marihuana.
9. Paraquat y diaquat.
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REACTIVOS
• FPN: A 5 ml de solución acuosa de cloruro férrico (50 g/l) agregar 45 ml de solución de ácido perclórico (200 g/kg ó 20% p/p) y 50 ml de solución de ácido.
• Forrest: Mezclar 25 ml de solución acuosa de dicromato de potasio (2 g/l), 25 ml de solución de ácido sulfúrico (300 ml/l), 25 ml de solución de ácido perclórico (200 g/kg) y 25 ml de solución de ácido nítrico (500 ml/L).
• Nessler: Disolver 50 g de cloruro mercúrico y 35 g de ioduro de potasio en 200 ml de agua, realizar en frío. Disolver 50 g de hidróxido de sodio en 50 ml de agua, realizar en frío.
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REACTIVOS
• Reactivo de hipobromito de sodio: Disolver 0,5 ml de bromo elemental cuidadosamente y enfriando en 5 ml de solución de hidróxido de sodio (400 g/l).
• Tiocianato de cobalto
• Disolver 6 g de nitrato de cobalto y 18 g de tiocianato de potasio en 100 ml de agua.
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REACTIVOS
• Liebermann
• 1 g de nitrito de sodio y 10 ml de ácido sulfúrico
• Mandelin
• Disolver 0,5 g de vanadato de amonio en 100 ml ácido sulfúrico concentrado (d = 1,86).
• Marquis
• Mezclar 1 ml de solución de formaldehído con 9 ml de ácido sulfúrico concentrado.
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REACTIVOS
• Ninhidrina • Adicionar 0,5 g de ninhidrina a 10 ml de ácido clorhídrico y
diluir a 100 ml con acetona.
• Simón • Solución acuosa de carbonato sódico al 20%. • Solución etanólica de acetaldehído al 50%. • Solución acuosa de nitroprusiato de sodio al 1%.
• Duquenois • Disolver 2 g de vainillina y 0,3 ml de acetaldehído en 100 ml de
etanol. Guardar en frasco oscuro.
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FENOTIAZINAS
• En un tubo de ensayo servir 1 ml de orina.
• Agregar lentamente 1 ml de reactivo FPN
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ANTIDEPRESIVOS TRICÍCLICOS
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ANTIDEPRESIVOS TRICÍCLICOS
• Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de la escena.
• Reactivos FPN; Mandelín; Marquis; Forrest; Ácido sulfúrico; Lieberman
• Procedimiento: Agregar 0,5 ml de reactivo a la muestra, calentar en baño maría durante 3 min.
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ANTIDEPRESIVOS TRICÍCLICOS
Desipramina
El reactivo de Forrest
Imipramina
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BETABLOQUEADORESS
• ATENOLOL
• Muestras: orina, contenido estomacal, resto de la escena.
• Reactivos: Liebermann y Nessler
• Procedimiento: Agregar 0,5 ml de reactivo a la muestra, calentar en baño maría durante
• 3 min.
• Resultados: Color observado frente al reactivo de Liebermann: negro
• Nessler: amarillomarrón (ligero)
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ALCALOIDES
• Son sustancias tóxicas extraídas de las plantas, químicamente pueden definirse como sustancias vegetales con nitrógeno básico.
• PRUEBA DE TANRED • A la sustancia a estudiar, añada 3 gotas de agua si la sustancia
es en polvo. • Agitar y añadir 2 gotas de reactivo tanred. • Un precipitado amarillo lechoso, indica prueba positiva para
alcaloides
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COCAÍNA
• Metil benzoilecgonina
• La cocaína es un alcaloide obtenido de Erythroxylon coca y otras especies de Erythroxylon, o por la síntesis de ecgonina.
• Los metabolitos principales son la benzolilecgonina, ecgonina y metil ester ecgonina.
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COCAÍNA • Prueba de Scott – Tiocinata de Cobalto
• Se adicionan 5 gotas de Tiocianato de Cobalto a la sustancia sospechosa . Si se torna AZUL TURQUESA, indica resultado parcialmente positivo.
• A la sustancia AZUL se le adiciona una gota de acido clorhídrico concentrado (HCL), en presencia de cocaína el color azul cambia a ROSADO.
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COCAÍNA
A esta solución ROSA se le adicionan 5 gotas de Cloroformo, el color AZUL debe reaparecer nuevamente en la capa líquida inferior para indicar la presencia de cocaína.
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• El término opio se utiliza para denominar el extracto obtenido de la planta papaver somniferum
• Opiaceo sustancias derivadas del opio. (morfina, codeína)
• Opioides sustancias que actúan en los receptores opioides. Se dividen en sintéticos y semisintéticos.
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OPIOIDES
• Naturales: Morfina, codeína.
• Semisintéticos: heroína, hidromorfona, dihidrocodeína, naloxona.
• Sintéticos: meperidina, metadona, fentanilo, tramadol, remifentanilo.
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OPIO Y DERIVADOS
• PRUEBA DE MARQUIS
• En una placa para prueba a la gota se adiciona una mínima cantidad de la sustancia sospechosa.
• Se vierten 2 gotas de reactivo de marquís.
• La aparición de un color violeta oscuro indica resultado preliminar positivo para opio y sus derivados.
• Si aparece virando amarillo- naranja – marrón, es positivo para anfetaminas, SI es negro son anfetaminas con anillo sustituído.(MDMA y análogos)
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MORFINA, CODEÍNA Y HEROÍNA
• Se vierte pequeña cantidad de la sustancia en una placa para prueba de gota.
• Se añade 1 gota de reactivo ácido nítrico.
• Positiva para morfina= un color naranja que vira rapidamente a rojo y luego lentamente amarillo.
• Positiva para codeína: un color naranja que vira lentamente a amarillo.
• Positiva para heroína: un color amarillo que vira lentamente a verde claro
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CODEÍNA, METADONA, MORFINA
• Muestras: orina, contenido estomacal, restos de la escena. • Reactivos • Liebermann • Mandelin • Marquis • Procedimiento: Agregar 0,5 ml de reactivo a la muestra,
calentar en baño maría durante 3 min. • Resultados: Colores observados frente a los reactivos de
Liebermann: negro Mandelin: verde Marquis: violeta
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ANFETAMINAS
• La anfetamina es un líquido incoloro, de olor débil y sabor acre, se volatiliza lentamente a temperatura ambiente. Poco soluble en agua destilada, soluble en alcohol y éter, fácilmente soluble en ácidos minerales diluidos.
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ANFETAMINAS
• Reacción de Liebermann
• Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de la escena, polvos.
• Resultado: La aparición de un color rojo-naranja indica presencia de anfetaminas
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ANFETAMINAS
• Reacción de Marquis • Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de
la escena, polvos. • Procedimiento: colocar una pequeña cantidad de la
muestra (1 a 2 mg de polvo o una o dos gotas si se trata de un líquido) en una placa y agregar el reactivo de Marquís gota a gota y no más de tres gotas.
• Resultados: La aparición de un color anaranjado que cambia al pardo indica la presencia de
• anfetamina como de metanfetamina. • Sensibilidad: 1 mg.
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ANFETAMINAS
• Reacción con ninhidrina
• Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de la escena, polvos
• Agregar 0,5 ml de reactivo a la muestra, calentar en baño maría durante 3 min.
• Resultados: La aparición de un color rosado-anaranjado luego de calentar indica la presencia de anfetaminas.
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ANFETAMINAS
• Reactivo de Simón. • Colocar una pequeña cantidad de la muestra (1 a
2 mg de polvo o una o dos gotas si se trata de un líquido) sobre una placa de toque y agregar reactivo.
• Resultados: Produce un color azul la metanfetamina y otras aminas secundarias. La anfetamina y otras aminas primarias producen un color rosado que cambia lentamente a rojo cereza.
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MARIHUANA
• La marihuana es extraída de la planta cannabis sativa.
• La principal sustancia psicoactiva del cannabis es el tetrahidrocannabinol (THC), además, la planta contiene en total cerca de 60 cannabinoides (entre éstos: cannabinol, cannabigerol, cannabicromeno, cannabiciclol), que se presenta en muchas variedades, siendo la mas activa la Δ9-THC
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MARIHUANA
• También se puede mezclar en la comida o beber como té.
• La marihuana común contiene en promedio 5 % de THC
• La sin-semilla (botones y flores de la planta hembra) contiene en promedio 12 % de THC(- 1 % al 27%)
• El hachís ( resina gomosa de las flores de las plantas hembras) 10 % de THC
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MARIHUANA
• Prueba de Duquenois Levine:
• 2ml de Vainillina (0,4g en 20 ml de etanol al 95%) • 0,5 ml de acetoaldehído • 2 ml de ácido clorhídrico concentrado, si es positiva forma
un color verde azul o violeta. • se agita y se agrega 2 ml de cloroformo
• Resultado: el color violeta se extrae y pasa a la fase
orgánica. • Cabe mencionar que el cannabidiol no da esta reacción.
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PARAQUAT Y DIQUAT
• Prueba de ditionito • Disolver 100 mg de ditionito de sodio en 10ml de NaOH (hidroxido de sodio ) En un tubo de ensayo adicionar 5ml de orina. Agregar 1 ml de la solución de ditionito, y teniendo un tubo de control negativo, observar: AZUL: Paraquat Verde: diquat