Pseudomonaden und Pseudomonaden und AeromonadenAeromonaden

Shahla SoltanmohammadlouShahla Soltanmohammadlou

und Elisabeth Kuhnertund Elisabeth Kuhnert

PseudomonadenPseudomonaden

Familie PseudomonaceaeFamilie Pseudomonaceae gram negative Stäbchengram negative Stäbchen polar begeißeltpolar begeißelt strikt aerobstrikt aerob pH: bis 5pH: bis 5 Temp. 0°C- 43°CTemp. 0°C- 43°C Über 60°C letal!Über 60°C letal! keine Sporen keine Sporen Pyocyanin, Pyorubin,Pyocyanin, Pyorubin, FluoresceinFluorescein

Abb.: Farbstoffbildung von Pseudomaden http://www.lg1.ch/cpg/displayimage.php?album=12&pos=0

Abb.: Mikroskopie von Pseudomonas http://www.lg1.ch/cpg/displayimage.php?album=12&pos=0

PseudomonadenPseudomonaden Feucht, BiologischeFeucht, Biologische Abwasserbehandlung.Abwasserbehandlung. Meereswasser(3,5%)Meereswasser(3,5%) LM: Fäulnis (schleimig)LM: Fäulnis (schleimig) Kühlhausflora(P.putida,Kühlhausflora(P.putida, P.fluorescens)P.fluorescens) SauerstoffeliminierteSauerstoffeliminierte BedingungenBedingungenFettsäurenFettsäurenVorläuferVorläufervon Acetatvon AcetatSubstrat Substrat methanogener MO!methanogener MO!

Abb.: Wasserspenderhttp://www.stern.de/wissenschaft/ernaehrung/551649.html?nv=nl_hp_rt

Abb.: kontaminiertes Fleischhttp://www.wdr.de/tv/service/kostprobe/inhalt/20040216/b_1.phtml

PseudomonadenPseudomonaden

Malachitgrün- Pepton- Bouillon Malachitgrün- Pepton- Bouillon (20h bei(20h bei 36°C)36°C)TrübungTrübungVerdacht aufVerdacht auf P.aeruginesaP.aeruginesa

Cetrimid- Agar Cetrimid- Agar (20h bei36°C)(20h bei36°C)Farbstofproduktion Farbstofproduktion ((blau- grunblau- grun)) spricht für P. aeruginesa spricht für P. aeruginesa

Chloroform: Pyocyanin in Chloroform und Wasser Chloroform: Pyocyanin in Chloroform und Wasser löslich, Fluorescein in Wasser aber nicht in Chloroform löslich, Fluorescein in Wasser aber nicht in Chloroform löslichlöslich

Cytochromoxidasereagenz(Cytochromoxidasereagenz(positivpositiv)) Gramfärbung(Gramfärbung(negativnegativ))

TiterbestimmungTiterbestimmung

ZL- KA: Bei der unverdünnten Wasserprobe waren ZL- KA: Bei der unverdünnten Wasserprobe waren Pseudomonaden nachzuweisen.Pseudomonaden nachzuweisen.

AL-KL: Bei der I.Verdünnungsstufe waren AL-KL: Bei der I.Verdünnungsstufe waren Pseudomonaden noch nachweisbar.Pseudomonaden noch nachweisbar.

BR- I: 100ml und10ml+5ml3XMPB(+)BR- I: 100ml und10ml+5ml3XMPB(+) ZL- PKA: Bei I.Verdünnungsstuffe waren noch ZL- PKA: Bei I.Verdünnungsstuffe waren noch

Pseudomonaden nachweisbar.Pseudomonaden nachweisbar.

MPN- VerfahrenMPN- Verfahren

0

50

100

150

200

250

300

ZL- KA ZL-PKA AL-KA BR- I

0

200

400

600

800

1000

1200

MPN

LL

UL

MembranfilterverfahrenMembranfilterverfahren

Cetrimidagar-NKS, Nachweis von Pseudomonas

0

5

10

15

20

25

30

35

40

1 2 3 4 5 6 7 8

Gruppennummer

Kei

me/

ml

BW (1 ml)

TW

Diagramm: Vergleich der Keimzahlen

AeromonasAeromonas

Charakterisierung und NachweisCharakterisierung und Nachweis

EinordnungEinordnung

Abteilung: Abteilung: ProteobacteriaProteobacteria Klasse: Klasse: DeltaproteobacteriaDeltaproteobacteria Ordnung:Ordnung: AeromonadalesAeromonadales Familie: Familie: AeromonadaceaeAeromonadaceae Gattung Gattung AeromonasAeromonas

MorphologieMorphologie

gramnegatives gramnegatives KurzstäbchenKurzstäbchen

monopolare, monotriche monopolare, monotriche BegeißelungBegeißelung

keine Sporenkeine Sporen

Abb. 2: REM-Bild von Aeromonas 2)

Abb. 1: Mikroskopisches Bild (1000x) 1)

KrankheitsbilderKrankheitsbilder

Abb. 3: verendeter Krebs 3)

Abb. 4: mit Aeromonas infizierter Fisch 4)

Abb. 5: Krankheitsbild von Aeromonas 2)

VorgehensweiseVorgehensweise

Beimpfung von Beimpfung von

Ampicillin-Dextrin-Medium zur AnreicherungAmpicillin-Dextrin-Medium zur Anreicherung bei Gelbfärbung bei Gelbfärbung Verdacht auf Aeromonas Verdacht auf Aeromonas verschiedene Verdünnungsstufen zur Prüfung verschiedene Verdünnungsstufen zur Prüfung

des Keimgehaltes von Gewässerndes Keimgehaltes von Gewässern

MPN-VerfahrenMPN-Verfahren

EL AL-KA BW BR ZL-PKA AL-PKA TS ZL-KA

MPN/ml 0,6 23 2,3 0,44 44 24 2,3 35000

LL 0,85 5 0,5 5 0,5 9100

UL 4,2 110 11 110 11 130000

Tab. 1: MPN-Werte

EL =Elbwasser AL-KA = Ablauf KläranlageBW = Badewasser BR = BrunnenwasserZL-PKA = Zulauf Pflanzenkläranlage AL-PKA = Ablauf Pflanzenkläranlage TS = Talsperrenwasser ZL-KA = Zulauf Kläranlafe

Graphische DarstellungGraphische Darstellung

MPN-Werte für Aeromonas

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

EL AL-KA BW BR ZL-PKA AL-PKA TS ZL-KA*e3

Wasserprobe

MP

N/m

l

Diagramm: MPN-Werte in Abhänigkeit der Wasserprobe

EinzelkolonienEinzelkolonien

Gelbfärbung der Gelbfärbung der BouillonBouillon

Überimpfung auf Überimpfung auf GSP-AgarGSP-Agar

gelbe Kolonien gelbe Kolonien BestätigungsreaktionenBestätigungsreaktionen

Abb. 6: mit Aeromonas bewachseneGSP-Agarplatte 5)

BestätigungstestsBestätigungstests

Lactoseverwertung Lactoseverwertung auf ENDO-Agar auf ENDO-Agar (positiv)(positiv)

Oxidasetest (positiv)Oxidasetest (positiv) Katalasetest (positiv)Katalasetest (positiv) Äsculinspaltung Äsculinspaltung

(positiv)(positiv) OF-Test (positiv)OF-Test (positiv) Voges-Proskauer Voges-Proskauer

(positiv)(positiv)Abb. 7: OF-Test mit Aeromonas 5)

API mit AeromonasAPI mit Aeromonas

Identifizierung von NichtenterobakteriaceenIdentifizierung von Nichtenterobakteriaceen Oxidase positiv Oxidase positiv api 20 NE api 20 NE Aeromonas hydrophila: 7577755Aeromonas hydrophila: 7577755

Abb. 8: ApiNE-Test 5)

LiteraturangabenLiteraturangaben1) http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/

cacnhomvikhuanchuyeu3.htm2) http://web.umr.edu/~microbio/BIO221_2004/ A_hydrophila.htm3) http://www.indian-ocean.org/bioinformatics/prawns/

GIF/DISEASE/Brownspo.htm4) http://www.practicalfishkeeping.co.uk/pfk/pages/

show_article.php?article_id=2635) eigene Fotos Dr. Münch (2007): „Praktikumsskript zum Wassermikrobiologischen

Praktikum Sommersemester“ Hans G. Schlegel (1992): „Allgemeine Mikrobiologie“, Georg Thieme Verlag,

Stuttgart