que impartirá el dr. kiyoshi kita graduate school...
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Seminario del Instituto de Fisiología Celular:
Diversity of parasite mitochondria as a drug target
Que impartirá el Dr. Kiyoshi Kita
Graduate School of Medicine, The University of Tokyo
Viernes 7 de marzo de 2014, 12:00 horas Auditorio Antonio Peña Díaz del propio Instituto
Entrada libre
http://www.ifc.unam.mx/
Composición química de una bacteria (E. coli)
Molécula % del peso seco (2.8x10-13 g)
• Macromoléculas totales 96
Proteínas 55
Polisacáridos 5
Lípidos 9.1
ADN 3.1
ARN 20.5
• Monómeros totales 3
Aminoácidos y precursores 0.5
Azucares y precursores 2
Nucleótidos y precursores 0.5
• Iones inorgánicos 1
Total 100%
Microorganismos
Fuente de energía
Oxido-reducción Quimiótrofas
Luz Fotótrofas
Compuestos orgánicos Quimioheterótrofos Fuente de carbono
Compuestos orgánicos Quimioheterótrofos
CO2
Compuestos orgánicos Fotoheterótrofos
CO2 Fotoautótrofos
Compuestos inorgánicos Quimiolitótrofos
Compuestos Orgánicos Mixótrofos
CO2 Litoautótrofos
Fuente de carbono
Fuente de carbono
Clasificación
Macronutrientes en los medios de cultivo
Elemento Forma encontrada en el medio ambiente
Forma química en los medios de cultivo
Carbono (C) CO2, compuestos orgánicos Glucosa, malato, acetato, piruvato, cientos de otros compuestos o en mezclas
complejas (extracto de levadura, peptona y otros)
Hidrógeno (H) H2O, compuestos orgánicos H2O, compuestos orgánicos
Oxígeno (O) H2O, O2, compuestos orgánicos
H2O, O2, compuestos orgánicos
Nitrógeno (N) NH3, NO3, N2, compuestos orgánicos nitrogenados
Inorgánicos: NH4Cl, (NH4)2SO4, KNO3, N2
Orgánicos: Aminoácidos, bases nitrogenadas de
nucleótidos y otros compuestos de nitrógeno;
PEPTONAS
Macronutrientes en los medios de cultivo
Elemento Forma encontrada en el medio ambiente
Forma química en los medios de cultivo
Fósforo (P) PO43- KH2PO4, Na2HPO4
Azufre (S) H2S, compuestos orgánicos de S, metales (FeS, CuS,
ZnS, NiS y otros)
Na2SO4, Na2S2O3, Na2S, cisteína u otros compuestos
orgánicos con azufre
Potasio (K) K+ en solución o varias sales de K
KCl, KH2PO4
Magnesio (Mg) Mg2+ en solución o varias
sales de Mg MgCl2, MgSO4
Macronutrientes en los medios de cultivo
Elemento Forma encontrada en el medio ambiente
Forma química en los medios de cultivo
Sodio (Na) Na+ en solución o como NaCl y otras sales de Na
NaCl
Calcio (Ca) Ca2+ en solución o como
CaSO4 y otras sales de Ca CaCl2
Fierro (Fe) Fe2+ o Fe3
+ en solución como FeS, Fe(OH), otras muchas
sales de Fe
FeCl3, FeSO4 y otras soluciones de fierro (o Fe3
+, EDTA, Fe2
+ citrato)
Micronutrientes en los medios de cultivo
Elemento Función celular
Cobalto Vitamina B12, transcarboxilasa
Cobre Proteínas, citocromo c oxidasa, SOD
Manganeso Activador enzimático, SOD.
Molibdeno Enzimas, nitrogenasa de molibdeno, nitrato reductasa.
Níquel Hidrogenasa, monóxido de carbono deshidrogenasa.
Selenio Hidrogenasas, aminoácido selenio-cisteína.
Tungsteno Formato deshidrogenasa.
Vanadio Nitrogenasa de vanadio.
Zinc Anhidrasa carbónica, alcohol deshidrogenasa.
Factores de crecimiento Vitamina Función
Ácido p-amino benzoico (PABA) Precursor del ácido fólico
Ácido fólico Metabolismo de un carbono, transferencia de grupos metilo
Biotina Biosíntesis de ácido grasos, beta descarboxilaciones, fijación de CO2
Niacina (ácido nicotínico) Precursor del NAD+; transferencia de electrones en reacciones redox
Cobalamina (B12) Reducción y transferencia de fragmentos de un solo carbono.
Riboflavina Precursor de FAD, FMN, transporte de electrones.
Ácido pantoténico Precursor de la CoA
Tiamina (B1) Alfa descarboxilaciones, transcetolasas.
Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina) Transformaciones de aminoácidos y cetoácidos.
Grupo Vitamina K, quinonas Transportadores de electrones (ubiquinonas, menaquinonas, etc.)
Medios de Cultivo Composición Naturales o Complejos
Sintéticos
Estado Líquido
Fluido 0.1% de agar
Semisólido 0.2 a 0.8% de agar
Sólido 1.5 a 2% de agar
Uso Enriquecidos o nutritivos
De enriquecimiento
Selectivos
Diferenciales
De transporte
De mantenimiento o conservación
Pruebas Bioquímicas
Clasificación por composición de los medios de cultivo
Naturales o complejos. Son medios que no tienen una composición definida. Sangre, suelo, frutas, etc. o medios que contengan ingredientes cuya composición no esté completamente definida como el extracto de levadura, peptonas o el agua de la llave.
Los medios sintéticos son aquellos cuya composición en completamente conocida, sus componentes son extrapuros, como en los medios empleados para investigación.
Clasificación por estado de los medios de cultivo
Medios líquidos. Generalmente tienen componentes completamente solubles. Son útiles en la propagación de microorganismos pero tienen la desventaja de que no se pueden detectar contaminaciones.
Agar Extraído a partir de un tipo de algas rojas (de los géneros Gelidium y Gracilaria), Agar es un gelificante que se emplea en Japón desde el siglo XV. En 1859 se introdujo en Europa como alimento característico de la cocina china y a principios del siglo XX se empezó a aplicar en la industria alimentaria. Es una fuente de fibra y tiene capacidad de formación de gel en proporciones muy bajas. Permite la elaboración de gelatinas calientes.
Clasificación por estado de los medios de cultivo
Los medios fluidos contienen agar en una concentración aproximada a 0.1%, el medio tiene una consistencia líquida pero la presencia de agar disminuye la velocidad de disolución de O2 ambiental. Se emplea generalmente en el cultivo de microorganismos anaerobios y microaerofílicos.
Medio fluido de tioglicolato con resarzurina (indicador
de oxido/reducción)
Clasificación por estado de los medios de cultivo
Los medios de cultivo semisólidos contienen de entre el 0.2 y el 0.8% de agar, son suaves y permiten observar la movilidad de los microorganismos. Esta consistencia es utilizada en los medios de transporte, las pruebas de movilidad, pruebas bioquímicas y pruebas genéticas.
Clasificación por estado de los medios de cultivo
Los medios sólidos contienen entre 1.5 a 2.0% de agar, esto los hace tener una consistencia dura y forman un soporte para el crecimiento microbiano. Se emplean para cultivo, aislamiento, diferenciación, cuantificación, pruebas de sensibilidad y en algunos casos para conservación (inclinados).
Uso. Medios enriquecidos Contienen componentes ricos nutritivamente y permite el crecimiento de microorganismos no exigentes. Ejemplos: • Agar cuenta estándar (cuenta en placa) • Infusión cerebro y corazón (BHI) • Agar Soya Tripticaseína (TSA) • Agar nutritivo (AN) • Agar sangre (AS)
Uso. Medios de enriquecimiento
Contiene componentes y condiciones que permiten el desarrollo de un tipo microbiano y disminuyen la velocidad de crecimiento de la flora acompañante. Ejemplos:
• Caldo selenito Detección de
Salmonella, Enterobacter sakazakii y Yersinia enterocolitica
• Agua peptonada pH 9 Detección de V. cholerae
• Caldo tetrationato Pre-enriquecimiento para Salmonella
Uso. Medios selectivos Contienen componentes que permiten el desarrollo de un tipo microbiano e inhiben el crecimiento de los demás microorganismos. Ejemplos: • Agar cetrimida (Pseudomonas) • Caldo bilis verde brillante (coliformes totales) • Agar Bacillus cereus • Agar Sabouraud cicloheximida (hongos patógenos primarios)
Uso. Medios diferenciales Contiene componentes que permiten diferenciar las actividades metabólicas de los microorganismos inoculados. La presencia de indicadores o el uso de reveladores después de la incubación ponen de manifiesto la actividad. Ejemplos: • Agar DNAsa • Agar almidón • Agar cromogénico para Candida
Uso. Medios diferenciales y Selectivos
• Agar sal y manitol (MSA) (estafilococos) • Agar eosina azul de metileno (EMB)
(bacterias entéricas Gram negativas) • Agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato)
Shigella • Agar Endo (coliformes) • Agar Mc Conkey (Bacterias Gram negativas)
Uso. Medios de conservación
Algunos medios de cultivo son empleados para la conservación temporal de microorganismos, como son:
• Medio sólido en caja a 4ºC (hasta 1 semana).
• Medio de agar inclinado 4ºC (hasta 2 semanas) con sello de glicerol estéril a 4ºC (varios meses dependiendo del microorganismo).
• Medio fluido de tioglicolato con carne molida con sello de aceite mineral estéril a temperatura ambiente (varios meses dependiendo del microorganismo).
En la liofilización también se emplea la leche descremada (años).
Son medios que se emplean para el transporte de muestras sin alterar la viabilidad y la proporción de microorganismos. Tienen consistencia semisólida, con amortiguador de pH y reducidos en nutrientes para preservar la proliferación de microorganismos por varias horas.
Las muestras se recolectan con asas o con hisopos de alginatos que no inhiben a los microorganismos.
• Medio Amies
• Medio de Stuart
Uso. Medios de transporte