التنفسي الجهاز من Aspergillus spp . جنس أنواع وتشخيص عزلالمزمنة ل الرئوية باألمراض لمصابين

م. . .أ فالح زهراء جاسم عبيد نيران د*عزيز

/ العلوم كلية القادسية جامعة الصيدلة كليةالقادسية/ جامعة

الخالصة

من اإلصابات الرئوية المزمنة.Aspergillus sppهدفت الدراسة الحالية إلى عزل أنواع الجنس في محافظة الديوانية , حيث جمعت عينات القشع من مرضى العيادة االستشارية لألمراض الص%%درية والتنفسية , وأخضعت العينات الى الفحص المجهري المباشر والتشخيص ال%%زرعي والجزي%%ئي بتقني%%ة

PCR(عزل%%ة عائ%%دة إلى جنس 107, أظه%%رت النت%%ائج أن)Aspergillus spp( من%28.08 وبنس%%بة ) Aspergillus( عزلة , وعلى مستوى األنواع التابع%%ة لجنس 381المجموع الكلي للعزالت والبالغ ) spp

.Aسجل fumigatus(تاله الفطر%29.9 أعلى نسبة مئوية للتردد ) A. niger( وع%%زلت%28.9بنسبة ) .Aك%%ذلك األن%%واع flavus وA. terreus و A. nidulans( 18.7 بنس%%بة% %%, 12.14% %%, (على2.8%

وال%%تي تعت%%برA.ustus وA.penicillioides و A.parasiticus وA. ochraceusالتوالي , كما تم عزل االن%%واع حسب الدراس%%ات المت%%وفرة ق%%د ع%%زلت ألول م%%رة في مدين%%ة الديواني%%ة ك%%ذلك دلت النت%%ائج على أن

التشخيص الجزيئي ذو كفاءة عالية في التشخيص .

PCR التشخيص الجزيئي بتقنية , .Aspergillus spp الدالة: الكلمات

ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ

مستل من رسالة ماجستير الباحث الثاني. البحث*

Isolation and Identification Aspergillus spp. Isolated from the Lower Respiratory tract of people with chronic lung diseases

Dr. Neeran Obied Jassim Zahraa Falah Aziz

College of Pharmacy College of Science AL-Qadisiyia Univ.

Abstract

Study aims to isolate isolates fungus Aspergillus spp. Isolated from injuries chronic lung in the province of Diwaniyah, where the samples were collected sputum from patients clinic Advisory diseases thoracic and respiratory, and subjected the samples to a microscopic examination of direct

and diagnosis pea and molecular technology, PCR, and the results showed (107) isolation of its ownership to the genus Aspergillus spp. and by (28.08%) of the total isolates and adult (381) isolation, while the level of species belonging to the genus Aspergillus spp. record A. fumigatus highest percentage of frequency (29.9%), followed by the fungus A. niger (28.9%), as well as the isolated species A. flavus and A. terreus and A. nidulans (18.7%, 12.14%, 2.8%), respectively, have also been isolated species A. ochraceus, A.parasiticus , A.penicillioides and A.ustus which are considered according to available studies has been isolated for the first time in the city of Diwaniya. The results also showed the level of diagnosis of type that molecular diagnostics has proved highly

efficient in the diagnosis .

Keywords: Aspergillus spp. , Molecular diagnostic PCR technology

Introduction المقدمة

الفطر من المختلفة باألنواع اإلصابة Aspergillusتعد spp. الفطرية اإلصابات أنواع أكثر من . كما تعتبر) Mixed infection() Prescott et al., 2005)شيوعا واألكثر تكراراً من بين األخماج المختلطة Opportunisticاألنواع التابع%%ة له%%ذا الجنس ممرض%%ة انتهازي%%ة ) pathogenicتنتش%%ر بك%%ثرة في الترب%%ة )

Airboneوالهواء , وتتمكن من النمو في أي وسط حي , وتحدث اإلصابة بها نتيجة الستنش%%اق االب%%واغ إذ تتمكن من الوصول إلى األسناخ الرئوية بأضعف تيار هوائي نتيجة لحجمها الصغير, والتي تؤدي إلى

Pulmonary(حدوث داء الرشاشيات الرئوي aspergillosis( , ( , بوج%ود عوام%ل تزي%%د2008 )اس%ماعيل من ش%دة اإلص%%ابة للمض%%يف , وال%%تي تجع%%ل الفط%%ر ق%%ادر على تج%%اوز الخط%%وط الدفاعي%%ة األساس%%ية للمضيف , كما تسهم في تخريب النس%يج ال%ذي تس%%توطنه مث%%ل العم%%ر , الجنس , الض%عف أو ال%وهن المناعي , السمنة , األمراض الخبيثة , مرض الس%كري وتن%اول األدوي%%ة المثبط%ة للمناع%ة كالمركب%ات

ومرافقة مع بعص االمراض الرئوية المزمنة التي تعتبر مه%%يئ لح%%دوث اإلص%%ابة)steroid(الستيرويدية .2012مثل السل الرئوي وخراجات الرئة والربو والتهاب القصبات الم%%زمن أو الح%%اد )الجن%%احي , %)

أساليب وراثية وفسلجية متعددة لتجنب دفاعات المض%%يف Aspergillusتتخذ الفطريات ومنها جنس مسببة بذلك المرض واإلصابة بواسطة افرازه%%ا األنزيم%%ات الخ%%ارج خلوي%%ة وال%%ذي يع%د واح%%د من اهم

Alpsoy(عوام%%ل الض%%راوة الكامن%%ة في ه%%ذا الفطر , Aspergillosis( . وعموم%%اً يع%%ني مص%%طلح 2010 .Aااللتهاب الذي تسببه فطريات fumigatus في الجهاز الرئوي القصبي ويمكن لألنواع األخ%%رى من

.A)الجنس مثل flavus , A. niger , A. terreus(ان تصيب الرئة لتسبب طيف واس%%ع من األم%%راض وغالب%%اً م%%امن تفاعالت فرط الحساس%%ية الى االص%%ابة الجهازي%%ة المباش%%رةالرئوية التي يتراوح مداها

وبشكل عام ف%%ان ش%%دة .تكون األعراض والعالمات السريرية غير واضحة وال تدل على نوع المسبب Inesاالصابة تعتمد على مناعة المضيف وض%%راوة الفط%%ر . ) et al., 2011. ونظرن%%اً لزي%%ادة إص%%ابات(%

Aspergillusالحساس%%ية والرب%%و في الس%%نوات األخ%%يرة وانتش%%ار الح%%االت المش%%جعة لإلص%%ابة بفط%%ر استهدفت دراستنا الحالية عزل والتشخيص المولرفولوجي والمجهري والجزيئي لألنواع التابعة لجنس

Aspergillusولكون الفطريات الممرضة وفي أغلب األحيان تظهر تباينن%%ا واض%%حاً ح%%تى بين الع%%زالت , ( ل%%ذلك تم اللج%%وء إلى اس%%تخدام التقني%%ات الجزيئي%%ة المعتم%%دة2012العائدة للنوع نفسه ) شريف ,

.في الكشف عن وجود األنواع في هيئتها الجسمية أو التكاثرية كما DNAعلى دراسة تتابع قواعد ال أنها تكشف وجود األنواع التي ال يمكن زراعتها والتي ال تعرف بإتباع طرق الفحص أو العزل التقلي%%دي

. وحتى متبقيات الفطريات الميتة أو المنقوصة

Materials and Methods المواد وطرق العمل

العزل :

التنفسية السفلى التهاب المجاري (تم عزل الفطريات المختبرة من حاالت LRTIs(حيث . جمعت عينات القشع من مرضى العيادة االستشارية لألمراض الصدرية والتنفسية والذين يع%%انون من سعال مصحوب بقشع مستمر لمدة طويلة وغير مس%%تجيب للعالج وأج%%ري التح%%ري االولي عن وج%%ود

)KOH 10%(الفطريات بأتباع الفحص المجهري المباشر وباستخدام كمية من هيدروكسيد البوتاسيوم بأمرارها على سطح)Swabs (. وفي نفس الوقت زرعت العينات باستخدام العيدان الخشبية المعقمة

SDA( Sabouraud(أطباق بالستيكية أو زجاجية معقمة حاوية على الوس%%ط الغ%%ذائي Dextrose Agar ْم( لم%%دة )121 , وعقمت بالمؤصدة بدرج%%ة )Biomerieuxوالمحضر حسب تعليمات الشركة المجهزة

للعزل 15 , باستخدام الطريقة المباشرة وحضنت. ) Direct plate method() Warcup , 1950(( دقيقة ْم ولمدة سبعة أيام مع المتابعة اليومية .28 ±2األطباق عند درجة حرارة

التشخيص العزالت على مستوى النوع :

في Pitt and Hocking , (1997 و))Quinn et al., (2002أتبعت مفاتيح التصنيف المذكورة من قبل وذلك بدراسة الخص%%ائص الش%%كلية المورفولوجي%%ة والمجهري%%ة منAspergillusتشخيص عزالت جنس

حيث ش%كل المس%%تعمرة ولونه%%ا وقوامه%%ا ون%%وع الغ%زل الفط%%ري وال%رؤوس الكونيدي%ة وش%كل ول%ون الكونيدات وأبعادها ومن ثم أخذت عينة من ك%%ل مس%%تعمرة ولقحت باس%%تخدام تقني%%ة تلقيح األوس%%اط

Czapek Yeast Extract Agar (CZA) & Malt Extractالزرعية على وسطين زرعين اساسين للتشخيص Agar (MEA) وكذلك شخصت باس%%تخدام تقني%%ة ال%%زرع, ْم 37 ْم و 25 وحضنت هذه عند درجة حرارة

Konemanعلى الشريحة الزجاجية ) et al., . وبعد ذل%%ك تم تش%%خيص الع%%زالت بتقني%%ة سلس%%ة)1978 Logotheti تبع%%اً لطريق%%ة )PCRتفاعالت البلم%%رة et al., Primers وك%%ذلك اس%%تخدمت الب%%وادئ )2009

..Aspergillus sppالمقترحة فيها كتشخيص توكيدي لألنواع جنس

على الوس%%ط ال%%زرعي من العزالت المنتخب%%ة DNA أستخلص الحامض النووي : DNAأستخالص ( Bioneer)لش%%ركة ا منجه%%زة مالع%%دة الم%%ع المرفقة , ثم أتبعت الخطوات المثبتة و(SDA)الصلب

Ethidium . وبعد ذلك مزج جزء منه مع صبغة بروميد االثي%%ديوم DNAالستخالص bromideعلى هالم TEB مل محلول دارئ (100) % في 1.5األكاروز المحضر بتركيز Buffer بترك%%يز (1X) ملى م%%والر

( لغرض التأكد من نقاوته بطريقة الترحيل الكهربائي . Bio Basicالمجهز من شركة )

50 ُحض%%ر م%%زيج التفاع%%ل )بحجم : PCRضير محلول التفاعل لسلسلة تفاعالت البلمرةتح ®AccuPower( لسلسلة تفاعالت البلمرة بأتب%%اع الخط%%وات المثبت%%ة والمرفق%%ة م%%ع الع%%دة مايكرو ليتر

PCR PerMix المجهزة من الشركة(Bioneer) وكاالتي:

التفاعل أنابيب ُحضر مزيج الحاوية على مكونات AccuPower® PCR PerMix tube في . للجين%%ات االربع%%ة الخاص%%ة ب%%األنواعتفاعل أنزيم البلمرة مع إضافة المكونات االخرى لمزيج التفاعل

.sppجنس Aspegillus قد تم تجهيزها من شركة Bioneer((( 1 الجدول %.)بع%%د إكم%%ال تحض%%ير م%%زيج نقلت األن%%ابيب , و ث%%وان5 لمدة Vortexتفاعل إنزيم البلمرة تم غلق األنابيب مع المزج بعناية بجهاز

لتفاعل أنزيم البلم%%رة ألج%%راء عملي%%ةGencycler من نوع Thermocyclerالى جهاز المضخم الحراري DNAالتضخيم Amplifation) DNA ) على وف%%ق الظ%%روف المثلى لل%دوراتبعد أن تم برمجته ً Thermo cycling conditionsالحرارية .)Logothetic et al., 2009( لما ورد في طبقا

DNA Primers (DNA(البادئات ال( : 1الجدول )

( مايكرو ليتر من نواتج تض%%خيم الجين%%ات(10 مزج :الترحيل الكهربائي لناتج تفاعالت البلمرةbuffer( م%%ايكرو لي%%تر من دارئ التحمي%%ل (3مع loadingعلى س%%طح ص%%فيحة زجاجي%%ة نظيف%%ة . رف%%ع

حيث رحلت , %1.5 بتركيز األكاروزالمزيج بواسطة ماصة دقيقة الى الحفرة المخصصة في هالمً كهربائيالنماذج لتحدي%%د الحج%%وم دقيق%%ة 55ملي أمب%%ير ولم%%دة 100 ف%%ولت وب80 بفولتية مق%%دارها ا

2000-100( القياس%%ي ع.بالمقارنة م%%)PCR(والمضخم والذي يمثل نواتج المستخلص DNAالجزيئة لل bp( DNA Ladder ألش%%عة ف%%وق البنفس%%جيةل وعرضت ورفعت صفيحة الهالم من الجهاز , وبعد ذلك

التقطت ص%%ورة الهالمو , جية ن%%انوميتر بواس%%طة ص%%ندوق األش%%عة ف%%وق البنفس%%(320)بطول م%%وجي . كاميرا باستخدام

: تم تق%%دير حساس%%ية االختب%%ارات. حســاب حساســية وخصوصــية االختبــارات التشــخيص 3Sensitivityوخصوصيته Specificity باالعتماد على (Thrusfield , 1986) : وبالشكل التالي

المجهري )الفحص

KOH)

الفطري الزرع نتائجالمجموع

PositiveNegative

PositiveABa + b

NegativeCDc + d

a + cb + da+c+b+dالمجموع

الحساسية = وهي قابلية االختبار على الكشف عن حاالت الموجبة للنمو الفطري وتحسب بالمعادل%%ة الخصوص%%ية = وهي قابلي%%ة االختب%%ار على الكش%%ف عن الح%%االت الس%%البة للنم%%و)a/)a+cالتالي%%ة :

. )d/)b+dالفطري وتحسب بالمعادلة التالية :

Results and Discussion والمناقشة النتائج

نتيجة موجب%%ة لتح%%ري األولي عن جنس )KOH )10% اوالً : أظهرت نتائج الفحص المجهري المباشرAspergillus ( عينة قشع36في ) ( ( عين%%ة س%%البة من المجم%%وع الكلي للعين%%ات والب%%الغ )370مقابل

( عين%%ة قش%%ع , وتم اختب%%ار حساس%%ية الفحص بالمقارن%%ة بنت%%ائج ال%%زرع المخت%%بري . فبلغت نس%%بة406 وكما ) %90.64( , في حين بلغت خصوصية الفحص ) %7.29حساسية الفحص المجهري المباشر )

Al-Ameri(( . ج%%اءت النت%%ائج مطابق%%ة م%%ع م%%ا توص%%لت الي%%ه 2مبين في الجدول ) ,( في ك%%ون2005 الفحص المجهري المباشر ال يمكن االعتماد عليه في اختبار كشف عن وجود أو عدم وجود الفطريات

)Niazi , 2000 (وأن ظهور بعض نتائج السالبة أو الموجبة كاذبة بالفحص المجهري المباشر يعود إلى

نوعالقواعد البادئ ناتج )'5→3' (ةالنيتروجينيتسلسل حجم

التضخيم

PEPICCA GTA CGT TGG TCT TCA ACT CF*

150 bpCAT CAC CAT GAC CAT CGT TTG CT**R

PEPOCGA CGT CTA CAA GCC TTC TGG AAAF

200 bpCAG ACC GTC ATT GTT CTT GTCR

PEXTAT GTC TTC CCC TGC TCCF

250 bpCTA TGC CTG AGG GGC GAAR

ATACTA TTG TAC CTT GTT GCT TCG GCGF

450bpAGT TGC AAA TAA ATG CGT CGG CGGR

Pseudallescheriaعدة أسباب منها ظهور فطريات أخرى مث%%ل sp . و Scopulariopsis sp.ال%%تي ق%%د تربك الفحص أو تعطي تشخيص%%اً خاطئ%%اً , وق%%د تك%%ون ناتج%%ة عن البكتيري%%ا الالهوائي%%ة وليس%%ت أص%%ابه فطرية , أو وجود المايكوبالزم وغيرها من المسببات , إضافة إلى احتمالية حدوث الخط%%أ التجري%%بي ,

Batraلذا فأن عزل الفطر على الوسط الزرعي ي%%وفر وس%%يلة مفي%%دة ج%%دا من أج%%ل التش%%خيص ) et al.,2006 .)

القشع . (:2جدول ) لعينات الفطري والزرع المجهري الفحص نتائج

المجهري الفحصالمباشر

(KOH)

الفطري الزرع نتائجالمجموع

PositiveNegative

Positive7 29 36Negative89 281 37096310406المجموع

وأنواعه المعزولةAspergillusنسبة اإلصابة بفطر ثانياً :

اعتماداً على نتائج الفحوصات المظهرية , المزرعية منها والمجهرية في تشخيص العزالت اثبتت على وسط )وذلك بعد تنميتها, ( عينة قشع 96 تعود إلى )Aspergillus( عزلة عائدة إلى جنس 107)

CZA وباالعتماد على المفاتيح التصنيفية المعتمدة في عدد من المراجع ومنها )Quinn et al., (2002( (26.35)% نسبة ظهور قد شكل .Aspergillus spp جنسيكونوبذلك , Pitt and Hocking , (1997و)

من المجموع الكلي(28.08(% وبنسبة تكرار ( عينة , 406 والبالغة )من المجموع الكلي للعينات فطرية . وهذا بدوره يعتبر مؤشر عامل خطورة صحية قد( عزلة381للعزالت الفطرية والبالغة )

يكون له دوُر في تفاقم الحاالت المرضية الرئيسة وظهور أعراض التحسس لدى مراجعي العيادة االستشارية لألمراض التنفسية والصدرية , حيث كان ثاني أكثر األجناس تكراراً بعد الخمائر مما يشير

كذلك إلى دورها في إحداث التهاب الجهاز التنفسي الفطري والذي قد يكون محدد أو أدنى مما من المستوطنات الطبيعية لتجويف المجاريCandidaللفطريات الخيطية خاصة وأن خميرة

( .1 (. كما موضح بالشكل )2006التنفسية مما يفسر ظهور الخمائر بأعداد عالية )الشبلي,

( المسجلة بالدراسة الحالية سبق وأن سجلت في دراسة Aspergillus وأن نسبة العزل لجنس Al-Ameri ( والتي أجرت دراسة عن مسببات االلتهابات الرئوية في محافظة الديوانية , ك%%ذلك2005

( , وقد بينت العديد من الدراسات ح%%ول2012( و)الجناحي , 2006تتفق النتائج مع دراسة )الغالي, ( ويعود2006العالم أن الفطريات الرمية هي التي تسود في الجهاز التنفسي ومنها ما ذكره )عبود ,

ذلك إلى طبيعة نمو هذه األحياء حيث تعتبر القناة التنفسية مك%%ان مناس%%ب لنموه%%ا فه%%و مك%%ان رطب ودرجة حرارة مناسبة مع وج%%ود المغ%%ذيات فض%%الً عن العوام%%ل المؤهل%%ة كانس%%داد الرئ%%وي الم%%زمن و

( Leonar Rocio et al., 2011السكري و االستخدام المفرط للمضادات الحياتية )

( النسبة المئوية لتردد اإلصابة الفطرية في عينات القشع .1الشكل )

أعلى نسبة مئويةA.fumigatus سجل الفطرAspergillusأما على المستوى األنواع التابعة لجنس .A%( في حين س%%جل 28.9 بنسبة )A.niger( وتاله الفطر (29.9 %كانت لإلصابة وكانت flavusو A.

terreus( على التوالي , وأن سيادة هذه األنواع االربعة جاءت مطابق%%ة لم%%ا12.14(و)18.69% نسبة )% A. ochraceus , A. parasiticus, كما تم في هذه الدراسة عزل الفطريات Al-Ameri ) 2005(وجدته

( في(2006للمرة األولى على المستوى المحلي في عينات القشع وبذات النسبة التي سجلها عب%%ود وللمرة)A. penicillioides , A. ustus )0.93%محافظة ذي قار, وكذلك سجل أقل نسبة عزل للنوعين

األولى في محافظة الديوانية من ح%%االت الته%%اب الجه%%از التنفس%%ي , ومن الض%%روري إح%%داث اإلص%%ابة التجريبية بهذه الفطريات مستقبالً للتأكد من أمراض%%يته وعوم%%ل الض%%راوة ال%%تي تمتلكه%%ا . كم%%ا م%%بين

(.2( والشكل )3بالجدول )

المعزولة خالل الدراسةAspergillus( : المجموع الكلي والنسبة المئوية لألنواع جنس 3جدول )من المرضى القناة التنفسية

جنس أ Micheli exLink Aspergillusنواع النسبة المئويةعدد العزالتالمعزولة

للتكرار)%(Aspergillus fumigatus Fersenium3229.90

Aspergillus niger Van Tieghen.3128.97

Aspergillus flavus Link & Fries.2018.69

Aspergillus terreus Thon.1312.14

Aspergillus nidulans(Eidam) Wint.32.80

Aspergillus ochraceus K.Wilh.43.73

Aspergillus parasiticus Speare.21.86

Aspergillus penicillioides Spegazzini.10.93

Aspergillus ustus (Bainier)Thom & Church.10.93

الكلي العزالت 107100مجموع

في عينات القشع .Aspergillus( النسبة المئوية لتردد األنواع التابعة لجنس 2الشكل )

لبعض العزالت :PCRثالثاً : التشخيص ألتوكيدي بطريقة ال

, والقائمة علىspp. Aspergillusأن اعتماد الطريقة التقليدية لتشخيص األعفان ومنها جنس تحديد المعاير المورفولوجية , لم تعد كافية بس%%ب ت%%داخل ه%%ذه المع%%اير م%%ع غيره%%ا من األن%%واع ال%%تي

Samson ن%%وع )300 والتي تزي%%د عن Aspergillusتصنف ضمن االنواع األخرى لجنس , 1994ً ( , فض%%ال عن التباين الوراثي فيما بينه%%ا , فم%زارع األحي%اء المجهري%%ة وإن انتمت إلى المجموع%ة نفس%ها تتب%اين وراثياً في خصائص نموه%%ا وص%%فاتها المورفولوجي%%ة , وال يع%%ني التب%%اين بالض%%رورة االختالف في البن%%اء الوراثي السيما بين المزارع والع%%زالت ال%%تي تنتمي إلى الجنس والن%%وع ذاته%%ا ب%%ل ق%%د يك%%ون ن%%ابع عن

( . لذا فقد قمن%%ا في ه%%ذه2013استجابة المزارع أو العزالت للظروف البيئية )محي الدين وجيجان , .A عزل%%ة نقي%%ة عائ%%دة إلى )20(الدراسة بتشخيص الجزيئي لم%%ا يرب%%و عن niger , A.

fumigatus , A. flavus , A. terreus المدروسة للجينات تضخيم نواتج أن حجوم لألنواعRFLP فوجد ,%% 150المنتخبة قد بلغت 200 %%, 250 %%, زوج قاعدة نيتروجينية لكل نوع على التوالي , مم%%ا450

( . واتفقت نت%%ائج ه%%ذه الدراس%%ة م%%ع م%%ا5( و )4أعطى فرصة التميز بينها . كما موضح فب الش%%كل )Logothetic(وجده et al., 2009( ( عزلة من جنس 59 الذي تمكن من دراسة )spp. Aspergillus

.A( عزلة تعود الى 13تعود إلى ستة أنواع مختلفة , من بينها ) niger(عزل%%ة 17 و )A. fumigatus( و لجينات معينة ,Primers وباستعمال بوادئ لجينات معينة A. terreus( عزالت 8 و )A. flavus( عزلة 16

من PCR ه%%ذه الجين%%ات بطريق%%ة ampliconsانه يمكن التميز بين هذه األنواع بتحلي%%ل ن%%واتج تض%%خيم خالل الترحيل الكهربائي.

على هالم االكاروز .DNA للالكهربائي الترحيل : ( :3الشكل)

, PEP(نواتج تضخيم الجينات (4الشكل ) PEX , ATE لعزالت الفطر ) Aspergillus spp.بأستعمال .PCRتقنية للفطر) )1,2,3,4,5العزالت لجين A. nigerالعائدة موجبة نتيجة , PEPأظهرت العزالت

للفطر) )6.7.8.9.10 لجين A.fumigatusالعائدة موجبة نتيجة ))11,12,13,14,15والعزالت, PEXأظهرتللفطر لجين A.terreusالعائدة موجبة نتيجة ATEأظهرت

.PCR بأستعمال تقنية Asp. flavusلعزالت الفطر ( PEPO(نواتج تضخيم الجين : (5الشكل )

المصادر :

(.كتاب الطفيليات والفطور الطبية , منشورات جامعة2008أسماعيل , محمد طاهر ,عبير الكفري ) صفحة(. 458البشري .) كلية الطب–دمشق

في نمو Cordia myxa( . تأثير مستخلصات نبات البنبر2012 فرقد عبد اإلله الجناحي ),الجناحي من مرضى األخماج الرئوية في مدينة الديوانية . رسالة ماجستير, كلية الفطريات المعزولة

جامعة القادسية .–التربية

Candida albicans( . تأثيرات العزالت السريرية لخميرة المبيضات 2006الشبلي , ماجد كاظم عبود)دراسة بايلوجية ونسيجية مرضية في محافظة الديوانية . أطروحة دكتوراه-جامعة القادسية .

468( . الفطريات الطبية . الذاكرة للطباعة والنشر . )2012شريف , فياض محمد شريف )صفحة(.

(. التأتيرات الخلطية لبعض المضادات الفطرية ومستخلصات2006الغالبي , حيدر حبيب حطيحط ) –نبات الثوم واألس تجاه بعض الفطريات الرئوية األنتهازية . رسالة ماجستير , كلية التربية

جامعة القادسية .

( . دراسة بعض الجوانب البايولوجية للفطريات والخمائر األنتهازية2006عبود , ميثاق ستار ) محافظة ذي قار .–المعزولة من عينات سريرية مختلفة من مستشفى الناصرية العام

جامعة ذي فار.–رسالة ماجستير , كلية التربية

منPOLGALACTYRONASE(. إنتاج أنزيم 2013محي الدين , محمد عمر ورقيباء علي جيجان ) المتحمل للحرارة والمنتجة لألنزيم وتشخيص العزلة األكثر أنتاجاً. مجلة Aspergillus nigerعفن

.97-105-ص 44-المجلد 1 العدد–العلوم الزراعية العراقية

.Koneman, E.W.;Roberts, g.d.;& Wright , S.H.(1978). Practical Laboratory mycology . The Williams & Wilkins Company Baltmore, U.S.A.

Al-Ameri, N.O.(2005). A study of taxonomy Epidemiolory of pulumonary mycotic infectionin Al-Qadisyia Province .Ph.D.Thesis.Collage of Education-Al-Qadisyia Universit

Alpsoy, L.(2010). Inhibitory effect of essential oil on aflatoxin activities . Afr . J. Biotechl.,9(17);2474-2481p.

Batra, V.,B. Asmar and J. Y. Ang. (2006). Aspergillosis. eMedicine D:/Medical Mycology/eMedicine-Aspergillosis Article by Vandana Batra MD.htm.

Collee, J.G. ; Fraser, A.G.; Marmion, B.P. & Simons ,A.(1996). Practical medical Microbiology .4th

ed. Churchill Livingston. New York .978p.

Ines, F.M.; Almedia,H.M.; Lourdesrdes, M.;Sara,M.O.;Santos,M.S.; Freitas, J.M.;Gasper, N.C.& Fernando, (2011). Mycobiot and aflatoxin B1 In feed for farmed sea Bass

Leonar, R.E. C.& Rocio, o. (2011). Malaurtiration and Gastrointestestional and Respiratory Infection in children : Apublic healthy problem. 1174-1205p.

Logotheti,M.;A.Tseleni ; G.,Arseenis, and N., Legakis. (2009). Multiplex PCR for the discriminatioation of A. fumigatus A. flavus ,A, niger and A. terreus. Journal of Micobiologgical methods . 79;209-211p.

Niazi ,A.D.(2000). Statistical Analysis In Medical Research . Republic of Iraq . AL.- Nedrien university.

Obrien , H. E. , J. L. Parrent, J. A. Jackson, J-M. Moncalvo and R. Vilgales . (2005). Fungal Community Analysis by Large-Scale Sequencing of Environmental Samples . Appl Environ Microbiol.,71(9):5544-5550..

Pitt, J.I. and A.D.,Hocking (1997) . Fungi and food Spoilage. Blackie Academic professional, 366-368p.

Prescott, C.M.;Harley , J.P.;Klein ,D.A.(2005). Micobiology . 6th edn ., Mcgraw-Hill Companies., U.S.A. 924p

Quinn, P.J.; Carter . M.G.; markey , B.&Carter , G.R.(2002). Clinical Veterinary Microbiology, M. Wlof, London.

Samson, R.A.(1994). Current systematics of the genus Aspergillus.In the genus Aspergillus . From Taxonomy and to industrial Application . Plenum press, London ; 261-279.

Thrusfield, M.(1986). Veterinary epidemiolory, Butterworth & Co.Ltd, London

Warcup, J.H.(1950). The soid plate method for Isolation of fungi from soid. Nature Iondo. 66:118- 120p.

Wilkins, R.L.:Dextex , J.R. and Gold , P.M. (2007). Respiratory Disease Case Study Approach to Patient Care. 3rd ed.F.A.Davis Company. California.