Ragadozó atka reprodukciós teszt talajban

OECD 226

Készítette:

Magai Zsolt

Teszt jellemzése

• A teszt célja, hogy értékeljük a vegyi anyagok hatását a talajban élő atkafajok (Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer) reproduktivitására. Ezáltal becsülhetjük az adott faj növekedési rátáját.

• Reproduktivitás itt azt jelenti, hogy hány ‘fiatal’ élőlény marad a teszt végén.

• Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer reprezentálja a tesztben a ragadozó atkákat. Ez a faj, könnyen beszerezhető, tenyészthető a laboratóriumi körülmények között.

• A teszt végpontja a reprodukciós ráta (utódok száma edényenként).

• Időtartam: 14 nap

A vizsgálat elve

• Az atkák a vizsgált anyag különböző koncentrációinak vannak kitéve. A teszt elején 10 felnőtt nőstény egyedet juttatnak a teszt edényekbe (szinkrontenyészetből). A hímeket nem használják fel.

• A tesztben felhasznált nőstények 28-35 naposak. A vizsgálat 14. napon ér véget (a nőstények talajba tevésétől számítva). Ekkora érik el a ‘fiatalok’ a deutonymph szakaszt fejlődésükben.

• Amit mérünk az az, hogy hány ‘fiatal’ egyed van egy kísérleti edényben és emellett túlélő nőstények száma.

• Meghatározzuk az ECx-et (pl. EC10, EC50) vagy a nem megfigyelhető hatást okozó koncentrációt (NOEC). Előbbi meghatározásához 12 mérési pontot veszünk fel.

A Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer

•A Lealapidae családjába tartozó atkafaj.•Mindenféle talajon megélnek és fő táplálékul egyéb atkák, fonálférgek, collembolák szolgálnak. Élelemhiány esetén váltanak kannibalizmusra. •Ízeltlábúak, minden lábon tövis és sörte található, utóbbit ásásra használja.•4 pár lába van, ebből az első pár antennaként funkcionál.•A hím 0,55-0,65 mm hosszú, és súlya 10 - 15 µg. •A nőstény 0,8-0,9 mm hosszú, és súlya 50-60 µg.

• Az atkák kb. 7 nap alatt fejlődnek petéből lárvává, és 28-35 naposan használjuk fel a teszthez.

• Egy nőstény egyed élhet 100 napig is, ezalatt akár 100 tojást is lerakhat.

Vizsgált anyag tulajdonságai• Vízben való oldhatóság• log Kow (oktanol-víz megoszlási hányados)• GőznyomásEzek lehetőleg ismertek legyenek. Ami még fontos lehet:• A vizsgált anyag sorsa a talajban, biotikus, abiotikus

degradáció.

• A tesztelés során vízben oldható vagy oldhatatlan anyagokat használunk. A teszt nem alkalmazható illékony anyagokra, azaz azokra, amelyeknek a Henry állandója, vagy a levegő / víz megoszlási hányadosa nagyobb mint egy, vagy olyan anyagokra, amelyeknél a gőz nyomása meghaladja a 0,0133 Pa-t 25 ° C-on.

A referencia anyag

• A referencia anyagra meg kell határozni ECx (EC20, EC50) és/vagy a NOEC értékeket annak bizonyításához, hogy a laboratóriumi vizsgálati körülmények megfelelőek, és ellenőrzésként, hogy a vizsgált szervezetek reakciója idővel nem változott.

• Két referencia anyagot használnak:– Dimetoát (CAS 60-51-5)– Bórsav (CAS 10043-35-3)

A teszt menete

• Előszőr létrehozzuk a szinkrontenyészetet.– Az optimális tenyésztési hőmérséklet 20 ± 2 ° C. – A generációk nagyrészt fedik egymást.

• A nőstényeket egy edénybe tesszük, majd adjunk hozzá megfelelő mennyiségű táplálékot.

• Két-három napig lehetővé tesszük, hogy lepetézzenek, majd eltávolítjuk a nőstényeket.

• 28-35 nappal később kivesszük a szinkron tenyészetből a hasonló korú kifejlett élőlényeket és a tesztedénybe juttatjuk.

• Összeállítjuk a talajunkat

– Ehhez a vizsgálathoz egy mesterséges talajt kell használni. A mesterséges talaj áll a következő összetevőkből:

• 5% tőzegmoha• 20% kaolin agyag• 75% ipari homok

• Kiszámítjuk, hogy megfelelő-e a talaj maximális víztartó képessége (20-30%-nak kell lennie, és a későbbiekben nem térhet el ennél 10%-nál jobban. )

• S = vízzel telített szubsztrát + cső tömege + szűrőpapír tömege • T = tára (+ szűrőpapír tömege) • D = szubsztrát száraz tömege

• TESZTELÉS (10 ‘felnőtt’ nőstény atkára és 20 g mesterséges talajra van szükség mintánként, kontrollonként )

• 14 nap után vége a tesztelésnek• Megszámoljuk a túlélő atkákat (külön a lárvákat,

‘fiatalokat’ és külön a ‘felnőtteket’).

Vizsgálati edények és eszközök

Edények

• A vizsgálati edények 3 - 5 cm átmérőjű üvegből vagy más, kémiailag inert anyagból készültek.

• Csavaros fedeleket előnyben részesítik.

• Olyan fedél kell, mely megakadályozza az atkák elszökését.

Eszközök

•Szabványos laboratóriumi eszközökre van szükség, különösen a következőkre:• Szárító szekrény; • Sztereomikroszkóp; • pH-mérő; • Megfelelő pontosságú mérleg; • Megfelelő felszerelés a hőmérséklet szabályozásához; • Hőmérséklet-vezérelt inkubátor

Vizsgálati jelentés tartalma• Vizsgálati anyag

– azonosítás (név, CAS-szám)– fizikai-kémiai tulajdonságok

• Tesztorganizmusok– azonosítása– tenyészet leírása, jellemzése (melyik fejlődési szakaszban vannak a

tesztorganizmusok)• Vizsgálati körülmények

– eljárás leírása– előkészítés leírása– talaj maximális víztartó képessége– alkalmazott technológia leírása– edények mérete, talaj száraz tömege– hőmérséklet, fény intenzitás, sötét-világos ciklus hossza– pH és víztartalom mérés– táplálék fajtája, etetési időpontok

• Vizsgálati eredmények– Fiatal egyedek száma a teszt végén– Felnőtt egyedek száma a teszt végén és ebből mortalitás (%) számítása– ECx és/vagy NOEC meghatározása

A teszt érvényessége

• A következő kritériumoknak kell teljesülnie:– Az átlagos ‘felnőtt’ nőstény

mortalitás nem haladhatja meg a 20%-ot.

– Az átlagos ‘fiatalok’ száma egy (10 ‘felnőtt’ nősténynél bevezetett) mérésnél min. 50-nek kell lennie a vizsgálat végén.

– A fiatal atkáknak a száma ne legyen 30% felett a teszt végén.

Forrás•OECD GUIDELINE FOR TESTING OF CHEMICALS 226 – Predatory mite (Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer) reproduction test in soil;http://oberon.sourceoecd.org/vl=19224635/cl=13/nw=1/rpsv/cw/vhosts/oecdjournals/1607310x/v1n2/contp1-1.htmKépek:•http://www.aguafilter.hu/atka3.jpg •http://www.biokontroll.hu/cms/index.php?option=com_content&view=article&id=202:ragadozo-atkak-a-lathatatlan-segitk-2&catid=112:bionovenyektermesztese&Itemid=43&lang=hu •http://daam.lapunk.hu/?modul=oldal&tartalom=621211