Sistema ABOSistema ABO

Dra. Fabiana Bastoscbastos@fmed.uba.arDepartamento de Hemoterapia e InmunohematologíaHospital de Clínicas “José de San Martín”

PERSPECTIVA HISTORICAPERSPECTIVA HISTORICA

1901 Karl Landsteiner El mas importante de todos los

sistemas de grupo sanguíneo en la práctica transfusional

Primer sistema de grupo sanguíneo descubierto

PERSPECTIVA HISTORICAPERSPECTIVA HISTORICA

Único sistema de grupo sanguíneo en el cual existen anticuerpos circulantes predecibles dirigidos hacia antígenos ausentes en los glóbulos rojos de todos los individuos

Sin exposición previa por transfusión o embarazo

PERSPECTIVA HISTORICAPERSPECTIVA HISTORICA

La transfusión de glóbulos rojos ABO incompatibles produce la lisis intravascular inmediata de las células

RHPT inmediata y severa Aun hoy se reporta como causa de

muerte asociada a la transfusión

PERSPECTIVA HISTORICAPERSPECTIVA HISTORICA

La tipificación ABO es la prueba inmunohematológica mas utilizada

La detección de incompatibilidad ABO entre donante y receptor es la base de las pruebas de compatibilidad pretransfusionales

HERENCIAHERENCIA

1924 Bernstein describe teoría de la herencia del sistema

Demuestra que un individuo hereda un gen ABO de cada progenitor y que ambos determinan que antígenos están presentes en la membrana del GR

HERENCIAHERENCIA

Expresión codominante Locus en el cromosoma 9 Ocupado por gen A, B o O en cada

cromosoma Genes A y B codifican

glicosiltrasferasas específicas Gen O es considerado amorfo

HERENCIAHERENCIA

FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS

Interacción de genes de 3 locus separados:– Hh– ABO– Se

No producen antígenos Producen glicosiltransfersas

específicas que adicionan azúcares inmunodominantes a una sustancia precursora común

FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS

Sustancia precursora Tipo 2 Galactosa terminal unida a N-acetil-

galactosamina mediante uniones β 1→4

Sustancia precursora Tipo 1 Galactosa terminal unida a N-acetil-

galactosamina mediante uniones β 1→3

β 1→4

FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS

FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS

Gen

Glicosiltransferasa

Azúcar inmunodomin

anteAntígeno

H α-2-L-fucosiltransferasa L-fucosa H

Aα-3-N-

acetilgalactosaminil-transferasa

N-acetil-galactosamina A

Bα-3-D-

galactosiltransferasa

D-galactosa B

FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS

GENETICA MOLECULARGENETICA MOLECULAR

Los genes ABO se componen de 7 exones

Exones 6 y 7 codifican para el dominio catalítico de las glicosiltransferasas

Reacciones serológicas débiles se deben a la presencia de sustituciones de aa producidas por– Deleciones– Mutaciones– Recombinación de genes

ANTIGENOSANTIGENOS

Gen A produce mayor cantidad de transferasa específica que el gen B

Gen A: 810.000 a 1.170.000 sitios antigénicos

Gen B: 610.000 a 830.000 sitios antigénicos

Ambos A y B: 600.000 sitios antigénicos A y 720.000 sitios antigénicos B

ANTIGENOSANTIGENOS

Desarrollados a los 37 días de la vida fetal

El RN tiene del 25 al 50% del número total de sitios antigénicos del adulto

La expresión de antígenos A y B se desarrolla por completo a los 2 a 4 años de vida y permanece constante

La expresión fenotípica puede variar con la edad, raza, interacciones genéticas y en estados de enfermedad

ANTIGENOSANTIGENOS

Presentes en la membrana de – Glóbulos rojos– Plaquetas– Linfocitos– Células endoteliales– Células epiteliales

ANTIGENOS SOLUBLESANTIGENOS SOLUBLES

Presentes en secreciones normales – Saliva– Lagrimas– Bilis– Leche– Jugo gástrico– Liquido amniótico

ANTIGENOS SOLUBLESANTIGENOS SOLUBLES

Presentes en fluidos patológicos – Derrame pleural– Peritoneal– Pericárdico– Quistes de ovario

ANTIGENOSANTIGENOS

En membrana de GR pueden ser:– Glicolípidos– Glicoproteínas– Glicoesfingolípidos

En secreciones son:– Glicoproteínas

ANTIGENOS SOLUBLESANTIGENOS SOLUBLES

Gen Se codifica α-2-L-fucosiltransferasa 80% de la población que hereda un gen

secretor Se (SeSe o Sese) es secretora Modifica sustancia precursora tipo 1

para expresar sustancia H que puede ser modificada para expresar sustancia A o B en las secreciones

Glicoproteínas

SUBGRUPOS ASUBGRUPOS A

1911 von Dungern describe A1 y A2 de acuerdo a la reacción de GR con anti-A y anti-A1

99% de individuos A son A1 o A2 – 80% A1 o A1B– 20% A2 o A2B

Diferencia es cualitativa y cuantitativa Reaccionan con igual intensidad con

reactivos anti-A

REACTIVOS ANTI-A y ANTI-HREACTIVOS ANTI-A y ANTI-H

Anti-A1:– Anti- A1 humano absorbido (anti-A de

individuos B absorbido con GR A2)

– Lectina Dolichos Bilorus Anti-H

– Lectina Ulex Europaeus

SUBGRUPOS ASUBGRUPOS A

Diferencias cuantitativas:– Menor número de sitios antigénicos– Menor cantidad de transferasas– Cadenas menos ramificadas

Diferencias cualitativas:– Diferencias en la estructura antigénica– Sutil diferencia en las transferasas

– Formación de Anti- A1 en algunos subgrupos

SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A

Diferencias cuantitativas Gen A1 produce mayor concentración

de α-3-N-acetilgalactosaminil-transferasa– Convierte casi toda la sustancia H en

820.000 a 1.700.000 sitios antigénicos A1

en los GR adultos– Gen A2 produce solo entre 240.000 y

290.000 sitios antigénicos En ambos el azúcar inmunodominante

es N-acetil-galactosamina

SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A

Diferencias cualitativas 1 a 8% de A2 y 22 a 35% de A2B

producen anti-A1

A1 presentan antígeno A y A1

A2 solo presentan antígeno A

SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A

Cantidad de sustancia H

O > A2 > B > A2B > A1 > A1B

SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A

4 formas diferentes de Ag. H – H1 y H2 cadenas rectas no ramificadas

– H3 y H4 cadenas completamente ramificadas

H1 y H2 son convertidas a antígenos Aa Ab por transferasas A1 y A2

H3 y H4 son convertidas a antígenos Ac Ad por transferasas A1

SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A

Mas sustancia H remanente en GR A2 (H3 H4)

En algunos individuos A2 – muy poco Ac – no hay Ad

Anti-A1 dirigido a determinantes Ac Ad

SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A

Transferasa B es mas eficiente que la A en convertir sustancia H en el antígeno correspondiente

Transferasa A2 falla completamente

A2B pierde componentes Ac Ad y produce anti-Ac y Ad (anti-A1)

RN deficiencia de H3 y H4 (Ac y Ad)

SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A

Glóbulos rojos A1:– Aa Ab Ac Ad

– H3 y H4 completamente convertidos en A1

Glóbulos rojos A2:– Predominantemente Aa Ab

– Sitios antigénicos H3 y H4

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

Se reconocen por discrepancias ABO

< 1% Características:

– Disminución de sitios antigénicos A– Variación en la aglutinación con anti-

AB– Variación en la detección de Ag H

– Presencia o ausencia de anti-A1

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

Métodos para diferenciar fenotipos débiles A3; Ax; Aend; Am; Ay; Ael

Prueba directa con anti-A, anti-AB anti-H Inversa con GR A1 A2

Técnicas de adsorción-elusión con anti-A Búsqueda de sustancia A y H en saliva Búsqueda de glicosiltransferasas en

suero Descartar enfermedades

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

A3

Patrón de aglutinación en campo mixto con anti-A y anti-AB

35.000 sitios antigénicos por GR Actividad débil en suero de

α-3-N-acetilgalactosaminiltransferasa

Heterogeneidad de enzimas aisladas en diversos individuos A3

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

Individuos A3 se dividen en 3 grupos de acuerdo a reacción de transferasas:– Grupo 1: reacciona a pH 7 y tiene

baja actividad– Grupo 2: no detectable– Grupo 3: reacciona a pH 6 y muestra

1/3 de la actividad normal en A1.Puede convertir O en A sin patrón A3

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

Pueden presentar Anti-A1 Se detecta sustancia A en

individuos secretores Alelo dominante del gen ABO Heterogeneidad molecular

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

Ax

No aglutina con anti-A Aglutina con la mayoría de anti-AB 4.000 sitios antigénicos por GR No se detecta transferasa en suero Puede detectarse fácilmente con

técnicas de adsorción-elusión Producen anti-A1

Solo se detecta H en secretores

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

Aend

Campo mixto con anti-A anti-AB < 10%

3.500 sitios antigénicos solo en los GR que aglutinan

No se detecta transferasa en suero Puede producir anti-A1

Solo se detecta H en secretores Variantes de Aend : Afinn y Abantu

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

Am

No aglutina o muy débilmente con anti-A

200 a 1.900 sitios antigénicos por GR No se detecta transferasa en suero Puede confirmarse con técnicas de

adsorción-elusión Cantidad normal de sustancia A y H

en secretores

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

Ay

No aglutina con anti-A y anti-AB 200 a 1.900 sitios antigénicos por GR Trazas de transferasa en suero Técnicas de adsorción-elusión menos

actividad en eluido que Am

Sustancia A y H en secretores menos que normal

Mutación familiar. No es alelo de ABO

SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A

Ael

No aglutina con anti-A y anti-AB Solo detectable por adsorción-

elusión No se detecta transferasa en suero Solo sustancia H en secretores Usualmente presenta anti-A1

Puede presentar anti-A Alelo raro del locus ABO

SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B

Métodos para diferenciar fenotipos débiles

B3; Bx; Bm; Bel

Tipo y potencia de aglutinación con anti-B, anti-AB anti-H

Presencia o ausencia de aglutininas en suero

Técnicas de adsorción-elusión con anti-B

Búsqueda de sustancia B y H en saliva Producida por alelos de gen B

SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B

B3

Patrón de aglutinación en campo mixto con anti-B y anti-AB

Transferasas en suero pero no en membrana

Alelo raro locus ABO Ausencia de anti-B en suero Cantidad normal de sustancia B en

secretores

SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B

B3

Aglutinación débil con anti-B y anti-AB

No presenta transferasas en suero o en membrana

Alelo raro locus ABO Presencia de anti-B débil en suero Cantidad aumentada de sustancia

H y B en secretores

SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B

Bm

No aglutina con anti-B y anti-AB Técnicas de adsorción-elusión con anti-B Presenta transferasas con poca actividad Alelo raro locus ABO o interacciones

genéticas Presencia de sustancia H y B en

secretores Mas frecuente en Japón

SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B

Bel

No aglutina con anti-B y anti-AB Técnicas de adsorción-elusión con

anti-B No presenta transferasas en suero Puede presentar anti-B débil en

suero Solo sustancia H en secretores

FENOTIPO BOMBAYFENOTIPO BOMBAY

1952 Bhende Genotipo hh Genes ABO presentes sin expresión 130 fenotipos reportados en el

mundo No presentan antígenos A, B y H en

membrana Fenotipo O en prueba directa No reacciona con anti-H

FENOTIPO BOMBAYFENOTIPO BOMBAY

Categoría 1: deficientes de H no secretores hh sese– presenta anti-A, anti-B, anti-AB en el

suero– Potente anti-H de amplio rango térmico

en suero– Ausencia de fucosiltransferasa en suero– Presencia de transferasa A y B en suero

– Solo compatibles con GR Oh

FENOTIPO BOMBAYFENOTIPO BOMBAY

Categoría 2: parcialmente deficientes de H no secretores– Expresan formas débiles de antígeno A y

B– Técnicas de adsorción-elusión– No se detecta transferasa H– Producido por gen mutante de H que

produce bajos niveles de transferasa– Toda la sustancia H se convierte en A y B – Anti-H en suero menos potente que Oh

– Ah, Bh y ABh

FENOTIPO BOMBAYFENOTIPO BOMBAY

Categoría 3: Fenotipo para-Bombay hh Se – Expresan formas débiles de antígeno A B y

H– Aglutinados solo por lectina anti-H– Técnicas de adsorción-elusión revelan H en

GR– Anti-IH reactivo a baja temperatura en

suero– Cantidad normal de sustancia H A y B en

saliva – Se detecta transferasa H débil

– Oho ; Oh

A ; OhB ; Oh

AB

Errores tipificación Errores tipificación ABOABO

CAUSAS DE ERRORCAUSAS DE ERROR

Identificación incorrecta de materiales

Identificación incorrecta de muestras

Errores administrativos Registro de resultados incorrecto

CAUSAS DE ERRORCAUSAS DE ERROR

Confusión o mezcla de muestras Relación suero-células inapropiada Reactivos contaminados o

inactivados Material de vidrio sucio

CAUSAS DE ERRORCAUSAS DE ERROR

Falla en la interpretación de hemólisis

Temperatura de reacción > 20°C Centrifugación insuficiente o

excesiva Centrifugas mal calibradas

DISCREPANCIAS ABO

GRUPO 1GRUPO 1Pérdida de reactividad del anticuerpo Edad:

– RN: producción de anticuerpos entre 3 y 6 meses de vida

– Ancianos: disminución de la producción de anticuerpos

Drogas inmunosupresoras Quimerismo: doble población de

GR que produce campo mixto

GRUPO 1GRUPO 1Pérdida de reactividad del anticuerpo Enfermedades:

– Hipogamaglobulinemia asociada a Leucemias y linfomas

– Agamaglobulinemia congénita– TMO – Inmunodeficiencias

Dilución por transfusión de plasma Subgrupos de ABO

GRUPO 1GRUPO 1ResoluciónAumentar la reacción en la prueba inversa Incubar a mezcla a TA durante 15-30

min Incubar a mezcla a 16°C o a 4°C

durante 15-30 min Utilizar autocontrol y control con GR “O”

para evitar autoaglutininas frías Quimerismo: transfusión de sangre o

TMO, EXT o HFM

GRUPO 2GRUPO 2Pérdida de reactividad del antígeno Genotipos inusuales: subgrupos A o B

con expresión antigénica disminuida. Enfermedad: leucemia aguda o

linfoma de Hodgkin pueden deprimir la expresión antigénica

Sustancias específicas de grupo en gran concentración: inactivan el suero al usar sangre entera (Ca estómago y páncreas, quiste de ovario)

GRUPO 2GRUPO 2Pérdida de reactividad del antígeno Antígenos adquiridos: acción de Gram-

o debido a alteraciones del intestino grueso (Ca colon y recto u obstrucción intestinal) Mecanismos: adsorción de polisacáridos bacterianos a los GR (Proteus mirabilis)

Anticuerpos contaminantes en los reactivos contra Ag de baja frecuencia

Anticuerpos anti acriflavina (anti-B)

GRUPO 2GRUPO 2Resolución

Resolver subgrupos de A Interrogar sobre enfermedad de

base Uso de GR lavados (exceso

sustancia grupo específica y anticolorantes)

GRUPO 2GRUPO 2Resolución Acidificar Anti-B a pH6 o investigar

presencia de sustancia A en secretores (Ag B adquirido)

Probar diferentes lotes de antisueros para evitar la presencia de anticuerpos contra Ag de baja

GRUPO 3GRUPO 3Anormalidades plasmáticas

Formación de Rouleaux o pseudoaglutinación

Aumento GG: – discrasia de células plasmáticas– Mieloma Múltiple– macroglobulinemia de Waldenström

Elevación de fibrinógeno Expansores plasmáticos: dextrán

GRUPO 3GRUPO 3Resolución

Agregar solución fisiológica en el tubo

Utilizar GR lavados

GRUPO 4GRUPO 4Anticuerpos adicionales Autoanticuerpos:

– aglutinación espontánea por auto Ac fríos

– pacientes con AHAI caliente– Causada por drogas

Anti-A1: en individuos A2 o A2B

Anticuerpos irregulares Poliaglutinación: alteración de la

superficie

GRUPO 4GRUPO 4Resolución

Autoanticuerpos fríos: – Lavar GR a 37°C– Autoadsorción

Autoanticuerpos calientes– Tratar GR con Cloroquina

Anticuerpos irregulares: uso GR Ag negativo

Determinar el tipo de poliaglutinación utilizando lectinas

Muchas Gracias