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SALMONELLA SPP. EN HECES, HISOPOS CLOACALES Y HUEVOS DE
GALLINAS PONEDORAS: GALLINAS PONEDORAS: ESTUDIO PRELIMINAR
AUTORES:
Cristina García BoverPablo Catalá GregoriJosé Miguel Soriano del CastilloAna Lorena Tudón GómezVictoria Benítez MiñanaLorena Andreu SerraIsaac Granero Villarroya
1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA
2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES
1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA
2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES
RIESGO PARA LA SALUD PÚBLICA: CAUSANTE DE TOXIINFECCIÓN ALIMENTARIA
Antecedentes y relevancia
Salmonella:2ª en nº de casos
Agentes causantes de toxiinfecciónalimentaria UE 2007 (EFSA, 2009)
Serotipos más frecuentes aisladosen humanos UE 2007 (EFSA, 2009)
2ª en nº de casos1ª en nº de brotes
Antecedentes y relevancia
Alimentos implicados en los brotes humanos de Salmonella, 2007 (EFSA, 2009)
Desconocido; 11,7 % Otros; 21,9%
El alimento másfrecuentemente
implicado en los brotes son los
HUEVOS Y OVOPRODUCTOS
N = 590
Productos de panadería; 13,7%
Huevos y derivados; 42%
Comidas preparadas; 5,9%
Carne de cerdo y derivados; 4,7%
OVOPRODUCTOS
Resumen datos salmonelosis en humana UE 2007 (EFSA, 2009):
• Salmonella ocupa el segundo puesto en nºde casos y el primero en número de brotes.
• 31,1 casos por 100.000 hab. de media en la UE.
Antecedentes y relevancia
• Disminución desde 2005.• Mayoría de los casos en niños de 0 a 4 años.• Pico estacional a finales de verano y otoño.• S. Enteritidis es el serotipo más frecuente aislado.• España es el país con mayor prevalencia en
gallinas ponedoras de la UE (27.1%).
Etiología
Enterobacteriaceae
Salmonella
Enterica Bongori
FAMILIA
GÉNERO
ESPECIEEnterica Bongori
Enterica Salamae DiarizonaeArizonae Houtenae Indica
+2500 serotipos
SUBESPECIE
SEROTIPO
Rodríguez Ferri, E. 2003
Enteritidis
Typhimurium
Programa Nacional:
Agentes zoonóticos a controlar en
gallinas ponedoras
Etiología
• Diversidad antigénica:O : H1 : H2
• Género + especie + subespecie + serotipo
Antígenos
somáticos
Antígenosflagelares
fase 2
Antígenosflagelares
fase 1
• Género + especie + subespecie + serotipo-Ej: Salmonella enterica enterica EnteritidisA nivel práctico: S. Enteritidis
Patogenia
Infecciones por Salmonella en aves
Sintomáticas Asintomáticas
Salmonella Gallinarum Salmonella Enteritidis
Sal
ud A
nim
al
Sal
ud P
úblic
a
Salmonella GallinarumSalmonella PullorumSalmonella arizonae
Salmonella EnteritidisSalmonella Typhimurium
Sal
ud A
nim
al
Sal
ud P
úblic
a
Específicas (aves)Inespecíficas
(aves, hombre)
Hoy en día son pocofrecuentes en la
avicultura industrial
AVES pueden ser
portadores asintomáticos
Salmonella en huevos
Contaminación verticalContaminación horizontal
Ambiente
Aparato reproductor
Interior del huevo
Cáscara
Interior del huevo
1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA
2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES
1.Relación entre resultados positivos a Salmonella en una explotación de gallinas ponedoras :
Objetivos
2. Caracterizar cepas aisladas:• Serotipado• Macrorestricción genómica utilizando la técnica de electroforesis en
campo pulsante (PFGE: Pulsed Field Gel Electroforesis).
1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA
2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES
Explotación avícola en estudio
• Explotación de 4 naves con una capacidad total de 150.000 gallinas ponedoras.
• Alojadas en jaulas de 12 animales en baterías de 6 alturas.
• Anexo II del RD 3/2002: Legislación vigente en • Anexo II del RD 3/2002: Legislación vigente en materia de bienestar animal.
• Mantenidos a 22ºC con una iluminación de 16h diarias.
• Vacunación: dos dosis de vacuna viva (S. Enteritidis; 2 y 8 semanas).
• Declarados positivos a S. Enteritidis las 24 semanas de edad en control oficial y autocontroles.
Toma de muestra
Seis huevos de 1 día desde
la fecha de puestapor jaula
Interior Exterior
Tres muestrasindividuales
de hisopos cloacales por jaula.
Una muestra colectiva de heces
de más de 150 gramos por jaula.
50 jaulas
TOTAL = 100 muestrasInterior Exterior
TOTAL = 150 muestrasTOTAL = 50 muestras
Aislamiento e identificación de Salmonella spp.MUESTRAS DE HECES, HISOPOS CLOACALES Y
HUEVOS EXTERIOR
HUEVOS INTERIOR
(ALIMENTOS)
ISO 6579:2002 Amd.1:2007
ISO 6579:2002. Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of Salmonella spp.
ISO 6579:2002/Amd. 1:2007. Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of Salmonella spp. Amendment 1: Annex D: Detection of Salmonella spp. in animal faeces and in environmental samples from the primary production stage.
ISO 6579:2002
Aislamiento e identificación de Salmonella spp.Cuatro etapas sucesivas:1. Preenriquecimiento en medio líquido no
selectivo.2. Enriquecimiento en medio selectivo:
3. Siembra e identificación.4. Confirmación de identidad.
Heces, hisopos cloacales y huevos exterior : MEDIO SEMISÓLIDO
Rappaport-Vassiliadis semisólido modificado MSRV
Huevos interior: MEDIO LÍQUIDO Caldo Muller-Kauffmann MKTTn
Caldo Rappaport-Vassiliadis con soja RVS
1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA
2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES
Salmonella spp. hisopos, heces y huevos
ESTADÍSTICA (Statgraphics)
• Existen diferenciassignificativas depositividad a Salmonella
spp. entre las matrices(p<0.05).
• Positividad:Heces>Hisopos y huevos ext.>>Huevos int.
Serotipado
Serotipado: conocer la fórmula antigénica, poner nombre propio (sólo subespecie enterica)
Serotipado dos hisopos cloaclales, tres heces y tres cloaclales, tres heces y tres huevos exterior :Salmonella entericasubespecie enterica serotipo Enteritidis
9, 12: g, m: -Antígenos Antígenos somáticos flagelares fase 1
Macrorrestricción
• Los patrones de bandas obtenidos con el enzima XbaI son iguales en todas las cepas estudiadas de
Comparación de fragmentos grandes (40 pb) de ADN genómico tras la digestión con una enzima de restricción
las cepas estudiadas de las diferentes matrices.
• Las cepas aisladas en todas las matrices comparten probablemente un origen común.
Perfiles de macrorestricción genómica de dos hisopos cloacales, tres heces y tres huevosinterior positivos a S. Enteritidis.
1. INTRODUCCIÓN2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODO4. RESULTADOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES
Conclusiones
La detección cualitativade Salmonella spp. a altos niveles (92 %) en las heces de gallina ponedora, no implicó su presencia
Necesidad de evaluar cuantitativamente la presencia de Salmonella spp. en heces (autocontroles y controles oficiales) para establecer correlación real con la
Herramienta útil para conocer la epidemiología de Salmonella en el sector avícola
en el interior del huevo presencia del patógenos en el interior del huevo
Caracterización mediantemacrorrestricción genómicaPFGE de cepas aisladas
MUCHAS GRACIAS