1

فصل اول

کوکسیھای گرم مثبت

خانواده میکروکوکاسھ

میکروککھا

تست کاتاالز

تست اکسیداز

تست تحمل نمک

مقاومت بھ لیزوستافین

حساسیت بھ باسیتراسین

فرمانتاسیون –تست اکسیداسیون

تست احیاء نیترات

تست ژالتیناز

تست اوره آز

استافیلوککھا

محیط مانیتول سالت آگار

محیط چاپمن

محیط وگل جانسون آگار

تست فسفاتاز

DNaseتست

کوآگوالز

تست حساسیت بھ نووبیوسین

خانواده استرپتوکوکاسھ

PYRتست

تست ھیدرولیز اسکولین

تست ھیپورات

تست کمپ

تست اپتوچین

تست حل شدن در امالح صفراوی

آزمایش کواالنگ

@wwwlabworldir

2

Selective Strep Agar

Azide Blood Agar Base

فصل دوم

وکسیھای گرم منفیک

نایسریا گونوره آ

نایسریا مننژیتیدیس

Thayer Martin Agar

Cystine Tryptic Agar(CTA)

فصل سوم

یل ھای گرم مثبتباس

باسیل ھای اسپوردار ھوازی

باسیلوس آنتراسیس

آسکولی تست

باسیلوس سرئوس

باسیلوس سوبتی لیس

محیط سرئوس سلکتیو آگار بیس

Egg Yolk Agarمحیط

تست ھیدرولیز نشاستھ

باسیل ھای اسپوردار بی ھوازی

کلوستریدیوم ھا

محیط تیو گلیکوالت براث

Reinforced Clostridial Agar

آگار انتخابی پرفرنژنس

Cooked Meat Broth

تست ناگلر

باسیل ھای گرم مثبت بدون اسپور

کورینھ باکتریوم ھا

محیط لوفلر

تست الک

@wwwlabworldir

3

تست شیک

لیستریا مونوسیتوژنز

Listeria Selective Agar & Broth

فصل چھارم

انتروباکتریاسھ

Dienesپدیده

IMVICمحیط ھای تست

تست اندول

تست متیل رد

VPتست

تست سیترات

TSIو KIAمحیطھای

تست دکربوکسیالز

آبگوشت پایھ تست اورنی تین دکربوکسیالز وآرژنین دھیدروالز

گزیلوز لیزین دزوکسی کوالت آگار

Lysine Iron Agar

تست فنیل آالنین دآمیناز

محیط اندوآگار

محیط ائوزین متیلن بلو

محیط مک کانکی آگار

محیط بریلیانت گرین فنل رد

محیط الکتوزساکارز آگار

محیط بیسموت سولفیت آگار

شیگال آگار –محیط سالمونال

کتوز ساکارز آگارمحیط دزوکسی کوالت سیترات ال

فصل پنجم

سودوموناس

تشخیص آزمایشگاھی

@wwwlabworldir

4

فصل اول

ھای گرم مثبت کوکسی

خانواده میکروکوکاسھ:

چھار جنس مھم این خانواده عبارتست از

میکروکک ھا )١

استافیلوکک ھا )٢

پالنوکک ھا )٣

استوماتوکک ھا )۴

میکروکک ھا

میکرون می باشد.آرایش آنھا در زیر میکروسکوپ بھ ۵?٣-۵مثبت ھستند کھ قطر آنھا بین کوکسی ھای گرم اشکال دوتایی ، چھارتایی، ھشت تایی ویا خوشھ ای دیده می شوند.

اشکال میکروسکوپی میکروکک ھا

.س آژیلیس میکروکوکوبھ طور کلی غیر متحرکند بھ جز یکنوع آنھا بھ نام

تست حرکت کلنی میکروکوکوس لوتئوس

@wwwlabworldir

5

استفاده می شود باکتریھایی کھ تاژک SIMبرای بررسی حرکت در باکتریھا از محیط ھای کشت موتیلیتی مدیوم ودارند قادرند در محیط نفوذ نمایند بنابراین اگر با فیلدوپالتین سوزنی باکتری را بھ طور عمودی در این محیط ھا

قط رد فباشد باکتری غیر متحرک اگرکشت دھیم باکتری دارای حرکت تمامی محیط را کدر می کند درحالیکھ آنس دیده می شود .

میلی متر ، گرد با سطح یکنواخت و کناره ی ۶تا ۴آنھا روی محیطھایی از قبیل نوترینت آگار بھ اندازه کلنیسطح کمی محدب ،قوام کره ای کدر با پیگمانھای رنگی سفید ،زرد لیمویی ، نارنجی وبدون بو دیده می صاف ،

آنزیم اکسیداز می باشند .ھوازی مطلق وبعضی شود. ھمگی آنھا دارای آنزیم کاتاالز بوده ولی بعضی از آنھا دارای بھ وجود می H₂Oو CO₂ھوازی اختیاری ھستند.گلوکز را در شرایط ھوازی اکسید نموده واز آن اسیداستیک ،

آورند.برخی از آنھا قادر بھ احیاء نیتراتھا بھ نیتریت می باشند.

غیربیماریزا محسوب می شوند ولی سھ جایگاه میکروککھا در خاک ،آب ،پوست انسان وحیوانات است .معموال دستھ از آنھا شناختھ شده اند کھ در بیماریزایی دخالت دارند وعبارتند از:

)Micrococcus luteusمیکروکوکوس لوتئوس ( )١

)Micrococcus roseusمیکروکوکوس رزئوس ( )٢

) Micrococcus variansمیکروکوکوس واریانس( )٣

میکروکوکوس لوتئوس

میکرون است .اگر روی نوترینت آگار کشت داده شوند قادر ٢تا ١کھ قطر آنھا بین کوکسیھای گرم مثبت ھستندرانیز ⁰۴۵بھ ترشح پیگمان زرد یا طالئی یا نارنجی ویا زرد مایل بھ سبز می باشند . می توانند تا درجھ حرارت

۵?٧بنابراین این فاکتور آنرا از سایر باکتریھای این خانواده می تواند جدا سازد.در مجاورت نمک تحمل کنند.

درصد را تحمل می کنند . احیاء نیتراتھا بھ نیتریت در آنھا منفی می باشد ۵درصد قادر بھ رشد نیستند ولی نمک اک تبدیل می کند) .آنزیم اکسیداز وژالتیناز در .برخی از انواع آنھا دارای آنزیم اوره آز ھستند (اوره را بھ آمونی

از سیترات بھ عنوان منبع کربن استفادهنمی توانند آنھا مثبت است . تخمیر قند گلوکز در آنھا منفی می باشد .

کنند.

میکروکوکوس رزئوس

.آرایش آنھا عینا مانند سایر میکروککھا می باشد ،با این تفاوت میکرون می باشد ۵?٢تا ١اندازه این باکتریھا بینکھ روی محیط نوترینت آگار ،دارای پیگمان صورتی ھستند کھ کامال قابل تفکیک از سایر آنھا می باشند، بھ ھمین

ریتدرصد رشد می کنند . احیاء نیتراتھا بھ نیت ۵?٧در مجاورت نمک علت بھ انھا میکروکوکوس رزئوس گویند .

در شرایط معمولی وھوازی قند را اکسید می نمایند در آنھا مثبت است . آنزیم اکسیداز واوره آز وژالتیناز ندارند . واندیکاتورھای محیط را در اثر اسیدیتھ ی محیط تغییر می دھندوبھ رنگ زرد تبدیل می نمایند .قادر بھ مصرف

سیترات بھ عنوان منبع کربن نمی باشند.

میکروکوکوس واریانس

. احیاء میکرون است . روی محیط نوترینت آگار دارای پیگمان سفید ھستند ۵?١تا ١اندازه این باکتریھا بین نیترات در آنھا متغیر بوده وآنزیم ژالتیناز ، اکسیداز واوره آز آنھا مثبت است . قند را در شرایط ھوازی اکسید

در صد ھم کمی رشد دارند. ١٠د ودر مجاورت نمک می کنن

@wwwlabworldir

6

کاتاالز تست

این آزمایش برای تشخیص آنزیم کاتاالز بھ کار می رود .آنزیم کاتاالز در اغلب باکتریھای ھوازی و بی ھوازی برای باکتری H₂O₂می باشند،زیرا H₂O₂اختیاری دارای سیتوکروم وجود دارد ودر نتیجھ قادر بھ تجزیھ ی

ھا سمی است.

2 H₂O₂ 2H₂O + O₂

ویا آب %٣آب اکسیژنھ - %٣٠آب اکسیژنھکھ جھت تست کاتاالز بھ کار می روند عبارتند از معرف ھایی )%١٠( ٨٠+بافر فسفات وتواین %٣٠اکسیژنھ

باید بھ وسیلھ ی کشتھای مثبت ومنفی شناختھ شده ،قبل از اینکھ مورد استفاده قرار بگیرد آزمایش H₂O₂نکتھ: شود.

نحوه ی انجام آزمایش:

ابتدا یک سوسپانسیون از میکروب مورد نظر روی الم تھیھ می نماییم وسپس یک قطره آب اکسیژنھ روی حبابھایی ظاھر خواھد شد . سوسپانسیون اضافھ می کنیم.در صورت مثبت بودن آزمایش

نکات مھم:

سوسپانسیون میکروبی نباید از محیط بالد آگار برداشتھ شود ، آنزیم کاتاالزی کھ در سلولھای قرمز خون )١ گردد.جواب مثبت کاذب ایجاد می وجود دارد خود باعث ایجاد حباب اکسیژن شده کھ

انجام شود،ھمچنین در موقع برداشت باید از مرکز کلنی استفاده ⁰25) آزمایش کاتاالز باید در درجھ حرارت ٢ساعتھ باشد زیرا کلنی ھای کھنھ ممکن است فعالیت کاتاالزی خود را ١٨-٢۴شود وکشتھای مورد استفاده باید

از دست داده باشند.

باید پرھیز شود زیرا این محلول سوز آور است واگر احتماال تماس از تماس دست با محلول آب اکسیژنھ ) ٣ محلول با پوست انجام شد باید فورا مقدار زیادی اتیل الکل را در محل مزبور بریزیم واز آب استفاده نکنیم .

ر) آب اکسیژنھ در مقابل نور بھ راحتی تجزیھ می شود وبی ثبات است وھنگامی کھ استفاده نمی شود باید د۴ یخچال نگھداری شود .

باید از لوپ با جنس پالتین استفاده کرد زیرا لوپ ھایی از جنس نیکروم (آلیاژ نیکل ) برای برداشتن باکتری ۵ وکروم) باعث نتیجھ ی مثبت کاذب می شوند .

@wwwlabworldir

7

تست اکسیداز

ام اکسیداز از محلولی بھ نبرای اثبات وجود . باکتریھایی کھ ھوازی مطلق ھستند آنزیم اکسیداز را دارا می باشند ) استفاده می شود .محلول اکسیدازتترامتیل پارافنیلن دی آمین دی ھیدروکلراید(

سیتوکروم اکسیداز (اکسید شده) ٢(احیاء شده) + تترامتیل پارافنیلن دی آمین دی ھیدروکلراید سیتوکروم اکسیداز(احیاء شده) ٢) + بنفش رنگ -هتترامتیل پارافنیلن دی آمین دی ھیدروکلراید(اکسید شد

می توان استفاده کرد.ھای زیربرای مشاھده وجود این آنزیم از روش

روی یک کاغذ صافی یک قطره از محلول اکسیداز را قرار می دھیم ،سپس یک آنس از کشت تازه روش اول : جاد .علت ایی باکتری را روی آن می گذاریم اگر تغییر رنگ کلنی بھ رنگ بنفش دیده شود جواب مثبت است

تشکیل اندوفنل می باشد .بنفش رنگ

روی کلنی باکتری ریختھ در صورت وجود تغییر رنگ می توان یک قطره از محلول اکسیداز را روش دوم : جواب مثبت است .

نکات مھم :

) نباید از کشت کھنھ استفاده شود ١

اکسیداز باید بھ صورت روزانھ و تازه تھیھ شود مگر اینکھ محلول ساختھ شده در فریزر %١) محلول ٢ نگھداری شود .

ھای کشت رنگی مثل مک کانکی استفاده شود چون نتیجھ ی مثبت کاذب ایجاد می گردد.) نباید از محیط ٣

) نباید از لوپ فلزی مثل استیل یا نیکروم استفاده شود چون نتیجھ ی مثبت کاذب می دھد .۴

تست تحمل نمک :

از آنھا را برخی %١٠ویا بیشتر از %۵?٧ھمگی رشد می کنند ولی نمک %۵میکروککھا در مجاورت نمک ساعت کدورت دیده می شود کھ دلیل ٢۴تحمل می کنند . اگر باکتری را در محیط حاوی نمک رشد دھیم بعد از

.ت حساسیت باکتری بھ نمک می باشد بر مقاومت باکتری بھ نمک است ولی اگر شفافیت مشاھده شد بھ عل

@wwwlabworldir

8

مقاومت بھ لیزوستافین :

برای تمایزمیکروکک ھا از استافیلوکک ھا می باشد سایر تست ھای مقاومت بھ لیزوستافین یک روش سریع ساعت انکوباسیون می ٢۴اقل نیازمند دتمایزی مثل تخمیر گلوکز ، حساسیت بھ باسیتراسین یا فورازولیدون ح

میکروککھا بھ لیزوستافین مقاوم ھستند .ساعت انکوباسیون دارد. ۵?٢باشند در حالیکھ این تست نیاز بھ

کار : روش

میلی لیتر سرم فیزیولوژی ٢مک فارلند در ٢ساعتھ باکتری یک سوسپانسیون معادل ١٨-٢۴)با استفاده از کشت ١ تھیھ کنید .

میلی لیتر از این سوسپانسیون را بھ لولھ ی دیگری انتقال دھید . ١)٢

. لولھ ی دوم را بھ عنوان وآنرا کامال شیک کنید)یک دیسک لیزوستافین را بھ یکی از لولھ ھا اضافھ کنید ٣

کنترل منفی در نظر بگیرید .

ساعت انکوبھ کنید . ۵?٢)ھر دو سوسپانسیون را در شرایط ھوازی بھ مدت ۴

)بعد از طی شدن مدت انکوباسیون کدورت لولھ حاوی دیسک را با کنترل منفی مقایسھ کنید .۵

حساسیت بھ باسیتراسین :

می .میکروککھا بھ این آنتی بیوتیک حساسباسیتراسین یک آنتی بیوتیک موثر بر دیواره سلول باکتری است ساعت اگر ٢۴دیسک را در یک قسمت کشت متراکم قرار می دھیم وبعد از باشند . برای مشاھده این حساسیت

تری بھ این آنتی بیوتیک مقاوم ھالھ ای در اطراف دیسک مشاھده شد باکتری حساس بوده در غیر اینصورت باک می باشد .

@wwwlabworldir

9

فرمانتاسیون گلوکز: –بررسی اکسیداسیون

از جملھ فنل رد براث ومحیط برای بررسی فرایند اکسید شدن وتخمیر شدن گلوکز ،محیط ھای پایھ متفاوت OF)Oxidative Fermentative medium استفاده می شود . محیط (OF برای استفاده باکتریھای گرم

مثبت حاوی معرف بروموکروزول پرپل می باشد کھ رنگ اولیھ محیط را بھ صورت بنفش روشن نمایان می کند در محیط ھای پایھ دیگر وجود دارد می باشد وچون دارای کھ ١٠ gr/litپپتون بھ جای ٢ gr/lit.این محیط دارای

این محیط رابھ صورت ایستاده یا آگار تال در داخل مقدار کمی آگار است بھ صورت نیمھ جامد تھیھ می شود . لولھ ھا می ریزند و باکتری را در آنھا کشت می دھند و کشت باکتری در شرایط ھوازی وبی ھوازی انجام می

ایجاد شرایط بی ھوازی استفاده از مقداری پارافین روی محیط توصیھ می شود .گیرد .برای

فراھم نمودن شرایط بی ھوازی

در محیط ھای پایھ ای مانند فنل رد براث ویا مشابھ آن کھ محیط بھ صورت مایع می باشد ، توصیھ می شود کھ دقیقھ جوشانده شود تا گازھای محلول محیط خارج شده وزمینھ برای شرایط بی ھوازی ٢٠تا ١٠محیط بھ مدت ، مقداری پارافین مایع یا جامد روی آن سپس محیط را سرد نموده وپس از کشت دادن باکتری در آنفراھم گردد.

اضافھ می کنند تا شرایط کامال بی ھوازی گردد . نتیجھ تخمیر قند در شرایط ھوازی و بی ھوازی یکسان است و از خنثی بھ اسیدی است کھ در نتیجھ ایجاد شدن اسیدھای pHتغییر رنگ معرف بھ رنگ زرد ،دلیل بر تغییر

ممکن است متفاوت باشد . بعضی دارای موجود در محیط می باشد . معرف محیط ھامختلف ناشی از تخمیر قند (گرم مثبت ھا) با برموکروزول پرپل ویا OFفنل رد بوده وبرخی دیگر بریلیانت گرین دارند ویا مانند محیط

. (گرم منفی ھا) با برومو تیمول بلو تھیھ می شود ، کھ ھیچ تفاوتی در نتیجھ آن ندارد OFمحیط

تست احیا ءنیترات :

تعیین قدرت یک ارگانیسم در تولید وتبدیل نیترات بھ نیتریت یا گاز نیتروژن آزاد ،در این آزمایش اندازه گیری ارگانیسم کھ در آن یک،صورت می گیرد توسط آنزیم نیترات ردوکتاز واکنش تبدیل نیترات بھ نیتریت می شود .

ن مانند یک پذیرنده ھیدروژن عمل می کند .ژاکسیژن رااز نیترات آزاد می نماید و اکسی

NO₃ + 2 ē + 2 Hᶧ NO₂ ̄ + H₂O

)احیاء شود .N₂)ویا نیتروژن (N₂O) ،اکسید نیترو (NOنیتریک (کھ سپس ممکن است بھ اکسید

نحوه ی انجام آزمایش :

slantدر ھر لولھ بھ صورت 5mlشود ، ازمحیط نیترات آگار از براث یا آگار تشکیل است محیط نیترات ممکن

می کنیم وچنانچھ برای آشکار شدن تولید گاز لولھ دورھام احتیاج در ھر لولھ اضافھ 1mlواز محیط نیترات براث ساعتھ باکتری را برداشتھ ١٨-٢۴پس از یک کشت باشد مقدار بیشتری از نیترات براث را در لولھ می ریزیم .

@wwwlabworldir

10

عنوان شاھد، ھمزمان با کشت لولھ باکتری مجھول ، ھم بھ را ودر محیط ھای ذکر شده کشت می دھیم . دو لولھا (شاھدھا)بھ ھمراه لولھ ای کھ تنھیکی از باکتری نیترات مثبت ودیگری را از باکتری نیترات منفی کشت داده

می گذاریم . ⁰٣۵ساعت در گرمخانھ ی ٢۴حاوی محیط کشت است

برای تشخیص احیاءنیترات از دو معرف زیر استفاده می شود :

A( 0.6معرف نفتیل آمین %

B(0.8اسید سولفانیلیک معرف %

قطره از مخلوط را بھ محیط کشت اضافھ ١٠این دو معرف را قبل از تست بھ نسبت مساوی با ھم مخلوط نموده ورا جداگانھ در لولھ محیط کشت وارد می کنیم Bقطره از محلول ۵و Aاز محلول قطره ۵می کنیم ویا اینکھ

تا ١دند . اگر جواب آزمایش مثبت باشد رنگ قرمز در عرض .محیط را تکان داده تا معرف ھا خوب مخلوط گردر اینصورت می توان فورا حدود ،دقیقھ ظاھر می شود واگر نتیجھ منفی باشد ھیچگونھ رنگی ظاھر نمی شود ٢

2mg بھ این لولھ اضافھ کرد ،بھ این دلیل کھ اگربعد از اضافھ کردن ھر دو معرف رنگ قرمز ایجاد نشود رویادعا کرد کھ میکروارگانیسم نیترات منفی است زیرا ممکن است نیترات بھ نیتریت وسپس نیتریت بھ نمی توان

باعث احیاء شیمیایی نیترات بھ نیتریت می شود اگر )zinc dustنیتروژن احیاء شده باشد . اضافھ کردن روی (دقیقھ ایجاد می ١۵نیترات توسط میکروارگانیسم احیاء نشده باشد توسط روی احیاء شده ورنگ قرمز در مدت

بھ این معنی است کھ میکروارگانیسم نھ تنھا شود .اگر ھیچ تغییر رنگی در محیط با افزودن روی ایجاد نشود یتریت احیاء کرده بلکھ نیتریت را نیز بھ گاز نیتروژن احیاء نموده است بنابراین این میکروارگانیسم نیترات را بھ ن

ھا نیز نیترات مثبت ھستند.

نفتیل آمین αنمک دی آزونیوم (بی رنگ) + HNO₂اسید سولفانیلیک +

β آزو سولفوبنزنα نفتیل آمین (محلول در آب وقرمز رنگ(

آزمایش ژالتیناز

قدرت آنزیم پروتئولیتیک یک باکتری مثل ژالتیناز کھ می تواند ژالتین را ذوب کند در اینجا مورد بررسی قرار می گیرد . آنزیم ژالتیناز یک آنزیم خارج سلولی است کھ توسط برخی از باکتریھا ترشح می شود.

کاتابولیسم پروتئین ھا در طی دو مرحلھ صورت می گیرد ، نتیجھ نھایی مخلوطی از اسیدآمینھ ھاست .

@wwwlabworldir

11

پروتئاز-ژالتیناز

پلی پپتید H₂Oپروتئین +

اسیدھای آمینھ مختلف H₂Oپلی پپتید +

نحوه ی انجام آزمایش

نگھداری شود سیال نمی ⁰٢٢یک آنس باکتری در محیط کشت ژالتین کشت داده ، این محیط اگر در حرارت امکانی نباشد باید سرلوپ را در آنرا قرار داد ولی اگر چنین ⁰٣٧باشد وبھتر است قبل از مصرف در بن ماری

ساعت در گرمخانھ گذاشتھ ،پس از این مدت لولھ حاوی کشت را ٢۴محیط بھ خوبی حرکت دھیم وآنرا بھ مدت . اگر پس از این مدت بستھ شود ، باکتری آنزیم ژالتیناز نداشتھ وجواب قرار داد ⁰۴دقیقھ در یخچال ٢٠بھ مدت

این مدت محیط سیال باقی بماند جواب مثبت است .منفی خواھد بود ولی اگر پس از

آز تست اوره

این تست برای تشخیص باکتریھایی کھ دارای آنزیم اوره آ ز ھستند انجام می گیرد .ابتدا باکتری را در محیط اوره براث کشت می دھیم رنگ اولیھ محیط بھ علت داشتن معرف فنل رد ابتدا صورتی روشن است .اگر باکتری بھ

نیاک بھ وجود می آید کھ بھ علت قلیایی کردن علت داشتن آنزیم اوره آز قادر بھ شکستن مولکول اوره باشد ،آمومحیط رنگ معرف تبدیل بھ صورتی ارغوانی می شود . در بعضی از باکتریھا مثل پروتئوس ھا این واکنش

٢۴سریعا انجام می گیرد ولی در بعضی باکتریھا مثل کلبسیال وسیتروباکتر شکستن مولکول اوره در عرض

باید فیلتر گردد زیرا اگر اتوکالو شود خودبھ خود این محیط ،لیزاسیون ساعت صورت می گیرد . برای استری محیط قلیایی شده وقبل از کشت در محیط رنگ معرف تغییر می کند.

@wwwlabworldir

12

گلوکز نام باکتری ھوازی

گلوکز بیھوازی

احیاء نیترات

نمک ژالتیناز اوره آز اکسیداز٥%

نمک ٧٫٥%

نمک ١٠%

لیزوستافین باسیتراسین پیگمان

M.luteus + - - + + + R S S زرد S R

M.roseus + - + - - - R R S صورتی S R

M.varians + - v + + + R R R سفید S R

استافیلوککھا

باکتریھایی ھستند کھ بھ طور وسیعی در طبیعت پراکنده می باشند وبھ صورتھای بیماریزا وغیر بیماریزا دیده می میکرون کھ بھ صورتھای دوتایی ،چھارتایی ویا ۵?٠-۵?١بھ اندازه شوند. این باکتریھا کوکسیھای گرم مثبت

نت آگار بھ رنگھای مختلف دیده می شود. شکل روی نوتریخوشھ ای دیده می شوند .فاقد حرکت بوده وکلنی آنھا می باشد . دارای آنزیم کاتاالز می باشند ودر ھر دو شرایط ھوازی کلنی گرد ، محدب ، کدر باقوام کره ای

۵?۶-۴۶می باشد ولی در حرارت بین ٣۵-۴٠وبیھوازی قابل رشد می باشند . درجھ حرارت مناسب رشد آنھا

صفرا را %۴٠نمک قابلیت رشد دارند . ھمچنین تا %١۵یشتر انواع آنھا در حضور نیز قادر بھ رشد ھستند . بنیز برای رشد تحمل می نمایند . نسبت بھ لیزوستافین حساس می باشند واین تفاوت آنھا را از میکروککھا متمایز

ی یکدیگر بھ کار ممختلف از می کند . عده ای از آنھا دارای آنزیم فسفاتاز ھستند کھ برای تشخیص سوش ھای روند.

استافیلوکوکوس اورئوس

این باکتری از حلق ، زخم ،دمل ، خلط ،عفونتھای دستگاه بیشتر بھ صورت خوشھ ای (نامنظم)دیده می شوند .تناسلی ، آکنھ ، عفونت ھای خون ،عفونتھای مایع نخاع ،مواد غذایی جدا می شود . شبیھ سایر استافیلو –ادراری

شتر است . بیککھا بوده ولی دارای پیگمان طالیی رنگ است کھ بدین علت بھ استافیلوکک طالیی نیز مشھوراین باکتری قند مانیتول را تخمیر می کنند ، از اینرومحیط چاپمن ومانیتول سالت آگار برای تشخیص آن سوشھای

ساعت اطراف کلنی یک ۴٨تا ٢۴محیط ھای مناسبی ھستند و اگر آنرا روی این محیط ھا کشت دھند بعد از کمکی است برای تشخیص واین تخمیرھالھ ی زرد رنگ ایجاد می شود کھ داللت برتخمیر مانیتول دارد

استافیلوکوک اپیدرمایدیس وساپروفیتیکوس .

@wwwlabworldir

13

استافیلوکوکوس اپیدرمایدیس

بھ علت آنکھ دارای پیگمان سفید رنگ می باشند بھ نام استافیلوکوکوس آلبوس نیز نامیده می شوند . معموال روی نیترات بھ نیتریت در آن مثبت است . درجھ .احیاء منفی است نات دیده می شود . کواگوالز آن پوست انسان وحیوا

درجھ می باشد .تست فسفاتاز آن معموال مثبت می باشد . ٣٠-٣٧حرارت مناسب رشد آنھا

استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس

%١٠بھ علت داشتن پیگمان زرد لیمویی بھ نام استافیلوکوکوس سیترئوس نیز خوانده می شود .در مجاورت نمک

رشد می نمایند .فاقد ⁰۴۵فقط بعضی از انواع آن در حرارت %١۵کند ولی در مجاورت نمک بھ خوبی رشد می در آن . احیاء نیتراتآنزیم فسفاتاز بوده ونسبت بھ دیسک نووبیوسین مقاوم است . ھمولیز در آنھا دیده نمی شود

.منفی است

محیط مانیتول سالت آگار

کلرور سدیم ، مانیتول ، فنل رد ، آگارترکیب محیط : کازئین ، عصاره گوشت ،

در نمونھ ھای مختلف بھ کار می رود. در این محیط میکروارگانیسم ھای برای شناسایی استافیلوککھای پاتوژنتجزیھ است . %۵?٧تحمل کننده نمک شامل استافیلوککھا می توانند رشد کنند چون غلظت نمک در این محیط

برای شناسایی این گونھ است .کلنی استافیلوکوکوس اورئوس بھ علت آنکھ مانیتول مانیتول بھ اسید اندیکاتوری مثبت است با رشد زیاد واحاطھ توسط ھالھ ھای زرد روشن مشاھده می گردد .

)Staphylococcus Selective Agarمحیط چاپمن (

آگار، مانیتول،کلرور سدیم وترکیب محیط : کازئین ، عصاره مخمر، پتاسیم ھیدروژن فسفات ، ژالتین ،الکتوز

کلنی با پیگمان ⁰٣٧ساعت در حرارت ۴٨این محیط کشت داده شود بعد از یاگر استافیلوکوکوس اورئوس رو.تشکیل اسید از مانیتول کھ در این باکتری طالیی ظاھر می گردد (بھ علت آنکھ در محیط پایھ معرف وجود ندارد)

بھ محل % ٠۴?٠مثبت است با تغییر رنگ بھ زرد بھ ھنگام اضافھ کردن چند قطره محلول برومو تیمول بلو کلنی ھا مشخص می شود .لیز ژالتین کھ معرف وجود سم در استافیلوکوکوس اورئوس می باشد با ظھور ھالھ

دقیقھ بعداز اضافھ کردن چند قطره محلول اشباع سولفات آمونیوم یا محلول ١٠ھای روشن در اطراف کلنی ھا ، اسید سولفوسالیسیلیک مشخص می گردد . % ٢٠

@wwwlabworldir

14

) Vogel-Johnson Agarمحیط وگل جانسون آگار(

این محیط جھت جداسازی استافیلوککھای مانیتول مثبت در نمونھ ھای کلینیکی و موارد دیگر بھ کار می رود.

ترکیب این محیط : کازئین ، عصاره مخمر ، فسفات دی پتاسیک ، مانیتول ، کلرور لیتیوم ، گالیسین ، فنل رد وآگار وجود دارد کھ می توان بھ آن تلوریت پتاسیم ھم افزود .محیط بھ رنگ قرمز می باشد .

ی شود. ت باالی گالیسین مھار مرشد باکتریھای ھمراه تقریبا بھ طور کامل بھ وسیلھ تلوریت وکلرور لیتیوم وغلظمانیتول توسط استافیلو کوکھای پاتوژن تجزیھ شده واسید تولید می گردد . این واکنش باتغییر رنگ فنل رد از

ث می شود رنگ کلنی ھا سیاه شود .قرمز بھ زرد مشخص می شود. ھمچنین احیاء تلوریت بھ تلوریم باع

آزمایش فسفاتاز

در این آزمایش توانایی یک میکروارگانیسم در تولید آنزیم فسفاتاز بھ وسیلھ ی آزاد کردن فنل فتالئین مشخص می صورتی درخشان نشانھ ی مثبت بودن آزمایش -شود . فنل فتالئین آزاد شده با یک قلیا واکنش می دھد ورنگ قرمز

می باشد .

فسفاتاز

رنگ قرمز NH₃یا NaOHنمک سدیم فنل فتالئین دی فسفات فنل فتالئین آزاد + صورتی

نحوه ی انجام آزمایش

روش اول

نموده با آب مقطر درست می کنیم وسپس آنرا فیلترابتدا یک محلول نیم درصد از ملح سدیم فنل فتالئین دی فسفاتھ در لولھ ھای 3ccدر ظرف استریل نگھ می داریم . بھ طور جداگانھ مقداری نوترینت آگار تھیھ نموده و بھ مقدار

آزمایش می ریزیم ولولھ ھا را استریل می کنیم (بھتر است کمی اضافھ ریختھ شود کھ در اثر بخار در اتوکالو 3cc ملح سدیم فنل فتالئین دی فسفاتھ بھ % ۵?٠لھ ھا باقی بماند) .پس از سرد شدن یک قطره از محلول در لو

دولولھ از این لولھ ھا را انتخاب کرده واز کشت باکتری مورد لولھ ھا اضافھ نموده وخوب آنرا مخلوط می نماییم . ساعت قرار می دھیم ۶درجھ بھ مدت ٣۵-٣٧.لولھ ھا را در ساعتھ) در دو لولھ تلقیح می کنیم١٨-٢۴نظر (

اضافھ کرده در صورت ظاھر شدن رنگ صورتی روشن جواب % ۴٠.سپس بھ لولھ ی اول یک قطره سود درجھ دوباره قرار می دھیم وبعد از ٣۵-٣٧ساعت در ١٨-٢٧مثبت است . در غیر اینصورت لولھ ی دوم را

این مدت تست می کنیم .

@wwwlabworldir

15

روش دوم

نمک سدیم فنل فتالئین دی فسفات مخلوط کرده ودر دو پلیت می 2ccنوترینت آگار را با 98ccدر این روش ساعت در ١٨-٢۴ساعتھ باکتری مورد نظر روی این پلیت ھا کشت خطی تھیھ کرده و ١٨-٢۴ریزیم . از کشت

گ قرمز روشن درجھ قرار می دھیم . پس از مشاھده رشد روی کلونی سود ریختھ در صورت ایجاد رن ٣۵-٣۶ جواب مثبت است .

DNaseتست

کشت می دھیم وسپس آنرا در DNase Test Agarبرای تشخیص این آنزیم باکتری مورد نظر را روی محیط نرمال می پوشانیم .در صورت ١قرار می دھیم .روز بعد سطح محیط کشت را با اسید کلریدریک ⁰٣٧حرارت

DNA. در بعضی از محیطھا عالوه بر ی شفافی مشاھده می شود در اطراف منطقھ کشت ھالھ DNaseوجود

گرم تولوئیدن بلو وجود دارد . رنگ اولیھ محیط آبی روشن می باشد ٠٠٨?٠، NaCl % ۵?٧مانیتول ، %١،محیط اسیدی می گردد ورنگ تولوئیدن DNA ،pHرا داشتھ باشد ، بھ علت تجزیھ DNase. اگر باکتری آنزیم

بلو صورتی می شود بنابراین ھالھ ی صورتی را می توان در اطراف کلنی باکتری مشاھده کرد .

تست کوآگوالز

کھ توسط استافیلوکوکوس ھای بیماریزا تولید می شود وفیبرینوژن موجود کواگوالز ماده پروتئینی شبیھ آنزیم بوده در پالسمای سیترات دار یا اکساالت دار انسان ، خرگوش یا گوسفند را بھ فیبرین تبدیل می کند . این آنزیم خودبھ

Coagulase Reacting Factorخود فعال نبوده وبھ وسیلھ عامل فعال کننده ای موجود در پالسما بھ نام

)CRF. فعال می شود و کوکسی را با دیواری علیھ فاگوسیتوز محافظت می کند (

نحوه ی انجام آزمایش

روش الم

کلنی استافیلوکوک را در آن حل نموده سپس یک لوپ ٣تا ٢یک قطره سرم فیزیولوژی روی یک الم قرار داده وتشکیل توده ھای سفید رنگ در مدت چند ثانیھ دلیل خرگوش را بھ آن افزوده وخوب مخلوط نماییدپر از پالسمای

برمثبت بودن آزمایش است .در صورت منفی بودن بھتر است آزمایش بھ روش لولھ ھم انجام شود .

@wwwlabworldir

16

روش لولھ

از پالسمای خرگوش وارد نموده و مخلوط نمایید تا یکنواخت شود میلی لیتر ۵?٠چند کلنی از استافیلوکوک را در درجھ قرار دھید وھر ساعت آنرا کنترل کنید .در صورت مثبت بودن آزمایش ٣٧ساعت در ۴مدت .لولھ را بھ

، لختھ در طی این مدت تشکیل می شود .

تست حساسیت بھ نووبیوسین

عدم رشد حساسیت با تشکیل ھالھ ی بیشتر استافیلوکک ھا نسبت بھ دیسک آغشتھ بھ نووبیوسین حساس ھستند . مشخص می شود .

حرکت

کاتاالز

اکسیداز

احیاء نیترات

نمک

١٠%

نمک

١۵%

OF

ھوازی

OF

بیھوازی

M.S.A

نووبیوسین

باسیتراسین

کوآگوالز

زفسفاتا

DNase

استافیلوکوکوس

+ + + S R + + + + + + - + - اورئوس

فقط - + + - + + - + - اپیدرمایدیس رشد

S R - + -

فقط - - + - + - - + - ساپروفیتیکوس رشد

R R - - -

@wwwlabworldir

17

خانواده استرپتوکوکاسھ

این زنجیره زمانی کھ باکتری گرم مثبت ودر زیر میکروسکوپ بھ اشکال دوتایی و زنجیره ای دیده می شوند . بعضی موجب دیده می شود. برخی ازآنھا فلور طبیعی ھستنداز محیط مایع کشت داده می شود بھتر وبلندتر

دمی باشنھیالورونیک دارای کپسول ازجنس اسیدبیماریھای عمده ای در بدن می شوند عموما بی حرکت ھستند.انند ،کامال گرد ومحدب م. کلنی آنھا نیمھ شفاف ومتمایل بھ کدر است .قطر کلنی کمتر از یک میلی متر می باشد

ن را تخمیر کرده ودر امالح صفراوی قابل حل نیستند وکاتاالز دانھ ھای تسبیح در سطح آگار دیده می شوند .اینولیاسترپتوکوکوس ھا ، گروه نامتجانسی از باکتریھا ھستند کھ سیستم مناسبی جھت طبقھ بندی آن منفی می باشند .وه رگونھ از این باکتریھا شناسایی شده اند کھ مھمترین آنھا شامل استرپتوکوکوس پایوژنز(گ ٢٠ھا وجود ندارد .

A استرپتوکوکوس آگاالکتیا (گروه ، (Bگروه) وانتروکوکوس (D ھستند کھ براساس خصوصیاتی نظیر شکل (کلنی ، طرح ھمولیز روی محیط آگار خوندار (آلفا ھمولیز ، بتا ھمولیز وبدون ھمولیز) ،ترکیب آنتی ژنی موجود در دیواره سلولی وواکنش ھای بیوشیمیایی شناسایی شده اند .استرپتوکوکوس پنومونیھ یا پنوموکوکوس براساس

اکاریدھای کپسولی طبقھ بندی شده است .ترکیب آنتی ژن پلی س

استرپتوکوکوس پایوژنز

قرار دارد . روی آگار خوندار ھمولیز بتا ایجاد می کند . یکی از روش ھای Aطبق دستھ بندی النسفیلد در گروه ال راجع بھ آن کھ قبتشخیص این باکتری از سایر کوکسیھای گرم مثبت بتا ھمولیتیک ،تست باسیتراسین است

وضیح داده شده است .ت

PYRتست

د کھ پایروگلوتامیل آمینوپپتیداز ھستن -استرپتوکوکوس پایوژنز وگونھ ھای مختلفی از انتروکک دارای آنزیم الماده آمید را ھیدرولیز کرده وبتا نفتیل آمین را رھا می سازند کھ بھ معرف سینامالدھاید چسبیده ورنگ قرمز

روشن ظاھر می شود .

روش آزمایش

قرار دھید . سپس ، یک قطره از PYRیک کلنی از باکتری مورد نظر برداشتھ ودر سطح کاغذ فیلتر آغشتھ با دقیقھ ظاھر می شود ۵ان دی متیل آمینو سینامالدھاید بھ آن اضافھ کنید . رنگ قرمز در مدت –معرف تازه ان

.

@wwwlabworldir

18

انتروکوک ھا

فکالیس ، انتروکوکوس فاسیوم و انتروکوکوس دورانس انتروکوکوسھای مھم از نظر پزشکی شامل انتروکوکوس واکنش می کنند وبخشی از فلور طبیعی روده را تشکیل می D. انتروکوکوس ھا با آنتی سرم ھای گروه می باشد

-لین را ھیدرولیز می کنند (صفرامثبت بوده ، در حضور صفرا رشد کرده و اسکو PYRدھند .انتروکوکوس ھا

کلرور سدیم رشد می کنند . % ۵?۶اسکولین مثبت ھستند).این باکتریھا در محیط غذایی حاوی

(تست ھیدرولیز اسکولین )اسکولین –کشت روی محیط صفرا

اسکولین استفاده –کھ انتروککھا را نیز شامل می شوند از محیط صفرا Dاسترپتوکوک ھای گروه برای شناسایی صفرا می توانند رشد نمایند ودر نتیجھ %۴٠واز جملھ انتروکک در حضور Dاسترپتوککھای گروه می شود .

اسکولین را بھ اسکولیتین وگلوکز ھیدرولیز کنند . اسکولیتین در داخل آگار پخش شده وبا سیترات فریک موجود در محیط ترکیب شده ورنگ سیاه ظاھر می شود .

کارروش

٢۴آگار کشت دھید وبھ مدت اسکولین –یک یا دو کلنی استرپتوکک را بر روی سطح شیب دار محیط صفرا

ساعت دیگر نگھداری نمایید .اگر سطح ٢۴نگھداری کنید .چنانچھ آزمایش منفی بود ، ⁰٣٧ساعت در حرارت محیط کشت سیاه شد دلیل برمثبت بودن آزمایش است .

استرپتوکوکوس آگاالکتیھ

استرپتوکوکوس را تشکیل می دھند . این باکتری ، فلور طبیعی مجرای تناسلی برخی Bاین استرپتوکوکھا گروه ھیپورات Bاز زنان بوده وعامل عمده ای در ایجاد سپتی سمی ومننژیت در نوزادان می باشد .استرپتوکوکوس گروه

۴آن مثبت است (حروف اول نام CAMPسدیم را ھیدرولیز می کند وتست .) Christie,Atkins,Munch ,Petersonپژوھشگر

@wwwlabworldir

19

تست ھیپورات

جھت تشخیص توانایی آنزیمی یک ارگانیسم در ھیدرولیز ھیپورات سدیم بھ بنزوئیک اسید وگالیسین بھ وسیلھ ی ده بھ نام نینھیدرین ، دی آمینھ شگالیسین توسط عامل اکسید کننده ای آنزیم ھیپورات ھیدروالز استفاده می شود .

و احیاء می گردد ورنگ بنفش ظاھر می شود .

روش اول (ھیدرولیز سریع ھیپورات)

کشت خالص از باکتری مورد نظر را بھ درون محلول ھیپورات سدیم وارد نمایید . محلول باید بھ حالت شیری میلی لیتر معرف نینھیدرین ٢?٠ار دھید .بعد ، ساعت قر ٢در بن ماری بھ مدت ⁰٣۵درآید .سپس لولھ ھا را در

دقیقھ ١۵اضافھ کرده بھ مدت )را بھ آن میلی لیتر بوتانل ۵٠و میلی لیتر استون۵٠گرم نینھیدرین ، ۵?٣( نگھداری نمایید . چنانچھ ھیپورات سدیم ھیدرولیز شده باشد رنگ بنفش پررنگی ظاھر می شود ⁰٣۵درحرارت

استون وبوتانل را مخلوط کرده وسپس نینھیدرین را بھ آن اضافھ می کنند ودر شیشھ ھای قھوه طرز تھیھ معرف : ای رنگ در پیچ دار می ریزند.

روش دوم

ساعت انکوباسیون می کنیم سپس محیط را ٢۴در محیط مایع ھیپورات کشت داده و از باکتری مورد نظر ، آب 2cc غلیظHClمعرف ( 0.2ccاز مایع رویی را در یک لولھ استریل ریختھ و 0.8ccسانتریفوژ کرده ،

را معموال با افزودن HClمحلول آبی %٢( ). FeCl₃.6H₂Oگرم کلرورفریک ھمراه با آب ١٢و 98ccمقطر ه وآنرا میلی لیتر آب مقطر تھیھ می کنند) را بھ مایع قبلی افزود ۶/٩۴) بھ %٣٧غلیظ ( HClمیلی لیتر از ۴?۵

دقیقھ وجود رسوب را در آن بررسی می نماییم .وجود ١۵خوب مخلوط کرده ودر محل آرامی قرارداده وپس از رسوب نشان دھنده ھیدرولیز ھیپورات سدیم وتبدیل آن بھ بنزوات است .

CAMPتست

را تولید می کند کھ ھمراه با توکسین بتا تولید CAMPماده ای شبیھ پروتئین بھ نام عامل Bاسترپتوکوک گروه شده توسط برخی از نژادھای استافیلوکوک اورئوس ، ھمولیز قویتری (اثر سینرژیک) را در سطح بالدآگار بھ

وجود می آورد .

بھ صورت یک خط کشت میکھ دارای ھمولیز بتا است را استافیلوکوکوس ،در وسط یک پلیت حاوی بالد آگار،عمود برآن استرپتوکوکوس آگاالکتیھ راکشت دھید بھ طوریکھ استافیلوکوک راقطع نکند .بعد از قرار دادن دھیم

ساعت یک حالت پیکان مانند عمود برکشت استافیلوکوکوس اورئوس از ٢۴بھ مدت ⁰٣٧در گرمخانھ

@wwwlabworldir

20

ری در داخل مولکولھایاسترپتوکوکوس آگاالکتیھ مشاھده می کنیم کھ بھ علت انتشار ھمولیزین ھای دو باکت بالدآگار می باشد.

استرپتوکوک پنومونیھ

یده بھ چسباین باکتریھا را پنوموکوک نیز می خوانند . بھ شکل دیپلوکوک می باشند کھ مانند شمع از قاعده دارای کپسول از جنس پلی ساکارید ھستند ..ندا

تست اپتوچین

وکوس کمتمایز کردن استرپتوکوکوس پنومونیھ از سایر گونھ ھای استرپتودیسک اپتوچین بھ طور اختصاصی برای ھای آلفا ھمولیتیک مورد استفاده قرار می گیرد . اپتوچین یک ماده ی شیمیایی بھ نام اتیل ھیدرو کوپرئین

موکوک دارای اثر باکتریواستاتیک اختصاصی برای پنو ١٠ₓ۵ ̄ ⁵تا ١٠ ̄ ⁵ھیدروکلراید است . این ماده باغلظت یا بیشتر نیاز ١٠ₓ۵ ̄ ٣وبرای اثر باکتریواستاتیک روی سایر استرپتوکوک ھای آلفا ھمولیتیک بھ غلظتاست است.

خون گوسفند کشت تھیھ کرده ودیسک را در قسمت متراکم %۵از باکتری مورد نظر روی محیط بالدآگار حاوی کشت قرار می دھیم .

نکات مھم

شوند . دیسکھا دریخچال نگھداری )١

در شرایط استریل برداشتھ شوند . )٢

@wwwlabworldir

21

) یک قطره آب مقطر روی دیسک ریختھ شود ،نتیجھ بھتر نمایان می شود .٣

) فشار کمی بھ دیسک وارد آید ولی بھ قدری نباشد کھ دیسک در محیط فرو رود.۴

انکوبھ شوند . % ٢-١٠ CO₂) پلیت ھا در ۵

باشد.زیرا غلظت این دیسک ھا طوری است کھ روی بعضی از 15mm) ھالھ اطراف دیسک نباید کمتر از ۶ استرپتوکوکھا ھم اثر باکتریواستاتیک دارد ولی قطر ھالھ آنھا کوچکتر است .

تست حل شدن در امالح صفراوی

کلنی ھای پنوموکوک بھ سرعت در صفرا یا محلول امالح صفراوی حل می شوند . عمل متالشی شدن باکتریھا با وجود آنزیم اتولیتیک داخل سلولی است .در ارتباط

نحوه ی انجام آزمایش

روش اول

تھیھ کنید. NaClاز محلول نرمال 1cc) سوسپانسیون غلیظ از باکتری در ١

)رنگ صورتی pH=7نرمال خنثی کنید.( ١?٠را با سود pH)یک قطره فنل رد بھ آن افزوده و٢

)0.5cc)این مخلوط را در دو لولھ تقسیم کنید .(ھر لولھ ٣

۴( 0.5cc 0.5ودر لولھ ی شاھد یا توروکوالت سدیم بھ لولھ آزمایش اضافھ کنید %١٠سدیم دزوکسی کوالتcc

NaCl . اضافھ کنید

در ساعت قرار دھید وھر ساعت محیط رابررسی نمایید ٣بھ مدت ⁰٣٧)لولھ را در آژیتاتور ودر حرارت ۵ صورت مثبت بودن آزمایش ووجود پنوموکوک محیط شفاف می شود.

@wwwlabworldir

22

روش سریع روی پلیت

)تھیھ کشت از پنوموکوک روی پلیت آگار خوندار با خون گوسفندی١

ساعت ٢۴)انکوباسیون پلیت ھا بھ مدت ٢

روی کلونیھا pH=7 با %٢)افزودن یک آنس دزوکسی کوالت ٣

⁰٣٧دقیقھ در ٣٠) ۴

مثبت بودن کلونی تجزیھ شده و فضایی شبیھ ھمولیز در جای کلونی ظاھر می شود .در صورت

تست تورم کپسولی - )Quellungآزمایش کواالنگ (

این آزمایش جھت نشان دادن وجود پنوموکوک در نمونھ (خلط یا مایع نخاع) یا تعیین تیپ اختصاصی از کپسول واکنش کواالنگ در واقع واکنشی بین پلی ساکارید کپسول باکتری وآنتی سرم ھم پنوموکوک بھ کار می رود .

در اطراف باکتری مشاھده تیپ خودش می باشد .در این حالت کپسول در زیر میکروسکوپ مانند حلقھ ای بزرگ می شود .

روش انجام آزمایش

.یک قطره از سوسپانسیون باکتری را روی الم قرار دھید )١

قطره پر از آنتی سرای پلی واالن روی آن ریختھ وخوب مخلوط می کنیم .) یک ٢

) یک قطره کوچک از محلول اشباع بلودومتیلن اضافھ کرده ومخلوط می کنیم .٣

مشاھده می کنیم . ١٠٠) روی آن یک المل قرار داده وبا عدسی ۴

دیده می شود.باکتری بھ رنگ آبی تیره و کپسول بھ صورت ھالھ شفافی در اطراف آن

محیطھای بھ کار رفتھ جھت جداسازی استرپتوکوکھا

Selective Strep Agar ١(

برای ممانعت از رشد باسیل ھای گرم منفی واستافیلوکوک ھا طراحی شده است ، بنابراین برای محیط این مونیھ مناسب واسترپتوکوک پنوجداسازی و تشخیص استرپتوکوک ھای پاتوژن شامل استرپتوکوکھای بتا ھمولیتیک

است .

ترکیب محیط : کازئین ، کنجالھ سویا ، کلرید سدیم ، اسید نوکلئیک ، عوامل انتخابی ، خون گوسفند

@wwwlabworldir

23

قرار می دھیم . توصیھ شده پلیت ⁰٣۵ساعت در ١٨-٢۴ آنرا از نمونھ مورد نظر کشت خطی تھیھ می کنیم سپس نکوبھ شوند تا منطقھ ھمولیز افزایش یابد .ا CO₂ % ۵-١٠ھا در شرایط بی ھوازی در

٢(Azide Blood Agar Base

برای جداسازی وشناسایی استرپتوکوکھا واستافیلوکوک ھا در مدفوع وفاضالب پیشنھاد شده است . آزید از رشد م ھای مشکل میکروارگانیسباکتریھای گرم منفی فلور طبیعی جلوگیری می نماید . محیط بسیار غنی است درنتیجھ

پسند ھم روی آن رشد می کنند . با افزودن خون فرم ھای مختلف ھمولیز مشخص می شود .

@wwwlabworldir

24

@wwwlabworldir

25

فصل دوم

کوکسیھای گرم منفی

خانواده نایسریاسھ

رم منفی گھمگی می باشد .این خانواده شامل جنس ھای نایسریا ، موراکسال ، اسینتوباکتر ، کینگال و موراکسال اند.

نایسریا دو گونھ بیماریزایی مھم دارد کھ عبارتست از:

عامل بیماری سوزاک نایسریا گونوره آ

عامل بیماری مننژیتنایسریا مننژیتیدیس

نایسریا گونوره آ

این باکتری معموال بھ صورت دیپلوکوک گرم منفی بھ شکل لوبیا در زیر میکروسکوپ دیده می شود کھ در مستقیم از ترشح مجرا ویا واژن ودر داخل لوکوسیت ھا نیز دیده می شود .برداشت

ھای غنی کننده از قبیل آگار خوندار و شکالت آگارنیاز دارد .محیط بسیار مناسب جھت برای رشد بھ محیط کھ بھ نام پروتئوز پپتون کورن استارچ آگار می باشد )NYC )New York City Mediumگونوکوک محیط

خوانده می شود .ترکیبات آن شامل :ھم

، کانامایسین ، Bپالسمای اسب ، ھموگلوبین ، گلوکز ، عصاره مخمر بھ ھمراه چھار آنتی بیوتیک پلی میکسین ونکومایسین ونیستاتین کھ مانع رشد سایر میکروارگانیسم ھا از قبیل کاندیدا آلبیکنس می شوند . بھ منظور رشد ،

قرار داده شود تا رشد نماید . Co₂ % ٣ -١٠جاورت این باکتری باید در م

@wwwlabworldir

26

نایسریا مننژیتیدیس

خیلی شبیھ گونوکوکوس بوده وبھ صورت دوتایی یا چھارتایی در درون لوکوسیت ھا یا آزاد در الم رنگ شده دیده می شود .روی آگار خوندار کلنی آن مرطوب ، برآمده ، صاف ، بھ رنگ خاکستری متمایل بھ آبی می

وتخمیر مالتوز صفت متمایز آن از گونوکوکوس محسوب می شود . بر گلوکز ومالتوز را تخمیر می کند باشد.اساس واکنشھای سرولوژیکی پلی ساکارید ھای کپسول تشخیص داده می شود.گروه سرمی سویھ جدا شده با

تشخیص داده می شود. با آنتی سرم ھای اختصاصی آگلوتیناسیون یا تورم کپسول

Thayer Martin Agar

Thayer Martin Agar بھ کار می رود جداسازی نایسریا گونوره آ ونایسریا مننژیتیدیس کھ برای محیط دیگر

می باشد .این محیط را می توان با افزودن سھ آنتی بیوتیک ونکومایسین ، کلیستین و تری متوپریم بھ محیط شکالت آگار تھیھ کرد.

گونوکوکوس مانند سایر نایسریاھا کاتاالز واکسیداز تولید می کند .

Cystine tryptic agar (CTA)

گونوکوک بھ کار بردن محیطھای مختلف کربوھیدرات است .برای این یکی دیگر از روش ھای تشخیص وتایید گلوکز ، مالتوز ، ساکارز ، %١کھ بھ آن استفاده می شود Cystine tryptic agar (CTA)کار از محیط

یک آنس پر از کشت تازه stabفروکتوز ویا الکتوز اضافھ نموده بعد از استریل نمودن وآماده کرده بھ حالت قرار می CO₂ %۵-١٠ودر شرایط ⁰٣۵ساعت در ٢۴باکتری را در عمق وسطح محیط کشت می دھیم وآنرا

دھیم .

@wwwlabworldir

27

الکتوز ساکارز وکتوزفر مالتوز گلوکز ارگانیزم - - - - + نایسریا گونوره آ

- - - + + نایسریا مننژیتیدیس + - - + + نایسریا الکتامیکا

@wwwlabworldir

28

فصل سوم

باسیل ھای اسپوردار ھوازی

باسیلوس ھا

شامل باسیلوس آنتراسیس ، باسیلوس سرئوس و باسیلوس سوبتی لیس

آنتراسیسباسیلوس

باسیل چھار گوش با اسپور مرکزی می باشد بھ نام باسیل شاربن ھم معروف است کھ عامل سیاه زخم می باشد.این باسیل ھا حرکت ندارند در حالی کھ باسیلوس ھای مشابھ غیربیماریزا نظیر باسیلوس سرئوس دارای حرکت

،دوتایی ویا بھ صورت زنجیره کوتاه می وقتی از بدن جدا شود بدون اسپور ،تک تک سوارمینگ می باشند .این باکتریھا در بدن حیوان دارای کپسول درجھ است . ٢۵-٣٠درجھ حرارت مناسب تولید اسپور حدود باشد.

نیک از کرببوده اما کپسول در شرایط آزمایشگاه فقط در محیط کشت دارای سرم یا بی کربنات ھا ودر حضور گ) مشخصی با لبھ مواج Roughتشکیل می شود . این باکتری در محیط ھای معمولی بھ صورت کلنی ھای خشن (

)Wavy margin) ھمراه با برآمدگیھای کوچکی (Medusa head رشد می کند .باسیلوس آنتراسیس ھمولیز ( ایجاد نمی کند .

، محیط ژالتین را بھ کندی مایع کرده واین عمل د می کنند این باکتریھا در محیط مایع شبیھ نخ ھای ابریشمی رشاین باکتری ھا دارای قدرت ھیدرولیز نشاستھ ھستند .در محیط ژالتین بھ صورت .از سطح محیط شروع می شود

وارونھ یعنی از باال بھ پایین رشد می کنند کھ اصطالحا بھ ان حالت سرو وارونھ گفتھ می شود .

@wwwlabworldir

29

:آسکولی تست

یک تست پرسی پیتاسیون برای شناسایی آنتراکس می باشد کھ در آن از عصاره ی بافت و آنتی سرم آنتراکس استفاده می شود .

باسیلوس سرئوس

این باکتری از نظر شباھت بھ باسیلوس آنتراسیس سالھا از نظر میکروبیولوژیست ھای پزشکی مورد توجھ بوده بوده ومسمومیت غذایی شایعی را LTوSTتشخیص این دو گونھ دشوار است . مولد انتروتوکسین ھای است .

فرصت طلب است و می تواند مننژیت، اوستئومیلیت ، عفونت ھای چشمی وبیماریھای در انسان پدید می آورد. د نماید.روده ای حاد در معتادان بھ مواد مخدر ، نوزادان وبیماران دارای نقص ایمنی ایجا

باسیلوس سوبتی لیس

گلوکز %١اغلب تکی ، دوتایی ودستھ جمعی وبھ ندرت زنجیره ای دیده می شود .روی نوترینت آگار حاوی کلنی ضخیم بھ وجود می آورد . رنگ کلنی تیره وبھ رنگ قرمز قھوه ای می باشد . روی نوترینت براث رشد

وچین خورده در تھ لولھ مشاھده می گردد .گاھی عامل عفونت چشمی باکتری بھ صورت پوستھ ھای بھ ھم چسبیده ذکر شده است .

@wwwlabworldir

30

)Cereus Selective Agar Base(محیط سرئوس سلکتیو آگار بیس

این محیط حاوی پپتون از گوشت ، عصاره گوشت ، مانیتول ، کلرور سدیم ، فنل رد وآگار می باشد .می توان بدین علت محیط اولیھ کدر می باشد . ھنگامیکھ نمونھ مورد نظر مشکوک بھ زرده تخم مرغ ھم اضافھ کرد کھ

تعداد زیادی میکروارگانیسم ھمراه باشد می توان پلی میکسین بھ محیط اضافھ کرد کھ جلوی رشد باکتریھای ساعت در ١٨-۴٠کلنی باسیلوس سرئوس بعد از حساس را می گیرد ولی مانع رشد باسیلوس سرئوس نمی شود .

بھ صورت ناھموار وخشک با قاعده صورتی تا ارغوانی و ھالھ رسوبی متراکم بھ رنگ سفید ناشی از ⁰٣٢تجزیھ لسیتین زرده تخم مرغ در اطراف آن دیده می شود . باکتریھای مانیتول مثبت در محیط بھ وسیلھ ھالھ زرد

یا شفاف احاطھ می شوند.

Egg Yolk Agarمحیط

توویتلین (از زرده تخم مرغ)می باشد . باکتریھای دارای آنزیم لسیتیناز ، لسیتوویتلین را بھ این محیط دارای لسیلسیتوویتلینین تبدیل می نماید واز لسیتوویتلینین اسیدھای چرب مانند دی گلیسیریدھا وفسفوریل کولین بھ وجود می

آید در چنین حالتی اطراف کلنی باکتری یک حالت کدورت دیده می شود .

لسیتیناز عالوه برلسیتین روی فسفولیپیدھای دیگر مانند : اسفنگومیلین ، سفالین ، فسفاتیدیل اتانول آمین وترمبوبالستین نیز اثر می کند .

تست ھیدرولیز نشاستھ

نشاستھ یک نوع کربوھیدرات با وزن مولکولی باالست کھ در حالت طبیعی حاللیت کمی درآب دارد .آنزیم می باشد . ٨?۶-٢?٧مناسب برای فعالیت آنزیم pHھیدرولیز کننده ان آمیالز نام دارد .

@wwwlabworldir

31

باتور می ساعت در انکو ٢۴در پلیت حاوی نشاستھ آگار از باکتری مورد نظر بھ صورت یک خط کشت داده وکلونی ھا مقداری معرف ید یا لوگل می ریزیم ، اگر در اطراف رشد باکتری ، محیط بی رنگ گذاریم .سپس روی

دیده شود دلیل بر وجود آنزیم آمیالز در باکتری است . ولی اگر اطراف کلنی بھ رنگ آبی درآید دلیل برعدم وجود آمیالز است .

نکات مھم :

حرارت دادن زیاد پرھیز شود زیرا حرارت زیاد سبب شکستھ شدن نشاستھ بھ آمیلوز و )ھنگام تھیھ محیط از ١ آمیلوپکتین می شود .

)محیط باید تازه تھیھ شود وبیشتر از دوھفتھ نماند .٢

آمیالز ضروری است .–)ھنگام تھیھ محیط بھتر است یون کلسیم اضافھ شود کھ برای فعالیت آلفا ٣

۴(pH . محیط باید در حد خنثی باشد

نوع باکتری

آمیالز ازلسیتین مانیتول الکتوز گزیلوز آرابینوز احیاءنیترات اکسیداز کاتاالز حرکت

باسیلوس آنتراسیس

- + - + - - + - + +

باسیلوس سرئوس

+ + + + - - + - + +

باسیلوس سوبتی لیس

+ + v + + + - + - +

اسپوردار بی ھوازیباسیل ھای

ستریدیوم ھاوکل

ھمچنین و یکروآئروفیلیک اسپورزا می باشند کھ بھ طور وسیع در خاک وآب انتشار دارندباسیل ھای بی ھوازی و می ھا را بھ توانایی آنھا در تولید اگزوتوکسین ھا ستریدیومو. بیماریزایی کلدر روده انسان وحیوانات یافت می شوند

ستریدیوم ھیستولیتیکوم کھ میکروآئروفیلیک است سایر آنھا بی ھوازی اجباری وبھ استثناء کل قوی نسبت می دھند .

@wwwlabworldir

32

ستریدیوم ھا بھ جز وبوده واز این رو آنھا را درعمق کشت ودر محفظھ ھای بی ھوازی پرورش می دھند.تمام کلستریدیوم تتانی کروی وانتھایی است در حالیکھ در سایر ووم پرفرژنس حرکت دارند .اسپور در کلستریدیوکلستریدیوم وستریدیوم ھا بھ استثناء کلوستریدیوم پرفرینژنس وکلوستریدیوم ھا بیضی ونزدیک بھ انتھاست .کلوکل

ستریدیوم وکل کشتستریدیوم ھا روی محیط بالدآگار ایجاد ھمولیز می کنند .پلیت ھای وکل بوتیریکوم کپسول ندارند. ساعت یابیشتر در شرایط بی ھوازی قرار داده شود. ۴٨باید بھ مدت

کلوستریدیوم ھایی کھ تحت شرایط بی ھوازی کشت داده شده اند را می توان بھ دو گروه تقسیم کرد :

شت بھ سرعت اسید وگاز تولید می کنند .)ساکارولیت ھا : بدون ھضم گو١

)پروتئولیت ھا : پروتئین شکستھ شده واسیدھای آمینھ را ایجاد می کند .٢

ستریدیوم بوتولینوموکل

.ارج از بدن میزبان تولید می شودعامل مسمومیت غذایی شدید وغالبا مرگ آوراست . توکسین این باکتری در خ

غذایی کنسرو شده تکثیر یافتھ وسم مھلکی تولید می کند کھ برای انسان کشنده است.ستریدیوم در مواد واین نوع کل

کلوستریدیوم پرفرینژنس

می کند. اسپور آن نزدیک بھ انتھاست وحرکت ان منفی است ، مسمومیت غذایی وسقط جنین ایجاد گانگرن گازی .آنزیم لسیتیناز دارد وھمولیز در آن مثبت است .

مورد استفاده برای کلوستریدیوم ھامحیط ھای

تیوگلیکوالت براث

مواد احیاء کننده نظیر تیوگلیکوالت و سیستئین شرایط بی ھوازی را فراھم می آورند کھ حتی برای باکتریھای بی ھوازی سخت رشد مناسب می باشند .

@wwwlabworldir

33

Reinforced Clostridial Agar

این محیط بھ معنی آگار تقویت کننده کلوستریدیوم ھا می باشد کھ حاوی عصاره گوشت ، پپتون از کازئین ، عصاره مخمر ،گلوکز ومواد احیاء کننده می باشد . ھمچنین جھت جلوگیری از رشد باکتریھای گرم منفی پلی

بھ این محیط اضافھ می شود . Bمیکسین

)Perferingenes Selective Agarآگار انتخابی پرفرنژنس (

سولفیت موجود در این محیط توسط اکثر کلوستریدیوم ھا احیاء شده وسولفید تولید شده با سیترات آھن واکنش داده وکلنی سیاھرنگ ایجاد می نماید . البتھ بعد از تلقیح باکتری در این محیط ، محیط ھا را در جار بی ھوازی قرار

توسط پلی میکسین و سولفادیازین و وارگانیسم ھای احیاء کننده سولفیت تاحد زیادیسایر میکر می دھند . سولفاپیریمیدین مھار می شوند .

Cooked Meat Broth

این آبگوشت باید مناسب می باشد .این محیط جھت تفکیک کلوستریدیوم ھای پروتئولیتیک وساکارولیتیک خیلی مورد استفاده قرار گیرد وگرنھ باید آنرا با مالیمت مختصری جوشاند تاھر ھر چھ زودتر بعد ازتھیھ وخنک شدن

مقدار اکسیژنی کھ حل شده خارج گردد واز ھمزدن باید خودداری کرد وبعد از تلقیح باکتری سطح براث را با الیھ ای از روغن پارافین پوشاند ، تا باکتریھا بھ طور بی ھوازی کشت شوند.

تحت شرایط بی ھوازی کشت داده شده اند را می توان بھ دو گروه تقسیم کرد :کلوستریدیوم ھایی کھ

) ساکارولیت ھا : بدون ھضم گوشت بھ سرعت اسید وگاز تولید می کنند (بوی اسید اغلب ھمراه با قرمز شدن ١ گوشت)

ی پر مانند یستالھاند . تیروزین بھ صورت کر)پروتئولیت ھا : پروتئین شکستھ شده واسیدھای آمینھ ایجاد می ک٢ سفید رنگ در خارج رسوب می کند (بوی تعفن بھ علت ترکیبات سولفور تواما با سیاه شدن گوشت)

تست ناگلر

جھت تشخیص کلوستریدیوم پرفرنژنس است :این آزمایش

.را بھ دو نیمھ کامال مساوی تقسیم می نماییم Egg Yolk Agar)پلیتی حاوی محیط کشت ١

نیمھ از پلیت را با آنتی توکسین این باکتری می پوشانیم .)تمام سطح یک ٢

)از باکتری مورد نظر بھ صورت یک خط روی پلیت کشت می دھیم .٣

)محیط را در شرایط کامال بی ھوازی قرار می دھیم .۴

ساعت در شرایط بی ھوازی انکوبھ می کنیم . ٢۴-۴٨)محیط را ۵

واکنشی مشاھده می شود ولسیتیناز این باکتری گرفتھ -ارد جلوی اثر آلفادر قسمتی از پلیت کھ آنتی توکسین وجود د نمی شود ولی در طرف دیگر ھالھ ی کدری در اطراف کلنی نمایان می گردد .

@wwwlabworldir

34

باسیل ھای گرم مثبت بدون اسپور

ھاالف) کورینھ باکتریوم

این باکتریھا بدون حرکت ، بدون اسپور وبدون کپسول می باشند . در زیر میکروسکوپ بھ صورت جفت ھای یکی از مشخصات این دیده می شوند .زاویھ دار یا ردیف ھای موازی مانند حروف چینی یا بھ صورت نردبانی

شت کدستھ از باکتریھا وجود دانھ ھایی از پلی فسفاتھای آلی بھ نام دانھ ھای متاکروماتیک یا ولوتین می باشد.با توان این دانھ ھا را شناسایی کرد کھ در یک یا دوانتھای باکتری رنگ آمیزی آلبرت میروی محیط لوفلر و سپس

یا در طول باسیل مشاھده می شوند .

محیط لوفلر

گلوکز می باشد . محیط راپس از تھیھ %١در این محیط سرم گاو یا گوسفند یا اسب در نوترینت براث بھ ھمراه قرار می دھند تا سرم داخل محیط منعقد شده ورنگ ⁰٨٠ساعت در ٢در لولھ ھای آزمایش تقسیم کرده و بھ مدت

نک شدن لولھ ھا و خشک شدن سطح آنھا جھت کشت از آنھا محیط بھ زرد مایل بھ سفید تبدیل گردد . پس از خاستفاده می شود . این محیط برای کورینھ باکتریومھا اختصاصی محسوب می شود ، زیرا این خانواده قادرند کھ

با ھضم پروتئین ھای منعقد شده با سرم در سطح محیط ایجاد کلنی نمایند .

@wwwlabworldir

35

)Elek test(تست الک

باسیل دیفتری وتمایز آن از دیفتروئیدھا کھ در حالت عادی در گلو وجود دارند باید از تست برای تشخیص قطعی اوی حبدین منظور می توان نوار کاغذ صافی آغشتھ بھ آنتی توکسین دیفتری را در داخل پلیت الک استفاده کرد .

نسبت بھ کاغذ صافی در سطح آگار آگار مناسبی قرار داده ،سپس باکتری ایزولھ شده از بیمار را در زاویھ قائمھ ساعت در شرایط مساعد قرار دھید . در این مدت، رسوب سفید رنگی در اثر ۴٨کشت دھید.بعد پلیت را بھ مدت

کھ بھ خوبی مشاھده می گردد.واکنش توکسین و آنتی توکسین حاصل می شود

)Schick testتست شیک (

بھ علت ایمنیاگر فردی بھ بیماری دیفتری مبتال شده باشد، ایمنی نسبت بھ بیماری در وی ایجاد می گردد. این وجود آنتی توکسین در بدن بیمار می باشد . بدین ترتیب کھ مقدار استانداردی از توکسین دیفتری را بھ داخل

کس العمل پوستی ظاھر نمی شود،زیراتوکسین با پوست فرد تزریق می نمایند.چنانچھ بیمار ایمن باشدھیچ نوع عمی شود کھ در آنتی توکسین بدن فردخنثی می شود اما اگر بیمار مصون نباشد ،پوست محل تزریق قرمزومتورم

اینصورت تست مثبت است .

@wwwlabworldir

36

لیستریا مونوسیتوژنزب)

لیستریوز بیماری مشترک انسان وحیوان بوده کھ عامل آن لیستریا مونوسیتوژنز می باشد . این باکتریھا باسیل وگرم مثبت می باشند کھ اسپور تولید نمی کنند.اغلب بھ صورت زوج ھایی کھ ھای کوتاه ، مستقیم یا کمی خمیده

قات بھ صورت رشتھ ھای بلند ، بھ خصوص در با ھم ایجاد زاویھ قائمھ می کنند مشاھده می شوند . گاھی اوحرکت بسیار جزئی داشتھ وگاھی فاقد حرکت می ⁰٣٧محیط جامد ودر حرارت اتاق دیده می شوند . درحرارت

SIMاگر باکتری را در محیط فعال ھستند وتاژک دارند . ⁰٢۵در حرارت اما در کشت ھای مایع و جوان باشند .

برای رشد .ھمولیز در محیط کشت بالد آگار مشاھده می شودکشت دھیم حرکت آن بھ صورت چتر دیده می شود .بھ مدت چند روز نگھداری کنید ،این باکتری بھ سھولت ⁰۴دارد. چنانچھ بافت آلوده را در CO₂ % ٢-١٠نیاز بھ

وشبیھ قطره آب می باشد.ساعت بسیار کوچک ٢۴کلنی این باکتری بعد از بھ دست خواھد آمد.

Listeria Selective Agar & Broth

محیط جامد حاوی تریپتوز ، گلوکز ، سدیم کلراید ،تریپافالوین ، نالیدیکسیک اسید وآگار است. در محیط مایع نیز .کسیک اسید ، تیوسیانات وجود دارد ترکیبات ذکر شده وجود دارد با این تفاوت کھ در محیط مایع بھ جای نالیدی

بھ مدت ⁰۴آبگوشت شفاف و متمایل بھ زرد می باشد. نمونھ عفونی را مستقیما در آبگوشت کشت می دھیم ودر روز قرار می دھیم . سپس از محیط مایع بر روی محیط جامد کشت می دھیم . کلنی لیستریا روی محیط ٣تا٢

ات ، اطراف سبز روشن متمایل بھ آبی شفاف کھ در مرکز مایل بھ سبز جامد ، کوچک مسطح تا کمی محدب ، م با شفافیت کمتر دیده می شود .

H₂S/TSI بتا ھمولیز حرکت اسکولین کاتاالز ارگانیزم

- + + + لیستریا مونوسیتوژنزگونھ ھای مختلف کورینھ باکتریوم ھا

+ - /+- /+- -

@wwwlabworldir

37

فصل چھارم

انتروباکتریاسھ

باسیل ھای گرم منفی ، متحرک یا غیر متحرک ، ھوازی وبیھوازی اختیاری ھستند کھ بر روی محیطھای کشت ساده آزمایشگاھی ومحیط ھای اختصاصی مانند محیط کشت مک کانکی کھ حاوی امالح صفراوی والکتوز می

ر کرده واسید د . قند الکتوز را تخمیاکسیداز منفی ھستند ونیترات را بھ نیتریت تبدیل می کنن باشد رشد می نمایند .یا اسید وگاز تولید می کنند .بعضی از اعضاء خانواده انتروباکتریاسھ مانند سالمونال ، شیگال و گونھ ھای بیماریزای

E.coli برای انسان بیماریزا ھستند وتشخیص دقیق آنھا از نظر کلینیکی اھمیت بسیار دارد . سایر اعضایوال کامنسال یا ساپروفیت ھستند اما گاھی بھ صورت عوامل بیماریزا در مجرای ادراری ، انتروباکتریاسھ اص

زخمھا ، کیسھ صفرا وغیره یافت می شوند .این باکتریھا گاھی بھ عنوان عوامل بیماریزای فرصت طلب در افرادی کھ دفاع بدنشان ضعیف است موجب بیماری می شوند .

خمیر الکتوز می توان بھ دو گروه تقسیم کرد :انتروباکتریاسھ ھا را بر اساس ت

)انتروباکتریاسھ ھایی کھ قادر بھ تخمیر الکتوز ھستند نظیر اشریشیا کلی ، کلبسیال ، انتروباکتر وغیره .١

)انتروباکتریاسھ ھایی کھ قادر بھ تخمیر الکتوز نمی باشند نظیر سالمونال ، شیگال ، آریزونا ،پروتئوس وغیره.٢

لیاشریشیا ک

خصوصیاتی کھ اشریشیا کلی را از سایر انتروباکتریاسھ ھا متمایز می سازد عبارتند از :

.الکتوز را تخمیر می کند . اندول تولید می کند . واکنش متیل رد مثبت از گلوکز گاز تولید می کند .حرکت دارد سیترات را مصرف نمی کند ،اوره راتجزیھ نکرده وژالتین را مایع نمی آن منفی است . VPدارد اما واکنش

سازد .کلنی ھای آن در محیط ائوزین متیلن بلو درخشش فلزی دارند .

کلبسیال

خصوصیات متمایز کننده آن :باسیل ھای گرم منفی بدون اسپور وبدون حرکت می باشند .

د اورنیتین دی کربوکسیالز یا فنیل آالنین دی آمیناز تولید نمی کننبدون حرکت ھستند ، ژالتین را مایع نمی کنند ، .اکثر نژادھا کپسول بزرگی دارند . از گلوکز گاز تولید می کنند .الکتوز ، آدونیتول واینوزیتول را تخمیر می کنند

مثبت ھستند . VP. اندول منفی ، اوره آز ، سیترات و

انتروباکتر

ھستند کھ در روده انسان بھ طور کومنسال ودر آب وخاک نیز یافت می شوند این این باکتریھا شبیھ کلبسیالباکتریھا بسیار متحرک بوده واز این نظر با کلبسیال تفاوت دارند . کپسول آنھا کوچکتر از کلبسیال است . این

باکتری گاھی عامل عفونت ھای بیمارستانی بھ ویژه در بخش سوختگی می باشد .

@wwwlabworldir

38

سراشیا

عضاء این جنس دارای حرکت بوده ودر برخی از واکنشھای بیوشیمیایی شبیھ انتروباکتر ھستند . انواع مختلف اسراشیا در سرعت مایع کردن ژالتین ، در ناتوانی بھ تخمیر رامنوز ودر تولید دی اکسی ریبونوکئاز با انتروباکتر

تفاوت دارند .

شود وگاھی می تواند عامل عفونت ھای بیمارستانی این باسیل بھ صورت ساپروفیت وآزاد یافت می معروفترین این گروه ، سراشیا مارسسنس بوده کھ پیگمان قرمز رنگی تولید می کند . باشد.

پروتئوس

این باکتریھا الکتوز را تخمیر نمی کنند . این باکتریھا بھ علت قدرت حرکت وتولید گاز از تخمیر قندھا بھ سالمونال ولی برخالف سالمونال قادر بھ تجزیھ اوره می باشند .این باکتریھا بھ علت داشتن تاژکھای پری شباھت دارند

بر روی محیط ھای کشت جامد را دارند . )Swarmingتریش ، حرکت فعالی دارند . قدرت خزندگی (

: Dienes پدیده

ھنگامیکھ یک نژاد از پروتئوس را در دو نقطھ متفاوت روی یک پلیت کشت دھند ، باکتریھا رشد بھم آمیختھ ای دارند ، درصورتیکھ وقتی دو نژاد متفاوت از یک گونھ پروتئوس را در سطح یک پلیت کشت دھند ، انتشار

شاھده است دو پروتئوس را ازھم جدا می پروتئوس بھم آمیختھ نبوده وفضای باریکی کھ بھ آسانی با چشم قابل منامند کھ برای شناسایی نژادھای مشابھ یا غیر مشابھ در Dienes phenomenonsکند . بروز این پدیده را

بررسیھای اپیدمیولوژی بھ کار می رود .

ط وسپس کشت روی محی EMBبرای شناسایی این باکتریھا از کشت روی محیطھای اختصاصی مک کانکی یا TSI استفاده می شود . ھمچنین تستIMVIC . انجام می پذیرد

سیتروباکتر

وبرخی از حیوانات یافت می شوند . مھمترین باکتریھایی ھستند کھ حرکت دارند ودر آب وخاک و روده انسان ما چنانچھ اآنھا سیتروباکتر فروندی است کھ در مدفوع انسان یافت می شود. این باکتری در روده بیماریزا نبوده

وسالمونال E.coli اعضاء جنس سیتروباکتر گاھی با بھ بخشھای دیگری از بدن راه یابد ایجاد بیماری می کند .مثبت ، لیزین دی کربوکسیالز منفی H₂Sبا وانش سیترات مثبت ،E.coli اشتباه می شوند . این باکتریھا از

@wwwlabworldir

39

لمونال با داشتن واکنش لیزین دی کربوکسیالز منفی تفاوت ومعموال اندول منفی تفاوت دارند . سیتروباکتر از سا دارد.

خصوصیات متمایز کننده انتروباکتریاسھ :

سودوموناس

-گلوکز

آلکالیژنز

سالمونال -اوره -الکتوز

متحرک

اوره + پروتئوس الکتوز گلوکز+

شیگال ̄ H₂Sغیر متحرک

انتروباکتر -اوره -اندول

اوره + کلبسیال

الکتوز +

اشریشیا -سیترات

اندول +

سیترات + سیتروباکتر

: IMVICمحیطھای تست

این تست کھ از تعدادی محیطھای جامد ،نیمھ جامد ومایع تشکیل یافتھ است ، فعل وانفعاالت مختلفی را کھ توسط دھنده این تست عبارتند از :باکتریھا انجام می شود را مشخص می کند . حروف تشکیل

I=Indol V=Voges-Proskauer (VP)

M=Methyl Red (MR) C=Simmons Citrate

@wwwlabworldir

40

تولید اندول

در اثر تجزیھ اسیدآمینھ تریپتوفان حاصل می شود. برای نشان دادن این فعل و کھ اندول ماده ای حلقوی است کھ ھر دو حاوی اسیدآمینھ تریپتوفان ھستند، استفاده نمود SIMانفعال می توان از محیط پپتون واتر ومحیط

معرف ساعت برای نشان دادن اندول حاصل ، از ۴٨تا ٢۴باکتری را در محیط ھای فوق کشت داده وپس از .معرف کواکس را بھ کشت اضافھ کرده، چنانچھ باکتری آنزیم ) استفاده می شود. دوتا سھ قطره Kovacsکواکس (

تریپتوفاناز تولید کند رنگ قرمزی تولید می شود .

متیل رد

برخی باکتریھا از تخمیر گلوکز تولید اسید می کنند . اسید حاصل توسط معرفی مانند متیل رد مشخص می شود . ساعت ، چند قطره معرف متیل رد بھ ۴٨تا ٢۴را در محیط حاوی گلوکز و فسفات کشت دھید پس از باکتری

باشد ، اسید حاصل بھ علت وجود معرفآن اضافھ کنید ،چنانچھ گلوکز موجود در محیط توسط باکتری تخمیر شده

بھ رنگ قرمز در می آید.

Voges Proskauer(VP)

برخی از باکتریھا در مرحلھ نھایی از تخمیر گلوکز ، ماده ای بھ نام استیل متیل کربینول تولید می کنند . این ماده وپتاس قطره)۶(کھ آلفا نفتولدر محیط قلیایی بھ دی استیل تبدیل می شود . برای تسریع عمل ، ضروری است

ساعتھ باکتری کھ در محیط حاوی گلوکز وفسفات ٢۴-۴٨قطره)بھ محیط اضافھ شود .چنانچھ بھ کشت ٢(%۴٠قرار دھید ایجاد رنگ قرمز نشان ⁰٣٧دقیقھ در حرارت ٢٠تا ١٠اضافھ کنید ومدت VPرشد کرده معرف

استیل می باشد . دھنده تشکیل استیل متیل کربینول و تبدیل آن بھ دی

@wwwlabworldir

41

استفاده از سیترات

این تست برای نشان دادن توانایی ارگانیزم ھایی است کھ قادرند سیترات را بھ عنوان تنھا منبع کربن و منبع . محیط سیمون سیترات حاوی انرژی ونمک آمونیوم را بھ عنوان تنھا منبع ازت جھت رشد خود بھ کار برند

سبز می باشد .ارگانیزم مورد نظر را در محیط حاوی سیترات بروموتیمول بلو است ومحیط کشت آماده بھ رنگ درجھ قرار دھید .تغییر رنگ از سبز بھ آبی نشان ٣۵-٣٧روز در حرارت ۴ساعت یا تا ٢۴کشت داده وبھ مدت

بھ رشد وتولید استات ومواد قلیایی می باشد .دھنده تست مثبت است یعنی ارگانیزم قادر

TSIو KIA ھایمحیط

محیطھای افتراقی ھستند کھ در لولھ بھ صورت مورب از آنھا استفاده می شود ومعموال برای نشان دادن تخمیر الکتوز ، تولید ھیدروژن سولفوره ، تولید گاز کربنیک وھیدروژن استفاده می شوند .

KIAمحیط

) بوده وھمچنین دارای موادی مانند سدیم تیوسولفات %١?٠) وگلوکز( %١دارای دو کربوھیدرات الکتوز ( می باشد . H₂Sوفریک آمونیوم سیترات جھت نشان دادن تولید

TSIمحیط

) را نیز اضافھ دارد.%١عالوه بر ترکیبات ذکر شده در باال قند ساکارز (

@wwwlabworldir

42

فنل رد بھ رنگ قرمز می باشند . شایان ذکر است کھ این محیط ھا را باید این محیط ھا بھ علت داشتن معرف ساعت گرمخانھ گذاری نتایج رابررسی کرد . ١٨-٢۴ھم سطحی وھم عمقی کشت داد وپس از

ھم متعاقب آن ی و اسید صورت نگرفتھ است یھیچ تخمیر قنداین است كھ هنشان دھند Alk/Alkواكنش -1كاتابولیزه شده و با تولید آمونیوم محیط یھواز یو ب یآن پپتون ھا تحت شرایط ھوازی تولید نشده است و بجا

كھ كاتابولیزه یرسد. در صورت یشده و كل محیط در ھر دو قسمت سطح و عمق قرمز رنگ بھ نظر م یقلیای یشاده مدار م شدن نیز تنھا در سطح شیبی انجام گرفتھ باشد واكنش قلیای یشدن پپتون تنھا تحت شرایط ھوازشود. ی صورت گرفتھ باشد این واكنش در ھر دو محیط دیده می ھواز یو ب یشود و اگر در ھر دو محیط ھواز

کھ جزو گروه انتروباکتریاسھ نمی Pseudomonas , Alkalgenesعبارتند از این دستھی ھایاز جملھ باكتر .باشند

كھ گلوكز یك قند ی. از آنجایفقط گلوكز تخمیر شده استاین است كھ ه نشان دھند Alk / Acidواكنش -2تخمیر شده باشد حتماً آن قند، گلوكز خواھد بود. واكنش در ی باشد بنابراین اگر قند یتخمیر م یبرای ترجیح

بدلیل ی بعد در قسمت سطحھ در مرحل یشود ول یاین مرحلھ بدین صورت است كھ ابتدا سرتاسر لولھ زرد می عضرسد. بی و در نتیجھ قرمز بھ نظر م یقلیای یپپتون ھا بھ آمین تبدیل شده و قسمت سطح حضور اكسیژن،

Salmonella , Proteus ,: یھا یكنند مثل باكتری ھم تولید م S 2Hھا ھستند كھ از تخمیر گلوكزیاز باكتر

Citrobacter .

قند یا حداقل یكي از دو قند الكتوز و سوكروز ٣ھر واكنشي است كھ نشان مي دھد Acid / Acidواكنش -٣عث باشند در نتیجھ بای موجود م ی. از آنجایي كھ این دستھ از تركیبات در محیط با غلظت باالترتخمیر شده اند

ی ھایاز باكتر Entrobacter , E.coli . klebsiella یشوند. بھ طور كلی محیط می تداوم فعالیت تخمیر باشد.ی م Acid / Acidھستند كھ واكنش آنھا بھ صورت تروباكتریاسھان هخانواد

می ٣و ٢نشان دھنده است این است کھ باکتری عالوه بر مصرف قند و ایجاد واکنش ھای H₂Sواکنش تولید -۴ تولید کند . H2Sتواند گاز

H₂Sباکتری در محیط اسیدی + تیوسولفات سدیم گاز مرحلھ اول :

+ یون فریک سولفید فرو (رسوب سیاه) H₂S: مرحلھ دوم

را داشتھ وباعث H₂و CO₂بعضی از باکتریھا با مصرف کربوھیدرات ھا توانایی تولید گاز واکنش تولید گاز -5

تشکیل حباب یا ترک خوردن محیط می شوند.

@wwwlabworldir

43

Results (slant/butt) Symbol Interpretation

Red/yellow K/A Glucose fermentation only;

Peptone catabolized

Yellow/yellow A/A Glucose and lactose and/or

sucrose fermentation

Red/red K/K No fermentation; Peptone

catabolized

Red/no color change K/NC No fermentation; Peptone

used aerobically

Yellow/yellow with

bubbles A/A,G

Glucose and lactose and/or

sucrose fermentation; Gas

produced

Red/yellow with bubbles K/A,G Glucose fermentation only;

Gas produced

Red/yellow with bubbles

and black precipitate K/A,G, H2S

Glucose fermentation only;

Gas produced; H2S

produced

Red/yellow with black

precipitate K/A, H2S

Glucose fermentation only;

H2S produced

Yellow/yellow with black

precipitate A/A, H2S

Glucose and lactose and/or

sucrose fermentation; H2S

produced

No change/no change NC/NC No fermentation

A=acid production; K=alkaline reaction; G=gas production; H2S=sulfur reduction

تست دکربوکسیالز

این تست براساس توانایی برخی از باکتریھاست کھ اسیدآمینھ را بھ آمین دکربوکسیلھ کرده وگاز کربنیک را رھا بھ طرف خنثی رفتھ یا افزایش pHپایین انجام شده ودر اثر این واکنش ، pHمی سازد . تولید دکربوکسیالز در

شود بنابراین سطح محیط باید توسط پارافین استریل انجام میتجزیھ اسیدھای آمینھ در شرایط بی ھوازی می یابد .پوشیده شود . سھ آنزیم دکربوکسیالز کھ برای تشخیص باکتریھا اھمیت دارند عبارتند از: لیزین و اورنی تین

وآرژنین دکربوکسیالز.

آبگوشت پایھ تست اورنی تین دکربوکسیالزوآرژنین دھیدروالز

بعد از کشت بروموکرزول پرپل می باشد. pHین یا آرژنین و معرف حاوی اسیدآمینھ اورنی تآبگوشت فوق ⁰٣٧روز محیطھا را در ۴میلی متر پوشانده وتا ۵باکتری در این محیط سطح محیط را با پارافین بھ ضخامت

ساعت اول انکوباسیون گلوکز توسط باکتری تجزیھ شده ومحیط زردرنگ می ٨تا ۶نگھداری می کنیم . ظرف شود . باکتریھایی کھ آنزیم اورنی تین دکربوکسیالز یا آرژنین دھیدروالز را دارند این اسیدھای آمینھ را در شرایط

محیط می شوند.وبنفش رنگ شدن pHاسیدی دکربوکسیلھ نموده وموجب افزایش

@wwwlabworldir

44

)XLD(گزیلوز لیزین دزوکسی کوالت آگار

این محیط جھت مشاھده آنزیم لیزین دکربوکسیالز در باکتریھا بھ کار می رود . در پایھ محیط اسیدآمینھ لیزین ، دزوکسی کوالت سدیم ، سیترات آمونیوم فریک ، تیوسولفات سدیم وسھ قند الکتوز،ساکارز وگزیلوز وجود دارد

بھ رنگ زرد نشان دھنده تخمیر یکی از pHومعرف محیط فنل رد می باشد . تغییر رنگ محیط در اثر کاھش قندھا یا ھر سھ قند است . اگر باکتری دارای آنزیم لیزین دکربوکسیالز باشد ، تخمیر قندھا توسط باکتری بھ عنوان

طوالنی شدن انکوباسیون رنگ اطراف کلنی ھا ارغوانی کوفاکتور جھت فعالیت این آنزیم استفاده می شود وبا می pHلیل قلیایی شدن محیط در اثر دکربوکسیالسیون لیزین وتولید کاداورین آمین وافزایش می گردد کھ بھ د

توسط تیوسولفات ونمک آھن را مشخص می کند . H₂Sباشد. مرکز سیاه کلنی تولید

A : اشریشیا کلیB سالمونال :C : مخلوط اشریشیا کلی وسالمونالD پروتئوس :

Lysine Iron Agar )LIA(

(بعد ) در محیط اسیدی L.D.Cلیزین موجود در این محیط توسط میکروارگانیسم ھای لیزین دکربوکسیالز مثبت (ارغوانی pHاز تخمیر گلوکز) دکربوکسیلھ شده وباعث می شود معرف یعنی بروموکروزول پرپل دراثر افزایش

رنگ محیط زرد شود . تولید منفی وتخمیر کننده گلوکز باعث می شوند L.D.Cگردد . میکروارگانیسم ھای H₂S .بھ علت تشکیل سولفید آھن باعث سیاه شدن محیط می گردد

@wwwlabworldir

45

مینازتست فنیل االنین دآ

محیط فنیل آالنین آگار برای تمایز پروتئوس و پروویدنسیا از سایر اعضاء انتروباکتریاسھ بھ کار می رود وبر %١٠توانایی تولید فنل پیروویک اسید از فنیل آالنین است . جواب مثبت با افزودن چند قطره کلرور فریک اساس

دقیقھ مشاھده گردد . ۵بھ کشت وظھور رنگ سبز نشان داده می شود کھ جواب باید در عرض

ENDO Agar محیط اندوآگار

وباکتریھای کلی E.coliسولفیت سدیم وفوشین موجود در این محیط رشد باکتریھای گرم مثبت را مھار می کند . سولفیت آزاد -فرم الکتوز راتجزیھ کرده وآلدئید و اسید تولید می کنند . آلدئید حاصل فوشین را از ترکیب فوشین

این واکنش بھ قدری E.coliی آورد . درمورد اسیدی کلنی ھا را بھ رنگ قرمز در م pHفوشین در می کند . شدید است کھ فوشین در خارج محیط کریستالیزه شده وبھ کلنی ھا یک جالی فلزی می دھد .

@wwwlabworldir

46

E.M.Bمحیط ائوزین متیلن بلو

این محیط حاوی قندھای الکتوز وساکارز ومعرف ائوزین ومتیلن بلو است . در شرایط الکتوز مثبت ائوزین از ھای مختلف اسیدی ازبنفش کمرنگ تا پررنگ دیده می شود. pHمتیلن بلو جدا می شود وکلنی باکتری بستھ بھ

اه است انعکاس نور روی ائوزین باعث ایجاد الکتوز با ایجاد آلدئید واسید پایدار ھمرکھ تجزیھ E.coliدر مورد درمورد سایر الکتوز مثبت ھا کھ آلدئید واسید ناپایدار وجود دارد بھ علت ضعیف بودن جالی فلزی می شود .

pHواکنش تولید ائوزین جالی فلزی ایجاد نمی گردد وکلنی باکتری بھ رنگ بنفش از کمرنگ تا پررنگ بستھ بھ

می شود . در شرایط الکتوز منفی وساکارز منفی کلنی ھمرنگ محیط دیده می شود . ھای مختلف اسیدی دیده

Macconkey Agarمحیط مک کانکی آگار

معرف این محیط نوترال رد است ومخلوط نمکھای صفراوی و کریستال ویولھ موجود در این محیط تا حد زیادی رشد باکتریھای گرم مثبت را مھار می کنند. باکتریھایی کھ بھ نمکھای صفراوی وکریستال ویولھ مقاومند وقادر

ه توسط ھالھ کدری کھ ناشی از رسوب بھ مصرف قند الکتوز این محیط می باشند ایجاد کلنی قرمز احاطھ شدمی باشد ، می نمایند وکلنی باکتریھای الکتوز منفی ھمرنگ محیط دیده می pHبھ علت کاھش اسیدھای صفراوی

شوند .

@wwwlabworldir

47

محیط بریلیانت گرین فنل رد الکتوز ساکارز آگار

مشابھ آن از رشد میکروارگانیسم ھایی در این محیط بھ علت افزایش غلظت بریلیانت گرین نسبت بھ محیط ھای مانند استافیلوکوکوس اورئوس وکمی از رشد میکروفلور دستگاه گوارشی جلوگیری می شود . باکتریھایی کھ الکتوز وساکارز منفی اند کلنی صورتی کھ توسط ھالھ ای قرمز رنگ احاطھ شده ایجاد می نمایند وباکتریھایی کھ

کی از این دو قند برایشان مثبت است کلنی زرد مایل بھ سبز ایجاد می نمایند کھ الکتوز و ساکارز مثبت ویا ی زرد ناشی از وجود بریلیانت گرین احاطھ می گردند .-توسط ھالھ ای سبز

اشریشیا کلی سالمونال

محیط بیسموت سولفیت آگار

روی ا ھبریلیانت گرین وبیسموت تا حد زیادی فلور باکتریایی روده را مھار می کنند ، ھنگامیکھ کلنی سالمونالد می کنند بھ علت تشکیل سولفید آھن سیاھرنگ می شوند . احیاء یونھای بیسموت بھ بیسموت فلزی این محیط رش

ھا ایجاد می نماید .یک درخشش نقره ای در اطراف کلنی

@wwwlabworldir

48

آگار SSشیگال آگاریا –محیط سالمونال

بریلیانت گرین ،صفرای گوسالھ وغلظت باالی تیوسولفات وسیترات کھ در این محیط وجود دارند تا حد زیادی از رشد فلور میکروبی ھمراه جلوگیری می کنند .باکتریھای الکتوز مثبت با مصرف الکتوز وایجاد اسید باعث تغییر

کتریھای الکتوز منفی بی رنگ دیده می شود رنگ معرف نوترال رد بھ صورتی مایل بھ قرمز می شود . کلنی با مرکز سیاه رنگ دارند . تولید می کنند SH₂وکلنی باکتریھایی کھ

A. Klebsiella pneumoniae

B. Escherichia coli

Klebsiella pneumoniae & Escherichia coli are positive for acid production from fermentation of the carbohydrate(s) present.

C: Salmonella sp.

D: Proteus mirabilis

Both Salmonella sp. & Proteus mirabilis product hydrogen sulfide.

E: Pseudomona aeruginosa

The Pseudomonas colonies are nearly colorless.

محیط دزوکسی کوالت سیترات الکتوز ساکارز آگار

غلظت دزوکسی کوالت وسیترات موجود دراین محیط در حدی است کھ از رشد فلور طبیعی گرم مثبت جلوگیری می کند . معرف این محیط نوترال رد می باشد . کلنی باکتریھایی کھ قادر بھ تخمیر الکتوز وساکارز می باشند

را مصرف می کنند بھ رنگ صورتی صورتی پررنگ مایل بھ قرمز می باشد . باکتریھایی کھ فقط قند الکتوز دیده می شوند .کلنی باکتریھایی مثل سالمونالھا وشیگالھا بھ جز سونھ ای کھ قادر بھ تخمیر الکتوز یا ساکارز

@wwwlabworldir

49

ھم می کنند در مرکز بھ رنگ سیاه می باشند . H₂Sنیستند بی رنگ دیده می شوند . کلنی باکتریھایی کھ ایجاد منفی کھ قادر بھ تجزیھ صفرای محیط می باشند باعث قلیایی شدن محیط گشتھ ونوترال باکتریھای الکتوز وساکارز

قلیایی بھ رنگ زرد کھربایی در می آید . pHرد در

@wwwlabworldir

50

فصل پنجم

سودوموناس

باسیل گرم منفی و میلھ ای شکل و متحرک است . سودوموناس آئروژینوزا در انسان یافت شده و مھم ترین پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا بر روی در بین سودوموناس ھاست کھ آن را سودوموناس پایوسیانا ھم می نامند .انسانی

. این باکتری بھ علت درجھ بھ خوبی رشد می کند ۴٢تا ٣٧تمام محیط ھای معمولی آزمایشگاھی در حرارت ژالتین را بھ سرعت مایع می کند درجھ با انواع دیگر سودوموناس ھا تفاوت دارد . ۴٢توانایی رشد در حرارت

. اغلب قادر بھ تخمیر قندھا نمی باشد . اکسیداز مثبت است . یکی از خصوصیات بارز این باکتری تولید پیگمان است . این پیگمان سبب رنگی شدن کلنی ھا نمی گردد بلکھ در داخل محیط کشت پخش می شود پایوسیانین آبی

بعضی از سویھ ھای سودوموناس آئروژینوزا وناس آئروژینوزا وجود دارد . پیگمان پیوسیانین فقط در سودوم.پیگمان فلورسنت پیووردین را تولید می کنند کھ ایجاد رنگ سبز در محیط آگاردار می کند بعضی سویھ ھا پیگمان

ند کھ باعث ی کنپیوروبین را تولید می کنند کھ ایجاد رنگ قرمز تیره را می کند یا پیگمان پیومالنین را تولید م ایجاد رنگ سیاه می شود .

تشخیص آزمایشگاھی

منتقل می کنیم . این باکتری چون TSIکشت داده سپس بھ محیط E.M.Bنمونھ را روی محیط مک کانکی یا TSIقادر بھ تخمیر قندھا نمی باشد ، تمام محیط را قرمز یعنی قلیایی می کند . پیگمان این باکتری روی محیط

خاکستری با جالی جیوه ای رنگ ظاھر می شود . با کشت برروی محیطی نظیر نوترینت آگار ، پیگمان بھ رنگمنفی است VPاین باکتری سیترات مثبت ، اندول منفی ، متیل رد و سبز مایل بھ آبی آن کامال مشخص می باشد .

. اکسیداز آن مثبت است وبھ اکثر آنتی بیوتیک ھا مقاوم می باشد .

@wwwlabworldir