seminário mutagênese
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Geobiology of Marine Magnetotactic BacteriaTRANSCRIPT
Teste do Micronúcleo
Aspectos gerais
• Exposição de organismos vivos a agentes
genotóxicos
– Escala mundial;
– Efeitos nocivos → Saúde pública e ambiental;
• Incidência de câncer;
• Problemas reprodutivos – inviabilidade populacional.
Aspectos gerais
• Biomonitoramento
– Teste dos Micronúcleos (MNs)
• Método alternativo ao das aberrações cromossômicas;
– Mais fácil de serem visualizados e contados
*Morfologia Cromossomal
Aspectos gerais
• Descrito pela primeira vez por Schimidt W. (1975)
– Teste realizado em mamíferos in vivo;
– Detecção de substância mutagênicas que lisam
cromossomos
• Substâncias clastrogênicas.
– Detecção de substâncias que interferem no fuso mitótico
• Alteração da distribuição equitativa dos cromossomos.
Aspectos gerais• Micronúcleos
Formam-se a partir da extrusão de cromossomos inteiros ou seus
fragmentos durante a divisão celular, sendo uma porção de cromatina
resultante de mitoses aberrantes.
Aspectos gerais
• Importância Teste do Micronúcleo
Permite identificar o eventual aumento na frequência de mutação em células que são expostas a uma gama variedade de agentes genotóxicos, por isso é capaz de expressar danos no cromossomo como micronúcleos
Fornece uma medida de confiança da perda do
cromossomo e da ruptura
Aspectos gerais
• Fatores que favorecem a escolha do teste:
– Baixo custo
– Rapidez na análise e triagem;
– Capacidade de avaliação de diversas substâncias;
– Ampla aplicabilidade.
ProcedimentosTeste para substâncias
• Utiliza-se, preferencialmente, camundongos
jovens
– Dieta equilibrada;
– Oriundos de biotério;
– Recebendo água e alimentos em horários controlados
• Evitar outras doenças ou fontes mutagênicas.
ProcedimentosTeste para substâncias
Grupo Controle Negativo
Grupo ControlePositivo
Administra-se uma substância
reconhecidamente como mutagênica. Ex:
Ciclofosfamida 50mg/Kg
GrupoTeste
* Recomenda-se que cada grupo contenha 10 animais, preferencialmente machos (evitar variações hormônais das fêmeas)
Os animais são tratados uma única vez com as respectivas substâncias de cada grupo, as
coletas devem ser feitas no mínimo 12 e no máximo 30 horas após o tratamento.
ProcedimentosTeste para substâncias
Sacrifício dos animais
Retira-se a medula óssea
Centrifuga-se (1000
rpm/min – 5 minutos)
Descarta-se o
sobrenadante e prepara-se as lâminas
Técnica de coloração
de Leishmann
Observação ao
microscópio de
fluorescência
ProcedimentosTeste para substâncias
• Análise
– Conta-se o número de eritroblastos policromados
(EPs) por lâmina;
– Conta-se o número de EPs com micronúcleos em
relaçãos ao total de EPs;
– Considera-se um mínimo de 1000 EPs por lâmina.
ProcedimentosTeste para ambientes contaminados
• Castilhos et al. (2005)
– Análise de dois rios contaminados por Hg;
– Coleta de sangue de peixes;
• Geophagus brasiliensis e Oreochromis niloticus
– 1000 células por lâmina;
– Coloração de Giemsa;
– Altas concentrações de Hg no músculo;
– Ambos apresentaram frequência mutagênica.
Teste do Micronúcleo
• Aplicações:
Ambiental
Biomonitoramento
Teste do Micronúcleo
• Aplicações:
Controle populacional
Saúde Pública