serija biohemijski testovi
TRANSCRIPT
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
1/23
FermentacijaFermentacijaugljikohidrataugljikohidrataBiohemijski testovi koji služeBiohemijski testovi koji služeza dokazivanjeza dokazivanje
mikroorganizamamikroorganizama
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
2/23
IskorištavanjeIskorištavanje
ugljikohidrataugljikohidrata• Mikroorganizmi mogu fermentirati ugljikohidrateMikroorganizmi mogu fermentirati ugljikohidraterazličito zavisno o nihovim enzimskim sustavimarazličito zavisno o nihovim enzimskim sustavima• Aerobni, anaerobni, fakultativni anaerobi, a nekim Aerobni, anaerobni, fakultativni anaerobi, a nekim
mikroorganizmima nedostaje sposobnost oksidacijemikroorganizmima nedostaje sposobnost oksidacije
glukoze bilo kojim putem nego to radeglukoze bilo kojim putem nego to radefermentacijom.fermentacijom.
• ermentacija! anaerobna disamilacija pri čemu seermentacija! anaerobna disamilacija pri čemu sestvara organska kiselina kao "to je mliječna,stvara organska kiselina kao "to je mliječna,mravlja, octena, pri čemu nastaju plinovi kao "to jemravlja, octena, pri čemu nastaju plinovi kao "to je
vodik i ugljični dioksid. vodik i ugljični dioksid.• akultativni anaerobi su u pravilu fermentoriakultativni anaerobi su u pravilu fermentori
ugljikohidrata i koriste glikolitički put razgradnje #ugljikohidrata i koriste glikolitički put razgradnje #$mbden!Ma%erhof $mbden!Ma%erhof
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
3/23
IskorištavanjeIskorištavanje
ugljikohidrataugljikohidrata
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
4/23
IskorištavanjeIskorištavanje
ugljikohidrataugljikohidrata• ermentacijska razgradanja u laboratorijskimermentacijska razgradanja u laboratorijskimuvjetima se obavlja kori"tenjem &urhamoveuvjetima se obavlja kori"tenjem &urhamoveepruveticeepruvetice
• &a bi se odigrala reakcija fermentacije u ispitivanju&a bi se odigrala reakcija fermentacije u ispitivanjumikroorganizama podloga za uzgoj treba da sadrži'mikroorganizama podloga za uzgoj treba da sadrži'
• (ranljive materije,(ranljive materije,• "e)er koji se razlaže,"e)er koji se razlaže,• p( indikator fenolno crvenilop( indikator fenolno crvenilo• *ulture mikroorganizama koje ne mogu fermentirati*ulture mikroorganizama koje ne mogu fermentirati
pojedini "e)er ne)e uzrokovati promjenu boje podlogepojedini "e)er ne)e uzrokovati promjenu boje podlogeu žutu i stvaranje plina u &urhamovoj epruveticiu žutu i stvaranje plina u &urhamovoj epruvetici
• +zeli smo podlogu koja se zove Andrade peptonska+zeli smo podlogu koja se zove Andrade peptonska voda sa indikatorom i dodavali tri test "e)era! voda sa indikatorom i dodavali tri test "e)era!lakotozu, glukozu i saharozu.lakotozu, glukozu i saharozu.
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
5/23
Određivanje fermentacije glukoze iOdređivanje fermentacije glukoze ilaktoze na Klingerovom željeznomlaktoze na Klingerovom željeznom
agaru i na agaru sa trostrukimagaru i na agaru sa trostrukimželjezom i šećeromželjezom i šećerom• azlikovati rodove unutar obitelji $nterobacteriaceaeazlikovati rodove unutar obitelji $nterobacteriaceae• azlikovati predstavnike obitelji $nterobacteraceae odazlikovati predstavnike obitelji $nterobacteraceae od
ostalih skupina bakterijaostalih skupina bakterija• azlika unutar obitelji i izme-u predstavnika drugih obiteljiazlika unutar obitelji i izme-u predstavnika drugih obitelji
su gram!negativni bacili kojin se razlikuju po načinu na kojisu gram!negativni bacili kojin se razlikuju po načinu na kojifermentiraju ugljikohidrate i tvorbe vodikova sulda odfermentiraju ugljikohidrate i tvorbe vodikova sulda odstrane različitih skupina mikroorganizama probavnogstrane različitih skupina mikroorganizama probavnogsustava.sustava.
• Bogatstvo nutrijenata kod ove podloge omogu)ava rastBogatstvo nutrijenata kod ove podloge omogu)ava rastbakterija iz porodice $nterobacteriaceae nakon primarnebakterija iz porodice $nterobacteriaceae nakon primarne
izolacije na primarnim ili selektivnim čvrstim podlogama.izolacije na primarnim ili selektivnim čvrstim podlogama.• /ndikator je ponovo fenolno crvenilo, laktoza i saharoza su/ndikator je ponovo fenolno crvenilo, laktoza i saharoza susadržane 01 puta u ve)oj koncentraciji od glukoze.sadržane 01 puta u ve)oj koncentraciji od glukoze.
• *osi dio podloge je izložen atmosferskom kiseoniku!*osi dio podloge je izložen atmosferskom kiseoniku!aeroban, donjindio relativno anaeroban.aeroban, donjindio relativno anaeroban.
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
6/23
TŠ!"Kultura se nanosi cik"cak naTŠ!"Kultura se nanosi cik"cak nakosoj #ovršini i u$odom u du$inukosoj #ovršini i u$odom u du$inu
#odloge#odloge
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
7/23
%eakcije do kojih dolazi na%eakcije do kojih dolazi naTŠ! TŠ!
&užnato na kosini ' lužnato&užnato na kosini ' lužnato uu du$inidu$ini!nema fermentacije!nema fermentacije(Pseudomonas aeruginosa)(Pseudomonas aeruginosa)
Kiselo na kosini ' kiselo uKiselo na kosini ' kiselo u du$inidu$ini!glukoza,laktoza i!glukoza,laktoza i
saharoza su fermentirani #saharoza su fermentirani # Escherichia, Enterobacter i Escherichia, Enterobacter i
Klebsiella. ( Klebsiella. ( lužnato na kosinilužnato na kosinipokaziuje fermentira lipokaziuje fermentira limikroorganizam laktozu2mikroorganizam laktozu2
&užnato na kosini ' kiselo&užnato na kosini ' kiselo
(crno) u du$ini(crno) u du$ini!glukoza!glukozafermentirana laktoza nijenfermentirana laktoza nijenfermentirana , proizvodi sefermentirana , proizvodi se vodonik vodonik sulfd-Salmonella,sulfd-Salmonella, Arizona, Proteus, Citrobacter Arizona, Proteus, Citrobacter
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
8/23
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
9/23
Indol reakcijeIndol reakcije
Indol " sposobnost mikroorganizama da razgrade aminokiselinu triptofan E. coli #pozitivna reakcija$ Klebsiella, Enterobacter "negativna reakcija%odaje se &hrlihov ili 'ovačev reagens
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
10/23
Test metilnimTest metilnim
crvenilomcrvenilomIdentifikacija bakterija koje proizvode jake kiseline p(ispod ),) *raspon p( + uto"p( crveno ),)- "roduljena inkubacija )/"01 sata
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
11/23
+oges"-roskauer +oges"-roskauer
oges roskauer test pozitivan kod bakterija koje proizvodeacetilmetilkarbinol kao krajnji produkt metabolizma ( Enterobacter,Serratia, Klebsiella)
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
12/23
Indol i test sa metilIndol i test sa metil
crvenimcrvenim
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
13/23
.immonsov citratni agar .immonsov citratni agar /asniva se na s#oso$nosti mikroorganizama da u#otrije$e/asniva se na s#oso$nosti mikroorganizama da u#otrije$e
natrijev citrat kao jedini izvor ugljika0 ta s#oso$nostnatrijev citrat kao jedini izvor ugljika0 ta s#oso$nostzaviosi od #risustva enzimazaviosi od #risustva enzima
citarat 1#ermeazecitarat 1#ermeazeIndikator $romtimolno modrilo koje na #odru2ju is#od #3Indikator $romtimolno modrilo koje na #odru2ju is#od #3 vrijednosti 4 "žute $oje0 a u #odrul2ju iznad #3 504 modre vrijednosti 4 "žute $oje0 a u #odrul2ju iznad #3 504 modre
$oje$oje
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
14/23
+oges 1-roskauer i test za +oges 1-roskauer i test zaiskorištavanje citrataiskorištavanje citrata
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
15/23
-rodukcija i određivanje-rodukcija i određivanjeureaze u #odloziureaze u #odlozi
s#oso$nost mikroorganizama da razgrades#oso$nost mikroorganizama da razgrade
ureu o#omoću enzima ureaze 0 #ose$no zaureu o#omoću enzima ureaze 0 #ose$no zaodređivanje vrste -roteus vulgarisodređivanje vrste -roteus vulgaris
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
16/23
-rodukcija i određivanje-rodukcija i određivanjeureaze u #odloziureaze u #odlozi
• /skori"tavanje ureje je mnogo slabije izraženo/skori"tavanje ureje je mnogo slabije izraženokod drugih vrsta enterobakterija u odnosu nakod drugih vrsta enterobakterija u odnosu na3roteus, stoga služi za brzu dijagnostiku3roteus, stoga služi za brzu dijagnostikupredstavnika toga roda i razlikovanje odpredstavnika toga roda i razlikovanje od
ostalih laktoza nefermentiraju)ih bakteriajostalih laktoza nefermentiraju)ih bakteriaj• 3risutnost ureaze može se odrediti pojavom3risutnost ureaze može se odrediti pojavomružičate boje zahvaljuju)i p( indikatoruružičate boje zahvaljuju)i p( indikatorufenolonom crvenilu, oslobo-eni amonijakfenolonom crvenilu, oslobo-eni amonijakstvara lužnati medij i ružičastu boju "to jestvara lužnati medij i ružičastu boju "to je
pozitivna reakcija.pozitivna reakcija.• *ao podloga se upotreblajva 4hristensenova*ao podloga se upotreblajva 4hristensenova
ureja agar.ureja agar.
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
17/23
Test za dokazivanjeTest za dokazivanjestvaranja vodikova sul6da0stvaranja vodikova sul6da0
#lina u #odlozi#lina u #odlozi• 5uldi se osloba-aju iz cistina ili metionina enzimskim5uldi se osloba-aju iz cistina ili metionina enzimskimdjelovanjem bakterijadjelovanjem bakterija• 5pajanje sulda sa vodikovim jonima5pajanje sulda sa vodikovim jonima
• 6tkrivanje plina pomo)u soli te"kih metala kao "to su6tkrivanje plina pomo)u soli te"kih metala kao "to su
željezo, bizmut ili olovo..željezo, bizmut ili olovo..
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
18/23
Određivanje $iohemijskihOdređivanje $iohemijskihaktivnosti mlije2nih $akterijaaktivnosti mlije2nih $akterija
#omoću litmus indikatora#omoću litmus indikatora
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
19/23
Katalaza testKatalaza tests#oso$nost nekih mikroorganizama das#oso$nost nekih mikroorganizama da
razgrade vodikov #eroksid #oomoću enzimarazgrade vodikov #eroksid #oomoću enzimakatalazekatalaze
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
20/23
2esto kori3teni testovi za aerobne gram pozitivne koke
'atalaza pozitivan i katalaza negativan testStaphylococcus, Streptococcus)
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
21/23
Oksidaza test saOksidaza test sa#"aminodimetilanilin#"aminodimetilanilin
oksalatomoksalatom• 5posobnost nekih bakterija da proizvode citohrom5posobnost nekih bakterija da proizvode citohromoksidazuoksidazu• &okaz proizvodnje je pojava ružičaste, potom sjetlo sme-e&okaz proizvodnje je pojava ružičaste, potom sjetlo sme-e
i napokon crne boje na povr"ini kolonija.i napokon crne boje na povr"ini kolonija.
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
22/23
.ta#h7lococcus vrste.ta#h7lococcus vrste
-
8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI
23/23
Koagulaza testKoagulaza test
• 5posobnost nekih bakterija da sintetiziraju5posobnost nekih bakterija da sintetizirajuenzime koji koaguliraju krvnu plazmu!koagulazaenzime koji koaguliraju krvnu plazmu!koagulazaplazma kuni)aplazma kuni)a
• *oagulaza pozitivna reakcija *oagulaza*oagulaza pozitivna reakcija *oagulazanegativnanegativna
reakcijareakcija