sérogroupage des salmonella 1 réalisation par christiane joffin
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Sérogroupage des Salmonella
1
Réalisation par Christiane JOFFIN
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POURQUOI ?
Obtenir la formule antigénique qui désigne le SÉROVAR, seul moyen
de préciser l’identification d’une
Salmonella
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QUE RECHERCHE T ’ON ?
Ag O de paroi Ag H du flagelle pour les souches mobilesAg Vi de la micro-capsule
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1- Les antigènes des 1- Les antigènes des Salmonella (et des bactéries Salmonella (et des bactéries
Gram négatives)Gram négatives)
1- Les antigènes des 1- Les antigènes des Salmonella (et des bactéries Salmonella (et des bactéries
Gram négatives)Gram négatives)
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2- Le principe du 2- Le principe du sérogroupage des sérogroupage des
SalmonellaSalmonella
2- Le principe du 2- Le principe du sérogroupage des sérogroupage des
SalmonellaSalmonella
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COMMENT ?
Après l’identification biochimique du genre Salmonella
Avec une culture pure sur une gélose non sélective (Kligler par exemple) Par une identification des Ag O, H (et Vi) en utilisant des Ac connus par une technique d’agglutination directe sur lame.
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Principe du sérogroupage Identifier :- d ’abord les Ag O de paroi,- puis les Ag H de flagelle- et éventuellement l’Ag Vi en utilisant des Ac connus spécifiques des Ag
O (Ac anti O), des Ag H (Ac anti H) et de l’Ag Vi.
Si les bactéries ont des Ag spécifiques des Ac utilisés connus, il va y avoir union Ag / Ac avec formation d’un réseau volumineux visible sous forme d’un agglutinat.
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Agglutination des Salmonella par suite
réaction Ag O/ Ac anti O
Agglutination des Salmonella par suite
d ’une réaction Ag H / Ac anti H
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3- Les 3- Les réactifsréactifs pour le pour le sérogroupage des sérogroupage des
SalmonellaSalmonella
3- Les 3- Les réactifsréactifs pour le pour le sérogroupage des sérogroupage des
SalmonellaSalmonella
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Voir dictionnaire des techniques
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Origine des Ac :
Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum
Prix des sérums : 30 € les 3 mL soit10 € par mL et 10 000 € par L(un lingot d’or (1 kg) = 40 000 €
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3-1- Les Ac anti Ag O• Des sérums O mélange (OMx)
Sérums (contenant un grand nombre d’Ac de sortes différentes) : 6 sérums mélange (Omx : OMA, OMB, OMC, OMD, OMF, OMG)
• Des sérums O monovalents
Sérums ne contenant qu’un seul type d’Ac : 1,2 / 4,5 / 6,7,8 / 7 / 8 / 9 / 3,10,15 / 10 / 15 / 1,3,19 / 11 / 13,22,23 / 6,14,24.
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Sérum O mélange
Ag spécifiques des Ac du sérum
Groupes agglutinés
OMA 1,2,3,4,5,9,10,12,19,21,46
A,B,D,E,L
OMB 6,7,8,11,13,14,20,22,23,24
C,F,G,H
OMC 16,17,18,28,30,35,38 I,J,K,L,M,N,O,P
OMD 39,40,41,42,43,44,45 Q,R,S,T,U,V,W
OMF 47,48,50,51,52,53 X,Y,Z,51,52,53
OMG 60,61,62,63,65,66,67 60,61,62,63,65,66,67
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Les Ac anti Ag O monovalents• Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si
agglutination avec le sérum OMA ?
• Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMB ?
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Ac anti 0 1, 2 pour le groupe AAc anti 0 4, 5 pour le groupe BAc anti 0 9 pour le groupe DAc anti 0 3, 10, 15 pour le groupe E
Le groupe le plus fréquent : groupe C à tester avec Ac anti 0 6 7 8
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3-2- Les Ac anti Ag H
• Des sérums H mélange – Sérum contenant un mélange d’Ac anti
Ag H
• Des sérums H monovalents – Sérum ne contenant qu’un seul type d’Ac
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3-3- Les Ac anti Ag Vi
• Une seule valence• Trois sérovars concernés
• Attention : d’autres Entérobactéries possèdent cet antigène (Klebsiella…)
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4- La technique du 4- La technique du sérogroupagesérogroupage
4- La technique du 4- La technique du sérogroupagesérogroupage
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Voir dictionnaire des techniques
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4-1- Les étapes du sérogroupage
Premières étapes
1- S’assurer que la bactérie est bien une Salmonella
2- Vérifier que la souche n’est pas auto-agglutinable (réalisation d’un témoin de non auto-agglutinabilité en mettant les bactéries en présence d’eau physiologique)
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Les étapes du sérogroupage (suite)
Etapes suivantes : identification du (ou des) groupe(s) O
3- Identifier les groupes auxquels la bactérie appartient grâce à des sérums mélanges d’Ac anti-O– OMA = agglutinines groupes A, B, D, E, L (contient Ag 1, 2, 3, 4,
5, 9, 10, 12, 19, 21, et 46)– OMB = agglutinines groupes C, F, G, H (contient Ag 6, 7, 8, 11,
13, 14, 20, 22, 23, 24)Remarque : si pas d’agglutination avec OMA et OMB, il faudra recherher si la souche a l’Ag Vi en utilisant des AC anti Vi
4- Préciser l’identification des Ag O en utilisant des sérums Anti O (sérums monovalents) en les choisissant par ordre de fréquence de groupe.
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Les étapes du sérogroupage (suite)
Dernières étapes : identification du sérogroupe précis par identification des Ag H
.5- Identifier SI POSSIBLE les Ag H parmi ceux possibles (en
fonction du résultat de l’identification de l’Ag O) grâce à des Ac anti H (mélange et monovalent). Respecter l’ordre des fréquences de groupe.
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Sérum OMA Anti O4, 5 Anti O 9 Anti H g, m Anti H l, v
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Anti H 1, 5
4-2- Exemple de résultats d’un sérogroupage
Pas d’agglutination avec l’eau physiologique :
Agglutination avec OMA :
Agglutination avec Anti O9 :
Agglutination avec Anti H1 et H5
Les bactéries testées ne sont pas auto-agglutinables, les autres résultats peuvent être interprétés
les Salmonella appartiennent aux groupes A, B, D, E, L
les Salmonella appartiennent au groupe D
les Salmonella sont Salmonella Panama
La bactérie n’appartient pas au groupe B