situaciÓn actual infecciÓn oculta por virus c
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Alta Frequencia de infección por VHC Oculto en pacientes en HD con Anti-VHC y VHC-RNA Negativos en suero. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
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Guillermina Barril, Inmaculada Castillo , Dolores Arenas**, Elena Rodriguez-Guillermina Barril, Inmaculada Castillo , Dolores Arenas**, Elena Rodriguez-Inigo*, Mario Espinosa***, Juan Garcia Valdecasas****, E. Glez Parra Inigo*, Mario Espinosa***, Juan Garcia Valdecasas****, E. Glez Parra + + , ,
Carmen Sanchez ++ ,Rafael Selgas++, Vicente Carreño*. Carmen Sanchez ++ ,Rafael Selgas++, Vicente Carreño*.
Servicios de Nefrología: Hospital U. de la Princesa, Madrid; H. Perpetuo Servicios de Nefrología: Hospital U. de la Princesa, Madrid; H. Perpetuo Socorro**, Alicante; H. Reina Sofia***, Cordoba; H. U. San Cecilio****, Granada, Socorro**, Alicante; H. Reina Sofia***, Cordoba; H. U. San Cecilio****, Granada, H. Central de la Defensa ,Madrid, Hospital La Paz ++ Madrid y Fundación para el H. Central de la Defensa ,Madrid, Hospital La Paz ++ Madrid y Fundación para el
Estudio de Hepatitis Virales* ,MadridEstudio de Hepatitis Virales* ,Madrid
Alta Frequencia de infección por VHC Alta Frequencia de infección por VHC Oculto en pacientes en HD con Anti-VHC y Oculto en pacientes en HD con Anti-VHC y
VHC-RNA NegativosVHC-RNA Negativosen sueroen suero
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SITUACIÓN ACTUAL INFECCIÓN OCULTA POR VIRUS C
Artículo original: J Infect Dis 2004 (Castillo y cols.)
Editoriales: Artículos relacionados
J Infect Dis 2004 (Hollinger B) J Infect Dis 2004 (Stapleton et al)
Curr Gastroenterol Rep 2004 (Coyle J) J Virol 2004 (Pham et al)
Hepatology 2005 (Liang T) Intern Med 2004 (Esaki et al)
Gastroenterology 2005 (Blendis L) J Clin Virol 2004 (Carreño et al)
Am J Gastroenterol 2005 (Gordon SC) Hepatology 2005 (Radkowski et al)
Lancet 2005 (Quiroga et al)
J Infect Dis 2005 (Radkowski et al)
Gut 2005 (Castillo et al)
J Infect Dis 2005 (Lee et al)
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ObjetivoObjetivo
Estudiar la existencia de infección oculta por VHC en pacientes en hemodiálisis mediante la
determinación del VHC-RNA en sus CMSP
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* Niveles altos de ALT (> 28 UI/l) y/o gamma-GT
* Marcadores serológicos negativos de infección por
VHB (AgHBs negativo) y VHC (anti-VHC y
VHC-RNA negativos)
* Exclusión de otras causas de daño hepático
CRITERIOS DE INCLUSIÓN:
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Estudio multicéntrico en el que han participado
6 unidades de hemodiálisis en la inclusión de pacientes:
* Hospital Univ. de la Princesa - Madrid* Hospital Perpetuo Socorro – Alicante* Hospital Reina Sofía - Córdoba* Hospital Univ. San Cecilio - Granada
* Hospital Central de la Defensa – Madrid* Hospital La Paz – Madrid
Los datos fueron enviados al HUP y procesados en base de datos SPSS 11.0 , se utilizó T de student para comparación de medias en variables continuas con distribución normal y la U de Mann withney para las no paramétricas-
La determinación de la infección oculta por VCH en CMSP se realizó por la FEHV
MATERIAL Y MÉTODOS I:
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Número de pacientes incluidos = 42
Controles sanos = 10
* Aislamiento CMSP para detección VHC-RNA
1) RT-PCR con cebadores región 5’ NC
2) Hibridación in situ con sonda región core
* Recogida de datos clínicos y analíticos
MATERIAL Y MÉTODOS II:
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CARACTERÍSTICAS DE LOS PACIENTES
Edad (años) 61,7 ±14,0
Sexo (Masculino/Femenino) 26/16
Tiempo en hemodiálisis (meses) 80,41 ±174
Tiempo de enzimas hepáticasalteradas (meses) 23,73 ± 27,64
ALT (UI/l, el día toma de muestra 32,28 ± 21,76
GGT (UI/l, el día toma de muestra) 126,47 ± 100,49
ALT (UI/l, los 6 meses anteriores) 24,97 ± 13,42
GGT (UI/l, los 6 meses anteriores) 94,86 ± 83,48
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RESULTADOS
* Se detectó infección oculta por VHC en las CMSP de
26/42 (61,9%) de los pacientes por RT-PCR
* Todos los casos (positivos y negativos) se confirmaron
por hibridación in situ
* Las CMSP de los controles sanos fueron siempre
VHC-RNA negativo por RT-PCR e hibridación in situ
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COMPARATIVA CARACTERÍSTICAS DE PACIENTES
VCH-RNA + VCH-RNA - p (N=26) (N=16)
Sexo (% Masculino) 61,9 38,1 0,69
*Edad (años) 57,9 ± 13,3 67,9 ± 13,2 0,02
Tiempo hemodiálisis (meses) 103,26 ± 215,6 40,8 ± 28,8 0,2
Tiempo enzimas hepáticasalteradas (meses) 26,8 ± 22,04 18,6 ± 28,7 0,3
**ALT (UI/l, día toma muestra) 36,0 ± 19,5 26,2 ± 24,3 0,02
GGT (UI/l, día toma muestra) 143,3 ± 117,9 99,1 ± 56,0 0,3
* T de student, ** U de Mann-Withney
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30,1216,6
110,5
67,7
0
20
40
60
80
100
120
VCH (+)VCH (-)
ALT GGT
p<0,000
p< 0,22
Niveles transaminasas durante los 6 meses previosa la inclusión en el estudio
Test U de Mann-withney
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NIVELES DE ENZIMAS HEPATICAS
Entre los pacientes con infección oculta por VCH
* 4/26 (15,3%) ALT elevada
* 8/26 (30,7%) GGT elevada
* 14/26 (53,8%) ALT y GGT elevadas
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CONCLUSIONES INICIALES
En la población estudiada, el 61,9% de los pacientes en
hemodiálisis con niveles alterados de ALT y/o GGT de etiología
desconocida y negativos para los marcadores serológicos de los
virus de hepatitis (incluyendo el VCH-RNA en suero), presentan
una infección oculta por VCH en sus CMSP, por lo que pueden
ser potencialmente infecciosos
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INFECCIÓN OCULTA POR EL VIRUS C DE LA HEPATITIS EN PACIENTES EN HEMODIÁLISIS
Estudiar la replicación del VCH oculto en las CMSP de los
pacientes en hemodiálisis
* Detección de la cadena antigenómica (intermediario
replicativo) del VCH
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INFECCIÓN OCULTA POR EL VIRUS C DE LA HEPATITIS EN PACIENTES EN HEMODIÁLISIS
Problemas de especificidad en la detección de la cadena
antigenómica del VCH por RT-PCR
1) Alta complementaridad interna de bases en la
región 5’ NC del VCH
2) Cadena genómica 10-100 veces más abundante que cadena antigenómica
Falsos positivos
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INFECCIÓN OCULTA POR EL VIRUS C DE LA HEPATITIS EN PACIENTES EN HEMODIÁLISIS
CCG
GGCUUUCCG -----CGGCUGA
Cadena genómica
Cadena antigenómica
AAAGGC-----GCCGACU
CGGCTGA
AAAGGC-----GCCGACU
CGGCTGA.... .. .. .. .. ..
UUUCCG -----CGGCUGA
GCC.... ..
CT
GA
AAAGGC-----GCCGACU
CGGCTGA.... .. .. .. .. ..
UUUCCG -----CGGCUGA
GCC.... ..
CT
GAPCR
¿Verdadero positivo? Sólo verdaderos positivos
PCR
cDNA
42º 60º
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INFECCIÓN OCULTA POR EL VIRUS C DE LA HEPATITIS EN PACIENTES EN HEMODIÁLISIS
Cadena genómica(fg RNA)
0.1 1 10 100 MN
0.1 1 10 100 MN(fg RNA)
1 10 100 MN(pg RNA)
Detección cadena genómica
(pg RNA) 1 10 100 MN
Cadena antigenómica
Detección cadena antigenómicaCadena antigenómica Cadena genómica
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INFECCIÓN OCULTA POR EL VIRUS C DE LA HEPATITIS EN PACIENTES EN HEMODIÁLISIS
Detección simultánea de la cadena genómica y antigenómica
por hibridación in situ
ACGCCGUUUAGG----------UAGGGAACACGGU-----
Región 5’NC Región core
UGCGGCAAAUCC
Cadena genómica
......
......
......
......
......
......
UGCGGCAAAUCC----------AUCCCUUGUGCCA-----
Cadena antigenómica
Región 5’NC Región core
UAGGGAACACGGU
......
......
......
......
......
......
...
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INFECCIÓN OCULTA POR EL VIRUS C DE LA HEPATITIS EN PACIENTES EN HEMODIÁLISIS
Detección simultánea de cadena genómica y antigenómica
![Page 19: SITUACIÓN ACTUAL INFECCIÓN OCULTA POR VIRUS C](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022081515/568154d9550346895dc2d990/html5/thumbnails/19.jpg)
INFECCIÓN OCULTA POR EL VIRUS C DE LA HEPATITIS EN PACIENTES EN HEMODIÁLISIS
* En 15 /26 (57,9%) pacientes en hemodiálisis con infección oculta
por VCH se detecta la cadena antigenómica del virus
por RT-PCR y por hibridación in situ
El VCH está replicando en las CMSP de estos pacientes
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Caso clínico con biopsia hepática
• Paciente de 53 años con ERC por GN IgA,
• Inicia HD en 1990 hasta 1992 …..Tx renal
• Recibe injerto renal de donante cadaver en ese año
• En Marzo 2003 reingresa en HD por NCI
• En Abril de 2004 presenta GPT 56 UI/l, GGT 340 UI/l por primera vez con marcadores serológicos negativos para VHC
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AntecedentesAntecedentesALTALT GGTPGGTP
Abril 2004Abril 2004 5656 340340Mayo 2004Mayo 2004 4444 355355Julio 2004Julio 2004 4242 275275Octubre 2004Octubre 2004 5050 268268
Febrero 2005Febrero 2005 Cadena genómica VCH: PositivoCadena genómica VCH: Positivo
Muestra de CMSPMuestra de CMSP Cadena antigenómica VCH: Cadena antigenómica VCH:
PositivoPositivo
INFECCIÓN OCULTA POR VCH EN PACIENTE EN HEMODIÁLISIS (anti-VCH y VCH-RNA negativo)
Se indica determinación de VHC oculto en CMSP por presentar elevación de ALT y GGT más de 9 meses con marcadores virológicos en suero negativos.
![Page 22: SITUACIÓN ACTUAL INFECCIÓN OCULTA POR VIRUS C](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022081515/568154d9550346895dc2d990/html5/thumbnails/22.jpg)
INFECCIÓN OCULTA POR VCH EN PACIENTE EN HEMODIÁLISIS (anti-VCH y VCH-RNA negativo)
Marzo 2005 muestra de biopsia hepática
RT-PCR H. in situ
Cadena genómica VCH 260.000 copias Positivo (3%)
Cadena antigenómica VCH 62.000 copias Positivo (1%)
Diagnóstico histológico: Colestasis (persistía en tto con Ciclosporina y prednisona)
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Conclusión FinalConclusión Final
Por todo ello actualmente, cuando pacientes en HD Por todo ello actualmente, cuando pacientes en HD presentan elevaciones de ALT ( GPT) y/o GGT de presentan elevaciones de ALT ( GPT) y/o GGT de forma ondulante o persistente, de etiología forma ondulante o persistente, de etiología desconocida, y con marcadores virales serológicos desconocida, y con marcadores virales serológicos negativos (incluyendo RNA-VHC), una infección negativos (incluyendo RNA-VHC), una infección oculta por VHC debe ser considerada.oculta por VHC debe ser considerada.