BAB 1PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang MasalahAkhir-akhir ini dunia kesehatan banyak membahas tentang radikal bebas dan antioksidan. Hal ini terjadi karena sebagian penyakit berawal oleh adanya reaksi oksidasi yang berlebihan dalam tubuh. Reaksi oksidasi dapat terjadi setiap saat. Reaksi ini mencetukan terbentuknya radikal bebas yang sangat aktif, yang dapat merusak struktur dan fungsi sel.Pada benda yang diterpa sinar ultraviolet secara terus-menerus, elektron atom benda tersebut akan meloncat dari orbitnya, dan terciptalah radikal bebas. Radikal bebas adalah suatu senyawa atom atau molekul yang mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan. Adanya elektron yang tidak berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif mencari pasangan, dengan cara menyerang dan mengikat elektron molekul yang berada disekitarnya. Radikal bebas sangat berbahaya dikarenakan tingginya reaktivitasnya yang mengakibatkan terbentuknya senyawa radikal baru. Bila senyawa radikal baru tersebut bertemu dengan molekul lain, maka akan terbentuk radikal baru lagi dan seterusnya hingga terjadi reaksi berantai.Efek oksidatif radikal bebas dapat menyebabkan peradangan dan penuaan dini. Lipid yang seharusnya menjaga kulit agar tetap segar berubah menjadi lipid peroksida karena bereaksi dengan radikal bebas sehingga mempercepat penuaan. Kanker kulit pun disebabkan oleh oksigen reaktif yang intinya memacu zat karsinogenik, sebagai faktor utama kanker kulit. Untuk menetralisir radikal bebas ini, tubuh kita memerlukan antioksidan yang dapat membantu melindungi tubuh dari serangan radikal bebas dan meredam dampak negatifnya. Antioksidan adalah molekul yang mampu menghambat oksidasi molekul yang dapat menghasilkan radikal bebas (Rajnarayana, Ajitha, Gopireddy, dan Giriprasad, 2011).Kita dapat melindungi diri kita secara alami dari efek merugikan sinar matahari dengan menghindari senyawa kimia toksik dalam tabir surya, menggunakan senyawa alami. Dalam sediaan tabir surya, disamping senyawa yang bersifat fotoprotektif, diperlukan juga senyawa antioksidan dan pelembab. Tabir surya adalah suatu sediaan yang mengandung senyawa yang dapat menyerap, menghamburkan atau memantulkan sinar matahari yang mengenai kulit sehingga dapat digunakan untuk melindungi fungsi dan struktur kulit manusia dari kerusakan akibat sinar surya. (Depkes RI, 1979: 19).Salah satu bentuk sediaan tabir surya yang banyak digunakan adalah lotion, yaitu sediaan cair berupa suspensi atau emulsi minyak dalam air, digunakan sebagai obat luar. Sediaan lotion mempunyai keuntungan antara lain kemampuan sebarnya secara cepat dan merata pada daerah kulit yang luas, serta meninggalkan selapis tipis bahan aktif setelah mengering.Bayam merah merupakan salah satu bahan alami yang dapat dimanfaatkan sebagai antioksidan. Dalam bayam merah terkandung flavonoid dan fenolik yang berfungsi sebagai antioksidan. Untuk mengetahui aktivitas bayam merah sebagai tabir surya maka pada penelitian ini ekstrak dari bayam merah diaplikasikan pada pembuatan lotion, yang kemudian lotion tersebut akan diuji aktivitas antioksidannya pada spektrofotometer UV-Vis dengan metode DPPH.

1.2 Rumusan MasalahBagaimana caranya mengaplikasikan ekstrak bayam merah pada pembuatan lotion dan bagaimana dengan aktivitas antioksidan produk lotion tersebut.

1.3 Tujuan Penelitian1. Membuat produk lotion dari ekstrak bayam merah.2. Mengukur aktivitas antioksidan produk lotion menggunakan metode DPPH.

1.4 Manfaat PenelitianManfaat yang diperoleh yaitu dapat membuat produk lotion dari sumber antioksidan alami dan mengetahui bagaimana aktivitas antioksidan pada produk tersebut.

1.5 Batasan Masalah1. Bahan yang digunakan sebagai sumber antioksidan dari produk lotion adalah ekstrak bayam merah.2. Lotion ekstrak biji kelengkeng digunakan sebagai perbandingan aktivitas antioksidan.3. Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH pada spektrofotometer UV-Vis.4. Dilakukan perbandingan IC50 ekstrak asli dengan ekstrak produk lotion.

BAB 2TINJAUAN PUSTAKA

4.1 AntioksidanAntioksidan adalah senyawa yang mampu menghilangkan, membersihkan, dan menahan pembentukan oksigen reaktif atau radikal bebas dalam tubuh. Radikal bebas adalah atom atau molekul yang tidak stabil karena memiliki elektron yang tidak berpasangan dalam orbital luarnya sehingga sangat reaktif untuk mendapatkan pasangan elektron dengan mengikat sel-sel tubuh. Apabila hal tersebut terjadi secara terus-menerus dapat menyebabkan dan kematian sel (Lautan, 1997). Antioksidan ditujukan untuk mencegah dan mengobati penyakit seperti aterosklerosis, stroke, diabetes, Alzheimer, dan kanker (Aqil, Ahmad dan Mehmood, 2006).Antioksidan merupakan senyawa pemberi elektron atau reduktan. Senyawa ini memiliki berat molekul yang kecil, tetapi mampu mengaktivasi berkembangnya reaksi oksidasi dengan cara mencegah terbentuknya radikal. Antioksidan juga merupakan senyawa yang dapat menghambat reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas dan molekul yang reaktif.Berdasarkan sumbernya antioksidan dibagi dalam dua kelompok yaitu antioksidan alami (antioksidan hasil ekstrak bahan alami) dan antioksidan sintetik (antioksidan yang diperoleh dari hasil sintesa bahan kimia). Sedangkan berdasarkan mekanisme kerjanya, antioksidan digolongkan menjadi tiga kelompok, yaitu antioksidan primer, sekunder, dan tersier.Antioksidan primer disebut juga sebagai antioksidan enzimatis. Antioksidan primer meliputi enzim superoksida dismutase, katalase, dan glutation peroksidase. Enzim-enzim ini menghambat pembentukan radikal bebas dengan cara memutus reaksi berantai (polimerisasi), dan mengubahnya menjadi produk yang lebih stabil. Antioksidan kelompok ini disebut juga chain-breaking-antioxidant (Winarsi, 2007).Antioksidan sekunder disebut juga antioksidan eksogenus atau non-enzimatis. Cara kerja sistem antioksidan non-enzimatis yaitu dengan cara memotong reaksi oksidasi berantai dari radikal bebas. Akibatnya radikal bebas tidak bereaksi dengan komponen seluler. Contoh antioksidan seluler ialah vitamin C, vitamin E, flavonoid, asam urat, bilirubin, dan albumin (Lampe, 1999).Antioksidan tersier contohnya enzim contohnya enzim DNA-repair dan metionin sulfoksida reduktase yang berperan dalam perbaikan biomolekul yang dirusak oleh radikal bebas. Kerusakan DNA yang terinduksi senyawa radikal bebas dicirikan oleh rusaknya single dan double stand, baik gugus basa maupun non-basa. Perbaikan kerusakan basa dalam induksi senyawa oksigen reaktif terjadi melalui perbaikan jalur eksisi basa. Pada umumnya, eksisi basa terjadi dengan cara memusnahkan basa yang rusak, yang dilakukan oleh DNA glikosilase (Winarsi, 2007).

4.2 Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPHDPPH merupakan radikal bebas yang stabil pada suhu kamar dan sering digunakan untuk menilai aktivitas antioksidan beberapa senyawa atau ekstrak bahan alam. Interaksi antioksidan dengan DPPH baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen pada DPPH akan menetralkan karakter radikal bebas dari DPPH. Prinsip uji DPPH adalah penghilangan warna untuk mengukur kapasitas antioksidan yang langsung menjangkau radikal DPPH dengan pemantauan absorbansi pada panjang gelombang 517 nm menggunakan spektrofotometer. Radikal DPPH dengan nitrogen organic terpusat adalah radikal bebas stabil dengan warna ungu gelap yang ketika direduksi menjadi bentuk non radikal oleh antioksidan menjadi warna kuning (Yu, 2008).

BAB 3METODE PENELITIAN

3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian3.1.1 Lokasi PenelitianPenelitian dilakukan di Pusat Laboratorium Terpadu (PLT) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta dengan pertimbangan di laboratorium tersebut tersedia alat dan bahan yang cukup layak untuk melakukan penelitian uji aktivitas antioksidan.3.1.2 Waktu PenelitianPenelitian dilakukan pada Selasa, 16 Desember 2014 pukul 09.00 WIB sampai pukul 13.30 WIB.3.2 Alat dan Bahan3.2.1 AlatAlat yang digunakan dalam penelitian ini adalah labu ukur 10 mL, tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet ukur, gelas kimia, vortex, aluminum foil, batang pengaduk.3.2.2 BahanBahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah lotion ekstrak bayam, methanol, dan larutan DPPH.3.3 Prosedur KerjaLotion dari ekstrak bayam dilarutkan dengan methanol dengan konsentrasi 32.000 ppm sebagai larutan induk kemudian dibuat dalam berbagai konsentrasi (2000; 4000; 8000; 16.000; 32.000 ppm). Lalu larutan tersebut dimasukkan ke dalam masing-masing tabung reaksi sebanyak 2 mL dan ditambahkan 2 mL larutan DPPH. Campuran ini kemudian diinkubasi dalam temperatur ruang selama 30 menit pada ruang tertutup. Selanjutnya serapan diukur pada spektrofotometer UV-Vis dan dihitung nilai IC50-nya.

BAB 4HASIL DAN PEMBAHASAN

Pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode DPPH menggunakan prinsip spektrofotometri. DPPH adalah senyawa radikal bebas berwarna ungu. Apabila DPPH direaksikan dengan senyawa peredam radikal bebas misalnya flavonoid, intensitas warna ungu akan berkurang dan bila senyawa peredam radikal bebas yang bereaksi jumlahnya besar, maka DPPH dapat berubah warna menjadi kuning. Metode DPPH memberikan informasi reaktivitas senyawa yang diuji dengan suatu radikal stabil. DPPH memberikan serapan kuat pada panjang gelombang 517 nm dengan warna violet gelap. Penangkap radikal bebas menyebabkan elektron menjadi berpasangan yang kemudian menyebabkan penghilangan warna yang sebanding dengan jumlah elektron yang diambil (Sunarni, 2005). Dalam penelitian ini, lotion ekstrak biji kelengkeng yang berasal dari kelompok lain dijadikan sebagai perbandingan aktivitas antioksidan.Tahap awal yang dilakukan adalah pengukuran panjang gelombang maksimum (maks) larutan DPPH atau blanko. Panjang gelombang maksimum yang digunakan adalah 516,9 nm dengan absorbansi sebesar 0,25 (Gambar 4.1). Selanjutnya lotion yang telah dibuat dari ekstrak bayam dilarutkan dengan methanol dalam berbagai konsentrasi (2000; 4000; 8000; 16.000; 32.000 ppm). Nilai konsentrasi yang besar disebabkan oleh kandungan ekstrak bayam merah yang terdapat dalam lotion hanya sekitar 0,002% sehingga diperlukan konsentrasi yang besar agar aktivitas antioksidan dapat terukur. Berdasarkan hasil pengamatan visual, larutan lotion ekstrak bayam merah yang telah direaksikan dengan DPPH setelah masa inkubasi selama 30 menit tidak mengalami perubahan berarti yaitu tetap berwana ungu, sedangkan larutan lotion ekstrak biji kelengkeng berubah menjadi kuning pucat. Sampel yang telah diinkubasi lalu dianalisis absorbansinya menggunakan spektrofotometri UV-Vis.

Gambar 4.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum (maks) dan Absorbansi Blanko

Setelah penambahan senyawa uji ke dalam larutan DPPH, terjadi penurunan absorbansi DPPH dibandingkan dengan blanko (Tabel 4.1). Turunnya absorbansi menandakan berkurangnya konsentrasi radikal bebas dari DPPH yang dikarenakan oleh adanya reaksi dengan senyawa antioksidan yang mengakibatkan molekul DPPH tereduksi dan diikuti dengan berkurangnya intensitas warna ungu dari larutan DPPH. Menurut hukum Lambert-Beer, ada korelasi sebanding antara konsentrasi dengan absorbansi, jika terjadi penurunan konsentrasi maka absorbansi spektrum sinar dari larutan tersebut juga akan mengalami penurunan.SampelC (/ml)(x)Absorbansi BlankoAbsorbansi Sampel

Lotion Daun Bayam merah20000.250.180

40000.179

80000.146

160000.092

320000.063

Lotion Biji Kelengkeng1250.250.210

2500.188

5000.157

10000.099

20000.019

Tabel 4.1 Data absorbansi lotion ekstrak bayam merah dan biji kelengkeng

Selanjutnya ditentukan persen inhibisi dari masing-masing absorbansi (Tabel 4.2). Persen inhibisi adalah perbandingan antara selisih dari absorbansi blanko dan absorbansi sampel dengan absorbansi blanko.Persen inhibisi digunakan untuk menentukan persentase hambatan dari suatu bahan yang dilakukan terhadap senyawa radikal bebas.Persen inhibisi dihitung dengan rumus berikut:Pi = [(Ab-As)/Ab] x 100%dimanaPi: Persen inhibisiAb: Absorbansi blankoAs: Absorbansi sampel

Sampel%inhibisi (y)IC50

Lotion Daun Bayam Merah2814520,62

28,4

41,6

63,2

74,8

Lotion Biji Kelengkeng16869,9

24,8

37,2

60,4

92,4

Tabel 4.2 Persen inhibisi lotion ekstrak bayam merah dan biji kelengkeng

Gambar 4.1 Kurva hubungan persen inhibisi dan absorbansi lotion ekstrak bayam merah (a) dan biji kelengkeng (b)

Dari persamaan regresi yang didapatkan pada kurva diatas, dapat ditentukan nilai IC50 pada lotion. IC50atau inhibitorConcentration50% adalah nilai konsentrasi suatu bahan untuk menghambat aktivitas DPPH sebesar 50%. Nilai konsentrasi dari larutan yang telah diencerkan dari ekstrak dan persen inhibisi diplotkan masing-masing pada sumbu x dan y. Berdasarkan perhitungan didapatkan IC50 lotion ekstrak bayam merah dan biji kelengkeng berturut-turut sebesar 14520,62 ppm dan 869,9 ppm. Nilai IC50 lotion ini berbeda jauh dengan IC50 masing-masing ekstrak. Nilai IC50 untuk ekstrak bayam merah dan biji kelengkeng masing-masing sebesar 146,65 ppm dan 11,01 ppm. Perbedaan yang jauh ini disebabkan karena banyaknya bahan yang terkandung dalam lotion, sedangkan ekstrak yang terkandung dalam lotion hanya sekitar 0,002% atau hanya ada 0,1 mg dalam 50 mL lotion. Hal inilah yang menyebabkan aktivitas antioksidan pada lotion ini sangat kurang jika dibandingkan ekstrak aslinya.

BAB 5PENUTUP

5.1 SimpulanAktivitas antioksidan pada lotion ekstrak bayam merah dan pembandingnya yaitu lotion ekstrak biji kelengkeng berturut-turut sebesar 14520,62 ppm dan 869,9 ppm.

5.2 SaranUji lain selain aktivitas antioksidan perlu dilakukan agar lotion menjadi lebih aman jika ingin digunakan.

LAMPIRANPerhitungan%inhibisi = A. Lotion Ekstrak Biji Kelengkeng1. 125 ppm %inhibisi = %= 16%2. 250 ppm %inhibisi = %= 24.8%3. 500 ppm%inhibisi= %= 37.2%4. 1000 ppm%inhibisi = %= 60.4%5. 2000 ppm%inhibisi = %= 92.4%r2 = 0.985r = 0.99y= 0.0401 x + 15.11750 = 0.0401x + 15.117x= 869.9 ppm

B.Lotion Ekstrak Daun Bayam Merah1.2000 ppm%inhibisi= %= 28%2.4000 ppm%inhibisi= %= 28.4%3.8000 ppm%inhibisi= %= 41.6%4.16000 ppm%inhibisi= %= 63.2%5. 36000 ppm%inhibisi= %= 74.8%r2 = 0.9125r = 0.95y = 0.0016x + 26.76750= 0.0016x + 26.767x= 14520.62 ppm