sky e m-fish. multi-band cgh (comparative genomic hybridization ) il dna da studiare è marcato con...
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SKY e M-FISH
Multi-band
CGH (Comparative genomic Hybridization)
Il DNA da studiare è marcato con un fluorocromo ed ibridato con un campione di DNA normale di controllo marcato con un diverso fluorocromo.Regioni sottorappresentate hanno segnale più debole perché legano meno sonda ed hanno colore diverso dalle regioni sovrarappresentate che legano più sonda.
Sono utili nello studio dei riarrangiamenti cromosomici sbilanciati
CGH
Microarray
851 Kb88.007 Mb88.000 Mb87,149 Mb87.139 Mb
Last presentprobe
First deleted probe
Last deletedprobe
First present probe
Deletionsize
244K
244K
244K
PATOLOGIE GENOMICHE
• Patologie genomiche: sindromi cliniche dovute a guadagno (duplicazione) o perdita (delezione) di uno specifico segmento cromosomico. Solitamente sono caratterizzate da difetti congeniti e/o deficit neurologici e cognitivi. Nella maggior parte dei casi le caratteristiche cliniche sono il risultato della variazione nel numero di copie di geni contenuti nell’intervallo genomico interessato. Più raramente il fenotipo può essere determinato dalla rottura di un gene, dalla creazione di geni di fusione, da un effetto di posizione o dallo ”smascheramento” di una mutazione recessiva per la realizzazione di una emizigosità.
NEXT GENERATION SEQUENTING
ESAME DEL DNA
ESAME DEL DNA
PREDITTIVO
DNA eMEDICINAFORENSE
IERI
OGGI
DNA
ALTRI TEST DIAGNOSTICI• PCR Quantitativa Real Time
• Test di Eterozigosità– Consiste nello studio di un pannello di marcatori
polimorfici (STR) che mappano all’interno della regione interessata. Se un marcatore è presente in doppia copia si può escludere la delezione del tratto che lo contiene, se è presente in singola copia ci possiamo trovare di fronte ad una delezione oppure ad una condizione di eterozigosità
• MLPA (Multiple Ligation-dependent Probe Amplification)– Con questa metodica è possibile valutare
contemporaneamente il numero di copie di più geni contenuti nella regione di interesse
IL LABORATORIO DI GENETICA
“chiedere bene per ottenere molto”
“chiedere a volte poco per ottenere molto”!
Diagnosi Prenatale
• I trimestre– Epoca: 10+4 - 13+6 settimane– NT + PAPP-A + free β hCG
• II trimestre– Epoca: 15 - 22 settimane– AFP + hCG + uE3 (+ inibina A)
• Integrato– I trim.: NT + PAPP-A +
II trim.: AFP + hCG + uE3 (+ inibina A)
Duo-Test /Bi-Test
Tri-Test
Quadri-Test
Test Combinato
Test predittivi ecografici
Detection rate (%)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Età Età + AFP
Età + AFP + hCG
Età + AFP + hCG + uE3
I trim. Integrato
Dott.F. Lonardo
Il “superamento”dei test invasivi in gravidanza conesami genetici da sangue periferico della gestante
Una “carta d’identità” genetica…cioè la predisposizioneindividuale a ogni tipo di patologia
Altri tessuti ?
“Il Dottore” di Sir Luke Fildes, c.1891