StaphylococcusStaphylococcus haemolyticushaemolyticus ttöörzsek rzsek antibiotikum rezisztenciantibiotikum rezisztenci áájjáának nak

klonklon áálislis megoszlmegoszl áása sa pulzpulz áállóó ggéélelektroforlelektrofor ééziszis alapjalapj áánn

Kardos Szilvia, Kardos Szilvia,

VolterVolter ImrImr éénnéé, Pesti , Pesti JJóózsefnzsefn éé, , GhidGhid áánn ÁÁgoston, goston,

KristKrist óóf Katalin, f Katalin,

RozgonyiRozgonyi Ferenc, Nagy KFerenc, Nagy K áárolyroly

Semmelweis Egyetem, Orvosi MikrobiolSemmelweis Egyetem, Orvosi Mikrobiol óógiai Intgiai Int éézetzet

Magyar Orvosi LaboratMagyar Orvosi Laboratóóriumi Szakdolgozriumi Szakdolgozóók Egyesk Egyesüülete (MOLSZE) lete (MOLSZE)

X. (jubileumi) NagygyX. (jubileumi) Nagygyőőlléésese

Budapest, 2007. augusztus 30 Budapest, 2007. augusztus 30 –– szeptember 01.szeptember 01.

BevezetBevezet ééssStaphylococcusStaphylococcus haemolyticushaemolyticus

Antibiotikum

rezisztencia magas

Gyakran polirezisztens

Az emberi b ır normál

baktérium flórájának

tagjai

Az ép bırön és

nyálkahártyákon fert ızést

nem okoz

Fiziológiás körülmények között Intenzív centrumok

A kolonizációt és fert ızést

okozó baktériumok eredete

nem egyértelm ően tisztázott

??

Anyagok Anyagok éés ms m óódszerekdszerekA tA t öörzsek azonosrzsek azonos ííttáása:sa:

�� katalkatal áázz, , koagulkoagul áázz, telepmorfol, telepmorfol óógiagia

�� API ID 32 API ID 32 StaphStaph ((BioMBioM éérieuxrieux ))

Az Az antibakteriantibakteri áálislis éérzrzéékenyskenys éégi vizsggi vizsg áálatoklatok�� korongdiffkorongdiff úúzizióós s éés s mikrodilmikrodil úúcici óóss mmóódszerrel dszerrel

(NCCLS/CLSI)(NCCLS/CLSI)

FenotFenot íípusospusos oxacillinoxacillin rezisztencia verifikrezisztencia verifik áálláásasa�� mecAmecA ggéén kimutatn kimutat áássáával PCR mval PCR m óódszerrel dszerrel

A sejtek adhA sejtek adh éézizióójjáéáért (rt ( biofilmbiofilm --kkéépzpzééss) felel) felel ııs gs g éének nek

jelenljelenl ééttéének kimutatnek kimutat áásasa

�� icaAicaA, , icaBicaB. . icaCicaC, , icaDicaD ,,icaRicaR , , fbnAfbnA, , fbnBfbnB

A tA t öörzsek epidemiolrzsek epidemiol óógiai vizsggiai vizsg áálatalata�� rezisztencia rezisztencia fenotfenot íípuspus meghatmeghat áározroz áássáávalval

�� ggenotipizenotipiz áálláássalssal

pulzpulz áállóó ggéélelektroforlelektrofor ééziszis PFGE (PFGE (SmaSmaII))

20012001--2005 k2005 köözzöött a Semmelweis Egyetemtt a Semmelweis Egyetemintenzintenz íív centrumaiban v centrumaiban áápoltpolt

szeptikus szeptikus áállapotllapot úú betegekbbetegekb ııl kitenyl kiteny éészett szett StaphylococcusStaphylococcus haemolyticushaemolyticus ttöörzsek rzsek

gyakorisgyakoris áágaga

9.26.47.66.83.7

0

10

20

30

40

50

60

70

2001 2002 2003 2004 2005

gyak

oris

ág (%

)

S.haemolyticus összes Gram-pozitív összes Gram-negatív

összesen 2417 izolátum

áátlagosan tlagosan ééventevente~~7 %7 %

163

98 hemokultúrából kitenyészett S. haemolyticus törzs MIC érték meghatározása

49clindamycin

87ciprofloxacin

72gentamicin

27amikacin

82

87

57

99

49

0

100

rezisztens%

moxifloxacin

levofloxacin

telithromycin

clarithromycin

teicoplanin

vancomycin

oxacillin

antibiotikum

MIC (µg/ml)

A sejtek adhA sejtek adh éézizióójjáéáért felelrt felel ııs gs g éének nek jelenljelenl ééttéének kimutatnek kimutat áásasaPCR mPCR móódszerrel dszerrel (n=149)

TapadTapad áási faktorok vizsgsi faktorok vizsg áálatalata

Nincs pozitívfbnB

Nincs pozitívfbnA

0,6 %1PozitívicaR

2 %3PozitívicaD

14 %21PozitívicaC

Nincs pozitívicaB

1,4 %2PozitívicaA

DenaturDenatur áácici óó Primerek DNS lPrimerek DNS l áánchosszabbnchosszabb ííttááss

hibridizhibridiz áácici óójaja

784 bp

icaRgén pozitív

20012001--2005 k2005 köözzöött a Semmelweis Egyetem intenztt a Semmelweis Egyetem intenz íív centrumaiban v centrumaiban áápolt betegekbpolt betegekb ııl kitenyl kiteny éészettszett

S. S. haemolyticushaemolyticus ttöörzsek rzsek (n=163) rezisztencia rezisztencia patternpattern tt íípus meghatpus meghat áározroz áásasa korondiffkorondiff úúzizióóss

mmóódszerreldszerrel

100összesen

5OX, CL, E, SXT, T, GE6d

2OX, CL, E, CIP, SXT, T6c

13OX, CL, E, GE, CIP, SXT6b

3OX, CL, E, T, GE, CIP6a

2OX, E, CL, T, GE5d

2OX, E, CIP, CL, T 5c

22OX, E, GE, CIP, CL5b

17OX, E, GE, CIP, SXT5a

4OX, E, GE, CL4e

1OX, E, GE, SXT4d

22OX, E, CIP, GE4b

1OX, E, CIP, SXT4a

3OX, E, CIP3b

3OX, E, GE3a

%rezisztencia patternpatterntípus

JelmagyarJelmagyar áázat:zat:

OX=oxacillinOX=oxacillin , , CL=clindamycinCL=clindamycin , , E=erythromycinE=erythromycin , , SXT=sulphamethoxasole/trimethoprimSXT=sulphamethoxasole/trimethoprim , , T=tetracyclineT=tetracycline , , CIP=ciprofloxacinCIP=ciprofloxacin , , GE=gentamicinGE=gentamicin

3 óra

M 1 2 3

24 óra

•Lizozim koncentráció550 µg/ml

•Proteináz K koncentráció800 µg/ml

M 1 2 3

Lysostaphinkoncentráció

1.: 40 µg/ml

2.: 80 µg/ml

3.: 120 µg/ml

HemokultHemokult úúrráábbóóll kitenykiteny éészett 98 szett 98 S. S. haemolyticushaemolyticus ttöörzs rzs klonalitklonalit ááss vizsgvizsg áálata lata

pulzpulz áállóó ggéélelektroforlelektrofor ééziszis mmóódszerreldszerrel

•SmaI•etidium-bromid

•PIV puffer5 µl

Szeptikus Szeptikus áállapotllapot úú betegek betegek hemokulthemokult úúrráájjáábbóóllkitenykiteny éészett szett S. S. haemolyticushaemolyticus ttöörzsek rzsek

epidemiolepidemiol óógiai vizsggiai vizsg áálata PFGE mlata PFGE m óódszerreldszerrel

M 1 2 3 4 5 6 M 7 8 9 10 11 12 M

Dice (Tol 1.0%-1.0%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

SmaI

100

989694929088868482807876747270686664626058565452504846

116

64

86

112

113

114

132

111

63

117

44

157

3

161

109

185

75

76

162

167

104

110

121

62

170

159

26

27

12

22

24

28

31

17

23

10

11

13

14

21

8

5

137

138

124

98

133

135

139

141

147

71

72

94

43

130

122

49

175

179

180

131

81

158

68

74

154

61

32

33

105

73

97

129

106

45

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

1 PIC

I. sz. perinatálisintenzív centrum

A nA n éégy leggyakoribb rezisztencia gy leggyakoribb rezisztencia patternpattern

csoportba tartozcsoportba tartoz óó 120 120 S.S. haemolyticushaemolyticus ttöörzs rzs genotgenot íípusos megoszlpusos megoszl áásasa

Rezisztencia Rezisztencia patternpattern tt íípuspus

PFGEPFGEtt íípusokpusok

1 1 1 1 1 1 1 1 3 1 1 1 3 1 1

1 1 1 2 2 1 1 1 1 2 1 1 1 1

1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 3 1 1 2 1 1 1

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

4b

5a

5b

6b

1 3 4a 5

6b 6c 7a 7c

8a 8c 8d 8e

8f 8g 8h 8i

8j 8k 9a 9b

10a 10b 10c 10d

10e 11a 11b 11c

11d 11e 11f 11h

11i 11j 12 18b

22a 23a 23b 24

25 26 27

ÖÖsszefoglalsszefoglal ááss

2001 2001 éés 2005 ks 2005 k öözzöött tt áátlagosan tlagosan éévente 7 %vente 7 % --banban tenyteny éészett ki az szett ki az

intenzintenz íív osztv oszt áályon lyon áápolt betegekbpolt betegekb ııl l S. S. haemolyticushaemolyticus

Ezek az Ezek az izolizol áátumoktumok polirezisztensekpolirezisztensek voltakvoltak

Csak Csak vancomycinvancomycin -- nelnel kezelhetkezelhet ıık a betegek k a betegek

MIC meghatMIC meghat áározroz áás javasolts javasolt

Az azonos antibiotikum rezisztencia kAz azonos antibiotikum rezisztencia k éép a p a S. S. haemolyticushaemolyticus

eseteset éében nem jben nem j áárvrváánytani nytani markermarker , mert genot, mert genot íípusosan a vizsgpusosan a vizsg áált lt

ttöörzsek krzsek k üüllöönbnb ööznekznek

��EredmEredm éényeink szerint a tnyeink szerint a t öörzsek nagyobb valrzsek nagyobb val óószszíínnőőssééggel ggel

randomrandom mmóódon vdon v áálogatlogat óódnak ki a betegek sajdnak ki a betegek saj áát flt fl óórráájjáábbóól vagy l vagy

mikro mikro éés makro ks makro k öörnyezetrnyezet éébbııll

KKööszszöönnööm a figyelmet!m a figyelmet!

"Kis l"Kis l ééppéés egy embernek, de hatalmas ls egy embernek, de hatalmas l ééppéés az emberiss az emberis éégnekgnek „„((NeilNeil A. A. ArmstrongArmstrong ))