sudskomedicinske genetike · sekvenciranje dnk hibridizacija dnk preparativne tehnike...
TRANSCRIPT
-
Biološki aspekti sudskomedicinske
genetike
-
Malo bazične biologije
◼ Telo je izgrađeno od ćelija
◼ U našem telu ima 30x1012 ćelija.
◼ Najviše je crvenih krvnih zrnaca (25x1012)
2,5 x 1013
2,5 kg
1,4x1012
13 kg
3,3x1012
10 kg 20 kg
crvena krvna zrnca trombociti masne ćelije drugo mišići
-
DNK se nalazi u hromozomima
◼obmotana oko proteina i višestruko uvijena
-
DNK je smeštena u hromozomima
1013 ćelija7 pikograma DNK po ćeliji
-
DNK je sastavljena od nukleotida
-
DNK je dvolančani molekul
◼ lanci su “polarni” : imaju 3’ i 5’ kraj
◼ naspram 3’ kraja jednoglanca je 5’ kraj drugog
◼ lanci sadrže “komplementarne” nukleotide:
– naspram A je T
– naspram G je C
-
Dve vrste hemijskih veza u DNK
◼ Fosfodiesterke veze – između susednih nukleotida
◼ Vodonične veze– između naspramnih
(komplementarnih) nukleotida
-
Pod dejstvom temperature DNK se “topi”- DENATURACIJA
◼ dolazi do raskidanja veza između naspramnih nukleotida
◼ nastaju jednolančani molekuli
-
Raskidanje fosfodiestarskih veza
U jednom lancu: nema veze
U oba lanca: FRAGMENTACIJA
Na više mesta: DEGRADACIJA
-
DNK je negativno naelektrisana
ravnomerno, duž čitave dužine oba lanca
-
DNK polimerizacija je:
usmerena u 5’ → 3’ smeru
semikonzervativnau novosintetisanom molekulu jedan lanac je stari, a jedan novi.
-
Malo bazične genetike
✓DNK nasleđujemo po pola od svakog roditelja
✓Naša DNK je identična u svim tkivima
✓DNK se ne menja tokom života(ni nakon smrti)
-
Svi smo genetički jedinstveni
◼ Humani genom je dugačak 3.2 milijarde nukleotida
◼ 99.9% DNK je identična među ljudima
◼ Malo matematike0.1% od 3 mldrd ≈ nekoliko miliona nukleotida
-
Osnovna genetička terminologija
◼ Genski marker ≈ genki lokus ≈ gen
– Tačno određeni deo molekula DNK na hromozomu
◼ Aleli
– Različite varijante gena koje mogu postojati
◼ DNK profil
– Kombinacija alela u nizu gena kod neke osobe
-
DNK: polimorfizmi
Polimorfizam sekvence
adenin
timin
guanin
citozin
-
DNK polimorfizmi: nastavak
UzastopnoPonovljene Sekvence2-7 bp=STR10-100=VNTRPolimorfizam broja ponovaka
-
Short Tandem Repeat (STR) Markeri
TCCCAAGCTCTTCCTCTTCCCTAGATCAATACAGACAGAAGACAGGTGGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATATCATTGAAAGACAAAACAGAGATGGATGATAGATACATGCTTACAGATGCACAC
= 12 GATA ponovaka (“12” oznaka alela)
short tandem repeat
7 repeats
8 repeats
9 repeats
10 repeats
11 repeats
12 repeats
13 repeats
Broj ponovaka može da varira između ljudi ali ne i unutar jedne osobe
An accordion-like DNA sequence that occurs between genes
-
Malo genetike
◼ U sudskomedicinskoj genetici se analizira 15-25 gena
◼ Isti geni kod različitih ljudi postoje u različitim varijantama- belezima (alelima)
◼ Svaki od petnaestak gena postoji u po desetak varijanti
◼ Svaki gen postoji u po dve kopije (od majkei od oca).
-
Savremene metode u molekularnoj genetici
-
Koraci u veštačenju biološkog materijala
Krim. tehnika
• Uočavanje, dokumentovanje, fiksiranje
• Izuzimanje, pakovanje i dostavljanje
Analiza
• Izolovanje DNK, umnožavanje gena
• Genotipizacija (utvrđivanje DNK profila)
Veštačenje
• Upoređivanje DNK profila
• Biostatistička analiza i interpretacija
-
Podela tehnikaAnalitičke tehnike
Izolovanje DNK
Umnožavanje DNK
Enzimska digestija DNK
Rekombinovanje DNK
Kloniranje DNK
Sekvenciranje DNK
Hibridizacija DNK
Preparativne tehnike
Centrifugiranje
Elektroforeza
-
PCR amplifikacija
Elektroforeza
Upoređivanje
Zaključivanje
Korišćenje forenzički validiranih hemikalija
Utvrđivanje dužine amplifikovanih fragmenata
Imenovanje alela
Sa referentnim uzorkom ili
bazom
Frekvencionistički i probabilistički pristup
Genotipizacija
Izolacija DNK
Dobijanje velike količine čiste DNK
Osnovni koraci u
savremenoj
DNK analizi