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TEMA 3. DIVISIÓN CELULAR Y CRECIMIENO

MIDIENDO EL CRECIMIENTO MICROBIANO

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS

Tomado de Luis Ramiro Caso Vargas en http://es.scribd.com/doc/2182004/Midiendo-el-crecimiento-microbiano

Métodos para medir el crecimiento microbiano

CUANTIFICACIÓN DE LA MASA MICROBIANA

Balance de materia

Cuantificación de componentes celulares: Proteínas ADN ARN

Fte de C + Fte de N + Pi + O2 = Masa Celular + CO2 + H2O + Productos + Energía

Métodos Indirectos


Determinación del consumo de nutrientes

Se selecciona un nutriente que no se parezca a ningún metabolito sintetizado como:

Fuente de Carbono Oxígeno Fosfato, Sulfato, Magnesio

Determinación de los Productos Formados

Esto depende del tipo de fermentación o producción de metabolitos:

CO2 Etanol Ácido Láctico Ácidos Orgánicos Colorantes Enzimas


Volumen de células Los microorganismos del mismo tipo tienen tamaño similar bajo las mismas

condiciones de crecimiento.

Se centrifuga bajo condiciones Standard de velocidad y tiempo, utilizando tubos graduados en los que se ve el volumen por las células.

Viscosidad del cultivo No es un método muy utilizado.

Determinación de ATP El contenido de ATP es 1 mg. de ATP/gr. de células secas. Se determina por una

reacción catalizada por la enzima luciferasa, se genera un fotón. Se mide la emisión de luz en presencia de luciferina y O2, se puede determinar 10-12 gr. de ATP/lt.


CUANTIFICACIÓN DEL NÚMERO DE CÉLULAS

Recuento microscópico de microorganismos totales. Recuento en placa de microorganismos viables. Recuento microscópico de microcolonias. Contador electrónico de microorganismos totales.

CUANTIFICACIÓN DE LA MASA CELULAR

Peso seco. Turbidimetría.

Métodos Directos


Cuenta en placa


Muestra

1 ml

10-1

10-2

10-3

1 ml

1 ml

1 ml

1 2 3 4 5

1 2 3 4 5

1 2 3 4 5

Realizar diluciones

10-3

10-2

10-1

Método del Número más probable


Tub

os

Dilución

10-1 10-2 10-3

1

2

3

4

5

3

12

X

X

X

X

X

X

X

X

X

Análisis de resultados


Cuenta directa al microscopio


Turbidez


Cantidad de metabolitos producidos. En la industria se utilizael azul de metileno paradistinguir almicroscopio de entrelevaduras vivas ymuertas.

Actividad metabólica


Filtro de membrana


Enzimas de restricción, esta describe las endonucleasas de restricción y cómo actúa cortando el ADN.

Se diagnostica en 4 pacientes la existencia o no de anemia falciforme mediante la presencia o ausencia en su ADN del gen codificador de la hemoglobina.

Típico caso de medicina legal o forense, en la que se han encontrado células sobre la victima que permite identificar al sospechoso.

Típico caso de investigación epidemiológica buscando poder comprobar el origen común o la relación de unas cepas de bacterias.

1.A. Análisis del polimorfismo

2.-Diagnóstico de laboratorio en medicina legal

3.-Diagnóstico de laboratorio de una enfermedad genética

4.Investigación epidemiológica comprueba el origen común o la relación de unas cepas de bacterias

Métodos moleculares


Microorganismos aislados del suelo en los que se quiere determinar el género al que pertenecen.

7 identificación de m.o De muestras de agua.

similar al de muestras ambiéntales pero con dos bacterias desconocidas diferentes

8 identificación de secuenciación del ADN

Se trata de secuenciar un fragmento de ADN mediante secuenciación automática e ir a consultar a las bases de datos de genes a que m.o correspondiente.

6. Identificación de microorganismos de muestras ambientales


9. Identificación mediante pcr

11. detección en aguas de bebida de patógeno“cryptosporidium parvum”

Aquí se utiliza el método del pcr para la detección, que es responsable del 30% de los brotes gastroenteritis.

12. Deteccion de virus entericos en mustras de agua

Se utiliza la tecnica de pcr para la deteccion en aguas de bebida de virus entericas

Esta técnica se utiliza diversos primers y la comprueban mediante la electroforesis con agarosa tamaño molecular.

Tecnología

genomica

Es el método en donde se determina únicamente ADN como análisis de estudio.“ por medio de electroforesis”

Western blot

Es un método especializado que determina proteínas.“Ejemplo la detección de VIH en la sangre.”

Dot blot y slot blot

método que determina únicamente ADN pero con la diferencia que no se somete en electroforesis. Este tipo de prueba es muy útil cuando se quieren estudiar gran número de muestras, pero tienen la limitante de no ofrecer información sobre el tamaño de las bandas del ARN hibridado.

Hibridación de colonias bacterianas

Es un método empleado para identificar colonias bacterianas que contengan determinada secuencia de ácidos nucleicos de interés.

Northern blot

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